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Analysis on fingerprint for root barks and stem barks of Toddalia asiatica

飞龙掌血根皮与茎皮指纹图谱对比研究



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 14 期 2016 年 7 月

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飞龙掌血根皮与茎皮指纹图谱对比研究
魏茂陈 1,刘 凯 1,易 琴 1,张丽艳 2*,周汉华 2,窦圣姗 3,张 杰 3
1. 贵阳新天药业股份有限公司,贵州 贵阳 550000
2. 贵阳中医学院,贵州 贵阳 550002
3. 上海海天医药科技开发有限公司,上海 200023
摘 要:目的 建立了飞龙掌血 Toddalia asiatica 根皮、茎皮高效液相色谱法指纹图谱,并运用相似度评价软件对指纹图
谱进行相似度对比,从而为促进飞龙掌血综合利用提供理论依据。方法 采用乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度系统,C18 柱(200
mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,测定波长 269 nm,体积流量 1.0 mL/min。通过对 10 批不同产地不同季节采收的飞龙掌血根
皮与 10 批不同产地不同季节的茎皮对比研究,从而建立飞龙掌血的指纹图谱,并计算相似度。结果 不同产地及不同季节
采集的飞龙掌血根皮与茎皮共有峰的相对保留时间相对一致,但相对峰面积差异较大,说明产地和采收季节的不同会导致相
关物质活性成分的量有一定的差异。结论 飞龙掌血根皮与茎皮指纹图谱相似度大于 0.9,其组成高度相似。
关键词:飞龙掌血;根皮;茎皮;相似度;指纹图谱;高效液相色谱
中图分类号:R286.6 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)14 - 2540 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.14.025
Analysis on fingerprint for root barks and stem barks of Toddalia asiatica
WEI Mao-chen1, LIU Kai1, YI Qin1, ZHANG Li-yan2, ZHOU Han-hua2, DOU Sheng-shan3, ZHANG Jie3
1. Guiyang Xintian Pharmaceutical Co., Ltd., Guiyang 550000, China
2. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China
3. Shanghai Haitian Pharmaceutical Science and Technology Co., Ltd., Shanghai 200023, China
Abstract: Objective To promote the comprehensive utilization in the root barks and stem barks of Toddalia asiatica and to establish an
HPLC method for the determination of the fingerprints for the root barks and stem barks of T. asiatica. Meanwhile, the similarity was
compared by similarity evaluation software based on the fingerprints. Methods HPLC analysis was performed on C18 (250 mm × 4.6 mm, 5
μm) with acetonitrile and 0.1% aqueous solution of phosphoric acid as mobile phase in gradient mode at the wavelength of 269 nm, and the
flow rate was 1 mL/min. The similarity was calculated by comparison on the fingerprints derived from 10 bathes of T. asiatica root barks and
10 bathes of T. asiatica stem barks, all the samples were collected from the different areas in different seasons. Results The mutualmode of
HPLC fingerprints was set up and the similar degrees to the crude drugs of different sources were compared. The content ratio of active
ingredients is different from samples in different areas and seasons. Conclusion The fingerprint similarity is greater than 0.9 between T.
asiatica root barks and T. asiatica stem barks, so the compositions are highly similar.
Key words: Toddalia asiatica; root barks; stem barks; similarity; fingerprints; HPLC

飞龙掌血 Toddaliae Asiaticae Radix 为芸香科
(Rutaceae)植物飞龙掌血 Toddalia asiatica (L.) Lam.
的干燥根。四季可采挖,切段,洗净,晾干。其为贵
州省少数民族用药,具有祛风止痛、散瘀止血、消肿
解毒的功效,用于风湿痹痛、胃痛、吐血、衄血、
跌打损伤、刀伤出血、痛经、闭经牙龈出血、口舌
生疮[1]。飞龙掌血在不同的地方标准中规定略有不同,
云南省中药材标准(2005 版)(第四册 彝族药)规定,
飞龙掌血为芸香科植物飞龙掌血 Toddalia asiatica (L.)
Lam. 的干燥茎[2];然而,湖南省中药材标准(2009
版)规定,飞龙掌血为芸香科植物飞龙掌血的干燥
根[3];与此同时,广西中药材标准第二册规定,飞龙
掌血为芸香科植物飞龙掌血干燥根及茎[4]。
根据现行各地方标准,飞龙掌血的用药部位主
要包括了根及茎,上述各地方标准及相关研究[5-8]
表明,其根与茎均可入药,且具有相同药理活性的
可能。为加强中药资源的保护和可持续利用,保护
中药种质和遗传资源,加强中药新品种研究,确保

收稿日期:2015-12-21
基金项目:贵州省科技厅项目[黔科合 SY 字(2015)3031]
作者简介:魏茂陈,男,博士。Tel: (0851)86317631 E-mail: weimc168@163.com
*通信作者 张丽艳,女,教授,从事中药质量控制与新药研究。Tel: (0851)86298351 E-mail: zly1964@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 14 期 2016 年 7 月

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中药材可持续发展,研究飞龙掌血根皮与茎皮指纹
图谱的相似性具有重要的理论和现实意义。本研究
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0 版)》
分析根皮与茎皮指纹图谱的相似度,从而了解根皮
与茎皮化学组成的差异,为促进飞龙掌血综合利用
提供理论依据,进而提高该品种的利用度,达到中
药资源保护及可持续利用的目的。
1 仪器和材料
1.1 仪器与设备
岛津 LC-20AD 型高效液相色谱仪,SPD-M20A
二极管阵列检测器,LC Solution 工作站;超声波清
洗器(上海冠特超声仪器有限公司);岛津
AUW120D 型电子天平(十万分之一)。
1.2 材料与试剂
飞龙掌血根皮对照药材(批号 121410-200701),
白屈菜红碱对照品(批号 111718-200501),均购于
中国食品药品检定研究院。冰醋酸、磷酸为分析纯,
甲醇、乙腈、异丙醇为色谱纯,水为重蒸馏水。供
试品由贵阳新天药业股份有限公司提供,所采集各
批次药材经贵阳中医学院周汉华教授鉴定为飞龙掌
血 Toddalia asiatica (L.) Lam. 根皮和茎皮,药材产地
及采收季节见表 1。飞龙掌血茎皮照飞龙掌血根皮
质量标准(《贵州省中药材、名族药材质量标准(2003
版)》,DB52/YC059-2003,P63)检验合格[1]。
表 1 药材产地及采收季节
Table 1 Origins and collecting seasons of T. asiatica
编号 批号 来源 部位 采收季节 编号 批号 来源 部位 采收季节
1 111230 安顺 根皮 秋季 11 111230 安顺 茎皮 秋季
2 120210 安顺 根皮 冬季 12 120210 安顺 茎皮 冬季
3 120212 安顺 根皮 冬季 13 120212 安顺 茎皮 冬季
4 120418 安顺 根皮 春季 14 120418 安顺 茎皮 春季
5 130130 息烽 根皮 冬季 15 130130 息烽 茎皮 冬季
6 130624 高坡 根皮 春季 16 130624 高坡 茎皮 春季
7 130723 贵阳 根皮 夏季 17 130723 贵阳 茎皮 夏季
8 130813 大方 根皮 夏季 18 130813 大方 茎皮 夏季
9 130901 息烽 根皮 秋季 19 130901 息烽 茎皮 秋季
10 140723 凯里 根皮 夏季 20 140723 凯里 茎皮 夏季

2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱为 Hypersil GOLD ODS(250 mm×4.6
mm,5 μm);流动相[9-11]采用乙腈(A)-0.1%磷酸
水溶液(B)系统进行梯度洗脱,程序为 0~5 min,
15% A;5~30 min,15%~80% A;30~35 min,80%
A;35~37 min,80%~15% A;37~50 min,15% A;
检测波长 269 nm;体积流量 1.0 mL/min。白屈菜红
碱保留时间为 23.6 min,50 min 内色谱峰全部检出。
2.2 对照品溶液及对照药材的制备
精密称取白屈菜红碱对照品适量,加 60%乙醇
溶解,定容至 100 mL,即得。精密称取飞龙掌血根
皮对照药材 0.2 g,加 60%乙醇超声提取 1 h 时,滤
过,即得。
2.3 供试品溶液制备
精密称取飞龙掌血根皮或茎皮粉末 0.2 g,
采用不同体积分数的乙醇 50 mL 超声提取 1 h,
提取液过 0.45 μm 的微孔滤膜后吸取 10 μL,注
入高效液相色谱仪观察,在使用 60%乙醇提取
时,能够得到较多的色谱峰,药材成分提取率
高。采用 60%乙醇 50 mL 提取 0.5、1.0、1.5 h,
提取液过 0.45 μm 的微孔滤膜后吸取 10 μL,注
入高效液相色谱仪,提取 1.0 h 得到的色谱峰与
1.5 h 的一致。故提取方法为精密称取飞龙掌血
药材 0.2 g,加 60%乙醇 50 mL 超声提取 1.0 h,
滤过,即得。
3 结果与分析
3.1 方法学考察
3.1.1 精密度试验 取批号为 140723 的飞龙掌血根
皮粉末,按照“2.3”项方法制备供试品溶液,连续
进样 6 次,记录色谱图。以 8 号峰白屈菜红碱的保
留时间和峰面积为参照,计算样品中共有峰与白屈
菜红碱的相对峰面积和相对保留时间的 RSD 分别为
0~1.89%、0~0.38%,结果表明,精密度良好。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 14 期 2016 年 7 月

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3.1.2 稳定性试验 取批号为 140723 的飞龙掌血
根皮粉末,按照“2.3”项方法制备供试品溶液,分
别在 0、3、6、9、12、18、21 h 进样,记录色谱图。
以 8 号峰白屈菜红碱的保留时间和峰面积为参照,
计算样品中共有峰与白屈菜红碱的相对峰面积与相
对保留时间 RSD 分别为 0~2.78%、0~2.21%。结
果表明,稳定性良好。
3.1.3 重复性试验 取批号为 140723 的飞龙掌血
根皮粉末,按照“2.3”项方法制备样品,同时制备
6 份,记录色谱图。以 8 号峰白屈菜红碱的保留时
间和峰面积为参照,计算样品中共有峰与白屈菜红
碱的相对峰面积和相对保留时间 RSD 分别为 0~
1.69%、0~0.32%。
3.2 指纹图谱建立
3.2.1 共有峰的标定 采用不同产地,不同采收季
节的飞龙掌血根皮或茎皮,依“2.3”项制备供试品
溶液,测定。取“2.2”项对照药材溶液,按照“2.1”
项色谱条件测定,得到对照指纹图谱,并标定 9 个
色谱峰为共有指纹峰,见图 1,根皮与茎皮指纹图
谱见图 2。共有峰相对保留时间与相对峰面积见表 2
和表 3。


图 1 飞龙掌血根皮与茎皮对照图谱
Fig. 1 Fingerprints of root barks and stem barks of T.
asiatica


图 2 不同批次飞龙掌血根皮与茎皮的指纹图谱
Fig. 2 Fingerprints of root barks and stem barks of
different batches of T. asiatica
表 2 飞龙掌血根皮与茎皮指纹图谱共有峰相对保留时间
Table 2 Relative retention time of common peaks for fingerprint of root barks and stem barks of T. asiatica
相对保留时间 样品
1 2 3 4 5 6 7 8 9
对照 0.160 0.204 0.279 0.372 0.785 0.820 0.951 1.000 1.055
1 0.160 0.204 0.279 0.373 0.785 0.820 0.951 1.000 1.055
2 0.160 0.204 0.279 0.374 0.785 0.819 0.950 1.000 1.055
3 0.160 0.204 0.278 0.374 0.784 0.819 0.950 1.000 1.054
4 0.160 0.204 0.279 0.373 0.784 0.819 0.951 1.000 1.054
5 0.161 0.204 0.279 0.375 0.784 0.818 0.950 1.000 1.053
6 0.160 0.204 0.279 0.373 0.784 0.818 0.950 1.000 1.053
7 0.160 0.204 0.279 0.375 0.783 0.818 0.950 1.000 1.052
8 0.160 0.204 0.279 0.374 0.783 0.818 0.950 1.000 1.052
9 0.160 0.204 0.279 0.374 0.783 0.817 0.950 1.000 1.052
10 0.160 0.204 0.279 0.374 0.783 0.817 0.950 1.000 1.051
11 0.160 0.204 0.279 0.376 0.782 0.816 0.950 1.000 1.050
12 0.160 0.203 0.279 0.376 0.782 0.816 0.950 1.000 1.050
13 0.160 0.204 0.280 0.374 0.782 0.816 0.950 1.000 1.050
14 0.160 0.203 0.279 0.376 0.781 0.816 0.950 1.000 1.049
15 0.160 0.203 0.279 0.376 0.781 0.815 0.950 1.000 1.049
16 0.160 0.203 0.280 0.376 0.781 0.815 0.950 1.000 1.049
17 0.160 0.203 0.280 0.374 0.781 0.815 0.950 1.000 1.048
18 0.160 0.203 0.280 0.374 0.781 0.815 0.950 1.000 1.048
19 0.160 0.203 0.279 0.376 0.780 0.815 0.950 1.000 1.048
20 0.155 0.203 0.279 0.374 0.780 0.815 0.950 1.000 1.048
1 2
3
4
5
6
7 8
9
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
t/min
样品 20




样品 1
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
t/min
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表 3 飞龙掌血根皮与茎皮指纹图谱共有峰相对峰面积值
Table 3 Relative areas of common peaks for fingerprint of root barks and stem barks of T. asiatica
相对峰面积 样品
1 2 3 4 5 6 7 8 9
对照 2.464 2.022 1.156 18.257 4.239 7.203 0.576 1.000 3.809
1 2.907 2.319 1.106 20.027 7.184 12.539 0.613 1.000 5.556
2 3.612 2.986 1.371 25.093 4.684 9.050 0.974 1.000 6.199
3 2.658 2.294 0.900 15.767 3.395 7.844 0.796 1.000 4.576
4 2.946 2.345 1.089 18.163 7.133 10.750 0.623 1.000 5.402
5 3.280 2.919 1.357 24.924 4.643 9.834 0.998 1.000 4.664
6 1.835 2.803 1.334 22.783 5.912 10.350 0.806 1.000 5.813
7 2.115 2.929 1.338 24.742 4.696 9.944 1.007 1.000 4.762
8 1.951 2.849 1.366 24.311 5.495 11.069 0.881 1.000 5.433
9 1.889 2.877 1.398 22.984 6.035 10.416 0.802 1.000 5.846
10 1.439 2.065 1.202 18.707 4.512 7.552 0.534 1.000 3.872
11 1.896 2.174 1.079 16.458 4.072 7.720 0.920 1.000 4.148
12 2.929 2.263 1.201 19.056 3.672 8.406 0.741 1.000 4.720
13 1.678 1.979 0.932 14.326 6.735 10.356 0.572 1.000 5.189
14 2.896 2.210 1.102 15.874 3.668 8.352 0.760 1.000 4.710
15 1.926 2.219 1.121 16.767 4.131 7.866 0.928 1.000 4.219
16 1.909 2.178 1.197 20.368 4.194 8.603 0.775 1.000 4.158
17 1.437 1.811 1.203 18.583 4.361 7.724 0.545 1.000 4.399
18 1.437 1.811 1.203 18.583 4.361 7.724 0.545 1.000 4.399
19 2.830 2.182 1.105 15.573 3.568 8.123 0.730 1.000 4.839
20 2.369 1.847 1.245 18.978 4.558 7.690 0.549 1.000 3.981

结果表明,不同产地及不同季节采集的飞龙掌
血根皮与茎皮共有峰的相对保留时间相对一致,但
相对峰面积差异较大,说明产地和季节的不同会导
致相关物质活性成分的量有一定的差异。
3.2.2 相似度计算 采用《中药色谱指纹图谱相似
度评价系统(2.0 版)》分析[9],对照图谱生成方法
为中位数,时间窗宽度 0.5,多点校正,全峰匹配,
相似度结果见表 4。由此结果可见,不同产地、不
同季节采收的飞龙掌血根皮及茎皮指纹图谱相近,
相似度均大于 0.90,表明其成分相近。
4 讨论
根据文献报道进行实验[10-12],结果表明,有大
量色谱峰较早被洗脱,且未能有效分离,故本研究
调整流动相,将洗脱方式从等度洗脱改为梯度洗脱。
调整后的结果显示,不仅共有峰数量较多,且各色
谱峰间分离度较好,因而有利于不同产地不同季节
采收的根皮及茎皮指纹图谱对比研究。同时,对样
品进行 3D 图像考察,各峰在 269 nm 处均有较强的
吸收,且多个峰均有最大吸收,故分析波长定为 269
nm。为充分提取药材中有效物质成分,因而本研究
表 4 相似度评价结果
Table 4 Evaluation of similarity
样品 相似度 样品 相似度
对照药材 1.000 11 0.998
1 0.976 12 0.993
2 0.996 13 0.975
3 0.993 14 0.991
4 0.976 15 0.998
5 0.998 16 0.998
6 0.997 17 0.999
7 0.998 18 0.999
8 0.998 19 0.994
9 0.996 20 0.996
10 1.000

还对前处理方法进行系统研究,不同体积分数的乙
醇提取效果表明,采用 60%的乙醇提取,色谱峰较
为丰富,峰面积较大,同时,考察提取时间为 0.5、
1.0、1.5 h 的结果表明,提取时间为 1.0 h 时白屈菜
红碱峰面积与 1.5 h 的相近,因此,最优提取方式为
60%的乙醇提取 1.0 h。
虽有相关文献研究了飞龙掌血的指纹图谱[11-12],
但迄今并未有根皮与茎皮的指纹谱图相似性进行对
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 14 期 2016 年 7 月

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比研究报道,然而,较多的中成药成方制剂是采用
飞龙掌血根皮入药,若茎皮能替代根皮入药将极大
促进了中药资源的可持续发展。本研究结果表明,
飞龙掌血根皮与茎皮化学组成相近,因此,此研究
为飞龙掌血茎皮替代根皮的使用提供理论依据,进
而为提高飞龙掌血的利用率,促进野生资源的合理
利用具有非常重要的意义。
参考文献
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 14 期 2016 年 7 月

·2545·
·综 述·
基于现代中药制剂发展的核心内容探讨引经药的研究思路
柯仲成 1, 2, 3,侯雪峰 4,贾晓斌 2, 3*
1. 黄山学院化工学院,安徽 黄山 245041
2. 南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023
3. 江苏省中医药研究院 国家中医药管理局中药释药系统重点研究室,江苏 南京 210028
4. 安徽中医药大学药学院,安徽 合肥 230038
摘 要:精致原料和优良辅料是现代中药制剂发展的核心内容,而引经药作为长期中医临床的实践总结,具有制剂载体的类
似功能。对引经中药的研究现状进行分析,尝试性地提出研究思路:一方面要利用引经作用加强对中药活性成分群的筛选,
制备精致原料,另一方面要科学阐述引经作用的物质基础及作用机制,开发优良辅料,促进现代中药制剂的快速发展。
关键词:中药制剂;引经药;精致原料;辅料;研究思路
中图分类号:R283.3 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)14 - 2545 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.14.026
Research ideas of meridian guided medicine based on key parts of modern
Chinese medicine preparation
KE Zhong-cheng1, 2, 3, HOU Xue-feng4, JIA Xiao-bin2, 3
1. College of Chemical Engineering, Huangshan University, Huangshan 245041, China
2. College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China
3. Affiliated Hospital on Integration of Chinese and Western Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210028,
China
4. College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230038, China
Abstract: Exquisite materials and excellent excipients are the key parts of modern Chinese medicine development. Long-term clinical
researches indicate that the meridian guided medicine has the property of carriers. In this paper, the status of the meridian guided
medicine was analyzed, and the research ideas were tried to be put forward. On the one hand, to take advantage of the meridian guided
action, the screening of active ingredients should be strengthened. On the other hand, the material basis and mechanism of meridian
guided action were clearly explained. In summary, deep research of the meridian guided medicine can exploit the excellent excipients
to promote the rapid development of modern Chinese medicine.
Key words: Chinese medicine preparation; meridian guided medicine; exquisite materials; excipients; research ideas

在药物防病治病的发展历程中,不论中药还是
化学药,都通过“组方配伍、增溶靶向”等手段,
促协同、助吸收、策分布,获得“治疗效果”的高
涌现性,不断推动药物的创新发展与临床应用。传
统中药制剂具有多成分、多靶点的特性,正是由于
这种成分的复杂性,造成了其物质基础不明确、作
用机制不明了、人体内吸收、分布、代谢、排泄
(ADME)性质不清楚的弊端,这也使得中药的“治
疗效果”常常难以直击病灶,在一定程度上限制了
中药制剂的临床应用。在传统中药临床实践中,临
床医生常常通过引经配伍改善药物的临床疗效,久
而久之便形成用药经验。这其中引经药作为外来要

收稿日期:2016-02-16
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81274088);安徽省高校省级自然科学研究重点项目(KJ2014A242)
作者简介:柯仲成,博士在读,副教授。Tel: 18055960325 E-mail: xiaoke1020@126.com
*通信作者 贾晓斌,教授,博士生导师。Tel: (025)85637809 E-mail: jxiaobin2005@hotmail.com