全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 13 期 2016 年 7 月

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HPLC 法同时测定大黄叶中 9 种成分
颜永刚，尹立敏，王红艳，刘姣姣，王 洁，邓 翀
陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046
摘 要：目的 建立 HPLC 法同时检测大黄 Rheum officinale 叶中没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡
萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚 9 种成分，探索合理开发利用大黄叶的科学依据。方法 采用武
本 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.2%乙酸水作为流动相，梯度洗脱，体积流量 1 mL/min，柱温 30 ℃，检测波
长 260 nm。结果 没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄
酚和大黄素甲醚分别在 20.2～606.0、79.3～2 379.0、10.1～301.8、14.8～443.7、0.7～2.2、0.13～3.9、12.4～372.0、38.8～1 164.0、
6.2～185.4 ng 与峰面积良好的线性关系（r＞0.999 6)；9 种成分的平均回收率为 95.76%～98.64%，RSD 为 1.46%～2.43%。
结论 该方法简便、准确，分离效果好，所测为大黄叶中化学成分结果真实、可靠，可为其合理开发利用提供参考依据。
关键词：大黄叶；HPLC；没食子酸；番泻苷 B；大黄酚-1-O-葡萄糖苷；大黄素-8-O-葡萄糖苷；芦荟大黄素；大黄酸；大黄
素；大黄酚；大黄素甲醚
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)13 - 2360 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.13.026
HPLC method for simultaneous determination of nine components from leaves of
Rheum officinale by HPLC
YAN Yong-gang, YIN Li-min, WANG Hong-yan, LIU Jiao-jiao, WANG Jie, DENG Chong
Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for determing nine components from the leaves of Rheum officinale, such as gallic acid,
senna glycosides B, rhubarb phenol-1-O-glucoside, emodin-8-O-glucoside, aloe-emodin, rhein, emodin, rhubarb, and emodin methyl ether, as
well as to explore the scientific evidence for reasonable exploitation and utilization of medicinal rhubarb leaf. Methods Takeing C18
chromatographic column (250 mm × 4.6 mm, 5 microns), methanol-0.2% acetic acid water as mobile phase, gradient elution and flow rate of 1
mL/min, column temperature 30 , ℃ and detection wavelength of 260 nm. Results Gallic acid, senna glycosides B, rhubarb
phenol-1-O-glucoside, emodin-8-O-glucoside, aloe-emodin, rhein, emodin, rhubarb, and emodin methyl ether had the good linear
relationship, respectively in the range of 20.2—606.0, 79.3—2 379.0, 10.1—301.8, 14.8—443.7, 0.7—2.2, 0.13—3.9, 12.4—372.0, 38.8—
1 164.0, 6.2—185.4 ng (r > 0.999 6); The nine kinds of the ingredients of the average recovery were 95.76% − 95.76%, RSD was 1.46% −
2.43%. Conclusion This method is simple and accurate, and with good effect and reliable results for the separation and determination of the
components from the leaves of R. officinale, which can provide the reference for its rational development and utilization.
Key words: leaves of Rheum officinalel; HPLC; gallic acid; senna glycosides B; rhubarb phenol-1-O-glucoside; emodin-8-O-
glucoside; aloe-emodin; rhein; emodin; rhubarb; emodin methyl ether

大黄叶为蓼科（Polygonaceae）植物大黄 Rheum
officinale Baill 的干燥叶，其原植物的根及根茎作为
传统中药大黄临床应用，《中国药典》2015 年版收
载为中药大黄正品之一[1]。现代研究表明，大黄叶
具有清热解毒、活血消肿、泻下、止血、生肌、收
敛、抗炎、等传统功效与生理活性，主要含有蒽醌
类、酚类、鞣质、氨基酸、微量元素等化学成分[2-6]。
大黄叶在民间有使用习惯，在藏族医药学中，大黄的
叶和柄，习称“秋久”，性温，可治培根病等多种疾
病，与大黄的药理作用和化学成分有类似之处[7]。

收稿日期：2016-03-16
基金项目：中医药公共卫生专项“国家基本药物所需中药原料资源调查和监测项目”（财社 [2011] 76 号）；中医药行业科研专项“我国代表性
区域特色中药资源保护利用”（201207002）；陕西省教育厅资助项目（13JS030，14JK1204）
作者简介：颜永刚（1978—），男，博士，副教授，硕士研究生导师，主要从事中药品种、品质与资源研究工作。E-mail: yunfeng828@163.com
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大黄为中药大黄的主要来源之一，在我国已有多年
应用历史。作为药用植物资源，药用大黄叶相对于
其根及根茎不仅资源丰富，而且生长快、采收期长，
更重要的是大黄叶资源开发和利用具有可持续性，
如能对其研究开发利用，将产生很大的经济效益和
社会效益。目前尚未见有关大黄叶多成分定量测定
报道。为使该资源进一步地充分利用，本实验通过
对陕西省镇巴县大黄叶中相关化学成分进行测定，
初步探索与其根及根茎中成分的差异性，为大黄叶
开发利用提供科学依据。
1 仪器及材料
1.1 仪器
Waters 2695 高效液相色谱仪（美国 Waters 公
司），包括四元超高压溶剂系统、自动进样恒温样品
管理器，Waters2998 PAD 检测器，Empower 色谱工
作站；GB204 型电子分析天平（北京赛多利斯仪器
系统有限公司）；KQ-200KED 超声波清洗机（江苏
昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 材料
对照品没食子酸（批号 122811，质量分数大于
99%）、番泻苷 B（批号 11z15，质量分数大于 98%）
购自天津西玛科技有限公司；大黄素（批号
110795-200505，质量分数大于 98%）、大黄酚（批
号 110796-200615，质量分数大于 99%）、大黄酸（批
号 0757-200206，质量分数大于 99%）、大黄素甲醚
（批号 110758-200610，质量分数大于 98%）、芦荟
大黄素（批号 03071201，质量分数大于 99%）、大
黄酚-1-O-葡萄糖苷（批号 110796-200615，质量分
数大于 98%）、大黄素 -8-O-葡萄糖苷（批号
10756-200110，质量分数大于 98%）购自中国食品
药品检定研究院。色谱甲醇（批号 20150603）上海
泰坦科技有限公司；娃哈哈纯净水（批号 20150702）
杭州娃哈哈集团有限公司；其他试剂均为分析纯。
大黄叶 22 批样品于 2015 年 8 月上旬均采自陕
西省镇巴县，经陕西中医药大学胡本祥教授鉴定均
为大黄 Rheum officinale Baill 的叶。大黄叶片样品采
集信息见表 1。
2 方法和结果
2.1 色谱条件
武本 C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相由甲醇（A）和 0.2%乙酸水（B）组成，梯
度洗脱（0～5 min，5%～15% A；5～15 min，15%～
30% A；15～25 min，30%～35% A；25～31 min，
35%～42% A；31～46 min，42%～53% A；46～66
min，53%～68% A；66～75 min，68%～100% A；
75～85 min，100% A），检测波长 260 nm，柱温 30 ℃，
体积流量 1.0 mL/min。进样量为 10 μL。在上述色谱条
件下分析，理论板数按各个成分计算均不低于 5 000，
与相邻组分峰的分离度均大于 1.5，色谱峰对称因子
均在 0.95～1.05。典型色谱图见图 1。
表 1 22 批样品采集信息
Table 1 Collected information of 22 samples
编号 产地 海拔/m 生长年限/年
1 小洋镇星子山林场 1 540.20 3
2 小洋镇星子山林场 1 626.70 1
3 小洋镇麻柳村 1 409.20 2
4 小洋镇麻柳村 1 267.40 3
5 小洋镇安桥村 1 084.80 5
6 小洋镇安桥村 1 255.10 3
7 小洋镇麻柳村 1 406.20 1
8 小洋镇麻柳村 1 124.70 3
9 小洋镇小洋村 1 155.60 3
10 小洋镇大毛桠 1 135.10 3
11 大池乡迎春村 1 473.10 2
12 大池乡迎春村 1 321.40 2
13 大池乡迎春村 1 478.70 1
14 大池乡力坪村 1 628.60 1
15 大池乡力坪村 1 414.40 2
16 大池乡力坪村 1 368.70 2
17 大池乡力坪村 1 762.30 3
18 大池乡力坪村 1 365.40 1
19 大池乡力坪村 1 252.20 2
20 大池乡力坪村 1 268.90 2
21 三溪镇池洋村 940.60 3
22 三溪镇池洋村 1 380.60 1




1-没食子酸 2-番泻苷 B 3-大黄酚-1-O-葡萄糖苷 4-大黄素-
8-O-葡萄糖苷 5-芦荟大黄素 6-大黄酸 7-大黄素 8-大黄酚
9-大黄素甲醚
1-gallic acid 2-senna glycosides B 3-chrysophanol-1-o-glucoside
4-emodin-8-O-glucoside 5-aloe-emodin 6-rhein 7-emodin
8-chrysophanol 9-physcion
图 1 混合对照品 (A) 及样品 (B) HPLC 图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A) and sample (B)
1
2 3 4
5 6
7 9
A
1 2 3 4 5 6
7
8
9
0 12.5 25.0 37.5 50.0 62.5 75.0 85.0
t/min
B
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2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液制备 分别取没食子酸、番泻苷
B、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、
芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲
醚 9 种对照品适量，精密称定，分别置 10 mL 量瓶
中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓
度分别 1.010、1.030、0.202、0.224、0.015、0.010、
0.191、0.702、0.025 mg/mL 的对照品储备液，分别
精密量取上述对照品储备液 1 mL至 10 mL量瓶中，
用甲醇稀释 10 倍，摇匀，得质量浓度分别为 101.0、
103.0、20.2、22.4、1.5、1.0、19.1、70.2、2.5 μg/mL
没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄
素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、
大黄酚、大黄素甲醚的混合对照品储备液。4 ℃保
存备用。
2.2.2 供试品溶液制备 取大黄干燥叶，研细（过
60 目筛），混匀，取 1 g，精密称定，置具 50 mL 塞
锥形瓶中，精密加入 45 mL 甲醇，称定质量。超声
处理（功率 500 W，频率 40 kHz）30 min，放至室
温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液过 0.45 μm
微孔滤膜，作为供试品溶液，待测。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察 精密量取混合对照品储备液
0.1、0.4、0.8、1.6、2.0、3.0 mL，分别置 10 mL 量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列混合对照
品溶液。按照“2.1”项下色谱条件分别进样 10 μL，
记录色谱图。分别以对照品溶液质量浓度为横坐标
（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，9 种待
测成分的线性回归方程、线性范围和相关系数（r），
见表 2。
表 2 9 种成分回归方程及线性范围
Table 2 Regression equations and linear ranges of nine constituents
对照品 线性方程 线性范围/ng r
没食子酸 Y＝53.137 X－0.100 3 20.20～606.0 0.999 6
番泻苷 B Y＝13.499 X＋0.124 1 79.30～2 379.0 0.999 9
大黄酚-1-O-葡萄糖苷 Y＝27.935 X＋0.037 2 10.10～301.8 0.999 7
大黄酚-1-O-葡萄糖苷 Y＝25.989 X＋0.032 5 14.80～443.7 0.999 9
芦荟大黄素 Y＝654.89 X＋0.080 0 0.70～2.2 0.999 7
大黄酸 Y＝552.95 X＋0.046 9 0.13～3.9 0.999 6
大黄素 Y＝ 53.47 X＋0.074 1 12.40～372.0 1.000 0
大黄酚 Y＝16.482 X＋0.044 2 38.80～1 164.0 0.999 9
大黄素甲醚 Y＝56.494 X＋0.021 2 6.20～185.4 0.999 9

2.3.2 精密度试验 取混合对照品溶液，每次进样
5 μL，连续进样 6 次，记录没食子酸、番泻苷 B、
大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟
大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的
峰面积积分值，计算 RSD，分别为 0.92%、2.18%、
1.76%、1.86%、2.08%、1.42%、0.86%、0.68%、1.56%，
表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 精密吸取同 8 号样品的供试品
溶液，分别于制备后的 0、2、4、8、16、24 h 进样
10 μL 测定，记录没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-
葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大
黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的峰面积积分
值，计算 RSD，分别为 1.48%、1.76%、2.36%、3.24%、
2.62%、1.46%、2.12%、0.89%、1.24%，表明供试
品溶液在 24 h 内稳定。
2.3.4 重复性试验 取 8 号大黄干燥叶粉末样品 6
份，精密称定，按“2.2.2”项下方法平行制备供试
品溶液，分别进样，测定峰面积。计算没食子酸、
番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄
糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大
黄素甲醚平均质量分数的 RSD，分别为 2.15%、
2.82%、2.16%、1.72%、2.24%、2.56%、1.82%、1.62%
和 1.48%，结果表明方法的重复性良好。
2.3.5 加样回收率试验 取 8 号大黄叶样品粉末
（过 6 号筛）各约 0.5 g 6 份，精密称定，分别加入
低、中、高 3 个质量浓度的对照品溶液（分别相当
于大黄叶原有质量分数的 80%、100%、120%），每
一质量浓度取 2 份，按“2.2.2”项下方法制备，根
据测得量和加入量计算各成分的加样回收率和
RSD。结果没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄
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糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、
大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的的平均回收率分别
为 98.26%、97.66%、 96.38%、95.76%、98.64%、
96.82%、98.36%、95.84%和 96.26%，RSD 分别为
2.36%、1.84%、1.46%、1.72%、2.43%、2.36%、1.96%、
2.03%和 1.64%。
2.4 样品测定
取 22 批待测大黄干燥叶样品各 20 g，研成细
粉，过 60 目筛。精密称取各样品约 1 g，每个样
品平行称 2 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品
溶液，并按“2.1”项下色谱条件进行 9 种化学成
分的定量分析，测定各成分峰面积，代入回归方
程，计算各成分在样品中的质量分数。结果见表
3。进一步分析结果，1、2、3 年生的大黄叶中 9
种化学成分量，其中游离型蒽醌总量的平均值分
别为 0.757 5、0.816 5、0.686 2 mg/g；结合型蒽醌
总量的平均值分别为 0.111 4、0.072 8、0.074 4
mg/g；没食子酸的平均值分别为 0.085 5、0.122 3、
0.094 9 mg/g；番泻苷 B 的平均值分别为 0.564 8、
0.389 1、0.291 0 mg/g。
表 3 22 批样品中 9 种成分的测定结果 (n = 3)
Table 3 Determination of nine constituents in 22 batches of samples (n = 3)
质量分数/(mg·g−1)
样品
没食子酸 番泻苷 B
大黄酚-1-O-
葡萄糖苷
大黄素-8-O-
葡萄糖苷
芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
1 0.040 6 0.435 9 0.046 9 0.049 2 0.000 9 0.001 1 0.141 4 0.754 4 0.053 9
2 0.059 5 0.338 7 0.088 7 0.115 6 0.000 3 0.001 3 0.156 8 0.760 7 0.055 7
3 0.063 7 0.516 1 0.050 5 0.063 7 0.000 1 0.001 5 0.155 7 0.759 4 0.055 7
4 0.181 0 0.313 0 0.044 5 0.036 5 0.000 3 0.000 2 0.144 4 0.568 3 0.047 9
5 0.091 9 0.404 2 0.057 4 0.052 9 0.000 5 0.001 4 0.148 0 0.772 1 0.057 0
6 0.092 1 0.298 1 0.048 8 0.034 2 0.000 9 0.000 9 0.093 8 0.617 6 0.039 6
7 0.043 4 0.209 9 0.066 2 0.086 3 0.001 5 0.001 1 0.123 5 0.563 8 0.036 3
8 0.051 9 0.285 2 0.076 5 0.054 0 0.000 3 0.000 2 0.058 9 0.268 8 0.024 4
9 0.043 4 0.178 5 0.019 8 0.013 2 0.000 2 0.001 0 0.096 3 0.564 1 0.039 9
10 0.167 4 0.231 1 0.019 4 0.025 7 0.000 1 0.000 5 0.102 2 0.381 7 0.026 8
11 0.186 5 0.509 1 0.038 1 0.026 1 0.000 3 0.001 0 0.149 3 0.860 4 0.058 9
12 0.178 9 0.213 0 0.016 8 0.009 9 0.000 2 0.000 4 0.098 4 0.568 4 0.034 1
13 0.102 9 1.108 9 0.049 9 0.036 5 0.001 6 0.000 8 0.119 9 0.560 6 0.044 0
14 0.097 6 0.413 3 0.041 5 0.044 7 0.000 2 0.001 3 0.143 6 0.775 6 0.052 9
15 0.186 3 0.688 8 0.029 6 0.019 8 0.000 1 0.000 5 0.105 6 0.675 3 0.041 3
16 0.099 4 0.322 2 0.050 5 0.036 5 0.000 9 0.001 1 0.095 7 0.632 1 0.044 8
17 0.103 5 0.293 9 0.054 8 0.048 5 0.000 2 0.001 3 0.154 8 0.818 6 0.051 5
18 0.102 0 0.266 5 0.029 2 0.022 0 0.000 4 0.000 2 0.059 6 0.349 5 0.022 2
19 0.089 9 0.224 5 0.045 3 0.029 6 0.000 8 0.000 6 0.068 7 0.432 1 0.027 8
20 0.070 0 0.345 2 0.031 3 0.031 9 0.000 7 0.000 8 0.097 6 0.498 9 0.036 4
21 0.079 7 0.292 6 0.015 2 0.008 2 0.000 4 0.000 3 0.062 5 0.346 6 0.022 3
22 0.107 4 1.051 2 0.045 5 0.042 3 0.001 1 0.000 6 0.115 4 0.556 6 0.037 8

3 讨论
3.1 测定成分的筛选
现代研究表明，大黄中主要含有蒽醌类、酚类、
鞣质类、氨基酸等多种化学成分，其中没食子酸、
(+)-儿茶素、番泻苷 A、番泻苷 B、芦荟大黄素、大
黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等的生物活性
比较显著[8-10]。根据同一种植物不同器官中化学成
分积累的近似性，以及前期预试验结果分析，为了
合理开发利用大黄叶片资源，综合分析本实验确定
同时检测没食子酸、番泻苷 B、大黄酚-1-O-葡萄糖
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苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、
大黄素、大黄酚和大黄素甲醚 9 种成分[11]。
3.2 色谱条件选择
本实验分别考察了乙腈-0.05%乙酸水、乙腈-0.1%
乙酸水、乙腈-0.2%乙酸水；甲醇-0.05%乙酸水，甲
醇-0.1%乙酸水，甲醇-0.2%乙酸水等色谱条件。甲
醇-0.2%乙酸水梯度洗脱时，色谱峰分离度良好，最
终选择甲醇-0.2%乙酸水的色谱条件研究大黄叶中
化学成分。采用 PDA 检测器在 200～400 nm 对检
测波长进行了考察；结果表明，检测波长在 260 nm
时色谱图所包含的信息量较大，杂质干扰较少，线
性关系和重复性良好，各色谱峰分离较好，参考文
献报道[11-12]，故本实验选择检测波长为 260 nm。
3.3 样品提取方法考察
以 9 种成分的提取率为指标，考察了 2 种提取
溶剂甲醇和乙醇，结果表明甲醇优于乙醇；考察了
甲醇回流、超声 2 种提取方法，结果表明两者无明
显差异；考察了甲醇超声提取 30、45、60 min 3 种
提取时间，结果表明三者也无明显差异。综合分析，
提取方法最终确定为甲醇超声 30 min。
3.4 结果分析
从测定结果分析，1、2、3 年生的大黄叶中 9
种化学成分量，其中游离型蒽醌总量的平均值分
别为 0.757 5、0.816 5、0.686 2 mg/g，其中 2 年生
的最高；结合型蒽醌总量的平均值分别为 0.111 4、
0.072 8、0.074 4 mg/g，其中 1 年生的最高；没食
子酸的平均值分别为 0.085 5、0.122 3、0.094 9
mg/g，其中 2 年生最高；番泻苷 B 的平均值分别为
0.564 8、0.389 1、0.291 0 mg/g，其中 1 年生最高；
分析其原因与生长年限有关，同时还与大黄化学
成分在其地上、地下部位的积累和转运规律相关。
至于光照、水分、伴生物等其他因素有待进一步
研究分析。
另外，与《中国药典》2015 年版对大黄药材中
游离蒽醌总量要求不能低于 0.20%要求比较，大黄
叶中的游离蒽醌总量超过 0.20%，这将为大黄叶的
开发应用提供理论依据。
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