全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 22期 2014年 11月 ·3295·

白头翁皂苷 D 体外抗肝癌作用及其机制研究
岳文华 1, 2，徐 坤 3，冯育林 1，张 天 2，许琼明 2，杨世林 1, 2，刘艳丽 2*
1. 江西中医药大学药学院，江西 南昌 330000
2. 苏州大学药学院，江苏 苏州 215123
3. 铜仁市人民医院 药学部，贵州 铜仁 554300
摘 要：目的 探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法 采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402
增殖的影响，同时观察 BEL-7402细胞形态的变化，采用集落形成实验考察白头翁皂苷 D对 BEL-7402细胞集落形成的影响；
Hoechest 33342染色观察 BEL-7402细胞凋亡的形态变化；流式细胞术检测 BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化；采用
Western blotting法检测 BEL-7402细胞 Bcl-2和 Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对 BEL-7402细胞增
殖有抑制作用；集落形成实验结果显示白头翁皂苷 D能明显抑制 BEL-7402细胞集落的形成，白头翁皂苷D（25.00 μg/mL）能
显著诱导 BEL-7402细胞凋亡；白头翁皂苷D（18.75、25.00 μg/mL）能显著降低 BEL-7402细胞线粒体膜电位；白头翁皂苷 D
（12.50、18.75、25.00 μg/mL）可显著上调 BEL-7402细胞中 Caspase-3的表达；白头翁皂苷D（25.00 μg/mL）可显著下调 Bcl-2
的表达。结论 白头翁皂苷 D有良好的体外抗肝癌作用，其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白 Bcl-2、Caspase-3的表达有关。
关键词：白头翁皂苷 D；抗肿瘤；肝癌；细胞凋亡；线粒体途径
中图分类号：R286.91 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)22 - 3295 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.22.015
Antihepatocarcinoma effect in vitro of pulchinenoside D and mechanisms
YUE Wen-hua1, 2, XU Kun3, FENG Yu-lin1, ZHANG Tian2, XU Qiong-ming2, YANG Shi-lin1, 2, LIU Yan-li2
1. College of Pharmacy, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330000, China
2. College of Pharmacy, Suzhou University, Suzhou 215123, China
3. Department of Pharmacy, Tongren City People’s Hospital, Tongren 554300, China
Abstract: Objective To research the antihepatocarcinoma effect in vitro of pulchinenoside D and mechanisms. Methods MTT assay was
used to evaluate the proliferative inhibition of pulchinenoside D on hepatoma carcinoma cells (BEL-7402), and the morphology of
BEL-7402 cells was also observed; Colony formation method was used to examine colony-forming role by pulchinenoside D on BEL-7402
cells; The morphological changes of drug-induced apoptosis of BEL-7402 were observed by Hoechst 33342 staining; Flow cytometry assay
was used to analyze the apoptosis rate and mitochondrial membrane potential changes of BEL-7402 cells; Western blotting was employed to
determine the expression levels of Bcl-2/Caspase-3 protein in BEL-7402 cells. Results MTT assay showed that pulchinenoside D could
inhibit the proliferation of BEL-7402 cells, and colony formation method showed that pulchinenoside D could significantly inhibit the
colony formation of BEL-7402 cells; Pulchinenoside D (25.00 μg/mL) could significantly induce the apoptosis of BEL-7402;
Pulchinenoside D (18.75 and 25.00 μg/mL) could significantly reduce the mitochondrial membrane potential of BEL-7402 cells;
Pulchinenoside D (12.50, 18.75, and 25.00 μg/mL) could significantly increase the expression of Caspase-3; Pulchinenoside D (25.00
μg/mL) could significantly down-regulate the expression of Bcl-2. Conclusion Pulchinenoside D has antitumor effects in vitro; The
mechanism is involved in regulation of the mitochondrial pathway apoptosis-related protein expression of Bcl-2 and caspase-3.
Key words: pulchinenoside D; antitumor; liver cancer; apoptosis; mitochondrial pathway

恶性肿瘤是目前危害人类生命健康的严重疾病
之一，严重威胁着人类的生存和健康。肝癌是最常
见的恶性肿瘤之一，我国每年死于肝癌的人数约为
11万，占全世界肝癌死亡人数的 45%[1]。手术切除

收稿日期：2014-01-06
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81273402）；重大新药创制国家科技重大专项资助（2011ZX11102-001-19）；江苏省自然科学基金资助
（BK2012620）；2013年苏州大学大学生创新创业训练计划（2013xj060）
作者简介：岳文华（1988—），女，研究方向为天然药物活性成分及其作用机制研究。Tel: 13162021065 E-mail: 1403393217@qq.com
*通信作者 刘艳丽，女，副教授，主要从事中药药理学研究。Tel: (0512)69561421 E-mail: liuyanli@suda.edu.cn
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一直是治疗肝癌的首选方法，但肝癌的总体手术切
除率仅有 20%左右，术后生存率也不高，容易复发
和转移，难以实现根治。化疗在肿瘤的治疗中占有极
其重要的地位，但其毒副作用和耐药现象限制了化疗
药物的应用。故临床上急需开发高效、低毒或作用于
新靶点的药物。中药因其毒副作用小，更易于被患者
所接受等特点，在抗肿瘤药物中占有重要地位。
白头翁为毛茛科（Ranunculaceae）植物白头翁
Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel. 的干燥根，别名
野丈人、粉草、毛姑杂花、老公花、大将军草、大
碗花、老冠花（山东）等，生于山野、荒坡及田野
间，喜生向阳处[1]。白头翁皂苷 D为白头翁中提取
的活性成分，有研究表明白头翁皂苷 D有抗肿瘤作
用[2]，能明显抑制人结肠癌细胞的增殖[3]，Son等[4]
通过实验证明白头翁皂苷D通过下调Bcl-2、VEGF、
HIF1α 的表达，上调 Caspase-3 的表达引起胰腺癌
系 PANC-1、MIAPaCa-2、BXPC-3、AsPC-1和 HPAC
细胞的凋亡。Won 等[5]发现白头翁皂苷 D 通过
c-Met/Akt/mTOR 通路诱导胃癌细胞 MKN-45 的凋
亡，发挥其抗肿瘤作用。本实验对白头翁皂苷 D的
体外抗肝癌作用进行了初步研究，并进一步探讨其
机制，为更好地开发利用白头翁提供实验依据。
1 材料
1.1 试药与试剂
白头翁皂苷 D［常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃鼠
李糖-(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉
伯糖苷］，由苏州大学天然药物化学教研室提供，
质量分数＞95%；5-氟尿嘧啶（5-FU），上海旭东海
普药业有限公司生产，批号 120603；RPMI 1640培
养液、小牛血清（NBS，美国 Gibco公司）；注射用
硫酸链霉素（大连美罗大药厂）；注射用青霉素钠
（华北制药股份有限公司）；二甲基亚砜（DMSO）、
胰蛋白酶（Amersco公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT）
（美国 Biosharp公司）。
1.2 细胞株
人肝癌细胞株 BEL-7402 购于中国科学院上海
细胞库。
1.3 仪器
BB—15 型二氧化碳培养箱（德国 Thermo
Scientific 公司）；KA—1000 型飞鸽牌台式离心机；
X85—2 恒温磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器有限公
司）；SW—CJ—2D型双人单面净化工作台（苏州净
化设备有限公司）；XDS—1A 型倒置式生物显微镜
（重庆光电仪器总公司）；Eclipse TE2000—U型倒置
荧光显微镜（日本Nikon公司）；Thermo MULTISKAN
FC型酶标仪（德国 Thermo Scientific公司）；WD—
9405B 型水平摇床（沃德生物医学仪器公司）；
THS—10电热恒温水槽（宁波天恒仪器厂）；低温高
速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；BSA223S电
子天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］。
2 方法
2.1 细胞培养
从液氮罐中取出 BEL-7402 细胞冻存管，迅速
置于 37 ℃恒温水浴中解冻，离心去除冻存液，加
入已配制的含 10% NBS的 RPMI 1640培养液，吹
打均匀并移至细胞培养瓶中，于 37 ℃、5% CO2
的饱和湿度孵箱中静置培养。次日换液，3～4 d传
代，取对数生长期细胞用于实验。
2.2 MTT 实验
收集对数生长期 BEL-7402 细胞，用含 10%
NBS的RPMI 1640培养基调整细胞悬液浓度至 1×
105/mL，接种于 96孔板中，每孔加入 100 μL细胞
悬液，置于 5% CO2、37 ℃培养箱中培养 24 h使细
胞贴壁完全。次日分组，对照组正常培养，给药组
给予白头翁皂苷 D（终质量浓度分别为 1.562 5、
3.125 0、6.250 0、12.500 0、25.000 0、50.000 0
μg/mL），每个质量浓度均设 3 个复孔，另设 5-FU
（25 μg/mL）阳性对照组，药物分别与细胞作用 24、
48、72 h，终止培养前 4 h加入MTT（5 mg/mL），
10 μL/孔，培养结束后弃去上层液体，每个复孔加
入 100 μL DMSO溶液，于摇床上振摇 10 min使结
晶充分溶解，采用酶标仪检测 490 nm 处各孔吸光
度（A）值。取其均值计算药物对细胞的增殖抑制率，
并求其半数抑制浓度（IC50）值，重复 3次实验。
增殖抑制率＝1－A 给药组 / A 对照组
2.3 细胞形态观察
取对数生长期 BEL-7402细胞，用含 10% NBS
的RPMI 1640培养基调整细胞浓度为 5×104/mL于
6孔板中， 37 ℃、5% CO2条件下培养过夜，次日
进行分组：给药组加入白头翁皂苷 D（终质量浓度
为 6.25、12.50、25.00 μg/mL），阳性组加入 5-FU
（25 μg/mL），200 μL/孔，对照组加入等体积培养基，
每组均设 3个复孔，药物作用 24 h后，去掉上清液，
置于显微镜下观察形态变化。
2.4 集落形成实验
取对数生长期 BEL-7402细胞，用含 10% NBS
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 22期 2014年 11月 ·3297·

的 RPMI 1640培养基调整细胞浓度为 250/mL，混
匀后吸取 2 mL细胞悬液于 35 mm无菌培养皿中，
于 37 ℃、5% CO2条件下培养过夜，次日分组给药，
给药组加入白头翁皂苷 D（终质量浓度为 0.781、
1.562、3.125 μg/mL），阳性组加入 5-FU（25 μg/mL），
200 μL/孔，对照组加入等体积培养基，每组均设 3
个复孔，在 37 ℃、5% CO2培养箱中静置 10 d，弃
去培养基，Gimesa染色，镜下记录含 50个细胞以
上的细胞集落数，计算集落形成率和集落抑制率，
并拍照。
集落形成率＝集落数 / 接种细胞数
集落抑制率＝1－给药组集落数 / 对照组集落数
2.5 细胞凋亡实验（Annexin V-FITC/PI 双染）
取对数生长期的 BEL-7402 细胞，用含 10%
NBS 的 RPMI 1640 培养基调整细胞浓度为 5×
105/mL于 6孔板中，2 mL/孔，在 37 ℃、5% CO2
条件下培养过夜，次日进行分组：给药组加入白头
翁皂苷 D（终质量浓度为 12.50、18.75、25.00 μg/mL）
继续培养 48 h，对照组加入等体积培养基，每组均
设 3个复孔，在含 37 ℃、5% CO2的培养箱中培养
后，收集板孔里所有细胞并用PBS液洗涤细胞 2遍，
加入 500 μL 的结合缓冲液悬浮细胞，加入 5 μL
Annexin V-FITC混匀后，加入 5 μL PI，混匀，室温
避光反应 5～15 min，上流式细胞仪进行检测。
2.6 细胞凋亡的形态观察
取对数生长期的BEL-7402细胞，按“2.5”项方
法分组给药，在含 37 ℃、5% CO2的培养箱中培养后
小心吸去上层液体，用 PBS液轻洗 1次，加入结合缓
冲液 500 μL/孔，使浸满底层细胞，然后每孔加入
Hoechest 33342染液 5 μL，避光反应 15 min，于荧光
显微镜下观察并拍照（拍照前先将板内的液体吸出）。
2.7 线粒体膜电位检测
取对数生长期 BEL-7402细胞，按“2.5”项方
法分组给药。培养结束后收集孔内所有细胞，每个
组的细胞中加入 0.5 mL细胞培养液，并移至对应的
1 mL EP管中，加入 0.5 mL JC-1染色工作液，充分
混匀，使细胞在 37 ℃避光孵育 20 min。在孵育期
间，按照每毫升 JC-1染色缓冲液（5×）加入 4 mL
蒸馏水的比例，配制适量的 JC-1染色缓冲液（1×），
并放置于冰浴中备用。37 ℃孵育结束后，4 ℃低
温离心机中 600 r/min离心 3～4 min，沉淀细胞，
小心吸除上清，加入 1 mL JC-1染色缓冲液（1×）
重悬细胞，洗涤细胞 2次。每个组加入 0.5 mL JC-1
染色缓冲液（1×）重悬后，于流式细胞仪上进行
检测。
2.8 Western blotting 检测细胞 Caspase-3 和 Bcl-2
蛋白表达
取对数生长期 BEL-7402细胞，经胰酶消化后，
以 1×106/mL 接种入细胞培养瓶内。待细胞长至
80%～90%，给药组加入白头翁皂苷 D（终质量浓
度 12.50、18.75、25.00 μg/mL），对照组加入等体
积培养基，作用 48 h后，提取各给药组及对照组的
蛋白，BCA法测定蛋白浓度。将蛋白样品加入 SDS-
聚丙烯凝胶，经电泳、转膜、5%脱脂奶粉封闭，封
闭结束后，TBST漂洗 3次，每次 5 min；加一抗溶
液，4 ℃孵育过夜，第 2天 37 ℃恒温热孵 1 h，用
TBST液洗 3次，每次 15 min；加入对应的荧光二
抗，37 ℃避光孵育 2 h，用 TBST液避光洗 3次，
每次 15 min，于荧光扫描仪中扫描。由 SigmaScan
Pro 5软件分析图片中条带灰度值。实验重复 3次。
2.9 统计分析
实验结果以 ±x s表示，采用 SPSS 11.5统计学
软件进行 One-way ANOVA方差分析。
3 结果
3.1 对 BEL-7402 细胞的生长抑制作用
实验结果显示，白头翁皂苷 D 在 1.562 5～
50.000 0 μg/mL内对 BEL-7402细胞的增殖有不同
程度的抑制作用，作用 24、48、72 h的增殖抑制率
分别为 5.89%～ 66.19%、 18.59%～ 81.04%及
24.21%～84.20%，呈明显量效关系，其 IC50值分别
为（11.93±2.42）、（7.74±1.09）、（4.91±1.42）
μg/mL。结果见图 1。



图1 白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖的影响 ( ± = 3x s , n )
Fig. 1 Effect of pulchinenoside D on proliferation of
BEL-7402 cells ( ± = 3x s , n )
增
殖
抑
制
率
/
%

100
80
60
40
20
0
1.562 5 3.125 0 6.250 0 12.500 0 25.000 0 5-FU
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)
24 h
48 h
72 h
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3.2 对 BEL-7402 细胞形态的影响
实验结果显示，对照组细胞生长良好，不同质量
浓度白头翁皂苷D处理后贴壁细胞数减少，皱缩变圆，
死亡细胞数增加，呈明显剂量依赖性。结果见图 2。
3.3 对 BEL-7402 细胞集落形成的抑制作用
结果显示，白头翁皂苷 D 3.125 μg/mL 组及
5-FU（25 μg/mL）组均无集落形成；对照组及白头
翁皂苷 D 0.781、1.562 μg/mL组的集落形成率分别
为 82.1%、79.7%、65.8%，白头翁皂苷 D 0.781、
1.562 μg/mL对BEL-7402细胞集落形成的抑制率分
别为 3.0%和 19.8%，其他剂量组抑制率均为 100%。
结果见图 3。


对照 5-FU 白头翁皂苷D 6.25 μg∙mL−1 白头翁皂苷D 12.50 μg∙mL−1 白头翁皂苷D 25.00 μg∙mL−1
图 2 白头翁皂苷 D 对 BEL-7402 细胞形态的影响
Fig. 2 Effect of pulchinenoside D on morphological features of BEL-7402 cells

对照 5-FU 白头翁皂苷D 0.781 μg·mL−1 白头翁皂苷D 1.562 μg·mL−1 白头翁皂苷D 3.125 μg·mL−1



与对照组比较：**P＜0.01，下同
**P < 0.01 vs control group, same as below
图 3 白头翁皂苷 D 对 BEL-7402 细胞集落形成的影响 ( ± = 3x s , n )
Fig. 3 Effect of pulchinenoside D on colony forming of BEL-7402 cells ( ± = 3x s , n )
3.4 对 BEL-7402 细胞凋亡率的影响
结果显示，白头翁皂苷 D 12.50 μg/mL 组
BEL-7402细胞凋亡率为（11.08±0.56）%，与对照
组比较差异不显著（P＞0.05）；白头翁皂苷 D 18.75、
25.00 μg/mL组细胞凋亡率分别为（24.84±4.29）%、
（81.71±3.02）%，与对照组比较差异非常显著（P＜
0.01）。结果见图 4。
3.5 对 BEL-7402 细胞凋亡形态的影响
白头翁皂苷 D作用 BEL-7402细胞 48 h后，经
Hoechest 33342染色观察，结果显示白头翁皂苷 D
12.50 μg/mL组对BEL-7402细胞凋亡形态的影响不
大，25.00 μg/mL 时细胞发出强烈的蓝色荧光，表
明被染色的细胞越来越多，大量细胞凋亡。结果见
图 5。
集
落
形
成
率
/
%

100
80
60
40
20
0
集
落
抑
制
率
/
%

100
80
60
40
20
0

对照 5-FU 0.781 1.562 3.125
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

对照 5-FU 0.781 1.562 3.125
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

**
**
**
** **
**
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图 4 白头翁皂苷 D 作用 BEL-7402 细胞凋亡率的影响 ( ± = 3x s , n )
Fig. 4 Effect of pulchinenoside D on apoptosis rate of BEL-7402 cells ( ± = 3x s , n )

对照 白头翁皂苷 D 12.50 μg·mL−1 白头翁皂苷 D 18.75 μg·mL−1 白头翁皂苷 D 25.00 μg·mL−1
图 5 白头翁皂苷 D 对 BEL-7402 细胞凋亡形态的影响
Fig. 5 Effect of pulchinenoside D on morphological features of BEL-7402 cells
3.6 对 BEL-7402 细胞线粒体膜电位的影响
JC-1 是一种用于检测线粒体膜电位的理想探
针，在线粒体膜电位高时，JC-1聚集在线粒体的基
质中，形成复合物（aggregates JC-1），可以产生红
色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在
线粒体的基质中，以单体（monomer JC-1）存在，
产生绿色荧光，以红、绿荧光强度的相对比值来衡
量线粒体膜电位去极化程度。
实验结果显示，白头翁皂苷 D（18.75、25.00
μg/mL）组作用 BEL-7402细胞 48 h后，红色荧光强
度与绿色荧光强度的比值呈下降趋势，与对照组比
较差异非常显著（P＜0.01），表明白头翁皂苷 D 可
导致BEL-7402细胞线粒体膜电位下降。结果见图 6。
3.7 对 BEL-7402 细胞中 Bcl-2 和 Caspase-3 蛋白
水平的影响
结果表明，18.75 μg/mL 白头翁皂苷 D 组
BEL-7402细胞中Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低



图 6 白头翁皂苷 D 对 BEL-7402 线粒体膜电位影响
( ± = 3x s , n )
Fig. 6 Effect of pulchinenoside D on mitochondrial membrane
potential of BEL-7402 cells ( ± = 3x s , n )
（P＜0.05），25.00 μg/mL白头翁皂苷 D组 Bcl-2蛋
白表达较对照组显著降低（P＜0.01）。结果见图 7。
103
102
101
100
100 101 102 103 100 101 102 103
103
102
101
100
103
102
101
100
103
102
101
100
100 101 102 103 100 101 102 103
PI

Annexin V-FITC

100
80
60
40
20
0
凋
亡
率
/
%

对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

对照 白头翁皂苷 D
12.50 μg·mL−1
白头翁皂苷 D
18.75 μg·mL−1
白头翁皂苷 D
25.00 μg·mL−1
膜
电
位

0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)


**
**
**
**
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与对照组比较：*P＜0.05
*P < 0.05 vs control group
图 7 白头翁皂苷 D 对 BEL-7402 中 Bcl-2 和 Caspase-3 蛋白表达的影响 ( ± = 3x s , n )
Fig. 7 Effect of pulchinenoside D on expression of Bcl-2 and Caspase-3 proteins in BEL-7402 cells ( ± = 3x s , n )
12.50、18.75 和 25.00 μg/mL 白头翁皂苷 D 组
BEL-7402细胞中剪切并活化的Caspase-3蛋白表达
较对照组显著提高（P＜0.01）。结果见图 7。
4 讨论
细胞活性测定是体外筛选抗肿瘤药物和临床
肿瘤药敏试验的重要方法之一，MTT实验、集落形
成实验结果均显示白头翁皂苷 D 对人肝癌细胞
BEL-7402 增殖有明显的抑制作用，表明其有良好
的抗肝癌活性。
细胞死亡分为两种方式，即坏死与凋亡，细胞
凋亡又称程序性细胞死亡（Programmed cell death，
PCD）[6]。采用 Annexin V-PI双染流式细胞术考察
白头翁皂苷 D对 BEL-7402细胞凋亡的影响，以探
讨其对肝癌细胞的细胞毒作用的相关机制。研究发
现，白头翁皂苷 D 在剂量为 25.00 μg/mL 时作用
BEL-7402细胞 48 h的凋亡率为 81.71%±3.02%，
提示白头翁皂苷 D能够显著诱导人肝癌细胞凋亡。
通过 Hoechest 33342染色观察，发现白头翁皂苷 D
对 BEL-7402 细胞形态有影响，随着给药浓度的增
加，发出强烈蓝色荧光的细胞越来越多，表明大量
细胞凋亡，提示其对 BEL-7402 细胞的凋亡作用呈
剂量依赖性，这与凋亡率的结果相吻合。
在细胞凋亡的早期阶段，细胞发生病理改变
前，线粒体膜电位就已经下降，一旦线粒体跨膜电
位崩溃，则细胞凋亡不可逆转[7]。线粒体膜电位下
降是细胞凋亡的特征性标志，维持正常的线粒体膜
电位是抑制细胞凋亡的重要手段[8]。采用流式细胞
术考察白头翁皂苷 D对 BEL-7402细胞线粒体膜电
位的影响，研究结果显示，白头翁皂苷 D 在 18.75
和 25.00 μg/mL作用 BEL-7402细胞 48 h后，红色
荧光强度与绿色荧光强度的比值呈下降趋势，与对
照组比较有显著性差异（P＜0.01），提示白头翁皂
苷 D对 BEL-7402细胞凋亡作用可能是通过线粒体
途径诱导的，白头翁皂苷 D 通过作用细胞的线粒
体，使膜电位下降，进而诱导细胞凋亡。
凋亡是多基因严格控制的过程，涉及一系列凋
亡信号转导系统，目前比较清楚的通路主要有外源
性途径和内源性途径。Bcl-2家族分子在内源性（线
粒体）途径中起重要作用 [9]。Caspase-3 是 ICE
（Interleukin-1β-converting enzyme）家族中能够执行
细胞凋亡的蛋白酶分子，其底物是聚合多聚酶
（PARP）。PARP是修复损伤DNA的酶，被Caspase-3
酶破坏后，其修复损伤 DNA 的功能丧失，从而导
致细胞凋亡，它是 Caspase 家族中的最重要的凋亡
对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

B
cl
-2
/β
-a
ct
in

1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
C
le
av
ed
C
as
pa
se
-3
/β
-a
ct
in

2.4
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0
Bcl-2
β-actin

Cleaved Caspase-3
β-actin
对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

对照 12.50 18.75 25.00
白头翁皂苷D / (μg·mL−1)

** **
** **
*
2.8×104
4.5×104

1.7×104
4.5×104
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 22期 2014年 11月 ·3301·

执行者之一，是细胞凋亡过程中的主要效应因子[10]。
采用Western blotting实验，探讨白头翁皂苷 D诱导
细胞凋亡的相关机制。研究表明，18.75 μg/mL 白
头翁皂苷 D 可以明显下调 BEL-7402 细胞中 Bcl-2
蛋白的表达（P＜0.05），25.00 μg/mL 白头翁皂苷 D
可以显著下调 Bcl-2 蛋白表达（P＜0.01），白头翁
皂苷 D各组（12.50、18.75、25.00 μg/mL）均可显
著上调BEL-7402细胞中磷酸化的Caspase-3蛋白表
达（P＜0.01）。提示白头翁皂苷 D可下调 Bcl-2蛋
白，使得线粒体发生一系列改变，导致 Caspase 家
族蛋白被激活，启动细胞凋亡程序。综上所述，白
头翁皂苷 D体外有明显的抗肝癌活性，其抗肝癌活
性可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡实现的。
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