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Effects of different Bupleuri Radix compatibility on contents of seven compounds in Chaige Jieji Decoction

不同柴胡配伍对柴葛解肌汤7种成分量的影响



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 12 期 2014 年 6 月

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不同柴胡配伍对柴葛解肌汤 7 种成分量的影响
孙慧敏 1, 2,邢 婕 1, 2,李震宇 1*,秦雪梅 1*
1. 山西大学 中医药现代研究中心,山西 太原 030006
2. 山西大学化学化工学院,山西 太原 030006
摘 要:目的 柴胡为多基原药材,《中国药典》2010 年版规定的柴胡包括柴胡 Bupleurum chinense DC. 和狭叶柴胡 B.
scorzonerifolium Willd.。以柴葛解肌汤为研究对象,对柴胡、狭叶柴胡配伍的复方进行化学成分比较,明确不同柴胡配伍对
复方中其他成分的影响。方法 首先采用 HPLC 法建立葛根素、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩
素 7 种化学成分的定量测定方法,并对不同柴胡配伍的柴葛解肌汤进行定量测定。结果 线性范围内 7 种化合物的标准曲线
呈良好线性关系,平均加样回收率均在 94.1%~106.6%,所有化合物的精密度、重复性的 RSD 均小于 2%,且样品在 12 h
内稳定性良好。不同柴胡配伍对柴葛解肌汤 7 种成分的量影响无显著性差异。结论 所建立方法简单,重复性好,可用于柴
葛解肌汤的质量控制,而不同柴胡配伍对柴葛解肌汤中其他成分及全方药理作用的影响值得进一步研究。
关键词:柴胡;狭叶柴胡;柴葛解肌汤;配伍;HPLC;葛根素;芍药内酯苷;芍药苷;甘草苷;黄芩苷;汉黄芩苷;黄芩素
中图分类号:R286.02 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2014)12 - 1718 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.12.012
Effects of different Bupleuri Radix compatibility on contents of seven compounds
in Chaige Jieji Decoction
SUN Hui-min1, 2, XING Jie1, 2, LI Zhen-yu1, QIN Xue-mei1
1. Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, Shanxi University, Taiyuan 030006, China
2. College of Chemistry and Chemical Engineering, Shanxi University, Taiyuan 030006, China
Abstract: Objective Bupleuri Radix is a kind of medicinal material derived from many sources, and Bupleurum chinense and B.
scorzonerifolium are described in Chinese Pharmacopoeia. In this study, the chemical constituents in Chaige Jieji Decoction (CJD)
composed of B. scorzonerifolium or B. chinense were compared to elucidate the influence of different Bupleuri Radix on other
components in CJD. Methods Firstly, an HPLC method for the simultaneous determination of seven constituents (puerarin, albiflorin,
paeoniflorin, liquiritin, baicalin, wogonoside, and baicalein) in CJD was developed. Then CJD composed of B. scorzonerifolium or B.
chinense was compared by the established method. Results Good linearity for the seven compounds was obtained, and the average
recoveries ranged from 94.1% to 106.6%. The RSD values of all the precision and repeatability of the compounds were less than 2%, and
the test sample was stable within 12 h. No significant differences were observed between the two different CJD. Conclusion The
developed HPLC method is simple and repeatable, which is helpful for the quality control of CJD. The effects of different Bupleuri Radix
compatibility on other ingredients in CJD and pharmacological activity of CJD deserve further study.
Key words: Bupleurum chinense DC.; Bupleurum scorzonerifolium Willd.; Chaige Jieji Decoction; compatibility; HPLC; puerarin;
albiflorin; paeoniflorin; liquiritin; baicalin; wogonoside; baicalein

柴胡是中医临床常用中药,具有疏散退热、疏
肝解郁、升举阳气的功效,主要用于治疗感冒发热、
寒来暑往、胸胁胀痛、月经不调、子宫脱垂、脱肛
等[1]。《中国药典》2010 年版收载的柴胡分别来自
伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC. 或狭叶柴
胡 B. scorzonerifolium Willd. 的干燥根,前者药材习
称“北柴胡”,后者称“南柴胡”或“红柴胡”。本
课题组之前的研究[2]和已有文献报道[3-5]均提示柴

收稿日期:2014-02-20
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31070295)
作者简介:孙慧敏(1990—),女,硕士在读,研究方向为中药质量控制与评价。Tel: (0351)7011202 E-mail: sunhm9413@163.com
*通信作者 秦雪梅,女,博士,教授,博士生导师,主要从事中药质量控制方面的工作。
Tel: (0351)7011202 Fax: (0351)7018379 E-mail: qinxm@sxu.edu.cn
李震宇,男,博士,副教授,硕士生导师,主要从事中药化学及质控研究。E-mail: lizhenyu@sxu.edu.cn
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胡和狭叶柴胡在化学成分上存在差异,柴胡中柴胡
皂苷 a、d 的量高于狭叶柴胡[3],2 种柴胡挥发性成
分的量[4]、组成[5]均不相同,二者的初级代谢物差
异也比较明显[2]。但在临床运用中,两者经常不加
区别混用。将不同的柴胡配伍到同一复方中,对全
方其他成分的煎出是否影响,目前尚不清楚。
柴葛解肌汤(Chaige Jieji Decoction,CJD)出
自明•陶华《伤寒六书》,由柴胡、葛根、黄芩、白
芍、羌活、白芷、桔梗、石膏、生姜、大枣和甘草
组成,用于感冒风寒、寒郁化热、火郁重、恶寒轻、
头痛肢楚、目痛鼻干、心烦不眠、眼眶痛、苔薄黄、
脉浮等症[6]。柴胡是柴葛解肌汤的君药,因此,本
研究选择柴葛解肌汤对这一问题进行研究。目前,
柴葛解肌汤在临床应用方面的文献较多[6-8],对其药
效或指标成分定量测定的报道较少,且已有文献只
对芍药苷或葛根素进行定量测定[9-10],评价指标较
单一。因此,本研究建立柴葛解肌汤的 HPLC 多成
分同时测定方法,并以这些成分为指标对柴胡、狭
叶柴胡配伍的复方(柴葛解肌汤)进行比较,为柴
胡、狭叶柴胡的临床应用提供研究依据。
1 仪器与材料
Waters e2695 高效液相色谱仪,2489 UV/Vis
Detector;Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色
谱柱;Empower 3 色谱工作站;CPA225D 十万分之
一分析天平、BSA124S 万分之一分析天平,SI 德国
赛多利斯公司。
对照品甘草苷(批号 111610-201005,质量分
数为 94.9%)、黄芩苷(批号 110715-200212,质量
分数>99%),购自中国食品药品检定研究院;黄芩
素(批号 121227,质量分数>99%)、汉黄芩苷(批
号 121130,质量分数>99%),购自上海融合医药
科技有限公司;葛根素(批号 3681-99-0,质量分
数>98%),购自 Asenal 公司;芍药苷(批号
23180-57-6,质量分数>98%)、芍药内酯苷(批号
39011-90-0,质量分数>98%),购自上海盛中医药
化工有限公司。
中药材柴胡、葛根、黄芩、白芷、生姜、白芍、
桔梗、羌活、甘草、大枣和石膏末共 11 味药,柴胡
购自山西陵川,狭叶柴胡购自河北安国,经山西大
学中医药现代研究中心秦雪梅教授鉴定,为伞形科
植物柴胡 Bupleurum chinense DC. 和狭叶柴胡
Bupleurum scorzonerifolium Willd. 的干燥根,留样
于山西大学,编号分别为 CH-7 和 CH-8;其余药材
购自山西华源制药集团,经山西大学秦雪梅教授鉴
定分别为豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.)
Ohwi 的干燥根、唇形科植物黄芩 Scutellaria
baicalensis Georgi 的干燥根、伞形科植物白芷
Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook.
f. 的干燥根、姜科植物姜 Zingiber offcinale Rosc. 的
根茎、毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干
燥根、桔梗科植物桔梗 Platycodon grandiflorum
(Jacq.) A. DC. 的干燥根、伞形科植物羌活
Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang 的干燥根
茎、豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干
燥根、鼠李科植物枣 Ziziphus jujuba Mill. 的干燥成
熟果实和硫酸盐类矿物硬石膏族石膏 Gypsum
Fibrosum。分析甲醇,北京化工厂;色谱乙腈,Fisher
公司;娃哈哈纯净水。
柴葛解肌汤样品的制备:根据处方分别称取柴
胡或狭叶柴胡(6 g)、葛根(9 g)、黄芩(6 g)、石
膏(5 g)、羌活(3 g)、桔梗(3 g)、白芍(6 g)、
白芷(3 g)、生姜(6 g)、大枣 2 枚,加入 8 倍量水,
浸泡 30 min。武火煮沸后继续煎煮 30 min,滤出药
汁。二煎,加入 5 倍量的水武火煎煮至沸腾后改文
火煎煮 30 min,滤出药汁。合并 2 次煎煮滤液,浓
缩定容至 100 mL。
2 方法与结果
2.1 混合对照品贮备液的制备
精密称取葛根素、芍药内酯苷、芍药苷、甘草
苷、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素的对照品适量,用
甲醇配制成葛根素 0.105 mg/mL、芍药内酯苷 0.102
mg/mL、芍药苷 0.294 mg/mL、甘草苷 0.101 mg/mL、
黄芩苷 0.170 mg/mL、汉黄芩苷 0.475 mg/mL 和黄
芩素 0.121 mg/mL 的混合对照品贮备液。
2.2 供试品溶液的制备
取柴葛解肌汤样品 1 mL,加甲醇定容至 5 mL,
涡旋,离心,取上清液过 0.22 μm 微孔滤膜,即得。
2.3 阴性样品溶液的制备
按处方比例及“柴葛解肌汤样品的制备”及
“2.2”项下方法分别制备缺葛根阴性样品、缺白芍
阴性样品、缺甘草阴性样品和缺黄芩阴性样品。
2.4 HPLC 色谱条件
Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;
柱温 25 ℃;流动相 A 为乙腈,B 为 0.1%磷酸水溶
液;梯度洗脱条件:0~15 min,20%~44% A;15~
20 min,44%~52% A;体积流量 0.8 mL/min;进样
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量 10 μL;检测波长 230 nm。
2.5 方法学考察
2.5.1 方法专属性 分别精密吸取混合对照品溶
液、供试品溶液与阴性样品溶液各 10 μL,在上述
色谱条件下进样测定,色谱图见图 1,各个阴性样
品在被检测物色谱峰处均无干扰。





1-葛根素 2-芍药内酯苷 3-芍药苷 4-甘草苷 5-黄芩苷 6-汉黄芩苷 7-黄芩素
1-puerarin 2-albiflorin 3-paeoniflorin 4-liquiritin 5-baicalin 6-wogonoside 7-baicalein

图 1 混合对照品 (A)、供试品 (B)、缺葛根阴性样品 (C)、缺白芍阴性样品 (D)、缺甘草阴性样品 (E)、
缺黄芩阴性样品 (F) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of mixture reference substances (A), testing solution (B), negative sample without Puerariae Lobatae
Radix (C), negative sample without Paeoniae Alba Radix (D), negative sample without Glycyrrhizae
Radix (E), and egative sample without Scutellariae Baicalensis Radix (F)

2.5.2 线性范围考察 将混合对照品溶液稀释至系
列质量浓度,分别平行进样 2 次,取峰面积的平均
值作标准曲线,进行线性考察。以对照品溶液质量
浓度为横坐标(X),峰面积积分值为纵坐标(Y),绘
制标准曲线,得葛根素、芍药内酯苷、芍药苷、甘
草苷、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素的回归方程和线
性范围。葛根素 Y=2.2×107 X+4.6×105,r=0.999 1,
线性范围 0.011~0.105 mg/mL;芍药内酯苷 Y=
2.3×107 X+87 604,r=0.999 0,线性范围 0.010~
0.102 mg/mL;芍药苷 Y=2.3×107 X+2.5×105,r=
0.999 0,线性范围 0.029~0.294 mg/mL;甘草苷 Y=
2.4×107 X+80 497,r=0.999 2,线性范围 0.010~
0.101 mg/mL;黄芩苷 Y=1.5×107 X+8.8×105,r=
0.999 1,线性范围 0.017~0.170 mg/mL;汉黄芩苷
Y=1.7×107 X-43 106,r=0.999 7,线性范围 0.048~
0.475 mg/mL;黄芩素 Y=3.4×107 X-38 400,r=
0.999 4,线性范围 0.012~0.121 mg/mL。
2.5.3 精密度试验 取同一供试品溶液,进样 10
μL,连续进样 6 次,记录峰面积。葛根素、芍药内
酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩
素峰面积的 RSD 分别为 1.6%、1.9%、1.5%、1.6%、
1.3%、0.3%、1.6%,表明仪器精密度良好。
2.5.4 重复性试验 制备柴葛解肌汤样品 6 份,并
分别按供试品溶液制备方法制备 6 份,在上述实验
条件下进样,记录峰面积,计算其质量分数及 RSD。
葛根素、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉
黄芩苷和黄芩素的平均质量分数分别为0.067、0.053、
0.167、0.067、1.337、0.282、0.094 mg/g,RSD 分
别为 1.7%、1.9%、1.7%、1.7%、1.4%、0.8%、1.6%。
2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于 0、
1、2、4、6、8、12 h 进样 10 μL,记录峰面积,葛
根素、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉
黄芩苷和黄芩素的峰面积的 RSD 分别为 1.5%、
1.8%、1.9%、1.4%、1.0%、1.3%、0.9%。表明供试
品溶液中上述 7 种成分在 12 h 内稳定性良好。
2.5.6 回收率试验 精密量取已测定的同一柴葛解
肌汤样品 9 份,每份 1 mL,分别精密加入一定量的
葛根素对照品溶液,定容至 5 mL,配制成高、中、
低不同质量浓度样品溶液,每个质量浓度制备 3 份。
在上述条件下进样测定,进行回收率试验。同法测
定芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩
苷和黄芩素回收率。结果 7 种成分的平均回收率在
2
3
4
5
6
7 2
3 4
5
6
71 2
3
4
5
6
7
A
3
4
1
C
D
B
FE
1
2
3
5
6
7 1 21
5
4
6
7
0 4 8 12 16 20 0 4 8 12 16 20 0 4 8 12 16 20
t / min
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94.1%~106.6%,RSD 在 0.3%~1.9%,表明加样回
收率试验结果良好。
2.6 不同柴胡配伍的柴葛解肌汤指标成分比较
采用上述已建立的方法,按“柴葛解肌汤样品
的制备”及“2.2”项下分别制备柴胡和狭叶柴胡配
伍的样品 6 份,按 HPLC 色谱条件进样。测得葛根
素、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄
芩苷和黄芩素 7 种成分的量见表 1。并对不同成分做
t 检验,结果显示 2 种不同来源柴胡配伍的柴葛解
肌汤中这 7 种成分的量没有显著性差异(P>0.05)。

表 1 不同来源柴胡配伍的柴葛解肌汤的 7 种成分的定量测定 ( x ±s,n=6)
Table 1 Determination of seven compounds in CJD composed of Bupleuri Radix from different sources ( x ±s, n=6)
质量分数 / (mg·g−1) 样品
葛根素 芍药内酯苷 芍药苷 甘草苷 黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素
含柴胡的柴葛解肌汤 0.067±0.001 0.053±0.001 0.167±0.003 0.067±0.001 1.337±0.019 0.282±0.002 0.094±0.001
含狭叶柴胡的柴葛解肌汤 0.064±0.001 0.054±0.001 0.166±0.002 0.067±0.001 1.328±0.023 0.282±0.005 0.091±0.002
P 值 0.28 0.49 0.71 0.65 0.65 0.95 0.06

3 讨论
在建立柴葛解肌汤 7 种成分定量测定方法时,
对于流动相的选择,在文献报道[9-12]基础上,比较了
乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-1%冰乙酸水
溶液等洗脱溶剂,最后选择乙腈-0.1%磷酸水溶液作
为流动相进行梯度洗脱,可以达到满意的分离效果。
关于检测波长的选择,本实验对 7 个分析物对照品
进行了 PDA 全波长扫描,发现各组分的最大吸收波
长分别为:葛根素 248 nm、芍药内酯苷和芍药苷 231
nm、甘草苷 276 nm、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素 276
nm。而在 230 nm 处各化合物均有较大响应值,且分
离度良好,故选择 230 nm 作为检测波长。
柴胡为柴葛解肌汤的君药,本研究结果显示柴
胡和狭叶柴胡分别配伍的柴葛解肌汤中,葛根素、
芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷
和黄芩素的量均无显著性差异。然而,柴葛解肌汤
的化学成分非常复杂,本研究只对 7 种指标成分进
行了比较,不同的柴胡配伍后对其他成分的影响值
得进一步研究。此外,已有文献报道狭叶柴胡和柴
胡在药理活性上存在显著差异[13],狭叶柴胡挥发油
的解热作用明显大于柴胡,而柴胡的保肝作用要优
于狭叶柴胡;本课题组前期也比较了柴胡和狭叶柴
胡在解热、抗炎、镇痛及保肝等方面的药效[14],结
果显示,柴胡的抗炎镇痛作用强于狭叶柴胡,而狭
叶柴胡的解热作用优于柴胡。此外,对于柴胡和狭
叶柴胡分别配伍的逍遥散抗抑郁作用[15],本课题组
研究发现狭叶柴胡组成逍遥散的抗抑郁作用及起效
时间略优于柴胡。因此,不同柴胡配伍的柴葛解肌
汤复方的药理作用是否存在差异,下一步将进行深
入研究。
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