全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月

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蛇附子化学成分及抗氧化活性研究
傅志勤 1，黄泽豪 1，林 婧 3，贺文达 1，纪明妹 1，许 文 1, 2*，范世明 1*
1. 福建中医药大学药学院，福建 福州 350122
2. 福建中医药大学 生物医药研发中心，福建 福州 350122
3. 福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350122
摘 要：目的 研究蛇附子（三叶崖爬藤 Tetrastigma hemsleyanum 的块根）的化学成分及抗氧化活性。方法 采用多种色谱
技术对其进行分离纯化，应用 1H-NMR、13C-NMR、MS、HR-MS 等波谱学方法进行结构鉴定；利用 DPPH 法进行抗氧化活
性测定。结果 从蛇附子 80%甲醇提取物中分离得到 14 个化合物，分别鉴定为山柰酚（1）、槲皮素（2）、水杨酸（3）、苯
甲酸（4）、氧化白藜芦醇（5）、儿茶素（6）、表儿茶素（7）、表没食子儿茶素（8）、原花青素 B2（9）、原花青素 B1（10）、
绿原酸（11）、原儿茶醛（12）、对羟基苯甲酸（13）、原儿茶酸（14）；其中化合物 2、8、9、10、12 抗氧化活性 IC50值分别
为 14.15、14.19、15.99、12.4、15.98 μmol/L，优于阳性药维生素 C（IC50值为 23.0 μmol/L）。结论 化合物 4～12 均系首次从
该植物中分离，得到蛇附子中除了黄酮类成分外，也富含较多的有机酸类成分；并且化合物 2、8、9、10、12 抗氧化活性良好。
关键词：蛇附子；槲皮素；表没食子儿茶素；原花青素 B2；原儿茶醛；抗氧化
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)11 - 1583 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.003
Chemical constituents in root tuber of Tetrastigma hemsleyanum and their
anti-oxidative activities
FU Zhi-qin1, HUANG Ze-hao1, LIN Jing3, HE Wen-da1, JI Ming-mei1, XU Wen1, 2, FAN Shi-ming1
1. School of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China
2. Centre of Biomedical Research & Development, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China
3. Academy of Integrative Medicine, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China
Abstract: Objective To study the chemical compositions from the root tuber of Tetrastigma hemsleyanum and their anti-oxidative
activities. Methods The compounds were isolated by various column chromatography. Their structures were identified by
spectroscopic methods including 1H-NMR, 13C-NMR, MS, HR-MS, etc. The anti-oxidative activities were evaluated by DPPH radical
scavenging assay. Results Fourteen compounds were isolated from the root tuber of T. hemsleyanum, they were identified as
kaempferol (1), quercetin (2), salicylic acid (3), benzoic acid (4), oxyresveratrol (5), catechin (6), L-epicatechin (7), epigallocatechin
(8), procyanidin B2 (9), procyanidin B1 (10), 3-O-caffeoylquinic acid (11), protocatechualdehyde (12), p-hydroxybenzoic acid (13), and
protocatechuic acid (14). The anti-oxidative IC50 values of compounds 2, 8, 9, 10, and 12 were 14.15, 14.19, 15.99, 12.4, and 15.98
μmol/L, respectively, better than the positive control Vit C (IC50 value was 23.0 μmol/L). Conclusion Compounds 4—12 are isolated
from T. hemsleyanum for the first time. It has been demonstrated that the root tuber contain flavonoids and also is rich in organic acids.
Moreover, compounds 2, 8, 9, 10, and 12 have the certain prospects in the development of natural anti-oxidative agents.
Key words: Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg; quercetin; epigallocatechin; procyanidin B2; protocatechualdehyde; anti-oxidative
activity

蛇附子 Tetrastigmatis Hemsleyani Radix 为葡萄
科（Vitaceae）崖爬藤属 Tetrastigma Planch. 植物三
叶崖爬藤（又名三叶青）Tetrastigma hemsleyanum
Diels et Gilg[1]的块根，是福建、浙江地区传统习用

收稿日期：2015-02-28
基金项目：福建省教育厅资助课题（JA13154）；国家公益性行业科研专项（201407002-3）；福建中医药大学校管课题（X2014134-学科）；国家级大学
生创新创业训练计划项目（201510393014）
作者简介：傅志勤（1991—），男，硕士研究生，研究方向为药物制剂及质量控制研究。E-mail: fuzhiqin123@sina.com
*通信作者 许 文（1986—），男，研究实习员，研究方向为中药药效物质基础研究。E-mail: yaoxuexuwen@qq.com
范世明（1964—），男，高级实验师，研究方向为中药鉴定与资源评价研究。E-mail: r3570379@163.com
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草药，习称“一粒珠”。蛇附子具有活血散瘀、解毒、
化痰的作用，临床上用于治疗病毒性脑膜炎、乙型
脑炎、病毒性肺炎、黄胆性肝炎等，特别是对小儿
高热有特效[2]。蛇附子中的化学成分研究已有报
道[3-7]，从中分离鉴定的成分多为黄酮类、三萜甾醇
和脂肪酸类，而极性部位的化学成分研究相对较少，
并且前期课题组采用质谱引导纯化系统，已从蛇附
子中分离制备 4 种黄酮类成分：芦丁（15）、异槲皮
苷（16）、山柰酚-3-O-芸香糖苷（17）、紫云英苷（18），
并用于不同产地蛇附子质量评价[8]。本实验继上述
研究后，对蛇附子化学成分进一步研究，从蛇附子
80%甲醇提取物中分离得到 14 个化合物，分别鉴定
为山柰酚（kaempferol，1）、槲皮素（quercetin，2）、
水杨酸（salicylic acid，3）、苯甲酸（benzoic acid，
4）、氧化白藜芦醇（oxyresveratrol，5）、儿茶素
（catechin，6）、表儿茶素（L-epicatechin，7）、表没
食子儿茶素（epigallocatechin，8）、原花青素 B2
（procyanidin B2，9）、原花青素 B1（procyanidin B1，
10）、绿原酸（3-O-caffeoylquinic acid，11）、原儿
茶醛（protocatechualdehyde，12）、对羟基苯甲酸
（ p-hydroxybenzoic acid ， 13 ）、 原 儿 茶 酸
（protocatechuic acid，14）。其中化合物 4～12 均系
首次从该植物中分离得到，蛇附子中除了黄酮类成
分外，也富含较多的有机酸类成分。另外，采用改
进的 DPPH 法对蛇附子中分离所得单体（包含前期
分离所得的 4 种黄酮类成分[9]）进行抗氧化活性研
究表明，除水杨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸、山柰
酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷以外，其他化合物呈现
出较好的抗氧化活性，其中化合物 2、8、9、10、
12 的抗氧化活性优于阳性对照维生素 C。
1 仪器与试药
柱色谱硅胶（100～200、200～300 目，青岛海
洋化工厂）；D101 大孔树脂（天津海光化工有限公
司）；Sephadex LH-20（北京绿百草科技发展有限公
司）；ODS（50 μm，美国 Welch 公司）；Waters
AutoPurification 自动纯化系统：Waters2545 二元梯
度泵，Waters 2767 自动进样器和收集器，Waters 515
补偿泵和在线稀释泵，Waters 2489 紫外检测器，
Waters SQD2 质谱（美国 Waters 公司）；Bruker
Avance 500 型超导核磁共振波谱仪（德国 Bruker 公
司）；micrOTOF 高分辨率飞行时间质谱仪（德国
Bruker 公司）；CPA225D 型十万分之一分析天平（德
国 Sartorius 公司）；KQ-500E 台式超声波清洗器（昆
山市超声仪器有限公司）；FY135 型中草药粉碎机
（天津市泰斯特仪器有限公司）；DPPH（美国 Sigma
公司）；维生素 C 对照品（中国食品药品检定研究
院，批号 100425-201103）；乙腈为色谱纯（德国
MERCK 公司）；Milli-Q 超纯水仪（美国 Millipore
公司），其余试剂均为分析纯。
蛇附子采自福建福安，经福建中医药大学药用
植物实验室范世明高级实验师及生药教研室黄泽豪
副教授鉴定为三叶崖爬藤 Tetrastigma hemsleyanum
Diels et Gilg 的干燥块根，样本（SYQ20131201）存
放于福建中医药大学药学院药用植物标本室。
2 提取与分离
干燥蛇附子（2 kg），用 10 倍量 80%甲醇回流
提取 3 次，每次 1 h，回收甲醇得流浸膏 175.2 g，
用热水超声混悬，采用 D101 大孔吸附树脂柱（60
cm×5.5 cm）粗分，用不同体积分数（10%、30%、
70%、95%）的乙醇梯度洗脱，各 5 000 mL，收集
30%和 95%乙醇洗脱部位浓缩得浸膏分别为 36.8、
10.4 g，95%洗脱部位经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸
乙酯（10∶1→0∶1）梯度洗脱，每 200 mL 收集 1
份。第 20～31 组分合并经过 Sephadex LH-20 凝胶
色谱（氯仿-甲醇 1∶1）分离得到化合物 1（28 mg）
和化合物 2（12 mg），30%洗脱部位经硅胶柱色谱，
二氯甲烷-甲醇梯度（50∶1→1∶1）洗脱，TLC 检
识，合并得到 4 个流分（Fr. 1～4）。Fr. 1 经硅胶柱
色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（50∶1→20∶1），
再经制 ODS 柱及自动纯化系统制备（乙腈-0.1%甲
酸梯度洗脱）得化合物 3（15 mg）、4（12 mg）和
5（8 mg）。Fr. 2 经反复 Sephadex LH-20 凝胶色谱（氯
仿-甲醇 1∶1）和自动纯化系统制备（乙腈-0.1%甲
酸梯度洗脱）得化合物 6（55 mg）、7（12 mg）和
8（8 mg）。Fr. 3 经反复 ODS 柱色谱（甲醇-水梯度
洗脱），再经自动纯化系统制备（乙腈-0.1%甲酸梯
度洗脱）得化合物 9（4 mg）和 10（22 mg）。Fr. 4
经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（15∶1→1∶1）
梯度洗脱，再经反复 ODS 柱色谱（甲醇-水梯度洗
脱）和自动纯化系统制备得化合物 11（10 mg）、12
（5 mg）、13（12 mg）、14（10 mg）。
3 结构鉴定
化合物 1：黄色粉末，HR-ESI-MS m/z: 285.039 5
[M－H]− (calcd. for C15H10O6)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 12.28 (1H, brs, H-5), 8.09 (2H, d, J = 9.0
Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.40
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(1H, d, J = 2.1 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J = 2.1 Hz,
H-6)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 177.4 (C-4),
165.6 (C-7), 162.5 (C-5), 160.6 (C-4′), 158.3 (C-9),
148.1 (C-2), 137.2 (C-3), 130.7 (C-2′), 130.7 (C-6′),
123.7 (C-1′), 116.3 (C-3′), 116.3 (C-5′), 104.6 (C-10),
99.3 (C-6), 94.5 (C-8)。以上数据与文献报道基本一
致[8]，故鉴定化合物 1 为山柰酚。
化合物 2：黄色粉末，HR-ESI-MS m/z: 301.034 7
[M－H]− (calcd. for C15H10O7)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 12.49 (1H, s, H-5), 7.68 (1H, d, J = 2.2
Hz, H-2′), 7.54 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz, H-6′), 6.88
(1H, d, J = 8.5 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d, J = 2.0 Hz,
H-8), 6.18 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100
MHz, CD3OD) δ: 175.9 (C-4), 163.9 (C-7), 160.7
(C-9), 156.2 (C-5), 147.7 (C-4′), 146.8 (C-2), 145.1
(C-3′), 135.8 (C-3), 122.0 (C-1′), 120.0 (C-6′), 115.6
(C-5′), 115.1 (C-2′), 103.0 (C-10), 98.2 (C-6), 93.4
(C-8)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化
合物 2 为槲皮素。
化合物 3：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 137.023 3
[M－H]− (calcd. for C7H6O3)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 7.85 (1H, dd, J = 8.0, 1.7 Hz, H-6), 7.45
(1H, ddd, J = 8.4, 7.2, 1.8 Hz, H-4), 6.90 (1H, ddd, J =
9.2, 8.4, 0.7 Hz, H-5), 6.87 (1H, dd, J = 8.1, 1.1 Hz,
H-3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 173.5 (C-7),
163.2 (C-2), 136.6 (C-4), 131.5 (C-6), 120.0 (C-5),
118.1 (C-3), 113.9 (C-1)。以上数据与文献报道基本
一致[11]，故鉴定化合物 3 为水杨酸。
化合物 4：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 121.028 5
[M－H]− (calcd. for C7H6O2)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 8.02 (2H, m, H-2, 6), 7.57 (1H, m, H-4),
7.45 (2H, m, H-3, 5)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)
δ: 169.8 (C-7), 134.0 (C-4), 131.9 (C-1), 130.7 (C-2,
6), 129.4 (C-3, 5)。以上数据与文献报道基本一致[12]，
故鉴定化合物 4 为苯甲酸。
化合物 5：淡黄色粉末，HR-ESI-MS m/z:
243.065 1 [M－H]− (calcd. for C14H12O4)。1H-NMR
(400 MHz, CD3OD) δ: 7.32 (1H, d, J = 9.1 Hz, H-6),
7.26 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-α), 6.81 (1H, d, J = 16.4
Hz, H-β), 6.44 (2H, d, J = 2.2 Hz, H-2′, 6′), 6.32～
6.29 (2H, m, H-3, 5), 6.13 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-4)；
13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 159.6 (C-3′, 5′),
159.2 (C-2), 157.3 (C-4), 142.2 (C-1′), 128.4 (C-α),
126.5 (C-β), 124.8 (C-6), 117.9 (C-1), 108.4 (C-5),
105.7 (C-2′, 6′), 103.6 (C-3), 102.3 (C-4′)。以上数据
与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物 5 为氧化白
藜芦醇。
化合物 6：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 289.071 2
[M－H]－ (calcd. for C15H14O6)。1H-NMR (400 MHz,
CD3COCD3) δ: 6.81 (1H, brs, H-2′), 6.70 (1H, d, J =
8.1 Hz, H-5′), 6.67 (1H, dd, J = 1.6, 8.1 Hz, H-6′),
5.93 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 5.79 (1H, d, J = 1.6 Hz,
H-6), 4.47 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-2), 3.81 (1H, m, H-3),
2.80 (1H, m, H-4α), 2.44 (1H, dd, J = 8.4, 16.0 Hz,
H-4β)；13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3) δ: 157.8
(C-7), 157.2 (C-5), 156.9 (C-9), 145.7 (C-3′), 145.7
(C-4′), 132.2 (C-1′), 120.1 (C-5′), 115.7 (C-6′), 115.3
(C-2′), 100.7 (C-10), 96.2 (C-6), 95.5 (C-8), 82.7
(C-2), 68.4 (C-3), 28.7 (C-4)。以上数据与文献报道基
本一致[14]，故鉴定化合物 6 为儿茶素。
化合物 7：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 289.071 0
[M－H]－ (calcd. for C15H14O6)。1H-NMR (400 MHz,
CD3COCD3) δ: 7.03 (1H, brs, H-2′), 6.81 (1H, dd, J =
1.7, 8.2 Hz, H-6′), 6.76 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 5.99
(1H, d, J = 1.9 Hz, H-8), 5.89 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-6),
4.85 (1H, s, H-2), 4.18 (1H, d, J = 3.4 Hz, H-3), 2.80
(1H, m, H-4α), 2.71 (1H, dd, J = 2.6, 16.4 Hz, H-4β)；
13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3) δ: 157.6 (C-7),
157.6 (C-5), 157.2 (C-9), 145.4 (C-4′), 145.3 (C-3′),
132.3 (C-1′), 119.4 (C-5′), 115.5 (C-6′), 115.3 (C-2′),
99.8 (C-10), 96.2 (C-6), 95.7 (C-8), 79.5 (C-2), 67.0
(C-3), 29.0 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致[14]，
故鉴定化合物 7 为表儿茶素。
化合物 8：灰白色粉末，HR-ESI-MS m/z:
305.065 5 [M－H]− (calcd. For C15H14O7)。1H-NMR
(400 MHz, CD3OD) δ: 6.51 (2H, d, J = 0.4 Hz, H-2′,
6′), 5.93 (1H, s, H-8), 5.91 (1H, s, H-6), 4.75 (1H, s,
H-2), 4.17 (1H, ddd, J = 4.6, 3.2, 1.4 Hz, H-3), 2.85
(1H, dd, J = 16.6, 4.6 Hz, H-4a), 2.73 (1H, dd, J =
16.9, 2.9 Hz, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ:
158.0 (C-7), 157.6 (C-5), 157.3 (C-9), 146.7 (C-3′, 5′),
133.6 (C-4′), 131.5 (C-1′), 107.0 (C-2′, 6′), 100.1
(C-10), 96.3 (C-6), 95.8 (C-8), 79.9 (C-2), 67.5 (C-3),
29.2 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴
定化合物 8 为表没食子儿茶素。
化合物 9：棕红色粉末，HR-ESI-MS m/z:
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577.134 8 [M－H]− (calcd. for C30H26O12)。1H-NMR
(400 MHz, CD3OD) δ: 7.09 (1H, brs, H-10′), 6.87
(1H, brs, H-10), 6.82 (2H, m, H-13, 14′), 6.71 (2H, dd,
J = 8.2 Hz, H-14, 13′), 6.01 (1H, brs, H-8), 5.98 (1H,
brs, H-6), 5.96 (1H, s, H-6′), 5.09 (1H, brs, H-2), 4.96
(1H, s, H-2′), 4.72 (1H, brs, H-4), 4.29 (1H, brs, H-3′),
3.99 (1H, brs, H-3), 2.93 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-4α′),
2.88 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-4′)；13C-NMR (100 MHz,
CD3OD) δ: 158.5 (C-7), 159.3 (C-8α), 157.8 (C-5),
155.8 (C-5′), 155.8 (C-7′), 153.9 (C-8α′), 145.4
(C-11′), 145.4 (C-11), 145.3 (C-12), 145.3 (C-12′),
131.9 (C-9), 131.9 (C-9′), 119.4 (C-14), 119.2 (C-14′),
115.5 (C-13), 115.5 (C-13′), 115.3 (C-10), 115.0
(C-10′), 107.0 (C-8′), 100.7 (C-4α), 100.5 (C-4α′),
96.5 (C-6′), 96.4 (C-6), 96.0 (C-8), 79.4 (C-2′), 77.0
(C-2), 72.9 (C-3), 66.5 (C-3′), 37.0 (C-4), 29.0 (C-4′)。
以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物 9
为原花青素 B2。
化合物 10：棕红色粉末，HR-ESI-MS m/z:
577.134 4 [M－H]− (calcd. for C30H26O12)。1H-NMR
(400 MHz, CD3OD) δ: 6.96 (2H, brs, H-10, 10′), 6.73
(2H, d, J = 8.0 Hz, H-13, 14′), 6.70 (2H, d, J = 8.2 Hz,
H-14, 13′), 6.00 (1H, brs, H-8), 5.93 (2H, brs, H-6, 6′),
5.06 (1H, brs, H-2), 4.74 (1H, s, H-2′), 4.66 (1H, brs,
H-4), 4.04 (1H, s, H-3′), 3.95 (1H, d, J = 4.2 Hz, H-3),
2.59 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-4′), 2.57 (1H, d, J = 16.4
Hz, H-4α′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 157.8
(C-8α), 157.7 (C-7), 156.0 (C-5′), 155.4 (C-7′),
155.4 (C-5), 153.0 (C-8α′), 145.5 (C-11′), 145.4
(C-11), 145.4 (C-12′), 145.2 (C-12), 132.6 (C-9),
132.4 (C-9′), 119.5 (C-14), 119.4 (C-14′), 115.7
(C-13′), 115.5 (C-13), 115.4 (C-10), 114.7 (C-10′),
107.3 (C-8′), 101.4 (C-4α), 101.1 (C-4α′), 97.0
(C-6′), 96.3 (C-6), 95.9 (C-8), 82.2 (C-2′), 77.0
(C-2), 72.7 (C-3), 68.0 (C-3′), 36.9 (C-4), 29.2
(C-4′)。以上数据与文献报道的基本一致[16]，故鉴
定化合物 10 为原花青素 B1。
化合物 11：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 353.086 9
[M－H]− (calcd. for C16H18O9)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 7.56 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-7′), 7.05 (1H,
d, J = 2.0 Hz, H-2′), 6.96 (1H, dd, J = 8.2, 2.0 Hz,
H-6′), 6.78 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5′), 6.26 (1H, d, J =
15.9 Hz, H-8′), 5.33 (1H, m, H-3), 4.17 (1H, m, H-5),
3.73 (1H, dd, J = 8.4, 3.2 Hz, H-4), 1.99～2.25 (4H,
m, H-2a, 2b, 6a, 6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ:
177.0 (C-7), 168.6 (C-9′), 149.6 (C-4′), 147.1 (C-7′),
146.8 (C-3′), 127.7 (C-6′), 123.0 (C-1′), 116.5 (C-5′),
115.2 (C-8′), 115.2 (C-2′), 76.1 (C-1), 73.4 (C-4), 72.0
(C-3), 71.3 (C-5), 38.8 (C-6), 38.2 (C-2)。以上数据与
文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物 11 为绿原酸。
化合物 12：灰白色粉末，HR-ESI-MS m/z:
137.023 7 [M－H]− (calcd. for C7H6O3)。1H-NMR
(400 MHz, CD3OD) δ: 7.31 (1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz,
H-6), 7.30 (1H, d, J = 1.7 Hz, H-2), 9.69 (1H, s, H-7),
6.91 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz,
CD3OD) δ: 191.7 (C-7), 152.3 (C-3), 145.8 (C-4),
129.4 (C-1), 125.0 (C-6), 114.8 (C-5), 113.9 (C-2)。以
上数据与文献报道基本一致[18]，故鉴定化合物 12
为原儿茶醛。
化合物 13：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 137.023 5
[M－H]− (calcd. for C7H6O3)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 7.88 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.82 (2H,
d, J = 8.8 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (CD3OD, 100 MHz)
δ: 170.1 (C-7), 163.3 (C-4), 133.0 (C-2, 6), 122.6
(C-1), 116.0 (C-3, 5)。以上数据与文献报道基本一
致[10]，故鉴定化合物 13 为对羟基苯甲酸。
化合物 14：白色粉末，HR-ESI-MS m/z: 153.018 0
[M－H]− (calcd. for C7H6O4)。1H-NMR (400 MHz,
CD3OD) δ: 7.44 (1H, brs, H-2), 7.42 (1H, dd, J = 8.8,
2.1 Hz, H-6), 6.8 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-5)；13C-NMR
(100 MHz, CD3OD) δ: 170.2 (C-7), 151.5 (C-4), 146.0
(C-3), 123.9 (C-6), 123.1 (C-1), 117.7 (C-2), 115.7
(C-5)。以上数据与文献报道基本一致[19]，故鉴定化
合物 14 为原儿茶酸。
4 抗氧化活性研究
参照文献报道的实验方法[20]进行适当改进，精
密称取适量 DPPH，用甲醇配成 50 μg/mL，避光备
用。将单体样品用甲醇制成系列浓度，各取 10 μL
加入 790 μL DPPH 溶液于 EP 管中混匀，避光反应
30 min。反应结束后，立即精密吸取 200 μL 反应液
置于 96 孔板中（n＝3），于 517 nm 波长处检测吸
光度（As）值。同时测定空白对照体系，即 10 μL
甲醇溶剂与 790 μL DPPH 溶液混合后的 Ac值，以及
背景信号纯甲醇 200 μL 的 Ab 值，每个浓度重复测
定 3 次，根据公式计算清除率，以清除率为纵坐标
（Y），化合物的浓度为横坐标（X）进行线性回归，
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月

·1587·
以清除率为 50%时待测样品浓度（IC50）为评价指
标，以维生素 C 为阳性对照。蛇附子中 18 种单体
化合物的抗氧化活性结果见表 1。
清除率＝1－(As－Ab)/(Ac－Ab)
表 1 蛇附子中 18 种化合物体外清除自由基活性检测结果
Table 1 Determination of 18 compounds from root tubers of T. hemsleyanum on in vitro scavenging free radical of DPPH
化合物 线性范围/(μmol·L−1) 线性方程 r IC50/(μmol·L−1)
1 5.31～31.86 Y＝−0.050 5 X＋0.770 5 0.999 3 26.84
2 3.82～19.08 Y＝−0.087 1 X＋0.759 0 0.996 5 14.15
3 — — — ＞1.16×103
4 — — — ＞2.58×103
5 6.58～65.78 Y＝−0.034 6 X＋0.738 5 0.995 7 43.81
6 6.58～32.89 Y＝−0.038 3 X＋0.700 7 0.996 0 31.18
7 6.58～32.89 Y＝−0.050 0 X＋0.723 5 0.995 6 24.22
8 5.17～25.83 Y＝−0.080 4 X＋0.717 6 0.996 1 14.19
9 3.29～16.45 Y＝−0.036 6 X＋0.683 5 0.998 0 15.99
10 2.72～13.62 Y＝−0.051 0 X＋0.746 4 0.996 1 12.40
11 4.73～47.30 Y＝−0.035 7 X＋0.771 7 0.997 3 29.63
12 7.24～24.25 Y＝−0.169 6 X＋0.761 9 0.993 7 15.98
13 — — — ＞2.42×103
14 11.69～58.43 Y＝−0.065 5 X＋0.748 3 0.991 7 36.06
芦丁 3.29～32.90 Y＝−0.024 8 X＋0.744 7 0.998 5 24.31
异槲皮苷 3.29～26.31 Y＝−0.043 9 X＋0.733 9 0.993 3 18.50
山奈酚-3-O-芸香糖苷 — — — ＞1.05×103
紫云英苷 — — — ＞1.05×103
维生素 C 5.85～29.24 Y＝−0.095 6 X＋0.770 2 0.999 3 23.00

5 讨论
课题组先后从蛇附子中共分离鉴定 18 个成分，
结果表明蛇附子中除了文献报道的黄酮类主要成分
外，也含有较多的有机酸类成分。并且，比较蛇附
子中各成分清除 DPPH 自由基的活性，结果表明槲
皮素、表没食子儿茶素、原花青素 B1、原花青素
B2、原儿茶醛和异槲皮苷 IC50 值较小，其抗氧化活
性均优于阳性对照维生素 C；而水杨酸、苯甲酸、
对羟基苯甲酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷和紫云英苷的
抗氧化活性则较弱（IC50大于 1 mmol/L）。
蛇附子中 18 种化合物，抗氧化活性不同：（1）
黄酮苷元与其苷类成分相比，苷元槲皮素和其 3 位
糖基取代的异槲皮苷和芦丁相比，抗氧化活性随着
糖基取代而下降；苷元山柰酚和其 3 位糖基取代的
紫云英苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷相比，抗氧化活性
随着糖基取代而大大下降。（2）黄酮间的比较，文
献报道[21]表明，黄酮类化合物的抗氧化能力与其结
构性质密切相关，B 环上的邻二酚羟基对黄酮类抗
氧化活性起主要作用；因此 B 环具有邻二酚羟基的
槲皮素及其苷类成分抗氧化活性明显优于山柰酚和
其苷类成分。（3）黄烷醇类二聚体的花青素（原花
青素 B1 和原花青素 B2）抗氧化活性优于单一体（儿
茶素和表儿茶素），并且其 3 位取代没食子酰基的表
没食子儿茶素活性优于表儿茶素。（4）有机酸类苯
甲酸、水杨酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸对比，有
机酚酸母核结构一致情况下，酚羟基越多，其抗氧
化活性越强，因而，具有邻二酚羟基的原儿茶酸表
现较好的抗氧化活性，苯甲酸、水杨酸和对羟基苯
甲酸则活性较弱；原儿茶醛相比于原儿茶酸来说，
其含醛基，抗氧化活性显著优于含羧基的原儿茶
酸；绿原酸由于其邻二酚羟基，也表现较好的抗氧
化活性。氧化白藜芦醇虽然没有邻二酚羟基结构，
但由于其具有 4 个间位酚羟基，也表现一定的抗氧
化活性。
本实验对蛇附子的化学成分进行分离，共鉴定
14 个成分，其中 9 个成分系首次分离，蛇附子中除
了黄酮类成分外，也富含较多的有机酸。DPPH 抗
氧化活性测试结果显示，所测多数成分都具有良好
的抗氧化能力，本研究对于明确蛇附子抗氧化的药
效物质基础以及蛇附子的开发利用具有指导意义。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月

·1588·
志谢：中国科学院福建物质结构研究所张旭东
研究员在核磁结构解析的帮助。本研究依托于福建
中医药大学福建省中药产业技术开发基地，福建省
中药研究开发工程实验室和福建省中药学重点实
验室。
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