全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 • 288 •
HPLC 法测定茵栀黄注射液中水解产物没食子酸
尹胜利，浦益琼，张 彤*，陶建生
上海中医药大学，上海 201203
摘 要：目的 建立灵敏度高、专属性强的茵栀黄注射液中鞣质的检测方法。方法 以茵栀黄注射液为模型药物，采用高效
液相色谱法测定注射液中水解没食子酸。Diamonsil ODS 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶
液（5︰95）；体积流量 1.0 mL/min；检测波长 271 nm；柱温室温；进样量 20 μL。结果 没食子酸进样量在 36.125～231.20
ng 与峰面积线性关系良好，平均回收率为 99.6%，RSD 为 1.77%。茵栀黄注射液中不能检测出游离没食子酸，而水解没食
子酸量较高，提示茵栀黄注射液中含有一定量的可水解鞣质。结论 通过测定注射液中水解没食子酸，可以达到间接控制注
射液中鞣质残留量的目的。
关键词：茵栀黄注射液；鞣质；水解产物；没食子酸；高效液相色谱
中图分类号：R284.2；R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)02 - 0288 - 03
Determination of hydrolysate gallic acid in Yinzhihuang Injection by HPLC
YIN Sheng-li, PU Yi-qiong, ZHANG Tong, TAO Jian-sheng
Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China
Key words: Yinzhihuang Injection; tannin; hydrolysate; gallic acid; HPLC

随着中药注射剂应用的增加，与该剂型相关的
不良反应的报道日益增多，其质量和安全性正引起
全社会的广泛关注[1-4]。有报道认为鞣质是致敏的可
能原因之一，鞣质的存在会影响中药注射液微粒系
统的稳定性[5]，导致不良反应的发生[6]；此外鞣质
还能与组织蛋白结合形成硬结，使注射部位产生疼
痛、坏死，一旦入血还能作为半抗原与血浆蛋白的
氨基结合成为高致敏原，诱发严重不良反应。而《中
国药典》所用的鞣质检查方法为鸡蛋清和氯化钠﹣
明胶法[7]，但方法灵敏度低，易出现假阴性结果。
茵栀黄注射液由茵陈、栀子、金银花提取物及
黄芩苷配制而成，具有清热解毒、利胆退黄、降低
转氨酶的作用，临床上有较多不良反应报道[8-9]。茵
栀黄注射液中栀子等药材含有较多的鞣质类成分，
现有注射液制备工艺通常难以除尽鞣质。本实验以
茵栀黄注射液为模型药物，利用可水解鞣质在一定
条件下水解成没食子酸的性质，建立了高效液相色
谱法测定水解没食子酸的方法，达到间接控制注射
液中鞣质残留量的目的，为建立灵敏度高、专属性
强的鞣质残留量的检测方法提供了一种新的思路。
1 仪器与材料
美国 Agilent 1100 型高效液相色谱仪；F5HA 型
恒温水浴锅（上海申生科技有限公司）；80—2 台式
低速离心机（上海医疗器械有限公司手术器械厂）；
PHS×3C 型 pH 计（上海精密科学仪器有限公司）。
没食子酸对照品（批号 110831-200302）购自
中国药品生物制品检定所；甲醇（色谱纯）、磷酸、
盐酸、氢氧化钠均为分析纯；水为重蒸水；茵栀黄
注射液（10 mL/支），山西三九万荣制药厂提供。
2 方法与结果
2.1 波长的选择
没食子酸对照品溶液在紫外﹣可见光全波长扫
描，在 271 nm 处有最大吸收，所以选择测定波长
为 271 nm。
2.2 色谱条件
Diamonsil ODS 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（5︰95）；
体积流量 1.0 mL/min；检测波长 271 nm；柱温室温；
进样量 20 μL。在上述条件下，没食子酸与两个相
邻色谱峰的分离度大于 1.5。理论板数按没食子酸峰

收稿日期：2010-06-09
基金项目：国家自然基金重大研究计划（90709047）；上海市教委资助项目（SZY-07025, J50302）
作者简介：尹胜利（1983—），男，河北唐山人，硕士，研究方向为中药制药技术。Tel: (021) 51322318 Email: yinsl2009@126.com
*通讯作者 张 彤 Tel: (021)51322318 Email: zhangtdmj@yahoo.com.cn
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计算不低于 19 000。色谱图见图 1。
2.3 线性关系考察
精密称定没食子酸对照品适量，置 10 mL 量瓶
中，用流动相溶解并加至刻度，制成对照品储备液。
精密吸取没食子酸对照品储备液，用流动相分别稀
释配制成 115.6、57.8、28.9、14.45、7.225、3.612 5、
1.806 2 μg/mL，进样，测定峰面积。以进样量为横坐
标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程 A＝
59 588 C－2.436（r＝0.999 9），结果表明没食子酸进
样量在 36.125～231.20 ng 与峰面积线性关系良好。

0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25
t/min
*-没食子酸
*- gallic acid
图 1 没食子酸对照品（A）、水解后（B）和水解前（C）样品的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of gallic acid reference substance (A), sample after hydrolysis (B),
and sample before hydrolysis (C)
2.4 供试品溶液的制备
取茵栀黄注射液 5 mL 于 10 mL 量瓶中，加入
4 mol/L HCl 溶液 0.5 mL，在 100 ℃水解 4 h；待冷
却至室温后以 3 000 r/min 离心，取上清液用 0.5
mol/L NaOH 溶液调 pH 值至 2～3，测定总体积；
精密量取 1 mL 于 25 mL 量瓶中，用蒸馏水稀释，
定容，混匀。经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.5 精密度试验
取高、中、低（57.8、14.45、3.612 5 μg/mL）
3 个质量浓度的对照品溶液，连续进样测定，记
录没食子酸峰面积，计算得其 RSD 分别为 0.43%、
0.60%、0.03%（n＝5）。取高、中、低 3 个质量浓
度的对照品溶液，5 d 内重复进样测定，记录没食子
酸峰面积，计算得其 RSD 分别为 0.26%、0.49%、
0.28%（n＝5）。
2.6 稳定性试验
取批号 0505282 样品制备供试品溶液，分别在
0、1、2、4、6、8、12、24 h 进样测定，进样量为
20 μL，记录没食子酸峰面积，计算得其 RSD 为
0.85%。
2.7 重现性试验
批号0505282茵栀黄注射液样品平行取样5份，
制备供试品溶液，每次进样 20 μL，记录没食子酸
峰面积，计算质量分数的 RSD 为 1.08%。
2.8 加样回收率试验
取批号 0505282 茵栀黄注射液样品 2.5 mL，共
9 份，水解后分别按 80%、100%、120%的量加入没
食子酸对照品，每一个水平平行 3 份，制备供试品
溶液，测定，计算回收率，结果平均加样回收率为
99.6%，RSD 为 1.77%。
2.9 样品测定
取批号 0505281、0505283、0505284 茵栀黄注
射液，制备供试品溶液，进样测定，进样量为 20 μL，
结果见表 1。
表 1 3 批茵栀黄注射液中没食子酸的测定结果
Table 1 Determination of gallic acid in three batch
of Yinzhihuang Injection
批号 没食子酸/(mg·mL−1) RSD/%
0505281 1.43 0.69
0505283 1.41 3.00
0505284 1.48 2.30

3 讨论
中药注射剂质量和安全性是近年来药学科研工
作的热点之一。目前的中药注射剂可以通过测定和
指纹图谱技术控制其所含的有效成分，同时也可以
通过处方筛选以及规范的制备方法来尽量减少热原
反应、溶血反应的发生[10-11]。然而与中药注射剂安
全性相关的因素还有很多，如鞣质残留与中药注射
液安全性也密切相关。然而中药注射液成分复杂，
现有的鞣质检查和测定方法存在灵敏度低、可靠性
差、容易出现假阴性结果的缺点。
A
*
B C *
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鞣质又称单宁或鞣酸，从化学结构和性质上可
分为可水解鞣质、缩合鞣质和复合鞣质。可水解鞣
质水解后能产生没食子酸。本实验利用鞣质的这个
性质，以茵栀黄注射液为研究对象，考察茵栀黄注
射液中水解鞣质的水解条件，通过 HPLC 法测定注
射液中残留鞣质水解后产生的没食子酸的量，达到
间接控制注射液中鞣质残留量的目的，为建立灵
敏度高、专属性强的鞣质检测方提供了一种新的
思路。
茵栀黄注射液不能检测出游离没食子酸，而水
解没食子酸的量较高，说明茵栀黄注射液中含有一
定量结合的可水解鞣质。中药注射液制备工艺中的
鞣质去除方法有待进一步研究。
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