全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

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四逆散镇静催眠作用的物质基础初步研究
李越峰 1, 2，苏云明 2，李廷利 3，严兴科 1*
1. 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000
2. 黑龙江中医药大学 博士后流动站，黑龙江 哈尔滨 150040
3. 黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040
摘 要：目的 初步确认四逆散镇静催眠作用的活性物质，为揭示其镇静催眠作用的机制提供依据。方法 采用 HPLC 方
法分析四逆散 ig 给药后大鼠血中及脑脊液中移行成分，色谱条件为 Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），体积流量
0.8 mL/min，柱温 28 ℃，流动相 A 为乙腈，流动相 B 为磷酸水（pH 值为 3），梯度洗脱（10%～90% A），分析时间为 140 min。
结果 4 种成分辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、甘草次酸均可使脑脊液中内源性物质 5-羟色胺（5-HT）峰面积大于空白脑脊
液中峰面积，但作用不如四逆散冻干粉整方强，且混合物组（辛弗林-芍药苷-柴胡皂苷 C-甘草次酸）脑脊液中 5-HT 峰面积
是四逆散冻干粉组的 3.2 倍；在延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间方面，辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、甘草次酸及其混合
物和四逆散冻干粉组作用强于对照组，且混合物组优于四逆散冻干粉组。结论 通过四逆散冻干粉血和脑脊液中移行成分分
析及四逆散冻干粉对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间影响的药效研究，初步确认了四逆散冻干粉的活性物质是血清中四逆散冻
干粉的移行成分辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C 及甘草次酸的混合物。
关键词：四逆散；镇静；催眠；物质基础；辛弗林；芍药苷；柴胡皂苷 C；甘草次酸
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)07 - 1361 - 05
Material basis of Sini Powder with sedative-hypnotic effect
LI Yue-feng1, 2, SU Yun-ming2, LI Ting-li3, YAN Xing-ke1
1. Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China
2. Postdoctoral Flow Station, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China
3. Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China
Abstract: Objective To confirm the active constituents in Sini Powder (freeze-dried powder) with the improving sedative-hypnotic
function for the further studies on effective constituents and their mechanism. Methods By using HPLC method and gradient elution,
chromatographic conditions were as follows: Kromasil C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), flow rate 1.0 mL/min, column
temperature 28 ℃; Mobile phase A was acetonitrile and mobile phase B was phosphoric acid water (pH = 3); mobile phase A gradient
elution (10%－90% A), and the analysis time was 140 min. Results Synephrine, paeoniflorin, saikosaponin C, and glycyrrhetinic
acid could make the peak area of endogenous substance (5-hydroxytryptamine, 5-HT) in cerebrospinal fluid larger than that in blank
cerebrospinal fluid. But all their effects were less than those of Sini Powder. The increasing peak area of 5-HT in cerebrospinal fluid
by the mixture of synephrine-paeoniflorin-saikosaponin C-glycyrrhetinic acid was 3.2 times as much as that of Sini Powder. The
effects of synephrine, paeoniflorin, saikosaponin C, glycyrrhetinic acid, their mixture, and Sini Powder on prolonging the sleeping
time of mice induced by Pentobarbital sodium were significantly stronger than those in the control group, and the mixture group was
better than the Sini Powder group. Conclusion Analysis on transitional composition of Sini Powder in blood and cerebrospinal
fluid, and efficacy study on Sini Powder on sleeping time of mice induced by Pentobarbital sodium are carried out, which indicates
that the active constituents (synephrine, paeoniflorin, saikosaponin C, and glycyrrhetinic acid) in Sini Powder are confirmed and
could improve the sedative function.
Key words: Sini Powder; sedation; hypnosis; material basis; synephrine; paeoniflorin; saikosaponin C; glycyrrhetinic acid

收稿日期：2011-06-16
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81073077）；教育部科学技术研究重点项目（212186）；甘肃省自然科学基金资助项目（1010RJZA212）
作者简介：李越峰，女，副教授，博士，硕士生导师，研究方向为中药及复方活性物质及机制研究。Tel: (0931)8765585 E-mail: lyfyxk@126.com
*通讯作者 严兴科 Tel: (0931)8765585 E-mail: lyfyxk@126.com
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中药指纹图谱技术是一种综合的、可量化的化
学分析鉴定手段，为全析中药复方化学成分提供了
技术手段，因此中药复方指纹图谱反映的不仅是药
物本身的信息，也反映了复方整体的天然化学成分
集合[1-3]。四逆散由柴胡、白芍、枳实、甘草 4 味药
组成，始载于东汉张仲景的《伤寒论》，为和解少阳、
调和肝脾的基础方剂，具有解郁透热、疏肝理脾、
宣散气血郁滞之功效。前期实验对四逆散冻干粉的
化学成分变化以及镇静催眠的药效学研究发现，该
复方在镇静催眠、提高睡眠质量方面具有独特的疗
效[4-5]。本实验采用 RP-HPLC 法[6]建立四逆散冻干
粉指纹图谱，并进行了拆方对比分析，通过四逆散
冻干粉血和脑脊液中移行成分分析及四逆散冻干粉
对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间影响的研究，初步
确认四逆散冻干粉镇静催眠作用的活性物质，为揭
示其镇静催眠的作用机制提供科学依据。
1 材料
1.1 药品与试剂
柴胡为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense
DC.的干燥根，购于河北省安国市康信义药材行；
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall. 的干
燥根，枳实（炙）为芸香科植物酸橙 Citrus aurantium
L.的干燥幼果，甘草（炙）为豆科植物甘草
Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根，均购自哈尔滨
市世一堂中药饮片厂；以上药材均经黑龙江中医药
大学生药学教研室都晓伟教授鉴定。戊巴比妥钠，
中国医药集团上海化学试剂公司；甘草酸单铵盐（质
量分数＞98%，批号 0900-200602）、柴胡皂苷 C 和
辛弗林（质量分数＞98%），成都思科华生物技术有
限公司；甘草次酸、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷（质
量分数＞98%），中国药品生物制品检定所；胰蛋白
酶，上海伯奥生物科技有限公司。三羟甲基氨基甲
烷（Tris）、高氯酸，均为分析纯；甲醇和乙腈，均
为 HPLC 级。
1.2 动物
Wistar 大鼠，雄性，体质量 200～220 g；昆明
种小鼠，雄性，体质量 18～22 g；均由黑龙江中医
药大学实验动物中心提供，许可证号：黑动字第
P00101006。
1.3 仪器
Shimad-ZU2010—A 高效液相色谱仪；色谱柱
Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）和 C18 保护
柱（大连依利特分析仪器有限公司）；KDC—40 低
速离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；
B3200S—T超声震荡仪，必能信超声上海有限公司。
2 方法与结果
2.1 混合对照品溶液的制备
精密称取芍药苷 0.521 4 g、柚皮苷 1.481 1 g、
柴胡皂苷 A 0.754 4 g、甘草次酸 0.772 3 g 对照品，
分别置 5 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，备用。
2.2 色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18 柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），检测波长 210、240 nm，体积流量 0.8
mL/min，柱温 28 ℃，流动相为乙腈（A）-磷酸水
（pH 3），梯度洗脱，0～10 min，10% A；10～30 min，
10%～15% A；30～35 min，15%～18% A；35～40
min，18% A；40～42 min，18%～20% A；42～62 min，
20%～28% A；62～70 min，28% A；70～75 min，
28%～30% A；75～80 min，30%～33% A；80～90
min，33% A；90～100 min，33%～50% A；100～115
min，50% A；115～120，50%～60% A；120～130 min，
60%～70% A；130～140 min，70%～90% A。
2.3 四逆散冻干粉的制备
精密称取四逆散各味药材适量，加入 10 倍体积
水煎煮 2 次，每次 1 h，滤过，合并 2 次滤液，减压
浓缩至稠膏状，于 70 ℃水浴浓缩至生药 0.8 kg/L。
四逆散冻干粉制备：提取物−40 ℃制冷，−20 ℃保
冻 2 h，−10 ℃保冻 16 h，20 ℃干燥 5 h，35 ℃两
次干燥 2 h。在此工艺条件下，获得的四逆散冻干粉
冻型饱满，复水性好，呈淡黄色，网状疏松，水分
小于 1%。HPLC 法测定其中芍药苷质量分数≥
2.74%，柴胡皂苷 C 质量分数≥2.32%，柚皮苷质量
分数≥3.31%，甘草次酸质量分数≥2.70%。
2.4 大鼠血清样品的制备
称取冻干粉 20 g，加水溶解配成 0.5 g/mL 溶液。
取大鼠 20 只，ig 给予 4.952 5 g/kg 的四逆散药液，
每天 1 次，连续 7 d。于末次给药后 5 h 大鼠 ip 1%
戊巴比妥钠溶液 4 mL/kg 麻醉，5 min 后肝门静脉取
血，每只 5 mL，4 000 r/min 离心 10 min，每只大鼠
取血清 2.0 mL。随机将 2 只大鼠血清合并，加入甲
醇 10 mL 快速混匀，密闭超声提取 10 min，4 000
r/min 离心 10 min，取上清液，在 40 ℃恒温条件下
减压回收至干，残渣以甲醇 1 mL 溶解，0.45 μm 滤
膜滤过，进样 10 μL 进行移行成分分析。结果见图 1。
2.5 大鼠脑脊液样品的制备
称取四逆散冻干粉适量，加水溶解配制成 0.5
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g/mL 溶液。Wistar 大鼠 20 只分为给药组和对照组。
给药组 ig 给予四逆散冻干粉 4.952 5 g/kg，连续给
药 7 d；对照组给予同体积蒸馏水。于末次给药后 5
h、取样前 5 min，大鼠 ip 1%戊巴比妥钠溶液 4.0
mL/kg 麻醉，用 1 mL 注射器于枕骨大孔抽取脑脊
液，并将 10 只大鼠脑脊液合并，加入甲醇 5 mL 快
速混匀，密闭超声提取 10 min，4 000 r/min 离心 10
min，取上清液，在 40 ℃恒温条件下减压回收至干，
残渣以甲醇 1 mL 溶解，0.45 μm 滤膜滤过，10 μL
进样进行 HPLC 分析。结果见图 2。
2.6 大鼠血清样品和脑脊液样品中四逆散冻干粉移
行成分分析
从图 1 可以看出，血中有 14 种移行成分，对其
中部分成分进行了鉴定，其中 2 号为辛弗林，4 号
为芍药苷，12 号为柴胡皂苷 C，14 号峰为甘草次酸，
而其他成分多数是体内代谢转化物，有待进一步鉴
定分析。
从图 2 可以看出，大鼠脑脊液样品色谱图中出

a-芍药苷 b-柚皮苷 c-橙皮苷 d-甘草次酸单铵盐 e-甘草次酸 图 2 同
a-paeoniflorin b-naringin c-hesperidin d-monopotassium glycyrrhizinate e-glycyrrhetinic acid same as Fig. 2
图 1 戊巴比妥钠＋空白血清 (A)、混合对照品＋空白血清 (B)、空白血清 (C)、血清样品 (D)、四逆散 (E) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of Pentobarbital sodium + blank serum (A), mixed reference substances + blank serum (B),
blank serum (C), serum sample (D), and Sini Powder (E)

图 2 血清与脑脊液中成分对比分析
Fig. 2 Contrast analysis on constituents in serum and cerebrospinal fluid
0 20 40 60 80 100 120 140
t / min
1
2
3 4 5 6
7 8 9 1011
1213
14
a b c d e
A
B
C
D
E

*
a b c d e
5
4
3
2
1
8
7
6
0 20 40 60 80 100 120 140
t / min
1-戊巴比妥钠＋空白脑脊液 2-混合对照品 3-空白血清 4、5-血清样品 6-对照组脑脊液 7、8-给药组脑脊液样品 * 内源性物质 5-HT
1-Pentobarbital sodium + blank cerebrospinal fluid 2-mixed reference substances 3-blank serum 4 and 5-serum sample 6-reference
cerebrospinal fluid in control group 7 and 8-cerebrospinal fluid administrated with Sini Powder * endogenous substance 5-HT
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现了一个血清样品色谱图中没有的色谱峰，经鉴定
为内源性物质 5-羟色胺（5-HT）。为了考察四逆散
的作用是否与 5-HT 有关以及初步确认四逆散的镇
静催眠药效物质基础，进一步以鉴定的 4 种血中移
行成分为目标成分，进行镇静催眠活性考察。
2.7 四逆散冻干粉与辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、
甘草次酸及其混合物镇静催眠作用比较
取小鼠 140 只，实验室放置 1 周，使之适应环
境。将小鼠随机分成 7 组，每组 20 只，分别为对照
组、四逆散冻干粉组、芍药苷组、甘草次酸组、辛
弗林组、柴胡皂苷 C 组及辛弗林、芍药苷、柴胡皂
苷 C、甘草次酸混合物组（混合物组）。四逆散冻干
粉组 ig 给予四逆散冻干粉 12 g/kg（相当于芍药苷
87 mg/kg、柴胡皂苷 C 42 mg/kg、辛弗林 38 mg/kg、
甘草次酸 39 mg/kg），各单体成分组按复方中所占
比例 ig 给药，混合物组 ig 给予混合物 206 mg/kg，
对照组给予同体积的蒸馏水，连续 7 d。于末次给药
前8 h禁食，给药60 min后，ip戊巴比妥钠50 mg/kg，
室内温度保持在 20 ℃、湿度 40%。以翻正反射消
失达 1 min 以上者即为入睡，观察并记录翻正反射
消失、恢复时间。翻正反射消失至恢复时间为睡眠
时间，结果见表 1（数据采用 SPSS 13.0 软件处理）。
可知，与对照组比较，四逆散冻干粉组、芍药苷组、
甘草次酸组、辛弗林组、柴胡皂苷 C 组、混和物组
连续 ig 给药 7 d，均可明显延长阈剂量戊巴比妥钠
表 1 四逆散冻干粉对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响
( 20=± n , sx )
Table 1 Effects of Sini Powder on sleeping time of mice
induced by Pentobarbital sodium ( 20=± n , sx )
组 别 剂量 / (g·kg−1) 睡眠时间 / min
对照 － 100.07± 26.18
四逆散冻干粉 12 216.06± 95.02**
芍药苷 0.087 146.89± 93.19
甘草次酸 0.039 108.74± 49.08
辛弗林 0.038 130.33± 32.39
柴胡皂苷 C 0.042 134.95± 72.98
混合物 0.206 235.00±136.84**
与对照组比较：**P＜0.01
**P < 0.01 vs control group
所致小鼠睡眠时间，其中四逆散冻干粉组、混合物
组与对照组比较具有显著差异（P＜0.01），且混合
物组的效果优于四逆散冻干粉组。
2.8 四逆散冻干粉与辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、
甘草次酸及其混合物对大鼠脑脊液中 5-HT 的影响
按“2.5”项方法分组、给药，制备脑脊液样品，
进行分析，结果见图 3。四逆散冻干粉、芍药苷、
辛弗林、柴胡皂苷 C、甘草次酸及混合物均可使脑
脊液中 5-HT 增加，推测四逆散镇静催眠作用与改
变 5-HT 水平有关。

图 3 对照组 (A)、四逆散冻干粉组 (B)、芍药苷组 (C)、辛弗林组 (D)、柴胡皂苷 C 组 (E)、甘草次酸组 (F)
和混合物组 (G) 脑脊液样品的 HPLC 图
Fig. 3 HPLC chromatograms of cerebrospinal fluid in control (A), Sini Powder (B), peoniflorin (C), synephrine (D),
saikosaponin C (E), glycyrrhetinic acid (F), and mixture (G) groups
3 讨论
经过综合分析，脑脊液中除戊巴比妥钠外，并
无血中移行成分的进入。从峰面积比值看，给予四
逆散冻干粉后大鼠脑脊液中 5-HT 峰面积约是空白
脑脊液 5-HT 峰面积的 12.5 倍。血清中四逆散冻干
粉的移行成分辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、甘草



0 50 100 150 0 50 100 150 0 50 100 150 0 50 100 150
t / min
0 50 100 150 0 50 100 150 0 50 100 150
*
*
* * *
A C
D E F G
* B
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次酸均可使脑脊液中 5-HT 峰面积高于空白脑脊液
中 5-HT 的峰面积，但不如四逆散冻干粉整方的作
用强，且混合物（辛弗林-芍药苷-柴胡皂苷 C-甘草
次酸）组增大的脑脊液中 5-HT 峰面积是四逆散冻
干粉组的 3.2 倍。这些结果表明，混合物可能就是
四逆散冻干粉镇静催眠作用的活性物质，为四逆散
镇静催眠作用机制研究奠定了基础。
连续给药后大鼠脑脊液中成分的量明显高于空
白脑脊液，表明脑脊液中的 5-HT 分泌增多。通过
对脑脊液成分分析发现，四逆散冻干粉在体内发挥
镇静催眠作用时，并不一定是药效成分直接起作用，
而表现出一种调控作用，这在某种程度上解释了四
逆散冻干粉在镇静催眠作用方面所具有的独特药理
作用，这一点与化学合成药物存在较大的差别。
给药组大鼠血清中四逆散冻干粉的 4 种移行成
分辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C、甘草次酸峰面积
较大，量较高，药理活性较强。
总之，通过四逆散冻干粉血中移行成分分析、
脑脊液中移行成分分析及四逆散冻干粉对戊巴比妥
钠所致小鼠睡眠时间影响的药效研究，初步确认四
逆散冻干粉的活性物质是血清中四逆散冻干粉镇静
催眠的移行成分辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷 C 及甘
草次酸的混合物，且作用机制与调节内源性物质有
关，但具体的更多的物质基础及作用机制正在进一
步研究中。
参考文献
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