全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

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一测多评法同时测定预知子中 4 种三萜皂苷
宋永贵 1, 2，张武岗 1, 2*，刘岩庭 2，侯雄军 2，李志峰 1, 2，苏 丹 1, 2，冯育林 1, 2*，杨世林 1, 2
1. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006
2. 江西中医学院，江西 南昌 330006
摘 要：目的 建立同时测定预知子中多种三萜皂苷成分的一测多评质量控制方法。方法 采用 Alltech Apollo C18色谱柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈和 0.1%的磷酸水溶液为流动相梯度洗脱；以常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→
2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（皂苷 PD, saponins PD）为内标物，考察在不同色谱柱、流动相系统、HPLC 仪器条件下，皂苷 PD,
与常春藤皂苷元 3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（皂苷 X, saponin X）、常春藤
皂苷元 3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（皂苷 B, saponin B）、常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（皂苷
A, saponin A）之间的相对校正因子，并利用该相对校正因子（RCF）计算皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 量。采用外标法同时测
定药材中该 4 种成分的量，将测定值与计算值进行多种统计学检验，以验证该质控方法的准确性和可行性。结果 在不同的
条件下，预知子中皂苷 PD与皂苷 X、皂苷 B 及皂苷 A 的相对校正因子重现性良好，（RSD＝0.70%、0.56%、0.59%），RCF
分别为 1.180、1.045、0.893。10 批预知子中皂苷 X、皂苷 B 及皂苷 A 的计算值与外标法实测值相比没有显著性差异（P＞
0.05）。结论 采用一测多评法控制预知子的质量是准确的、可行的。
关键词：预知子；一测多评；相对校正因子；皂苷 PD；皂苷 X；皂苷 B；皂苷 A；HPLC
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)07 - 1418 - 04
Quantitative analysis of multi-assessment by single marker on four triterpenoid
saponins in Akebiae Fructus
SONG Yong-gui1, 2, ZHANG Wu-gang 1, 2, LIU Yan-ting2, HOU Xiong-jun2, LI Zhi-feng1, 2, SU Dan1, 2,
FENG Yu-lin1, 2, YANG Shi-lin1, 2
1. National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine, Nanchang 330006, China
2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006, China
Key words: Akebiae Fructus; quantitative analysis of multi-assessment by single marker (QAMS); relative correction factor (RCF);
saponins PD; saponin X; saponin B; saponin A; HPLC

预 知 子 为 木 通 科 木 通 属 植 物 五 叶 木 通
Akebia quinata (Thunb.) Decne.、三叶木通 A.
trifoliate (Thunb.) Koidz. 和白木通 A. tridoliata
(Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. 的成
熟果实[1]。具有舒肝和胃、活血止痛、散结、利
尿功效。用于脘胁胀痛、痛经经闭、痰核痞块、小
便不利 [2]。三萜皂苷类成分是预知子中的主要成
分，具有抗癌、抗菌、抗炎等[3-5]广泛的生物活性。
目前对预知子质量控制标准方面，王家明等[6]对皂
苷 PK进行了 HPLC 分析，《中国药典》2010 版将 α-
常春藤皂苷作为测定指标[2]，而关于预知子中其他
三萜皂苷的多成分测定尚未见报道。
由于中药成分的复杂性，多指标综合质量控制
模式已成为中药质量评价的发展趋势。但在实际工
作中，由于多种原因中药化学对照品常常很难获得，
这就限制了一般外标法或内标法实现多指标质量控
制。一测多评法（QAMS）利用中药有效成分内在
的函数关系和比例关系，实现了采用一种易得对照
品对多个成分的同步测定。该法在茶叶[7]、大黄[8]、
人参[9]等药材中得到发展和验证，黄连的一测多评
标准已被《中国药典》2010 年版收录[2]。本实验采
用一测多评法建立的校正因子，提高了方法的实用
性，可用于预知子的质量评价，更准确、方便地实
现多成分同步测定，更好地控制该药材质量。

收稿日期：2011-11-19
基金项目：国家“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09103201-008）；江西省科技支撑计划项目（20111BBG70005-2）
作者简介：宋永贵（1979—），男，讲师。
*通讯作者 冯育林 Tel: (0791)87119632 E-mail: fengyulin2003@hotmail.com
张武岗 Tel: (0791)87119650 E-mail: zwgchf98@foxmail.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

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1 材料与仪器
Waters 高效液相色谱仪；Millipore Simplicity
超纯水器；AUW220D 型电子分析天平（上海天平
仪器厂）；AB135—S 十万分之一天平（Mettler
Toledo）。
乙腈（色谱纯），甲醇（分析纯）。常春藤皂
苷元 3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉
伯糖苷（皂苷 PD）、常春藤皂苷元 3-O-β-D-吡喃
葡萄糖基 -(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→2)-α-L-
吡喃阿拉伯糖苷（皂苷 X）、常春藤皂苷元
3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷
（皂苷 B）、常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖
苷（皂苷 A）由本实验室分离纯化，质量分数＞
98%。预知子收集自不同产地，经江西中医学院
杨世林教授鉴定为三叶木通 Akebia trifoliate
(Thunb.) Koidz. 的成熟果实，见表 1。
表 1 样品来源
Table 1 Sources of samples
编号 产地 编号 产地
1 江苏灌南 6 河南商城
2 江苏赣榆 7 安徽滁州
3 江苏洪泽 8 安徽金寨
4 湖北宜昌 9 安徽霍山
5 河南西峡 10 四川通江
2 方法与结果
2.1 方法原理
在一定的范围内成分的量（质量或浓度）与检
测器响应成正比，可得响应因子 f＝A/C。在预知
子的多指标质量评价时，以皂苷 PD 为内标，建立
皂苷 PD 与其他 3 种三萜皂苷成分（皂苷 X、B、A）
之间的相对校正因子（RCF 值，fsa，fsb，fsc…），通
过相对校正因子计算皂苷 X、皂苷 B、皂苷 A 的
量[10]。同时用常规外标法进行同步测定，以验证
计算值的正确性和可行性。
2.2 一测多评方法学考察
2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Alltech Apollo C18 色谱
柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%
磷酸水溶液（45∶55）；体积流量为 1.0 mL/min；检
测波长为 203 nm；柱温 30 ℃；进样量 20 μL。在
上述色谱条件下，各待测峰的分离度均大于 1.5，理
论塔板数大于 5 000，色谱图见图 1。
2.2.2 对照品溶液制备 精密称取各对照品适量，

1-皂苷 X 2-皂苷 B 3-皂苷 PD 4-皂苷 A
1-saponin X 2-saponin B 3-saponin PD 4-saponin A
图 1 对照品 (A) 和样品 (B) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances
(A) and sample (B)
置于同一 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，制成皂苷 PD、皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 的
质量浓度分别为 0.310 2、0.210 4、0.25、0.15 mg/mL。
2.2.3 供试品溶液制备 取本品粉末（过 60 目筛）
约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%
乙醇 100 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率
300 W，频率 50 kHz）30 min，放冷，再称定质量，
用 70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液，经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，10 μL 进样。
2.2.4 线性关系考察 精密量取对照品溶液各 0.5、
1、2、4、8、10 mL，分别置 10 mL 量瓶中，用甲
醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述各混合溶
液 10 μL 进样，按上述色谱条件测定。以峰面积（Y）
对质量浓度（X）进行线性回归，得皂苷 PD、皂苷
X、皂苷 B、皂苷 A 的标准曲线，见表 2，各标准
曲线在线性范围内线性关系良好。
2.2.5 相对校正因子（RCF）计算 以皂苷 PD 为
内标，RCF 值按照公式 fsi＝fs/fi＝As×Ci/Cs×Ai（式
表 2 预知子中 4 种三萜皂苷类成分的标准曲线
Table 2 Calibration curves of four triterpenoids
from Akebiae Fructus
成分 标准曲线 线性范围 / (μg·mL−1) r
皂苷 PD Y＝8.38×103 X－1.674 15.51～310.2 0.999 9
皂苷 X Y =6.961×103 X＋2.641 10.52～210.4 0.999 7
皂苷 B Y =8.01×103 X－0.953 12.50～250.0 0.999 8
皂苷 A Y =9.50×103 X－6.597 7.500～150.0 0.999 9



0 10 20 30
0 10 20 30
A
B
t / min
1
3
2 4
2 3
4
1
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中 As 为内参物对照品峰面积，Cs 为皂苷 PD质量浓
度，Ai 为某待测成分对照品 i 峰面积；Ci 为某待测
成分对照品 i 质量浓度），结合“2.2.4”项下系列浓
度对照品溶液所得峰面积数据，计算皂苷 PD对皂苷
X、皂苷 B 和皂苷 A 的 RCF 值，分别为 1.180、1.045、
0.893。
2.2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液（6
号），在上述色谱条件下，连续进样 6 次，测定峰面
积。皂苷 PD、皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 的峰面积
RSD 分别为 1.9%、2.7%、2.0%、1.5%。表明仪器
的精密度良好。
2.2.7 稳定性试验 取 2 号供试品溶液，室温下放
置，分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 测定，
皂苷 PD、皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 峰面积的 RSD
分别为 2.7%、2.1%、1.9%、1.2%。表明供试品溶
液在 24 h 内稳定。
2.2.8 重复性试验 称取 2 号样品粉末 6 份，按
“2.2.3”项下方法操作，在上述色谱条件下进行分析
测定，计算皂苷 PD、皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 质
量分数的 RSD 分别为 2.5%、2.7%、1.7%、1.8%。
表明该方法的重复性良好。
2.2.9 加样回收率试验 取已测定的 2 号样品共 9
份，每份取约 0.5 g，精密称质量，3 份为 1 组，每
3 组按低、中、高质量浓度分别精密加入相当于药
材 50%、100%、150%的对照品溶液，依“2.2.3”
项下方法操作，测定，计算加样回收率。皂苷 PD、
皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 的平均加样回收率分别
为 100.0%、102.0%、99.1%、98.2%，RSD 分别为
2.3%、2.0%、2.1%、1.5%。
2.3 不同色谱柱和高效液相色谱仪校正因子的重
现性考察
精密吸取“2.2.4”项下系列混合对照品溶液，进
样 10 μL 测定，按照“2.2.5”项下分别计算皂苷 PD对
皂苷X、皂苷B和皂苷A的RCF值。试验考察了Agilent
1100 和 Shimadazu LC—10AT 型高效液相色谱仪和
Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），Elite Hypersil
DBS（250 mm×4.6 mm，5 μm），Phemomenex Gemini
C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）3 种色谱柱，见表 3。
表 3 不同仪器和色谱柱测定 RCF (n＝6)
Table 3 Determination of RCFs by different instruments and columns (n = 6)
RCF 值 仪 器 色谱柱
皂苷 X 皂苷 B 皂苷 A
Agilent 1100 Diamonsil 1.231 1.029 0.862
Agilent 1100 Elite 1.238 1.019 0.872
Agilent 1100 Phemomenex 1.226 1.010 0.875
Shimadazu LC-10AT Diamonsil 1.215 1.019 0.870
Shimadazu LC-10AT Elite 1.222 1.022 0.878
Shimadazu LC-10AT Phemomenex 1.224 1.028 0.875
RSD / % 2.5 2.5 2.1

2.4 预知子定量测定一测多评法与常规外标法的
结果比较
分别称取预知子粉末（过 60 目筛）约 1 g（n＝
3），精密称定，按“2.2.3”项下方法制备各供试品
溶液，在上述色谱条件下进样测定。采用外标法和
一测多评法计算不同产地及不同种类的预知子中皂
苷 PD、皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 量，结果见表 4。
常规的外标法实测值与一测多评计算的含量值经配
对 t 检验，表明两种方法测得结果没有显著性差异
（P＞0.05）。由此说明一测多评法可用于预知子的多
成分质量评价研究。
2.5 预知子一测多评方法的再验证
随机选择另外的预知子 3 批（产地分别为安徽
滁州，安徽金寨和湖北宜昌），分别按“实测法”和
“一测多评法”（按建立的校正因子）计算皂苷 PD、
皂苷 X、皂苷 B 和皂苷 A 的量，两种方法所测结果
的 Pearson 相关系数均大于 0.99，表明本实验建立
的一测多评法具有科学性和实用性。
3 讨论
三萜及其皂苷类成分为预知子的特征性成
分，有较强专属性，皂苷 PD 为三萜皂苷，具有多
方面的药理活性，尤其对肝脏具有较强的保护作用，
这与预知子的临床药效是相一致的，同时，其对照
品价廉易得，因此本方法选用皂苷 PD为内参物，建
立预知子中 4 种三萜皂苷成分的一测多评法。
本实验采用超声提取方法并考察了溶媒（水、
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表 4 2 种方法所得的预知子中三萜皂苷类成分量 (n＝3)
Table 4 Comparison on contents of triterpenoids in Akebiae Fructus by two methods (n = 3)
皂苷 X / (μg·g−1) 皂苷 B / (μg·g−1) 皂苷 A / (μg·g−1) 皂苷 PD / (μg·g−1)编号
外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法
1 1.812 1.820 8.900 8.92 1.342 1.313 2.743
2 1.591 1.611 7.612 7.638 0.982 0.945 2.512
3 1.415 1.433 8.400 8.430 1.252 1.222 2.382
4 5.153 5.107 19.17 19.13 5.151 5.228 3.931
5 6.052 6.000 2.181 2.170 3.099 3.113 3.815
6 8.040 7.960 2.233 2.223 3.183 3.209 3.369
7 1.771 1.780 1.510 1.506 1.583 1.561 2.620
8 1.832 1.842 1.624 1.621 1.665 1.644 2.553
9 1.652 1.666 1.442 1.439 1.486 1.457 2.701
10 10.61 10.47 12.61 12.54 7.382 7.499 25.22

甲醇、70%甲醇、70%乙醇、50%甲醇）和超声时间
（15、30、45 min）对提取效率的影响。结果显示，
70%乙醇为溶媒，超声 30 min 为最佳提取条件。
采用二极管阵列检测器对待测的皂苷 PD、皂苷
X、皂苷 B 和皂苷 A 成分进行全波长扫描发现，4
种皂苷类成分吸收相似，均在 203 nm 处有最大吸
收，故选取 203 nm 为检测波长。
参考文献
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