全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 94 •

HPLC 法测定芪葛颗粒中黄芪甲苷
徐忠坤，徐海娟，宋 娟，萧 伟*
江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 建立 HPLC 法测定芪葛颗粒中黄芪甲苷的方法。方法 色谱柱：Agilent Zorbax-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相：乙腈-水（33∶67）；柱温：30 ℃；体积流量：1 mL/min；Waters 2420 蒸发光散射检测条件：漂移管温度：43 ℃；
雾化器温度：35 ℃；氮气压力：172 kPa。结果 共测 10 批样品，黄芪甲苷质量分数在 1.10～1.95 mg/袋。结论 本法方便、
快速、准确，可用于测定芪葛颗粒的质量控制。
关键词：芪葛颗粒；黄芪甲苷；D101大孔树脂；高效液相色谱；蒸发光散射检测
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)01 - 0094 - 02
Determination of astragaloside in Qige Granula by HPLC
XU Zhong-kun, XU Hai-juan, SONG Juan, XIAO Wei
Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
Key words: Qige Granula; astragaloside; D101 macroporous resin; HPLC; evaporative light scattering detection

芪葛颗粒是治疗神经根型颈椎病的 6 类中药新
药，处方由黄芪、葛根、桂枝、威灵仙、白芍、菊
花等 8 味药组成[1]。黄芪为方中君药，黄芪甲苷是
该药材的主要有效成分。原质量标准仅仅采用薄层
扫描法，操作繁琐，影响因素多，重现性较差。因
此本实验参考相关文献报道[2-5]，采用 HPLC-ELSD
法检测芪葛颗粒中黄芪甲苷，并进行了方法学考察，
结果表明，此法精密度、重现性良好，回收率试验
结果符合要求，测定迅速、准确，为制定该制剂专
属性的质量控制标准提供依据。
1 仪器与试药
Waters 高效液相色谱仪，Waters 2420 蒸发光散
射检测器，Eemper 色谱工作站；D101 大孔吸附树脂
柱（内径 1.5 cm，长 12 cm）。
芪葛颗粒（江苏康缘药业股份有限公司，规格
10 g/袋）、黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检
定所，批号 0781-200210）；乙腈（色谱纯），水（超
纯水），其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Agilent Zorbax-C18（150 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为乙腈-水（33∶67）；柱温：30 ℃；
体积流量：1 mL/min；Waters 2420 蒸发光散射检测
条件：漂移管温度：43 ℃；雾化器温度：35 ℃；
氮气压力：172 kPa。在上述条件下，理论板数以黄
芪甲苷峰计算大于 3 000，分离度、拖尾因子符合
规定。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷适量，精密
称定，加甲醇制成 1 mg/mL 的溶液，作为对照品
溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品 1 袋约 10 g，研
细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加热水 50 mL，
振摇使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取 4 次（60、
40、40、40 mL），合并正丁醇液，用氨试液洗涤 3
次，每次 40 mL，弃去氨液，回收正丁醇至干，残
渣加水 10 mL使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内
径 1.5 cm，长 12 cm），以水 50 mL 洗脱，弃去水液。
再用 40％乙醇 50 mL 洗脱，弃去 40％乙醇洗脱液，
继用 70％乙醇 150 mL 洗脱，收集洗脱液，蒸干，
用甲醇溶解并移至 2 mL 量瓶内，加甲醇至刻度，摇
匀，作为供试品溶液。
2.2.3 阴性供试品溶液的制备 按处方组成，取除
黄芪外的其余药材和辅料按工艺要求制成缺黄芪的

收稿日期：2010-08-03
基金项目：国家科技部重大新药创制项目（2009ZX09313-032）
作者简介：徐忠坤（1979－），男，黑龙江省宁安市人，工程师，2003 年毕业于黑龙江中医药大学中药学专业，现就读于南京中医药大学中药
专业研究生进修班，从事中药新药研发与中药新工艺、新技术研究。Tel: 13812344975 E-mail: hfh1919@sina.com
*通讯作者 萧 伟 E-mail: wzhzh-nj@tom.com
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阴性样品，同供试品溶液的制备项下方法制得阴性
供试品溶液。
2.3 空白试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试
品溶液各 5 μL，注入高效液相色谱仪，测定，结果
表明，阴性供试品对黄芪甲苷峰无干扰。见图 1。


*黄芪甲苷
* astragaloside
图 1 黄芪甲苷对照品（A）、芪葛颗粒（B）和缺黄芪的
阴性样品（C）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of astragaloside reference
substance (A) , Qige Granula (B), and negative
sample without Astragali Radix (C)
2.4 线性关系考察
分别精密吸取 1.012 mg/mL 黄芪甲苷对照品溶
液 1、2、4、6、8、10 μL 注入液相色谱仪，按照上
述色谱条件进行试验。以进样质量的对数为横坐标，
峰面积的对数为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方
程 Y＝1.690 4 X＋5.780 1，r＝0.999 0，结果表明黄
芪甲苷在 1.012～10.12 μg 时进样量的对数与峰面
积的对数呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取 1.012 mg/mL 黄芪甲苷对照品溶液
4 μL，重复进样 6 次，测定黄芪甲苷峰面积，计算，
结果其 RSD 为 2.10%。
2.6 稳定性试验
取本品（批号 081201）制备供试品溶液，分别
于 0、2、4、6、8、10、12 h 进样 5 μL 注入液相色
谱仪，测定黄芪甲苷峰面积，结果 RSD 为 2.17%，
表明供试品溶液在 12 h 内基本稳定。
2.7 重现性试验
取本品（批号 081201）5 份，制备供试品溶液，
进行测定，计算黄芪甲苷的质量分数，结果表明黄
芪甲苷平均质量分数为 1.09 mg/袋，RSD 为 2.19%。
2.8 加样回收率试验
取本品（批号 081201），称取 5 份，每份约 5 g，
精密称定，分别精密加入 0.58 mg/mL 黄芪甲苷对照
品 1 mL，制备供试品溶液，进行测定，计算得平均
加样回收率为 96.89%，RSD 为 1.58%。
2.9 样品测定
取 10 批芪葛颗粒成品，每批 2 份，制备供试品
溶液。分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液 2、5 μL，
供试品溶液 5 μL，注入液相色谱仪，进行测定。结
果见表 1。根据 10 批样品中黄芪甲苷的测定结果，
初步拟定为本品含黄芪甲苷不得低于 1.0 mg/袋。
表 1 芪葛颗粒中黄芪甲苷的测定结果
Table 1 Determination of astragaloside in Qige Granula
批 号 黄芪甲苷/(mg·袋−1)
081206 1.11
081207 1.20
081209 1.10
081211 1.81
081213 1.82
081222 1.95
081223 1.26
090105 1.12
090106 1.18
090107 1.14

3 讨论
因为黄芪甲苷仅在紫外区末端（200 nm 附近）
有弱吸收，受试剂影响大，故采用蒸发光散射检测
器，克服黄芪甲苷在紫外检测器上易受干扰的缺陷；
同时本实验采用峰面积的自然对数对质量浓度的自
然对数作标准曲线，线性关系良好。
供试品溶液的制备方法，一般采用甲醇提取后
正丁醇提取再用碱液洗去杂质的方法。笔者经过实
验对比考察表明，加热水振摇使溶解，用水饱和正
丁醇振摇提取 4 次，氨水洗涤 3 次，能较完全地将
黄芪甲苷提取出来。
参考文献
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astragaloside Ⅳ derivative on heart failure in rats [J].
Chin Herb Med, 2010, 2(1): 48-53.
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