全 文 ：黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 裸鼠移植瘤的抑制作用
刘成军1 ,桑国优2 ,韦世秀2
,李牡艳2 ,吴  华2
( 1
广西壮族自治区江滨医院, 广西 南宁  530021; 2
广西医科大学医学科学实验中心,广西 南宁  530021)
摘  要: 目的  探讨黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法  建立人鼻咽癌
CNE2 裸鼠多植瘤模型,随机分为对照组, 顺铂组, 黄芪注射液高、中、低剂量组, 分别 ip 生理盐水, 顺铂, 10
40、
5
20、2
60 g / kg 黄芪注射液, 4 周后处死 CNE2 荷瘤裸鼠。通过移植瘤生长曲线、终末瘤质量, 计算黄芪注射液的
抑瘤率; 采用 HE 染色, 于光镜下观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化; 采用免疫组化法检测黄芪注射液对各
组裸鼠移植瘤组织中凋亡相关蛋白 p53、Bcl2 和 Bax 表达的影响。结果  黄芪注射液高、中剂量组移植瘤体积明
显低于对照组 ( P< 0
05) , 瘤质量明显低于对照组 (P < 0
01) , 抑瘤率分别为 39
90%、30
77% ;黄芪注射液高、中
剂量组移植瘤组织中 p53、Bcl2 蛋白的表达低于对照组 ( P < 0
01) ;各组移植瘤组织中 Bax 蛋白表达均呈阴性。
结论  黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用, 其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡, 降低肿瘤
组织中 p53 和 Bcl2 蛋白的表达有关。
关键词: 黄芪注射液; CNE2; 鼻咽癌 ; 移植瘤; 细胞凋亡
中图分类号: R285
5   文献标识码: A    文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0968- 03
  多年生豆科植物黄芪是一味传统中药,有广泛
的生物学效应和药理活性。近年来有研究显示, 黄
芪注射液在体外能抑制多种肿瘤细胞的生长,并可
抑制人鼻咽癌 CNE2 细胞增殖并诱导其凋亡[ 1]。
本研究通过建立人鼻咽癌 CNE2 裸鼠移植瘤模型,
观察黄芪注射液对人鼻咽癌 CN E2 裸鼠移植瘤生
长的抑制作用,并通过免疫组化法考察黄芪注射液
对移植瘤组织中凋亡相关蛋白 p53、Bcl2 和 Bax 表
达的影响, 以初步探讨黄芪注射液对人鼻咽癌
CNE2 抑瘤作用的机制。
1  材料与方法
1
1  药物与试剂:黄芪注射液为成都地奥九泓制药
厂产品, 10 mL/支 ( 相当于原药材 20 g, 批号
0711049) ;注射用顺铂 (冻干型) 为齐鲁制药有限
公司产品, 10 mg /支 (批号 7120151DB)。胎牛血清
为天津灏洋生物制品科技有限责任公司产品; RP
M I 1640 培养基为海克隆生物化学制品 (北京) 有
限公司产品; PBS, 鼠抗人 p53、Bax、Bcl2 免疫组化
单克隆抗体, 即用型免疫组织化学超敏 U ltr aSensi
t ive TM SP 试剂盒, DAB,免疫组化阳性切片均为
福州迈新生物技术开发有限公司产品。
1
2  动物与瘤株: SPF 级 Balb/ c ( nu/ nu) 裸小鼠,
35 只,雄性, 4周龄,购自上海斯莱克实验动物有限
责任公司, 动物质量合格证号: SCXK (沪) 2007
0005。人鼻咽癌 CN E2 细胞株为广西医科大学附
属第一医院耳鼻咽喉科实验室惠赠。
1
3  仪器: 水套式 CO2培养箱 (美国 Fo rma 公
司) ;医用超净工作台 (上海跃进医疗器械厂) ; 倒置
相差显微镜 (德国 Zelss 公司) ; 病理图像分析仪
(德国 Leica 公司) ; YB202 型电子天平 (上海海康
电子仪器厂) ; LD4 2A 型台式低速离心机 (北京
医用离心机厂)。
1
4  细胞培养: 将 CNE2 细胞接种于含 10% 灭
活胎牛血清、100 U/ mL 青霉素和 100 U / mL 链霉
素的 RPM I 1640 培养基中,置 37 ! 、饱和湿度、5%
CO 2恒温培养箱中培养, 0
25% 胰蛋白酶消化传
代,取对数生长期的细胞进行实验。
1
5  人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型制备:裸鼠饲养于超
净生物层流架内, 环境定期紫外线消毒, 保持恒温
( 25 ∀ 2) ! 、恒湿 ( 45% ~ 50% ) ,笼具、饮水均经高
压蒸汽灭菌,实验操作均在无菌罩内进行。取处于
对数生长期的 CNE2细胞, 消化后用无血清培养液
离心洗涤 2 次,并用无血清培养液调整细胞浓度为
1 # 107个/ mL。0
4% 台盼蓝染色, 活细胞计数>
98%。无菌条件下用带 6号针头的注射器抽取细胞
悬液接种于裸鼠背侧靠右腋窝皮下,每只裸鼠接种
0
2 mL。注射局部出现明显皮丘, 5 d后 35 只被接
种裸鼠皮下均出现结节, 裸鼠移植瘤模型建立。
∃968∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月

收稿日期: 20090921                     基金项目:广西科学基金资助项目 (桂科基 0663031)作者简介:刘成军( 1954 ) ,男,广西南宁人,主任中药师,研究方向为中药抗肿瘤研究。
Tel: ( 0771) 2114384  Email: chengjun542003@ yahoo. com. cn
* 通讯作者  韦世秀  Tel: ( 0771) 5358216  Email : axiu56@ yahoo. com. cn
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3  讨论
  传统中药黄芪为多年生豆科植物, 该属植物约
1 600 种, 分布于除大洋洲外的亚热带和温带地区,
我国有 130 种以上, 主要产于东北, 可充黄芪作药
用者有 10 种左右[ 2] 。黄芪具有广泛的生物学效应
和药理活性, 在体内外均有抗肿瘤作用 [ 3] ,且能够增
强放疗肿瘤患者的免疫功能及改善症状[ 4, 5] 。本实
验通过建立人鼻咽癌 CNE2 裸鼠移植瘤模型,观察
黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 裸鼠移植瘤生长的
抑制作用。结果显示, 用药结束后, 与对照组相比,
各用药组对移植瘤生长均有不同程度的抑制作用,
黄芪注射液高、中剂量组移植瘤体积明显低于对照
组 ( P< 0
05) ,瘤质量明显低于对照组 ( P< 0
01) ,
抑瘤率分别为 39
9%、30
77% , 表明高、中剂量的
黄芪注射液可抑制人鼻咽癌 CNE2 的生长。
肿瘤的发生、发展与很多因素相关,而细胞凋亡
的减少是其中一个关键因素。p53、Bcl2 和 Bax 等
基因在调节细胞凋亡的过程中相互联系、共同作用,
在细胞凋亡的调控中扮演着重要角色 [ 6]。然而, 有
关 P53、Bcl2 和 Bax 蛋白表达与鼻咽癌的相互关
系的文献报道结果不一[ 7, 8] , 这些结果的不一致可
能与肿瘤基因发生调控的复杂性和多样性, 以及所
选研究材料的差异和统计方法的不同等因素有关。
本实验通过免疫组化法考察黄芪注射液对移植瘤组
织中凋亡相关 p53、Bcl2 和 Bax 蛋白表达的影响。
结果显示,与对照组相比, 黄芪注射液高、中剂量组
移植瘤组织中的 p53、Bcl2 蛋白的表达较低 ( P<
0
05, 0
01) ,而各组移植瘤组织中 Bax 蛋白免疫组
化检测结果均呈阴性。这与刘宇[ 9] 等报道 p53 蛋
白过表达与 Bcl2 蛋白过表达呈正相关一致。结合
鼻咽癌组织中 p53、Bcl2 基因表达水平与细胞自发
凋亡率均呈负相关的报道 [ 10] , 提示大剂量黄芪注射
液的抑瘤作用可能是通过降低 p53 蛋白以及 Bcl2
蛋白的过表达, 促进肿瘤细胞凋亡而实现的。以此
认为,诱导细胞凋亡也是黄芪注射液体内抑制人鼻
咽癌生长机制之一。
参考文献:
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