全 文 ：其中 PN 能抑制多种肿瘤细胞 DNA 合成和细胞增
殖,提示 PN 可能具有抗癌作用[ 7]。研究表明 PN 对
多种恶性细胞的抗肿瘤效应与其细胞毒作用和细胞
增殖抑制效应有关。报道 Feverfew TW提取物和纯
PN 对体外小鼠纤维肉瘤细胞株 ( MN -11) 和人淋
巴瘤细胞株 ( T K6) 有细胞生长抑制作用。然而,有
关 SLs 对人鼻咽癌细胞的作用国内外尚未见报道。
本研究通过系统地检测 PN 诱导的 CNE1 细胞毒
性和细胞凋亡:首先, 阐明了 PN 具有有效的细胞毒
效应,表现在 PN 暴露的早期 ( 6 h) 即出现 LDH 漏
出率显著增加,呈时间效应和剂量效应关系,在作用
的后期 ( 24 h) 甚至低浓度 PN ( 10
mo l/ L ) 也可导
致 LDH 漏出增高; 其次,细胞增殖功能检测显示在
PN 作用的中期 ( 12 h) , 较低浓度 ( 25
mol/ L ) 作
用已显著抑制肿瘤细胞的增殖, 并随时间和剂量呈
明显增加, 12和 24 h 的 IC50分别为 42. 35和 29. 56

mol/ L ; 第三, 凋亡指标和特征性凋亡细胞形态学
改变等检测,证实 PN 作用可明显诱导 CNE1 细胞
凋亡并存在时间和剂量-效应关系,在 PN 作用的后
期 ( 24 h) 和晚期 ( 36 h) , 中、高剂量组 ( > 50

mol/ L ) TU NEL 阳性细胞、失贴壁细胞百分比和
细胞周期 SubG1 亚群均显著增加, 结果表明凋亡是
PN 作用引起肿瘤细胞死亡的主要形式。
综上所述, 一方面,人鼻咽癌细胞株 CNE1 对
草本植物菊花等的倍半萜烯内酯类化合物的主要活
性成分 PN 的细胞毒效应敏感, 并发现 PN 诱导
CNE1 细胞凋亡;另一方面,上述结果存在时间循序
性改变和剂量效应关系, PN 在一定剂量范围内
( 10～100
mol/ L ) 诱导的细胞膜完整性的破坏以
及由此引发的细胞增殖抑制出现早, 提示 PN 诱导
的细胞凋亡与介导细胞毒效应有关。对临床应用倍
半萜烯内酯衍生物和开发中草药植物新药进行鼻咽
癌的化学预防提供有用的信息。
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黄芪注射液和白术提取部位对小肠上皮细胞移行的影响
张子理1 ,陈蔚文2

( 1. 深圳市第二人民医院, 广东 深圳　518035; 2. 广州中医药大学脾胃研究所,广东 广州　510405)
摘　要: 目的　观察黄芪注射液 ( Hi) 及白术提取部位 ( B1、B4、B9、B13) 对小肠上皮细胞 ( IEC-6) 移行的影响,探
讨其粘膜修复的机制。方法　IEC-6 接种于 6孔培养板, 72 h 后损伤细胞,并加入不同剂量的 Hi、B1、B4、B9 和 B13
溶液 100
L , 空白组加等量 D-PBS,阳性对照组加表皮生长因子 ( EGF ) , 加药后 24, 48 和 72 h 观察细胞移行。结
果　B4、B9、B13 和 EGF 均明显促进细胞移行, 与对照组比较 24, 48 和 72 h 均具有显著性差异 ( P < 0. 01) , 但
B4、B9、B13 作用不如 EGF 强。B1 和 Hi对细胞移行无明显促进作用, 与 EGF 比较 24, 48 和 72 h 均具有显著性差
异 (P < 0. 01)。B13 和 Hi 配伍应用后,对 IEC-6 细胞移行具有协同促进作用,与对照组、Hi 和 B13 组比较 24, 48
和 72 h 均具有明显差异 (P < 0. 05～0. 01)。结论　B4、B9、B13 通过促进细胞移行在小肠粘膜损伤修复过程中发
挥作用, 可能是白术粘膜保护和修复作用的物质基础。B13 和 Hi 配伍应用对细胞移行具有协同促进作用。
关键词: IEC-6 细胞株; 移行;黄芪注射液;白术提取物
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0912 04
·912· 中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　2002 年第 33 卷第 10期

收稿日期: 2002-04-22基金项目:国家自然科学基金( No. 39970906) ;国家重大基础研究计划( 973) (NO. G 19990544) ;广东省自然科学基金( No. 990354)及广东省千百十人才工程基金项目( No. 9953)作者简介:张子理( 1963-) ,男,甘肃人,教授,主任医师, 1986年 7月毕业于兰州医学院医疗专业, 2002年 7月获广州中医药大学中西医结合临床专业博士学位,主要从事中西医结合临床、教学及科研工作,出版学术著作 3 部,发表论文 40 余篇。
* 通讯作者: E-m ail : pwx h@ gzht . cm. edu . cn.
Effects of Astragali Injection and extracts from
Atractylodes macrocephala on IEC-6 cell migration
ZHANG Zi-li, CHEN Wei-w en
( 1. Shenzhen Second Peoples Hospit al, Shenzhen 518035, China;
2. Piw ei Institute, Guang zhou Univer sity of T CM , Guang zhou 510405, China)
Abstract: Object　To observ e the effects of Astr agal i Inject ion ( Hi) and ext racts from A tracty lodes
macr ocephala Koidz. ( B1, B4, B9, B13) on the mig ration o f rat small intest inal crypt-like cells line ( IEC-
6) . Methods　IEC-6 cel ls w er e inoculated in 6-w el l m icroplates and injured in 72 h, and added w ith Hi,
B1, B4, B9, B13. T hen D-PBS to negat ive control in the same amount and EGF to posit ived control, the
cell mig ration w as observ ed in 24, 48 and 72 h after tr eatment . Results　B4、B9、B13 and EGF signif icant ly
pr omoted the m ig rat ion o f w ounded IEC-6 cells ( P < 0. 01 vs the control ) . B1 and H i had no ef fects on
IEC-6 cell migr at ion. Combined administ rat ion of B13 and Hi st imulated cell migr ation in a synerg ist ic
manner ( P< 0. 05- 0. 01 vs the control ) . Conclusion　B4, B9, and B13 play an impor tant ro le in muco sa
repair of small intestine by pr omot ing IEC-6 cell migrat ion, w hich may constitute the material basis of the
pr otect iv e and repairing agents induced by A . macrocephala on gastr ointest inal mucosa. Compat ible appli-
cat ion of B13 and Hi show s the synergism on IEC-6 cell migrat ion.
Key words: IEC-6 cell line; m ig rat ion; A st ragal i Inject ion; ex t ract f rom Atracty lodes macrocephala
Koidz
　　胃肠粘膜修复机制一直是国际研究热点之一,
近年来取得了较大进展。研究表明胃肠道粘膜各种
类型损伤后, 几乎在 24 h 内完全修复 [ 1, 2]。至少两种
完全不同性质的过程即上皮细胞的移行和隐窝细胞
的增殖参与了粘膜的修复[ 3, 4]。其中细胞移行发生在
粘膜损伤后的早期, 是胃肠道糜烂粘膜恢复早期的
主要动力[ 5, 6]。粘膜修复的机制非常复杂,受胃泌素,
表皮生长因子,转化生长因子等的调控。目前尚未见
到有关中药对其调节作用的报道。黄芪和白术是最
常用的益气健脾中药之一。药理学研究表明黄芪和
白术等益气健脾药物对各种原因引起的胃肠粘膜损
伤具有防治作用 [ 7～10] , 但其确切细胞分子生物学机
制目前还未阐明。McCormack 等[ 11, 12]用大鼠小肠隐
窝细胞株( IEC-6)建立了培养中胃肠道细胞移行的
模型。本文观察了黄芪注射液( Hi)和白术提取部位
( B1、B4、B9、B13)对 IEC-6细胞移行的影响, 探讨其
粘膜修复作用的机制。
1　材料与方法
1. 1　材料:黄芪注射液 ( Hi) : 成都地奥九泓制药
厂,批号 00050403, 每支注射液 10 mL 含生药 20
g ,临床静脉滴注一次用注射液 10～20 mL, 每日一
次。白术提取部位: B1、B4、B9、B13为用化学溶剂分
离方法从白术提取而获得的有效部位。主要成分为
L -rhamnose,含量 500～750 g / L。
IEC-6 细胞株: 购自美国 AT CC 公司, 批号:
CRL-1592。
细胞培养液 DMEM , 超滤胎牛血清 ( dFBS) ,
磷酸缓冲液 ( D-PBS ) , 胰岛素, 庆大霉素和 500
mg/ L 胰酶 200 mg / L EDTA 溶液, 表皮生长因子
( EGF) 均为 Gibco 公司产品。
培养瓶、培养板购自丹麦 Nunclon 公司, CO 2培
养箱为美国 ESPEC 产品。
1. 2　溶液配制: 完全培养液 ( cDMEM ) : 由 95%
DMEM , 5% dFBS, 10 mg/ L 胰岛素和 50 mg / L 庆
大霉素组成。
实验药物配制: 精确取实验药物 Hi、B1、B4、
B9、B13 适量, 分别用 D-PBS 配制成 62. 5, 125,
250, 500, 1 000, 2 000 mg / L 的溶液。
1. 3　方法
1. 3. 1　细胞培养: IEC-6 细胞立即复苏。将细胞冻
存管在 37 ℃水浴中轻轻摇动,细胞解冻后, 迅速从
水浴取出, 70% 酒精消毒, 将细胞转入含 cDMEM
且预先孵育了 15 m in 的 25 cm 2的组织培养瓶中,
在 CO 2培养箱中, 37 ℃, 90% 空气, 10% CO 2的潮
湿环境中孵育。5 d 传代 1次,每周换液 3 次。传代
5次后的细胞用于实验。
1. 3. 2　药物对 IEC-6 细胞移行的影响: 对数生长
期细胞每孔 1×106 / mL 的密度接种于 6孔培养板,
接种后 72 h,用 18 mm 长的单面刀片轻刮单细胞
层,产生约 18 mm×8～10 mm 的损伤区,立即更换
培养液,并加入不同受试药物, Hi+ B13 配伍组加等
量 Hi 和 B13, 空白组加 D-PBS, 阳性对照组为
EGF。每组设 3 个复孔。加药后 24, 48和 72 h 倒置
显微镜下放大 100 倍,检测移行到损伤部位的细胞
·913·中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　2002 年第 33 卷第 10期
数。从刮出细胞的标志线起,肉眼观察每 1 mm2范围
内细胞数量, 观察相邻的 6个部位。
1. 3. 3　统计学处理:所有资料表示为 x±s, 用社会
科学统计软件包 ( SPSS) 进行独立 t 检验。
2　结果
2. 1　Hi、B13 及 Hi+ B13 对 IEC-6 细胞移行的影
响:表 1表示药物作用后 24, 48和 72 h IEC-6 细胞
的移行数量。结果显示 IEC-6细胞损伤后出现细胞
移行, 24 h 细胞移行数量最多, 48和 72 h 移行数量
逐渐减少。EGF 明显促进细胞移行, 与对照组比较
24, 48和 72 h均具有明显差异 ( P< 0. 01)。Hi对细
胞移行无明显促进作用, 与对照组和 EGF 比较 24,
48 和 72 h 均具有显著性差异 ( P< 0. 01)。B13 明
显促进损伤的细胞移行,具有剂量依赖关系 ( 24 和
48 h)。二者配伍应用后,对 IEC-6 细胞移行具有协
同促进作用, 与对照组、Hi 和 B13组比较 24, 48 和
72 h 均具有明显差异 ( P< 0. 05～0. 01)。
2. 2　B1、B4、B9 对 IEC-6 细胞移行的影响:由表 2
表 1　Hi、B13 及配伍对 IEC-6 细胞移行作用的时间和剂量反应 (细胞数, x±s)
时　间
(h )
组　别 剂　量 ( mg/ L)
62. 5 125 250 500 1 000
空白组 EGF
( 5
g/ L)
24 Hi 41. 5±1. 9△△ 40. 8±3. 2△△ 44. 2±3. 6△△ 44. 8±2. 3△△ 47. 2±3. 5△△
B13 42. 5±2. 4△△ 48. 3±1. 9△△ 54. 2±2. 8* △△ 58. 3±2. 8* * △△ 62. 5±2. 7* * △△ 46. 0±4. 5 100. 3±7. 3* *
Hi+ B13 52. 8±2. 8* △△ 58. 2±1. 9* * △△ 61. 2±1. 5* * △△ 62. 7±1. 8* * △△ 68. 0±2. 1* * △
48 Hi 55. 0±2. 4△△ 54. 7±3. 9△△ 58. 5±4. 1△△ 61. 8±4. 6△△ 64. 0±4. 6△△
B13 56. 5±3. 0△△ 64. 3±2. 7△△ 73. 2±2. 8* △△ 77. 7±3. 9* * △△ 83. 3±3. 7* * △△ 60. 7±5. 6 132. 7±7. 7* *
Hi+ B13 70. 7±3. 4* △△ 77. 3±2. 2* * △△ 81. 7±2. 1* * △△ 83. 3±2. 3* * △△ 90. 5±2. 9* * △
72 Hi 68. 7±2. 8△△ 68. 3±4. 8△△ 73. 0±4. 9△△ 77. 0±5. 8△△ 80. 0±5. 4△△
B13 104. 0±4. 5* * △△ 97. 0±4. 7* * △△ 91. 5±3. 3* △△ 80. 7±3. 4△△ 70. 7±3. 7△△ 76. 0±6. 9 164. 5±9. 9* *
Hi+ B13 88. 7±4. 0* * △△ 97. 2±2. 8* * △△101. 8±2. 3* * △△104. 3±3. 1* * △△112. 8±3. 7* * △△
　　与对照组比较: * P< 0. 05　* * P < 0. 01;　与 EGF 比较: △P < 0. 05　△△P< 0. 01
可见, IEC-6细胞损伤后出现细胞移行,损伤后 24 h
细胞移行数量最多。EGF, B4 和 B9 明显促进细胞
移行,与对照组比较 24, 48 和 72 h 均具有显著性差
异 ( P< 0. 01)。其中 EGF 作用最强,与 B4和 B9比
较也具有显著性差异 ( P< 0. 01)。B1对 IEC-6细胞
移行无明显影响, 与对照组比较无显著性差异 ( P>
0. 05)。
表 2　B1、B4、B9 对 IEC-6 细胞移行的影响
组别 剂量
( m g/ L)
移行细胞数
24 h 48 h 72 h
对照 - 46. 0±4. 5 60. 7±5. 6 76. 0±6. 9
EGF 0. 005 100. 3±7. 3* 132. 7±7. 7* 164. 5±9. 9*
B1 2 000 45. 5±4. 8△ 60. 5±6. 3△ 75. 5±7. 7△
B4 2 000 57. 7±5. 0* △ 79. 0±2. 8* △ 98. 5±3. 6* △
B9 2 000 79. 3±1. 9* △106. 2±2. 9* △132. 5±4. 0* △
　　与对照组比较: * P< 0. 01;　与 EGF 比较: △P < 0. 01
3　讨论
　　胃肠粘膜屏障具有保护胃肠粘膜免受酸、碱、
酶、细菌和毒素等胃肠道内容物损伤的作用。炎症性
肠病、急慢性腹泻、消化性溃疡和应激性溃疡等疾病
状态下,常出现胃肠粘膜屏障损伤。隐窝细胞增殖、
分化和移行是胃肠粘膜病理性损伤后修复, 从而重
建上皮完整性和维护粘膜屏障的关键 [ 13]。小肠粘膜
上皮细胞的快速修复能力即隐窝细胞移行, 是维持
其完整性的重要因素, 是小肠粘膜重要的自身防御
机制。由于小肠粘膜上皮的完整性可能是粘膜屏障
的形态学基础, 因此这种快速修复机制在胃肠粘膜
的损伤防御中意义重大。中医临床应用黄芪、白术以
益气健脾, 又认为“脾主运化水谷精微”、“脾旺四季
不受邪”, 即“脾”的生理与胃肠运动、消化、吸收及粘
膜屏障等功能相关, 因此黄芪、白术益气健脾的作用
可能与其维护粘膜完整及其屏障功能有关。临床研
究证明黄芪[ 9, 1 0]、白术[ 14, 15]等益气健脾类药对粘膜
病理损伤具有治疗作用。药理学研究也表明黄芪、白
术等益气健脾药具有明显的胃肠粘膜保护作用, 能
防治粘膜损伤[ 7～10]。但能否通过促进粘膜修复机制
起作用,目前了解尚不多。黄芪具有明显的提高机体
免疫和促进胃肠运动的作用[ 16～18] ,但其在防治粘膜
损伤中的作用, 目前了解尚不多。本实验结果表明,
Hi 和 B1 对细胞移行无明显促进作用, B4、B9、B13
明显促进损伤的细胞移行。Hi和 B13 配伍应用后,
促进其分化,对细胞移行无影响。B13促进细胞分化
和移行,而对细胞增殖无作用(另文报道) ,表明二者
在粘膜修复的早期发挥作用, 从细胞分子药理水平
阐明了黄芪、白术益气健脾,修复粘膜的作用机制。
也说明益气健脾药物在胃肠粘膜修复过程中具有协
同调节作用。
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地黄对缺氧大鼠心脑肾线粒体呼吸功能的保护作用
汤依群1, 戴德哉1 ,黄　宝2

( 1. 中国药科大学 药理研究室,江苏 南京　210009; 2. 杭州娃哈哈集团,浙江 杭州　310009)
摘　要:目的　研究地黄抗缺氧的机制。方法　大鼠处死放置 15 min, 造缺氧模型,用氧电极法测定大鼠心室肌、大
脑和肾线粒体呼吸功能参数,观察地黄浸膏预防给药 2 h 对线粒体的保护作用。并以苄普地尔 5 m g/ kg ip 给药作
阳性对照。结果　地黄浸膏 2, 4 g / kg 给药,对大鼠缺氧心、脑、肾线粒体有明显的保护作用,用药后 ST 3 , RCI 值较
模型组提高并呈剂量依从关系, 地黄对肾脏的保护作用相对心、脑强。结论　地黄预防性给药, 可有效保护心、脑、
肾组织线粒体的呼吸产能功能, 对肾脏的保护作用最显著。
关键词: 线粒体;缺氧; 苄普地尔;地黄; 呼吸功能
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 10 0915 03
Protective effects of plant of rehmannia root extract on mitochondrial
respiratory function of heart, brain and kidney in hypoxia rat
TANG Yi-qun
1, DAI De-zai
1 , HUANG Bao
2
( 1. Resear ch Div ision o f Pharmacolog y, China Pharmaceutical Univ er sity, Nanjing 210009, China ;
2. Hangzhou WAHAHA Group, Hangzhou 310009, China)
Abstract: Object　T o observe the protect ive ef fects of rehmannia r oot ex t ract ( Reh) on m ito chondrial
respirato ry funct ion in hypox ia rat . Methods　Rat w as killed rapidly and the body w as put at room tem-
peratare for g lobal ischem ia o f 15 min. T reatment of po Reh 2 and 4 g / kg w as started 2 h befo re hypox ia.
The mito chondrial respir ato ry parameter o f myocardium , brain and kidney w as measured by oxygen elec-
tr ode method. T he protect ive effect of Reh on mitochondr ion w as observed in 2h p o. Bepridil ( Bep) , an
Ca
2+
channel blocker, ip 5 mg / kg 30 min pr io r to hypoxia ser ved as posit ive contro l. Results　 In my-
ocardium and kidney, hypox ia injury w as show ed similar , ST 3 and RCI value w as increased as compared
w ith the contro l gr oup in a dose dependent manner, show ing a select iv e st ronger protect ion on renal mito-
chondrial than that on heart and br ain. Conclusion　Reh is effect ive in protect ing metochondr ial r espirato-
·915·中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　2002 年第 33 卷第 10期

收稿日期: 2002-03-15作者简介:汤依群( 1966-) ,女,广西南宁人,讲师,硕士毕业,博士在读,研究方向为心血管药理学,主要从事药理学、病理生理学的教学及科研工作。　T el : 025-3271453　E-m ail : T an gyiqu 0130@ sina. com