全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·887·
转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究
郑青1，郭建红1，周仲楼2，曾庆平3，赵文1
(1．暨南大学药学院，广东广州 510632；2．温州医学院附属眼视光医院，浙江温州315027；
3．广州中医药大学热带医学研究所，广东广州 510405)
摘要：目的研究转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用，观察药物作用后细胞凋亡情况。方法采用
MTT法检测青蒿琥酯单用或与转铁蛋白合用对鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制作用，DAPI染色观察CNE2细胞
凋亡，流式细胞术分析细胞凋亡率变化。结果 青蒿琥酯对CNE2细胞的lCs。值为116pg／mL，青蒿琥酯合用转铁
蛋白后Ic；。值降为17．4vg／mL，DAPI染色显示青蒿琥酯合用转铁蛋白作用CNE2细胞24h后， 出现明显凋
亡现象，流式细胞分析结果显示，与对照组相比，青蒿琥酯合用转铁蛋白组作用24h后，细胞出现明显凋亡现象，
而平行进行的青蒿琥酯i00pg／ml，组相同作用时间没有出现凋亡。结论转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性有
较强增效作用，转铁蛋白与青蒿琥酯合用加速了青蒿酯诱导的细胞凋亡，是转铁蛋白增强青蒿琥酯作用的重要机
制之一。
关键词：转铁蛋白；青蒿琥酯；鼻咽癌CNE2细胞；细胞凋亡
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0887一03
青蒿素是我国自主开发研制的抗疟特效药，青
蒿素类衍生物青蒿琥酯作为抗疟药，不但效价高，而
且长期使用不易产生耐药性。它的代谢产物是二氢
青蒿素，抗疟活性高、毒性小[1]。研究表明，青蒿琥酯
对白血病、结肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列
腺癌、中枢神经系统肿瘤及肾癌细胞等都具有较强
的抑制作用[2]。鉴于青蒿素及其衍生物的确切抗癌
作用，美国国家癌症研究所(NationalCancer
Institute，NCI)已把其纳入抗癌药物筛选与抗癌活
性研究计划[3]。Singh等[4]报道，转铁蛋白与二氢青
蒿素合用，可显著提高二氢青蒿素作用效果。对于转
铁蛋白与青蒿琥酯合用，对青蒿琥酯增效作用的研
究目前国内外尚无报道。本研究将青蒿琥酯与转铁
蛋白合用于人鼻咽癌CNE2细胞，观察药物的抑制
作用。同时采用不同检测方法，研究药物作用后细胞
凋亡情况，从而对青蒿琥酯作为抗肿瘤药物的体内
研究及临床应用起到指导借鉴作用。
I材料与方法
I．1 药品和试剂：注射用青蒿琥酯，批号
20051022，桂林南药股份有限公司，白色粉剂，用前
溶于5％NaHCo。溶液中，经滤过除菌，用DMEM
培养液稀释，临用前配制。转铁蛋白，Sigma公司，溶
于无菌双蒸水中，DMEM培养液稀释，一20℃冻
存，为防止转铁蛋白效能下降，不反复冻融。DEME
细胞培养液、胎牛血清、Hanks缓冲盐溶液为Gibco
公司产品。
1．2 仪器：高速冷冻离心机，Sigma；倒置显微镜
CK一40，Olympus；流式细胞仪，1DA0nDSF；液氮
灌，ThermoForma；C02培养箱，ThermoForma；酶
标仪，SPECTRAmaxM5。
1．3 细胞和细胞培养：人鼻咽癌CNE2细胞购于
中山医科大学药学院实验动物中心，在含有10％
胎牛血清，100U／mL青霉素，100U／mL链霉素的
DMEM培养基中贴壁生长，37℃、5％C0：的湿润
培养箱中培养。
1．4 MTT法检测药物对CNE2细胞的增殖抑制
作用：取对数生长期细胞消化，计数4000个／孔，铺
于96孔板，37℃、5％CO：孵箱中过夜后加入含药物
的培养液，转铁蛋白在加入青蒿琥酯前1h加入。每
个药物质量浓度设5个复孔，另设不加药的对照孔，
和不加细胞只加培养基的空白孔，各设5个复孔。继
续培养48h，每孔加入20弘L以PBS溶解的MTT
(5mg／mL)，温箱孵育4h，弃上清，每孔加入150
肛LDMSO，室温下摇床摇10min以充分溶解蓝紫
色颗粒，在SPECTRAmaxM5酶标仪上测定490
nm处吸光度(A)值，计算细胞存活率，由软件计算
IC5。值。
细胞存活率=(A加药组一A空白组)／(A对照组一以
空白组)×100％
1．5 DAPl染色观察药物作用后细胞凋亡：收集药
收稿日期：2007—09—30
作者简介：郑青(1964一)，男，云南人，暨南大学药学院生物制药教研室副主任，副教授，博士，硕士生导师．长期从事生物技术药物研
究开发工作，已发表论文50余篇，获省部级科技进步奖3项。Tel／Fax：(020)85220850E—mail：tzhengq@jn．．edu．crl
万方数据
·888· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
物处理后的细胞，PBS洗1次，加入2pg／mLDAPI
染色液染色，离心去除染液，PBS洗2次，细胞重悬
于PBS中，滴片，在荧光显微镜下观察细胞核的变
化情况。
1．6流式细胞术检测细胞凋亡：取对数生长期细胞
消化，用新鲜培养液，计数1．5×105／孔，铺于6孔板。
37℃、5％C0：孵箱中过夜后，加入不同质量浓度的
药物。37℃、5％CO：孵箱中继续培养24h，收集药
物作用后的细胞，PBS洗2次，加入～20℃预冷的
70％乙醇4℃固定过夜，离心弃乙醇，PBS洗1次，
碘化吡啶(PI，50pg／mL)4℃避光染色30min，过
400目尼龙网，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
1．7统计分析：各组数据以z士5表示，单用组与合
用组间比较用Wilcoxon配对法检验，组内差异比
较用t检验。
2结果
2．1 转铁蛋白对CNE2细胞生长的影响：分别以
终质量浓度50、100、250、500、750、100、2000pg／
mL的转铁蛋白作用于CNE2细胞48h，结果见图
1。表明在本实验质量浓度范围内，转铁蛋白对鼻咽
癌CNE2细胞的生长没有影响。
2．2青蒿琥酯单用或合用转铁蛋白对CNE2细胞
的增殖抑制作用：青蒿琥酯+转铁蛋白(200
葶＼
碍
!}g
雉
转铁蛋白P，(ug·mL4)
圈1转铁蛋白对CNE2细胞生长的影响(工士s，甩=5)
Fig．1Effectof ransferrinongrowthofCEN2cells
G士s，开=5)
1 ‘
对照组
／Ⅲg／mL)作用48h，对CNE2细胞的抑制作用与单
用组相比较，结果见图2。合用组与单用组作用48h
后，细胞存活率有显著差异(P
IC50值为11699／mL。
loo
∞
毒
蒋60
蜒
仕40
20
0
青蒿琥酯p／(vg·nlL。1)
与胃需琥酯单用组比较：’P<0．05一P
细胞生长的影响(；士s，席一5)
Fig．2Effectofartesunnatea drtesunnateplustrans-
ferrionongrowthofCNE2cells(；士s，n一5)
2．3 DAPI染色结果：细胞DAPI染色后，对照组
细胞固定染色后显微镜下观察细胞核形态完好，染
色均一；青蒿琥酯(20／-g／mL)+转铁蛋白(200
／．tg／mL)组可观察到部分细胞细胞核形态呈不规则
状况，且染色不均一，为凋亡细胞。
2．4流式细胞仪分析结果：青蒿琥酯+转铁蛋白
(20099／mL)作用CNE2细胞24h后，与对照组
相比G。期荧光强度明显前移，出现凋亡峰，细胞发
生明显凋亡，随剂量增加，凋亡细胞减少，死亡细胞
增加。单用组在作用细胞24h后与对照组相比G。
期荧光强度无前移现象发生，也无凋亡峰出现，单用
青蒿琥酯100ttg／mL作用24h后细胞没有凋亡和
死亡现象发生，结果见图3。
青蒿琥酯(100ug’札1毳毳誓篱((22000vugg‘．m|IlLL-1I)+雾囊薹篙((25000tapgg‘．mmLL-l-t))+青转铁蒿琥fli酯Au(20000vu gg-．IIILmL-_1)t)+
圈3青蒿琥醋合用转铁蛋白诱导CNE2细胞凋亡
Fig．3InductionofapoptosisofCNE2cellsbyartesunateplusransferrin
3讨论
Ikrger等[532005年首次报道了两例应用标准
化疗无效，加用青蒿琥酯的葡萄膜黑色素瘤转移病
人。病人耐受性很好，没有其也副反应的发生。一例
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·889·
病人在诊断为Ⅳ期黑色素瘤后生存了47个月，而生
存中值只有2～5个月。青蒿琥酯没有严重的副作
用，良好的耐受性，将推动其成为不久的将来临床试
验的主要药品。关于青蒿素类药物的抗癌效应的始
发机制，有些研究者认为与青蒿素类药物的抗疟机
制以及肿瘤细胞代谢的特点有关[6]。Singh等[71提出
癌细胞的核酸代谢旺盛，需要大量铁质，大多数肿瘤
细胞表面有高密度的转铁蛋白受体，正常细胞转铁
蛋白受体较少。含有内过氧桥的青蒿素类药物则通
过二价铁离子，促进过氧基团分解产生自由基，发挥
破坏作用，从而使肿瘤细胞较正常细胞形成更多的
自由基，起到选择性杀伤作用[7]。青蒿素及其衍生物
对正常细胞毒性较低，且其来源广泛，在抗癌药物的
开发方面有很大前景。但是青蒿素及其衍生物作为
抗肿瘤药应用还需要解决很多方面的问题，如在青
蒿素诸多衍生物中选择抗癌作用强、抗癌谱广的化
合物，或者通过合用增强其作用效果；深入研究青蒿
素及其衍生物抗肿瘤作用机制等。转铁蛋白是单一
肽链的蛋白质，是人体内一种重要的铁元素载体，可
特异性与转铁蛋白受体结合，将铁离子运送入细胞
内。本研究将转铁蛋白与青蒿琥酯合用，研究转铁蛋
白对青蒿琥酯在体外的抗癌增效作用。结果表明转
铁蛋白可显著提高青蒿琥酯对CNE2细胞的增殖
抑制作用。这对于临床青蒿琥酯作为抗肿瘤药的应
用将起到推动作用。另外可以考虑将转铁蛋白开发
为一种新的药物剂型，通过使用转铁蛋白调节体内
铁离子的摄入，从而对青蒿琥酯产生增效作用。
参考文献：
[1]徐亦益，陈绍芳．刘祥薜．青蒿琥醇的抗肿瘤作用[J]．中国
肿瘤，2004，13(10)：641—644．
[2]EfferthT，DunstanH，SauerbreyA，eta1．Theantimalarial
artesunateis lsoactiveagainstcancer[J]．IntJ Oncol，
2001。18(4)：767-773．
[33叶启翔，陆羡．青蒿素类药物抗肿瘤作用研究进展口]．实
用医学杂志。2006，22(5)：600·601．
[4]SinghNP，LaiH．Dihydroartemisininandholotransferrin
[J]．LifeSci，2001，70：49—56．
[5]BergerTG，DieckmannD，EfferthT．Artesunatei the
treatmentofmetastaticuvealmelanoma—firstexperiences
[J]．Onco／Rep，2005，14(6)：1599—1603．
[63肖凤春，林隆，沈培强，等．青蒿素及其衍生物抗肿瘤研
究进展口]．国外医学中医中药分册，2005，27(3)，149-
15l，161．
[7]HenryLai，NarendraP，SinghNP．Selectivecancercell
cytotoxicityfromexposureto dihydroartemisininand
holotransferrin[J]．CancerLett，1995，91：41—46．
蒺藜皂苷对缺血心肌细胞内核转录因子一KB的作用
孙巍，李晶莹，李红，杨世杰’
(吉林大学白求恩医学院药理教研室，吉林长春 130021)
摘要：目的研究蒺藜皂苷对培养大鼠乳鼠心肌细胞Hz0。损伤时心肌细胞内蛋白激酶C(PKC￡)、细胞外信号
调节激酶(ERKl／2)及核转录因子一KB(NF—KB)水平的影响。方法利用培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞，采用
Hzo。建立心肌细胞损伤模型，应用PKCt抑制剂Chelerythrine干预后，观察细胞形态学改变，应用流式细胞仪定
性检测细胞凋亡率，Westernblotting定量检测各组PKCe、ERKl／2及NF—KB水平。结果蒺藜皂苷明显保护受损
心肌细胞，降低细胞凋亡率，并且能够升高PKCe、ERKl／2及NF—xB水平；应用Chelerythrine可部分阻断蒺藜皂
苷的上述作用。结论蒺藜皂苷对H。0：损伤大鼠心肌细胞具有保护作用，其保护作用机制与PKCe、ERKl／2及
NF—xB激活有关。
关键词：蒺藜皂苷；PKCeIERKl／2；核转录因子一KB(NF—KB)}Chelerythrine
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0889一04
蒺藜又称白蒺藜、刺蒺藜，系蒺藜科植物蒺藜
TribulusterrestrisL．的果实，主要含有皂苷类、黄
酮类、生物碱类、甾醇类等化合物。蒺藜皂苷(gross
saponinofT．terrestris，GSTT)是从蒺藜地上全
草中提取的有效组分之一，是以甾体皂苷为主的10
余种皂苷的混合物，主要包括呋甾醇和螺甾醇两类
皂苷。研究资料n~41表明蒺藜皂苷具有降血压、舒张
血管、降低胆固醇和抗动脉粥样硬化作用；对离体大
收稿日期：2007一12—24
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30472020)
作者简介：孙巍(1978一)，男，吉林省长春市人，博士，讲师，主要从事药物对心血管疾病作用及药物对心肌细胞信号转导通路的研究。
*通讯作者杨世杰Tel：(0431)5619483E—mail：jcyaoli@sina．corn
万方数据
转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究
作者： 郑青， 郭建红， 周仲楼， 曾庆平， 赵文
作者单位： 郑青,郭建红,赵文(暨南大学药学院,广东,广州,510632)， 周仲楼(温州医学院附属眼视光
医院,浙江,温州,315027)， 曾庆平(广州中医药大学热带医学研究所,广东,广州,510405)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)
被引用次数： 4次
参考文献(7条)
1.徐亦益;陈绍芳;刘祥麟 青蒿琥酯的抗肿瘤作用[期刊论文]-中国肿瘤 2004(10)
2.Efferth T;Dunstan H;Sauerbrey A Theantimalarial artesunate is also active against cancer[外文期刊]
2001(04)
3.叶启翔;陆羡 青蒿素类药物抗肿瘤作用研究进展[期刊论文]-实用医学杂志 2006(05)
4.Singh N P;Lai H Dihydroartemisinin and holotransferrin[外文期刊] 2001
5.Berger T G;Dieckmann D;Efferth T Artesunate in the treatment of metastatic uveal melanoma-first
experiences 2005(06)
6.肖凤春;林隆;沈培强 青蒿素及其衍生物抗肿瘤研究进展[期刊论文]-国外医学(中医中药分册) 2005(03)
7.Henry Lai;Narendra P;Singh N P Selective cancer cell cytotoxicity from exposure to
dihydroartemisinin and holotransferrin[外文期刊] 1995
本文读者也读过(10条)
1. 蔡怀鸿.杨培慧.蔡继业.CAI Huai-hong.YANG Pei-hui.CAI Ji-ye 青蒿素与转铁蛋白相互作用的光谱分析[期刊
论文]-化学研究与应用2006,18(6)
2. 郭建红.郑青.Guo Jian-hong.ZHENG Qing 转铁蛋白增强青蒿琥酯对A549细胞增殖抑制活性[期刊论文]-安徽医
药2009,13(2)
3. 林溪.黄秀旺 人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备及其体外细胞毒作用[期刊论文]-肿瘤2000,20 (4)
4. 张豪.沈明山.方宏清.王明刚.陈惠鹏 转铁蛋白/转铁蛋白受体介导的药物运输[期刊论文]-中国生物工程杂志
2004,24(6)
5. 朱晓静.刘永明.ZHU Xiao-jing.LIU Yong-ming 盐酸拓扑替康及10-羟基喜树碱和转铁蛋白的相互作用[期刊论
文]-化学研究与应用2008,20(8)
6. 林溪.黄秀旺.柯丹如.温彩霞 人转铁蛋白-甲氨喋呤结合物对人肝细胞、人肝癌细胞体外细胞毒的作用特点[期
刊论文]-福建医科大学学报2001,35(1)
7. 吕冬颖 二醇桥联青蒿素二聚体衍生物的裂解研究[学位论文]2008
8. 马振秋 第一部分 半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂筛选方法的建立;第二部分 二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增
殖和诱导凋亡[学位论文]2007
9. 余和平 青蒿素联合全转铁蛋白对小鼠肝癌H-22细胞作用的研究[学位论文]2007
10. 姚鹏.姚爱杰.康春生.Yuan Xu-bo.CHANG Jin.PU Pei-yu.YAO PENG.ZHAO Ai-jie.KANG Chun-sheng.Yuan Xu-
bo.CHANG Jin.PU Pei-yu 复合功能传递系统的结构、铁转递蛋白的传递联系和药物载体的磁性颗粒[期刊论文]-中
国医学工程2005,13(2)
引证文献(4条)
1.苗立云.张祖贻 铁离子增强青蒿琥酯抗癌作用及改变癌细胞死亡方式研究[期刊论文]-中草药 2008(10)
2.黄玲.张平祖.曾庆平 青蒿素增敏复方抑制肿瘤细胞增殖及延缓荷瘤裸鼠移植肿瘤生长的研究[期刊论文]-广州中
医药大学学报 2010(3)
3.张莉.徐维平.苏育德.陆杨.王艳萍.汪菲.杨金敏 转铁蛋白-转铁蛋白受体在肿瘤主动靶向治疗中的应用[期刊论
文]-中国药业 2012(5)
4.陈蕾.孙晓然.杨光.张秀凤 蛋白质载药体系的研究进展及其应用[期刊论文]-现代化工 2013(7)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200806030.aspx