全 文 ：HPLC法测定利胆片中大黄素和大黄酚
戴德雄1 , 朱
莹1 ,蔡仁华2*
( 1
浙江维康药业有限公司,浙江 丽水
323000; 2
浙江省丽水食品药品监督管理局, 浙江 丽水
323000)
摘
要: 目的
H PLC 法测定利胆片中大黄素及大黄酚。方法
Hyper sil ODS 色谱柱( 250 mm  4
6 mm, 5
m) ;
流动相甲醇0
1% 磷酸 ( 78 22) ; 检测波长 254 nm; 体积流量 0
8 mL/ min; 柱温 40 ! 。结果大黄素在 0
98 ~
15
72
g / mL、大黄酚在 1
56~ 37
34
g / mL 线性关系良好。大黄素平均回收率为 99
767% , RSD为 2
28% ; 大
黄酚平均回收率为 99
411% , RSD 为 1
54%。结论
方法可行、重复性好, 能有效控制利胆片的质量。
关键词:利胆片; 大黄素;大黄酚; 高效液相色谱
中图分类号: R286
02


文献标识码: B


文章编号: 02532670( 2010) 07111102


利胆片的处方源于∀中华人民共和国卫生部药
品标准#中药成方制剂第一册,为含大黄、金银花、金
钱草、木香、知母、大青叶、柴胡、白芍、黄芩、芒硝、茵
陈的复方制剂, 具有清热止痛的功效, 用于胆道疾
患,胁肋及胃部疼痛,呕吐不食等症的治疗。原标准
无定量检测指标。本实验建立了高效液相色谱法测
定利胆片中大黄素和大黄酚的测定方法, 为该产品
提供了质量控制依据。
1
材料和仪器
美国安捷伦 1100 高效液相色谱仪; Sartori
usBP211D 电子天平 (感量 0
1 mg; 0
01 mg ) ;
USC ∃ 502超声波清洗器, T U ∃ 11901紫外分光光
度计。
大黄素 (批号 110756200110)、大黄酚 (批号
110796200513)对照品购自中国药品生物制品检定
所;利胆片由浙江维康药业有限公司提供,甲醇为色
谱纯,磷酸为分析纯,水为新制备的纯化水。
2
方法与结果
2
1
色谱条件的确立
2
1
1
测定波长的选择:大黄素和大黄酚具有显著
的紫外吸收峰, 可以选择紫外检测器进行定量分析。
分别对大黄素和大黄酚在流动相中 200~ 400 nm
进行紫外扫描, 二者均有多个紫外吸收, 大黄酚在
256 nm 波长时具有最大吸收, 而大黄素在 253 nm
处有较大的吸收, 故选择 254 nm 作为大黄素和大
黄酚的紫外检测波长。
2
1
2
色谱条件: Hypersil ODS 色谱柱( 250 mm 
4
6 mm, 5
m) (大连依利特公司) ; 流动相甲醇
0
1%磷酸( 78 22) ; 检测波长 254 nm ; 体积流量
0
8 mL/ min; 柱温 40 ! 。
2
2
溶液的制备
2
2
1
对照品溶液的制备: 精密称取大黄素、大黄
酚对照品适量, 加甲醇制成各含 10
g / mL 的混合
溶液,即得。
2
2
2
供试品溶液的制备: 取本品 20 片, 除去包
衣,精密称定,研细,取约0
5 g, 精密称定, 置具塞锥
形瓶中,精密加入甲醇盐酸三氯甲烷( 25 2 23)
的混合溶液 50 mL,称定质量,加热回流 1 h,放冷,
再称定质量, 用上述溶剂补足减失的质量, 摇匀, 滤
过,精密量取续滤液 10 mL, 置蒸发皿中蒸干,残渣
加甲醇使溶解, 转移至 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻
度,摇匀,滤过,取上清液微孔滤膜( 0
45
m)滤过,
取续滤液作为供试品溶液。
2
2
3
阴性对照溶液的制备:按处方制备除大黄以
外的空白片, 并按供试品溶液的制备方法制备阴性
对照溶液。
2
3
专属性考察:按上述色谱条件分别取对照品溶
液、供试品溶液和阴性对照溶液进行分析, 结果无干
扰。见图 1。
2
4
线性关系的考察: 精密称取大黄素对照品
19
64 mg ,置 100 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至
刻度;精密吸取上述溶液 1 mL, 置 10 mL 量瓶中,
加甲醇稀释至刻度。再精密吸取上述溶液 0
5、
1
0、2
0、4
0、6
0、8
0 mL 分别置于 10 mL 量瓶
中,加甲醇稀释并至刻度。分别精密吸取上述溶液
10
L 注入液相色谱仪, 记录色谱图。得回归方程
Y= 50
037 X + 2
692 2, r= 0
999 9, 结果表明大黄
素在 0
98~ 15
72
g/ mL 线性关系良好。
%1111%中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 20100129





















作者简介:戴德雄( 1968 ∃ ) ,男,工程师、执业药师, 1991 ∃ 2000年工作于浙南制药厂, 2000 ∃ 2003年工作于浙江瑞新药业有限公司生产技术部, 2003年至今工作于浙江维康药业有限公司。
1大黄素
2大黄酚
1em odin
2chrysophanol
图 1
对照品( A)、利胆片( B)和阴性样品(C)的
HPLC图
Fig. 1
HPLC Chromatograms of reference substance (A) ,
Lidan Tablets ( B) , and negative sample ( C)
精密称取大黄酚对照品 15
56 mg, 置 100 mL
量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度。精密吸取上
述溶液 0
25、0
5、1
0、2
0、4
0、6
0 mL 别置于 25
mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度。分别精密吸取
上述溶液 10
L 注入液相色谱仪, 记录色谱图。得
回归方程 Y= 50
037 X+ 2
692 2, r= 0
999 9。结果
表明大黄酚在 1
56~ 37
34
g/ mL 线性关系良好。
2
5
精密度试验: 取样品(批号 080201)制备供试
品溶液,取上述供试品溶液重复进样 6 次, 测定, 计
算得大黄素峰面积的 RSD 为 0
32%, 大黄酚峰面
积的 RSD为 0
73%。
2
6
稳定性试验:取供试品溶液(批号 080201) , 于
室温( 20~ 25 ! )下放置, 分别于 0、2、4、6、8、10 h
精密吸取 10
L 进样,测定峰面积,计算得大黄素峰
面积的 RSD 为 0
85% , 大黄酚峰面积的 RSD 为
0
22%, 可见供试品溶液中的大黄素和大黄酚在放
置 10 h测定,保持稳定。
2
7
重现性试验:取样品(批号080201)共 6份 , 制
备供试品溶液, 进样, 测定峰面积并计算质量分数。
结果表明, 供试品中大黄素质量分数的 RSD 为
2
30%,大黄酚质量分数的 RSD为 2
40%。
2
8
回收率试验:取批号 080201 利胆片内容物适
量 , 精密称取该粉末9份 , 每份约0
2 5 g , 添加
0
111 2 mg/ mL 大黄素对照品储备液 1
4、2
2、3
0
mL 和 0
250 0 mg / mL 大黄酚对照品储备液 1
2、
2
0、2
8 mL, 制备供试品溶液, 平行 3份, 取样, 注
入液相色谱仪,测定,计算回收率, 结果大黄素平均
回收率为 99
767% , RSD为 2
28%; 大黄酚平均回
收率为 99
411%, RSD为 1
54%。
2
9
样品测定:取 8批样品,制备供试品溶液, 按上
述色谱条件测定, 以外标法计算样品中大黄素和大
黄酚的质量分数, 结果见表 1。可见每片中大黄素
和大黄酚的总量约在 0
19~ 0
56 mg, 暂拟定本品
中每片大黄素和大黄酚的总量不得少于 0
20 mg。
表 1
利胆片中大黄素和大黄酚的测定结果
Table 1
Determination of emodin and chrysophanol
in Lidan Tablets
批号 大黄素/
( m g % 片- 1)
大黄酚/
( mg % 片- 1 )
总量/
( mg % 片- 1 )
080301 0
083 0
14 0
22
080302 0
083 0
13 0
21
080303 0
080 0
14 0
22
080304 0
071 0
12 0
19
080305 0
072 0
12 0
20
080307 0
081 0
15 0
23
080308 0
074 0
13 0
20
080309 0
076 0
14 0
21
3
讨论
本实验曾采用∀中国药典#2005 年版一部大黄
项下大黄素和大黄酚的测定方法, 该方法操作比较
复杂,故将该法中先甲醇超声再盐酸超声, 而后再氯
仿回流的几个步骤合为一步, 以甲醇盐酸三氯甲
烷( 25 2 23)回流,结果发现该方法操作简单, 且
所测成分的量高于药典所用方法, 故采用该法作为
测定中供试品溶液的制备方法。
用 Kromasil C18 ( 250 mm  4
6 mm , 5
m)、Li
cr osor b C18 ( 250 mm  4
6 mm, 5
m)、Hypersil C18
( 250 mm  4
6 mm , 5
m) 3 个不同型号的色谱柱
所测大黄素和大黄酚质量分数的 RSD 均小于
2
0%, 色谱柱对该方法基本无影响。
用不同 pH 值 2
5、2
75、3
25的流动相所测大
黄素和大黄酚质量分数的 RSD 小于 2
0% , 流动相
的 pH 值在以上范围内对该方法基本无影响。
用 244、254、264 nm 不同检测波长所测大黄素
和大黄酚质量分数的 RSD小于 3
0%, 检测波长在
以上范围内对该方法基本无影响。
%1112% 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月