全 文 ：化坚止痛膜中大黄素和大黄酚的 HPLC法测定
张 美, 王 鑫
(天津市药品审评中心,天津 300191)
摘 要: 目的 建立一种简便的测定化坚止痛膜中大黄素和大黄酚的测定方法。方法 Ir regularH C18色谱柱
( 250 mm 4 6 mm, 10 m ) ;流动相 :甲醇0 1%磷酸水溶液( 85! 15) ; 检测波长 254 nm;体积流量 1 mL / min。结
果 大黄素在 0 076~ 0 380 mg,大黄酚在 0 194~ 0 970 mg 与峰面积呈现良好的线性关系。大黄素平均回收率为
95 87% ,大黄酚平均回收率为 100 17%。结论 本法操作简便,分离效果理想,可以用于化坚止痛膜的质量控制。
关键词: 化坚止痛膜;大黄素; 大黄酚;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0913- 02
化坚止痛膜临床使用多年, 功能祛邪拔毒, 通络
止痛,活血软坚,消肿散结, 用于治疗轻、中度癌性疼
痛。方中主要药味大黄凉血解毒、逐瘀通经,现代药
理研究表明大黄中所含大黄素等成分有抗肿瘤功
效[ 1] ,故选择大黄中主要成分作为本品控制的指标。
本实验采用高效液相色谱法对该制剂中大黄素和大
黄酚进行测定,取得满意效果。
1 仪器与试药
岛津 LC ∀ 10AT vp 高效液相色谱仪; JA2003
电子分析天平(上海精科天平厂) ; T CQ ∀ 250超声
波清洗器(北京医疗设备二厂)。大黄素、大黄酚对
照品由中国药品生物制品检定所提供。化坚止痛膜
由天津中医药大学第一附属附医院提供。甲醇为色
谱纯,水为二次蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: IrregularH C18色谱柱( 250 mm
4 6 mm, 10 m) ; 流动相甲醇0 1% 磷酸水溶液
( 85!15) ;检测波长 254 nm;体积流量 1 mL/ min。
2 2 对照品溶液的制备: 精密称取大黄素、大黄酚
的对照品适量,加甲醇制成含大黄素 76 g/ mL、大
黄酚 194 g / mL 的对照品储备液; 精密量取对照品
储备液 10 mL 于 50 mL 量瓶,加甲醇至刻度, 即得
(其中含大黄素 15 2 g/ mL、大黄酚38 8 g/ mL)。
2 3 供试品溶液的制备 [ 2] :精密称取本品约 2 g, 置
具塞锥形瓶中, 精密加入乙醇 25 mL, 密塞, 称定质
量。置水浴中加热回流 1 h,取出, 放冷, 称定质量,
用乙醇补足减失质量。摇匀, 滤过, 取续滤液 10
mL,蒸干;再加入 2 5 mol/ L H2 SO4 15 mL , 酸化,
超声处理 5 min。加入氯仿 20 mL,水浴加热回流 1
h, 放冷,分取氯仿层,酸液用氯仿提取二次, 每次 15
mL,合并氯仿液, 减压回收溶剂至干, 残渣加甲醇使
溶解,转移至 5 mL 量瓶中,加甲醇至刻度, 摇匀, 滤
过,取续滤液,即得。
2 4 阴性溶液的制备:按处方比例称取除去大黄并
与所取的供试品含相同其他药材,按制备工艺和供
试品溶液的制备方法制成阴性溶液。
2 5 专属性试验:吸取阴性溶液、对照品溶液、供试
品溶液各 10 L,分别注入色谱仪中,色谱图见图 1。
供试品色谱图中,在与对照品色谱相应的位置上, 有
相同的色谱峰, 阴性样品无干扰峰。
1大黄素 2大黄酚
1emodin 2chrysoph anol
图 1 对照品( A)、化坚止痛膜( B)和阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference substance ( A) , Huajian Zhitong Pellicle ( B) , and negative sample ( C)
#913#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
收稿日期: 20100129 作者简介:张 美( 1973 ∀ ) ,女,天津人,主管药师,理学学士,主要从事药品审评工作。
Tel: ( 022) 60255265 Email : qiqi12182000@ s ina. com
2 6 线性关系考察: 精密吸取上对照品储备液
0 5、1 0、1 5、2 0、3 0 mL, 置 10 mL 量瓶中,加过
膜甲醇稀释至刻度,分别精密吸取 10 L, 注入液相
色谱仪,每种浓度连续进样 2针,按上述色谱条件进
行分析,测定峰面积。以质量浓度为纵坐标,峰面积
值为横坐标, 进行回归。大黄素回归方程为 Y =
5 22 10- 5 X+ 0 14, r= 0 999 7; 大黄酚回归方程
为 Y= 4 27 10- 5 X - 0 181, r= 0 999 7。大黄素
在 0 076~ 0 380 mg, 大黄酚在 0 194~ 0 970 mg
与峰面积呈现良好的线性关系。
2 7 精密度试验:精密吸取供试品溶液, 按照上述
色谱条件连续重复进样 5 次, 每次 10 L 测定峰面
积积 分值, 结果大 黄素质量分 数的 RSD 为
0 981% ,大黄酚质量分数的 RSD为 1 236%。
2 8 稳定性试验:取供试品溶液分别于 1、3、6、8、
12、18、24 h,按上述色谱条件测定峰面积。结果表
明,样品溶液于 24 h 内, 色谱峰面积无明显变化。
大黄素质量分数的 RSD为 0 594%, 大黄酚质量分
数的 RSD为 0 714% ,因此供试品溶液在 24h内基
本稳定。
2 9 重现性试验: 取供试品约 1g , 精密称定, 共 6
份,按上述色谱条件测定峰面积,大黄素质量分数的
RSD为 1 59%,大黄酚质量分数的RSD为 1 41%。
2 10 加样回收试验:取化坚止痛膜约 1g, 精密称
定,共 6份,每份中加入对照品储备液 10mL,制备供
试品溶液,测定,计算大黄素及大黄酚的加样回收率,
结果大黄素平均回收率为 95 87%,大黄酚平均回收
率为 10017%, RSD分别为0 816%、0 605%。
2 11 样品测定: 取不同批号的样品, 制备供试品溶
液,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液,按上述色
谱条件测定峰面积积分值,计算质量分数,结果见表1。
表 1 化坚止痛膜中大黄素和大黄酚的测定结果
Table 1 Determination of emodin and chrysophanol
in Huajian Zhitong Pellicle
批号 大黄素、大黄酚总量/ ( mg # g- 1 )
090421 288 68
090422 299 84
090423 275 78
3 讨论
本涂膜剂中含有 PV A,若去除不干净, 则极易
产生乳化现象, 因此其去除干净与否直接影响定量
实验。查阅文献报道 [ 3] 采用 95%乙醇超声提取处
理样品, 结果表明本方法可去除 PVA 的干扰, 能将
有效成分提取完全, 对测定无影响。
经实验验证表明样品加热时间过长、水浴温度
过高易使残留物焦化, 故三氯甲烷萃取液须减压回
收即可避免焦化现象产生。
参考文献:
[ 1] 王本祥 现代中药药理学 [ M ] 天津:天津科学技术出版社,
1997
[ 2] 王云娇,李武毅,张永云 清火片中大黄素和大黄酚的 HPLC
法测定[ J] 中草药, 2006, 37( 7) : 10341035
[ 3] 佟 杰,李 进, 陈 涛,等 HPLC法测定银屑灵涂膜剂中 5
种蒽醌类成分的含量[ J] 天津中医药 2007, 24( 5) : 419421
HPLC法测定抗骨增生片中柚皮苷
朱 克,吴立成, 周玲娜
(浙江省金华市食品药品检验所, 浙江 金华 321000)
摘 要: 目的 建立抗骨增生片中柚皮苷的测定方法。方法 采用高效液相色谱法 , Eclipse XDBC18 ( 150 mm
4 6 mm, 5m)色谱柱,乙腈水( 17! 83)为流动相, 体积流量 1 0 mL/ min,检测波长 283 nm,柱温 35 ∃ , 进样量 5
L。结果 柚皮苷在 0 0376~ 2 408 g 线性关系良好, r= 0 999 9,平均加样回收率为 97 68% , RSD为 0 92%。
结论 该方法简便、快速、准确, 为测定抗骨增生片中柚皮苷的测定提供了可靠的方法。
关键词: 抗骨增生片;柚皮苷; 高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0914- 03
抗骨增生片由熟地黄、鹿衔草、骨碎补(烫)、鸡
血藤等 7味中药制成, 补肾,活血,止痛,用于肥大性
脊椎炎, 颈椎病,跟骨刺, 增生性关节炎等。柚皮苷
为骨碎补的主要有效成分。本实验采用 HPLC 对
抗骨增生片的柚皮苷进行了测定, 方法操作简便, 结
果准确,可用于抗骨增生片的质量控制。
#914# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
收稿日期: 20090903 作者简介:朱 克, ( 1974 ∀ ) ,男,浙江金华人,主管中药师, 1996年毕业于浙江中医学院中药专业,从事中药检验工作。
Tel: ( 0579) 82301314 Email : zkiss jmn@ 163 com