全 文 ：正交试验法优选胆黄连炮制工艺的研究
钟凌云, 杨金梅,龚千锋,孙莹莹*
(江西中医学院药学院, 江西 南昌 330004)
摘 要: 目的 通过优选出胆黄连的最佳炮制工艺, 为控制黄连炮制品种质量、探讨炮制机制以及考察辅料对药物
寒热药性可能产生的影响奠定基础。方法 采用正交试验法, 以胆黄连饮片外观性状、醇浸出物和 3 种生物碱总
量为考察指标,选择胆汁量、炒制时间及炒制温度 3 个因素(每因素 3 水平) , 对胆汁制黄连工艺进行优选。结果
胆汁用量、炒制温度对试验结果有显著性影响, 影响程度为胆汁量> 炒制温度> 炒制时间, 确定最佳炮制工艺为加
入 12%胆汁, 100 e 炒制 10 min。结论 本研究对规范胆黄连的炮制工艺具有一定的意义, 为制备胆黄连标准饮
片以进行下一步研究工作奠定了基础。
关键词:胆黄连; 炮制工艺;正交试验
中图分类号: R2841 2; R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2010) 08-1296-03
黄连为毛茛科植物黄连 Cop ti s chinensis
Franch1、三角叶黄连 C1 del toidea C1 Y1 Cheng et
Hsiao 或云连 C1 t eeta Wall1 的干燥根茎。味苦,
性寒, 归心、胃、肝、胆、大肠经。功效清热燥湿、清
热泻火、泻火解毒。其主要活性成分为原小檗碱型
生物碱。黄连的主要炮制品种有酒黄连、姜黄连、胆
黄连、吴萸连、萸黄连[ 1]。经炮制后, 黄连成分发生
不同程度变化,可导致药性改变[ 2]。为了从现代药
性理论角度探讨炮制对药物寒热药性的影响, 本实
验选择苦寒之性的胆汁炮制黄连,确定胆汁黄连的
炮制工艺, 为控制黄连炮制品种质量、探讨炮制机制
以及最终考察性味相反辅料对同一药物可能产生的
不同影响提供参考。
1 仪器和材料
Dionex Ult iM ate3000液相色谱仪, PDA ) 3000
二极管阵列紫外检测器, Chromeleon 工作站,
KQ3200超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公
司) , Met fler AE 240型十万分之一,电子天平(瑞士
Metfler) , Sartor ius万分之一电子天平(德国赛多利
斯) , Raynger ST 型红外测温仪(美国 Raytek)。
盐酸小檗碱(批号 110713-200207)、巴马汀(批
号 0732-200011)、药根碱(批号 0733-200008)对照
品均购自为中国药品生物制品检定所。黄连购于樟
树药材市场,经江西中医学院中药鉴定教研室刘庆
华鉴定为三角叶黄连 Cop t is chinensi s Franch1 的
根茎。猪胆购自农贸市场,剪碎取汁。试验用甲醇、
乙腈为色谱纯, 磷酸二氢钾为分析纯, 水为重蒸水,
其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果
21 1 盐酸小檗碱、药根碱、巴马汀的测定[ 3, 4]
21 11 1 色谱条件: Hypersil ODS C18分析柱( 250
mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ;流动相: 乙腈 01 05 mol/ L 磷
酸二氢钾溶液( 28 B72,磷酸调节 pH 值为 31 0) ;体
积流量 11 0 mL/ min; 检测波长 345 nm ;柱温 30 e 。
理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算不低于 5 000。色
谱图见图 1。
21 11 2 对照品溶液的制备:分别精密称取盐酸小檗
碱、巴马汀、药根碱对照品 131 32、31 1、41 99 mg, 分
别置 50 mL 量瓶中,加甲醇-盐酸( 99 B1)溶解并稀
释至刻度,作为对照品储备液。分别精密吸取对照
品储备液各 15 mL,置同一 50 mL 量瓶中, 稀释至
刻度,作为混合对照品溶液。
21 11 3 供试品溶液的制备:精密称取生黄连及各号
胆黄连粉末(过三号筛)约 1 g ,置于具塞锥形瓶中,
加甲醇-盐酸( 99 B1) 50 mL,称定质量,静置 30 min
后,连接冷凝管, 加热至沸腾, 并保持微沸 30 min,
再超声 30 m in,放冷,用混合溶剂补足减失的质量,
摇匀,备用。取提取液 2 mL, 置于 25 mL 量瓶中,
加入混合溶剂定容, 摇匀, 以 01 45 Lm 微孔滤膜滤
过,取续滤液,即得。
21 11 4 线性关系考察: 精密吸取混合对照品溶液
11 0、51 0、101 0、151 0、201 0、25 LL 依次注入液相色谱
仪,进行分析,以进样量为横坐标, 3次测得的峰面积
均值为纵坐标,峰面积对相应进样量进行线性回归计
#1296# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 2009- 12-27 基金项目:江西省青年科学家(井冈之星)培养对象计划( 2007185)作者简介:钟凌云( 1971 ) ) ,女,江西南昌人,副教授,博士,主要从事中药饮片质量标准及炮制机制研究。E-mail: ly1638163@ 1631 com
算, 得回归方程。盐酸小檗碱: Y = 641 834 X+
01 193, r= 1; 盐酸巴马汀: Y = 671 168 X- 01 009 7,
r= 01 999 9; 盐酸药根碱: Y = 681 71 X + 01 086 3,
r= 01 999 4,其结果表明分别在 01 079 9~ 11 998 0、
01 018 6~ 01 465 0、01 029 94~ 01 748 50 Lg 进样量
与峰面积呈良好的线性关系。
1-盐酸药根碱 2-盐酸巴马汀 3-盐酸小檗碱
1- jat rorr hizine h ydrochloride 2- palmatin e hydroch loride
3-b erberine hydr ochloride
图 1 混合对照品( A)、生黄连( B)和胆黄连( C)的
HPLC色谱图
Fig1 1 HPLC Chromatograms of mixed ref erence
substance (A) , Coptidis Rhizoma (B) ,
and Coptidis Rhizoma stir- baked with bile (C)
21 11 5 精密度试验: 精密吸取生黄连供试品溶液
10 LL,连续进样 5次,测定各组分的峰面积值,计算
得盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱峰面积的
RSD分别为 01 42%、01 10%、01 17%。
21 11 6 重现性试验:取生黄连细粉,制备供试品溶
液,平行制备 5份,在上述色谱条件下进行测定, 计算
得5份样品中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱
质量分数的 RSD分别为 01 56%、11 24%、11 39%。
21 11 7 稳定性试验:精密吸取生黄连供试品溶液 10
LL,分别于 0、2、4、6、8、12 h进样, 测定各组分的峰面
积值,计算得盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱
峰面积的 RSD分别为 01 99%、01 89%、01 92%。结果
表明,供试品溶液在 12 h内基本稳定。
21 11 8 加样回收试验: 取 5 份黄连药材, 各约 30
mg, 精密称定, 分别精密加入适量对照品 (其中含
盐酸小檗碱 21 04 mg ,盐酸巴马汀 01 52 mg ,盐酸药
根碱 01 16 mg ) ,制备供试品溶液,进样测定, 结果小
檗碱、巴马汀、药根碱平均回收率分别为 981 1%
( RSD为 01 44%)、981 0% ( RSD 为 01 6% )、991 9%
( RSD为 01 75% )。
21 2 炮制方法
21 21 1 生黄连的制备:取原药材,去除杂质,润透后
切成薄片,晾干,即得生黄连样品 [ 5]。
21 21 2 胆黄连的制备: 取猪胆剪碎, 取汁去渣。依
照 L 9 ( 34 )正交表安排, 取黄连片 200 g ,加入适当的
胆汁拌匀闷润吸尽后, 炒干为度。
21 3 正交试验设计安排及结果: 采用 L 9 ( 34 )正交
表对胆汁用量( A )、炒药温度( B)、炒药时间( C)进
行考察,以炮制后的饮片性状、醇浸出物、生物碱总
量(小檗碱、药根碱、巴马亭之和) 3 个指标的综合评
分为考察指标,对黄连的胆汁炮制工艺正交试验结
果进行筛选。因素与水平见表 1。
表 1 因素水平
Table 1 Factors and levels
水平 因 素
A/ % B/ e C/ min
1 6 80 8
2 12 100 10
3 24 120 12
请有经验药工按照炒制后饮片颜色、片形完整
度对饮片性状分为 5 等分值: 100 分、90 分、80 分、
70分、60分。浸出物测定按照5中国药典62005年版
附录中醇浸出物测定的方法进行测定[ 5]。将各样品
醇浸出物的量和生物碱总量最高的那一项值定为
100分,均为第 9号样品, 分别用公式 Y 1 * = 631 55+
Y1 和 Y 2 * = 891 76+ Y 2 , 把各号样品的醇浸出物和
生物碱总量转化为分数。综合加权评分标准为: 醇
浸出物的量、生物碱总量各占 40% , 饮片性状外观
占 20%。采用正交设计助手 V31 1版计算机软件分
析数据,数据见表 2,方差分析见表 3。
可以看出,加入胆汁用量对胆汁制黄连工艺影
响最大。通过方差分析表明, 加入胆汁用量和炒药
温度对黄连胆汁制工艺具有显著性影响, 从直观分
析极差的结果可知 3个因素的影响程度为 A> B>
C,故胆黄连的最佳炮制工艺为 A 2B2C2 , 即加入
12%的胆汁, 100 e 炒制 10 min。
21 4 炮制工艺验证:按照优选出的胆黄连饮片炮制
工艺条件:加入 12%胆汁, 100 e 炒制 10 min,分别
制备 3批样品并测定各指标成分。所制备的胆黄连
无焦斑,片形完整,且灰屑杂质少,饮片性状好, 测得
样品饮片整体性状较好,所得样品醇浸出物分别为
#1297#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
表 2 L9 ( 34 )正交试验结果
Table 2 Results of L9 ( 34) orthogonal test
试验号 A B C D(空白) 饮片性状 浸出物的量/ % 生物碱总量/ % 综合加权评分
1 1 1 1 1 60 271 33 91 03 871 868
2 1 2 2 2 80 271 92 91 57 921 320
3 1 3 3 3 60 291 21 91 71 881 892
4 2 1 2 3 90 281 30 101 17 941 712
5 2 2 3 1 100 261 27 101 12 951 880
6 2 3 1 2 70 301 19 91 95 911 380
7 3 1 3 2 70 331 57 91 84 921 760
8 3 2 1 3 80 331 50 91 89 941 680
9 3 3 2 1 70 361 45 101 24 941 000
Ñ j 269108 2751 34 273193 2771 75
Ò j 281197 2821 88 281103 2761 46
Ó j 281144 2741 72 277153 781 28
Ñ j平均 89169 911 78 91131 921 58
Ò j平均 93199 941 29 93168 921 15
Ó j平均 93181 911 42 92151 921 76
R 4130 21 87 2137 01 608
表 3 方差分析结果
Table 3 Analysis of variance
方差来源 离差平方和 自由度 方 差 显著性
A 351 47 2 601 53 P < 01 05
B 141 68 2 251 05 P < 01 05
C 81 41 2 141 36
误差 01 59 2
F 01 05( 2, 2) = 191 00
361 41%、361 37%、361 48%;生物碱(盐酸小檗碱、药
根碱、巴马汀之和)总量分别为 101 25%、101 27%、
101 23%,表明优选的工艺条件稳定合理可行。
3 讨论
研究结果表明,胆汁用量和炒药温度对黄连胆
汁制工艺具有显著性影响, 同时盐酸小檗碱遇高温
易被破坏, 炮制过程中应注意炮制温度的控制,过高
破坏有效成分, 过低又延长炒药时间, 增加能源损
耗,因此以加入 12%的胆汁, 100 e 炒制 10 min 最
为合理。
采用全波长扫描时发现, 盐酸小檗碱、盐酸巴马
汀和盐酸药根碱这 3种生物碱在 345 nm 附近都有
最大吸收, 因此选择 345 nm 为检测波长。
实验曾比较了流动相乙腈-01 1% 磷酸 ( 28 B
72)、乙腈-01 1%磷酸(含 01 1%三乙胺) ( 25 B 75)以
及乙腈-01 05mol/ L 磷酸二氢钾(用磷酸调 pH 31 0
( 28B 72) ) ,结果显示第 1种流动相所得待检色谱峰
有严重拖尾现象,影响色谱峰的分离;第 2种流动相
所得色谱峰峰形对称性不好,且药根碱不能与其他
成分完全分开;第 3 种流动相所得色谱峰峰对称性
及分离度均符合要求, 其保留时间也符合分析要求,
故选择已腈-01 05mo l/ L 磷酸二氢钾(用磷酸调 pH
31 0) ( 28B72)为本实验流动相, 此流动相未使用对
色谱柱损害较大的离子对试剂[ 6] , 也可使黄连中 3
种主要的生物碱与其他成分达到基线分离,峰形及
保留时间均较合适。
虽然胆黄连非5中国药典6收载品种, 但作为地
方炮制品种使用历史悠久,同时也与药典收载的黄
连炮制品种酒黄连、姜黄连和萸黄连所选择的炮制
辅料性味完全相反, 可以作为考察辅料对药物寒热
药性影响的研究品种, 具有一定代表性。本实验确
定了胆黄连最佳炮制工艺参数, 为规范胆黄连的炮
制工艺提供技术参数, 为制备胆黄连标准饮片进行
下一步研究奠定基础。
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