全 文 :2016
y
4
z Ó
41
âÓ
8
}
Vol41,No.8 April,2016
[
st)(
] 20151106
[
R
]
Jf&£¤¥
(2012BAI29B02,2012BAI28B02);
JÖ×fñd¥
(81130070,81325023,81473307);
SJSef
ñg
“
ZeZ[”
¥
(CM20143001)
[
uq?v
]
Ø\Ù
,
]Ðij
,
ijî¼ÒSh»¼^?¿~
,Tel:(010)640144112847,Email:zzlzhongyi@163com
[
?v
]
ÐÑ
,
Õij¦
,Email:stars3368@sinacn
NO¬PQR¥STô¥UO©!
VDW,X$
5
YB¬Êµ
ÐÑ
1,2,
$
1,
]{
1,
ÒÓÔ
1,
ÕrO
1,
Ö6×
1,
$Ï
2,
Ø\Ù
1,
iÚ
1
(1.
SJSefñg Sh»¼S (ÅhpJ¶·ÂÄ´Å
,
lm
100700;
2.
lmSehñ Shñg
,
lm
100102)
[
wx
]
ã^bcóNO¬PQR¥
UùÂSTL;/±ô¥UO©!VDW,X$
5
,B¬ÊµÄ#
,
ñóÒ
UZF(>ÄVDW,X$
5
,B¬ÊµÄxõÚe
。
ç¯{
2%
æçkéõ&Qw
,WatersACQUITYUPLCCSH
C18S(21mm×100mm,17μm),çUùª->é«Á,ª-Î!0,ô¥Ø4ê)©(MRM)Î!¨©。ä+
,5
,B¬Êµ¦xȧ¹ò98§¹©ÙÞ
(r>09978),
&ɦ
9672%~1032%,RSD
é
10%~24%。
ã
VbcÄ#m!¹
、
]+r
、
;u¹Þ
,
°ÞVDW$B¬ÊµÄxõ©!
;
ÒU(>ÄVDW,X$ʵxõÚ
Ûøù
,
VDW,XÄôõ»Íw¹WCO
,
í¶VDW,X½PØ`Äxõ ±æD®ÄÅ,°ÍwÕ Ä£«
(æ
。
[
yz{
]
NO¬PQR¥
UùÂSTL;/±ô¥
;
VDW
;
ÎyHÙ
;
B¬Êµ
;
xõ©!
Determinationoffiveefectivecomponentsinmedicinalmaterialof
TripterygiumbyUPLCESIMS/MS
HUJun1,2,LIUChao1,GUOLanping1,HAOQingxiu1,KANGLiping1,NANTiegui1,
LIUYong2,ZHANZhilai1,HUANGLuqi1
(1StateKeyLaboratoryofDaodiHerbsBreedingBase,NationalResourceCenterforChineseMateriaMedica,
ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
2SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)
[Abstracts] Thispaperisaimedtodevelopamethodforthedeterminationoffiveefectivecomponentsinmedicinalmaterialof
Tripterygiumusingultraperformanceliquidchromalographycoupledwithelectrosprayionizationtandemmassspectrometry(UPLCESI
MS/MS),whichthenwasusedtostudytheircontentsinrawmaterialsfromdiferentareasanddiferentsourcesTheseparationwas
performedonaWatersACQUITYUPLCCSHC18Scolumn(21mm×100mm,17μm),usingacetonitrile02% ammoniumforma
teaqueoussolutionasmobilephaseThetargetcomponentsweredetectedinmultiplereactionmonitoring(MRM)modebymassspec
trometrywithelectrosprayionization(ESI)sourceoperatedinpositiveionizationmodeThequantitativeresultsshowedthatgoodline
aritywasachievedintheirrespectivelinearrangesandfinedeterminationcoeficient(r>09978),andtheoveralrecoveriesranged
from9672%1032% withtheRSDrangingfrom10%24%Themethodissensitiveandaccurate,andsuitablefortheefectivecom
ponentsquantificationinmedicinalmaterialofTripterygium;contentsoffiveefectivecomponentsfromdiferentsourcesvarysignifi
·9641·
2016
y
4
z Ó
41
âÓ
8
}
Vol41,No.8 April,2016
cantly,sothequalityandsafetyofmedicinalmaterialofTripterygiumneedstobeimprovedItisveryimportanttocontrolthequality
withmultiindexforclinicsafety
[Keywords] UPLCESIMS/MS;Tripterygiumwilfordi;Tripterygiumhypoglaucum;efectivecomponents;contentdetermination
doi:10.4268/cjcmm20160817
VDWÇÈÉæ;«Ä,°ÈÉ
,
CJØM#
®ü°
,20
¾
60
yPØB°®ºR°V4ê
¬øù
,
=Öúû©g
,
ñQ~3óÙ=Ä
,
m×®BîoIJk
、
¥ðy±
、
²«
、
²ËÓ
ÖØ,,诰
,
øùZúû¦ê°ÞWºÄGV
È©k
、
0ÁhHÀ
、
¢Ú
、
s¦k
、
oÛ¹s
)ÁÖ
,
U&¶xq%ÜÁABøùÄR¬
[13]。
V
DWÔÎyHÙUÞ}¿ÆÇQ¡
,
¦CJM
é,°VDWĪ«(>
[45],
SÚÃVxª«Ä_
ʵéL¨G
、
ËÉG
、
ب8ýG
、
¨
G
、
BfçG
、
ÝG
、
ñFG
、
DEFÖ
[68],
®$Ø
¨8ýGʵIVDWæF
、
VDW8ýFæ]ª
«Ä̹ʵ
,
ËÉGʵIVDW¾
、
VDW
!
、
VDWæxõ]OÄʵ
。
f78ʵ
næ̹ʵ
,
AæBºÊµ
,
OBk¬®=ÖÄÒ
4ê
[916]。
øù¶®ôõÄöϪ«°î[`¹Ê
µ
,
Ià$ÍÖ
[17]
çVDWæFÄxõ(öÏVD
W,XÄôõ
;
OUÖ
[18]
çVDW8ý(öÏÒ
U,X1øZFÄVDW,Xôõ
,
fî[_
ʵÒöw945,XÄôõ
。
íØ`öϪ«
°PQR¥#
,
I!ØÖ
[19]
j°
HPLC
UO!
õ©!VDW,X$
6
,B¬ÊµñäHªÊµµ
î#
(PCA)
öÏÒUZFÄVDW,Xôõ
,
f
HPLC
æO(
,
S®?r±
,
®¶ÞNBá£
Äʵçxõ±Ä¨GÖʵ¨©B¦+
W
,
_£VDW,X$ËY`¹ËÉÄxõ
±
,
rÔ®;¹Q¡ÄäýGÐÉØ
,
{%PQ
¨©Cq
、
µªrÚ
,
B¦×ÚoÄEF
。
¡y(çÖÄNO¬PQR¥
UùÂSTL
;/±ô¥UÞ®µªMrL
、
?rO
、
©!
$¹îµúû°Þ$,uĵî$
,
®æ4
õʵÄ
[20]。
u½.×ÞNO¬PQR¥
U
ùÂSTL;/±ô¥bcó¶VDW,X¥$
5
,B¬Êµn!õµîÄ#
,
ñ¶ÒUZF
ÄVDW,X$
5
,浩!
,
®xõÚÛ
,
ç
¶VDW,XÄôõnØ`Ä ±
,
D®°
,ÄÍw
。
1
XL
ACQUITYIClass
NO¬PQR¥Ú
(
Û%
Wa
ters
DE
);ABQTRAP6500
L;/±ô¥Ú
(
Û
%
ABsciex
DE
,
=¼
AnalystABsciex;
=¼µ
î
Multiquant30),BSA224S
q
1/1
üµî!Í
(
%
Sartorius
DE
),Centrifuge5415D
qªSf
(
%
Eppendorf
DE
),SB800DTD
qNvhwf
,
Nv
Ê
500W(
£jßËÉ&(âJBCDE
),Pa
cificTⅡqN7Ú(Û%ThermoDE)。
_¶#[VDWæF
(
Î<
PS14030304),
V
DW¾
(
Î<
PS07250010),
VDW!
(
Î<
PS07250005)
ÑÞÊÜÛËÉ&(âJBCD
E
,
7r
>98%,
VDW
(
Î<
4001165865)
ÑÞrHtÞËÉ&(BCDE
,
7r
>98%,
VD
W8ýF
(
Î<
MUST14092810)
ÑÞÊßàÆË
É&(BCDE
,
7r
>98%。
éN7
,
æ
,
¯{éR¥7
(FishierScientific
DE
),
®B
éµî7
。
B.V°ÄéVDWÎyHÙÄ¥
,
µe
ÈpK
、
9
、
9
、
opÖ
,
$%$A&®
$,~>$SÍ¡o
Gd!
,
ÿ&?DBÞ
$%$A&®$,~>$S
,
,X(>l+
1。
+
1
XL(>
Table1 Sourceofmaterials
No.
,X 9: (>F
1
VDW
Tripterygiumwilfordi
pKØ
2
VDW
(
>?
) Twilfordi(cultivated)
9ßp
3
VDW
Twilfordi
Cb¹£
4
ÎyHÙ
Thypoglaucum
9§/
5
VDW
(
>?
) Twilfordi(cultivated)
opߤ
6
VDW
Twilfordi
9ßp
7
VDW
Twilfordi
2@à
8
VDW
Twilfordi
op_è
9
ÎyHÙ
Thypoglaucum
pKá_
10
ÎyHÙ
(
>?
) Thypoglaucum(cultivated)
¢âÀ
11
ÎyHÙ
Thypoglaucum
9[É
12
VDW
(
>?
) Twilfordi(cultivated)
Cb¹£
13
ÎyHÙ
Thypoglaucum
¢ã59
·0741·
5
äÖ
:
NO¬PQR¥STô¥UO©!VDW,X$
5
YB¬Êµ
2
#Ôä
21
R¥µîÏp
R¥ÏpéR¥
WatersACQUITYUPLC
CSHC18S(21mm×100mm,17μm);õ&Q
é
2%
æçk
(A)¯
{
(B),
rw
;0~5
min,40% ~70% B;51~7min,100% B;71~
9min,40% B;
õM
05mL·min-1;
40℃;
&õ
1μL。
ô¥Ïpéª->
TurboV,
UªÎ!
:
(ESI+);
!Ø4ê)©
(MRM);
ª-_r
(TEM)550℃;
ùÂUÆ
5500V;
Â_Ã
(Gas1)
55kPa;
jsÃ
(Gas2):55kPa;
ÃåÃ
(CUR):30
kPa;
®¯Ã
(CAD)Medium;
_Äxª-¶ô¥Ð
=^
,
l+
2。
+
2
_Äô¥ÏpÐ=
Table2 OptimizedMS/MSparameters
_HÉ
tR/min !¹ª-¶ m/z ùæUÆ/V ®¯UÆ/eV ®¯þåÁUÆ/eV
VDWæF
111 361/145 160 35 13
VDW8ýF
180 359/143 140 40 14
VDW!
297 884/838 30 42 13
VDW¾
303 858/840 264 37 14
VDW
358 868/746 120 38 13
22
¶#[NPıì
]+ ¶#[VDWæF
,
VDW8ýF
,
V
DW
,
VDW!
,
VDW¾¶#[õ
,
10mL
õX$
,
õæNvü®N
,
¾
r
,
S=
,
±ôõré
23×102mg·L-1
Ä
VDWæF
,14×102mg·L-1
VDW8ýF
,
09×102mg·L-1
ÄVDW
,17×102mg·L-1
ÄVDW!
,17×102mg·L-1
ÄVDW¾¶
#[/BP
。
23
/B[NPıì
13
ÎVDW,X
,
=
,
]+ ,X
¢
020g
2mLEp
*$
,
i
80%
æ
15mL,
Nv
(
Ê
500W)
1h,
þ
,12000r·s-1
ªS
10min,
rhP
,
022μmÄ4çï,/
UPLCQTRAP
µî
。
24
#Ü9
241
#-ǹ
¦r{R¥
ô¥ÏpÀ
,
OH¶#[»&[
5
,B¬Êµ
MRM
!õª-qlq
1。5
,浵
ªÞ
,
í$0×ô&[ĵî+×ôʵ
ÒHZ©
5
,B¬ÊµÄ¨©
。
242
§¹ò9
、¨
©C
、
!õC
]+õ ±ìÞĶ#[NPõ
,
T[
!Är
,
¬µe°æÿÊ
7
Yrr
Ķ#[NP
,
µBR¥Ïpnµî
。
çC9
Ë饤
(Y),
¶#[NPÄréÔ¤
(X),
A
¶#[
;B
&[
。
q
1
VDWÎyHÙ$
5
,ʵ ª-Ä
MRM
q
Fig1 MRM of5componentsinTripterygiumwilfordiand
T.hypoglaucum
T
5
,ʵÄÉÊ
、
Q©Ù=»§¹ò9
;
¬
渶#[NPv
(S/N)
é
10
DM
!õC
(LOQ),
v
(S/N)
é
3
DM¨©C
(LOD),
l+
3。
·1741·
2016
y
4
z Ó
41
âÓ
8
}
Vol41,No.8 April,2016
+
3 5
,ʵÄÉÊâ§
、¨
©C»!õC
Table3 Calibrationcurves,LODs,andLOQsof5components
ʵ ÉÊ
r
§¹ò9
/μg·L-1 !õC/μg·L-1 ¨©C/μg·L-1
VDWæF
Y=406248X+319786 09993 599~76667 149 002
VDW8ýF
Y=345379X+63797 09998 365~46667 365 011
VDW!
Y=302922X+2296759 09991 26563~17000 111 069
VDW¾
Y=564E+4X+506E+6 09986 26563~17000 003 004
VDW
Y=2915964X+192E+6 09978 8474~5400 029 009
243
]+r
、
m!¹
、
;u¹»ÉB.
2431
]+rB.
[!rÄOH¶#[
NP
,
#
21
ÍÄR¥Ïp
,
;u&
6
,
µe
DMxʵ9ËÄ
RSD
¦
17%~26%,
ä+
ÚÃ]+rÞ
。
2432
;u¹B.
#r{/B[NP±ì
#
,
U[&[Ín±ì
6
J/B[NP
,
21
ÍÄR¥Ïp&µî
,
©!xʵxõÄ
RSD
¦
13%~29%,
+#;u¹Þ
。
2433
m!¹B.
;u¹B.$ÄU[J
/B[NP
,
21
ÍÄR¥ÏpµeÞ
0,2,4,
8,12,24h
&µî
,
µeDMxʵxõÄ
RSD
¦
25%~42%,
ä+/B[NPþÀ¦
24
h
8m!
。
2434
ÉB.
]+ µàxõÄU[
&[
6
J
,
020g,
]+i±
、
$
、
O
3
YrÄ
5
,¶#[
,
#/B[±ì#±ì/B[NP
,
21
ÍÄR¥Ïp&µî
,
DM
5
YʵÄÍ
&ɦ
9672% ~1032%,
®
RSD
¦
10% ~
24%,
+#ÉÞ
,
äl+
4。
+
4
]+r
、
;u¹
、
m!¹»&É
(n=6)
Table4 Precision,repeatability,stability,andrecoveryof5
components(n=6) %
_HÉ
RSD
&É
]+r ;u¹ m!¹ ÍÉ
RSD
VDWæF
20 42 28 9672 24
VDW8ýF
26 25 28 9903 13
VDW!
17 34 14 1032 15
VDW¾
22 40 13 1012 10
VDW
17 25 29 9823 20
25
&[©!
µe]+
13
ÎÄVDW&[¢
020
g,
/B[±ì#±ì/B[NP
,
21
ÍÄ
R¥Ïp&µî
,
µeDMxʵÄxõ
,
l+
5。
+
5
VDWÎyHÙ,X$
5
,_ʵôõµ=
Table5 Determinationof5componentsinTripterygiumwilfor
diandThypoglaucum μg·g-1
No
VDW
æF
VDW
8ýF
VDW
!
VDW
¾
VDW
1 0090 0043 12255 0774 1650
2 0043 0012 7824 0070 0168
3 0069 0011 2507 3392 1796
4 0048 0001 1270 0735 0267
5 0083 0011 4041 0992 2177
6 0075 0019 16440 0140 0561
7 0047 0019 8261 0486 1182
8 0102 0047 11679 0658 1848
9 0032 0012 16920 0143 0532
10 0087 0021 5105 2931 1227
11 0053 0075 3452 0744 1157
12 0052 0015 5219 4611 4527
13 0044 0014 2457 0870 0487
3
ºÒ
¦&[µî$
,
u
óÒU³æR
¥¶VDW$
5
,ʵĵª¬
,
Ü9ó
Wa
tersHSST3C18(21mm×100mm,17μm),Waters
CSHC18S(21mm×100mm,17μm),WatersBEH
C18(21mm×100mm,17μm),WatersBEHC18
(21mm×50mm,17μm)4¥R¥,]N
WatersCSHC18S(21mm×100mm,17μm),Ø
®µªr»?røOÞ®xNO¬PQR¥
。
¶Þõ&QÄ
,
Ü9ó¯{
01%
æç
、
¯{
01%
æçk
、¯
{
02%
æçk
,¯
{
02%
æçk]Ê
。
@£
,
R¥µªrVDW!
»VDWf#B¬µª
,
f¦ô¥@¬r
2
Y
_HĪ-¶ÒQ~H
,
Õç$!õ
。
¶
13
YÎÄVDWÎyHÙ&[n
·2741·
5
äÖ
:
NO¬PQR¥STô¥UO©!VDW,X$
5
YB¬Êµ
!õµî
,
¦!ÄR¥ÏpÀ
,
#Ü9
,
#Ä;u¹
、
m!¹
、
]+rOHB©!
,
#
$Õ
、
úwLM
。
fæ
,
ÒUÎÄVDW,X
$VDWæF
、
VDW8ýF
、
VDW!
、
VDW
¾
、
VDWxõÚÛo
。
q+
5
$ÕçSå
,
VDW!xõ¦pK
Ø
、
9ßp
、
op_èÄVDW$
,
pKá_ÄÎ
yHÙ$xõO
;
VDW8ýFxõ¦9ß
p
、
opߤÄVDW$
,
¢âÀ
、
Cb¹£ÄÎ
yHÙ$O
,
S®é>?[
;
VDWæFxõ
¦opߤ
,
op_èÄVDW$
,
¢âÀÄÎ
yHÙ$xõO
。
Cb¹£éVDWĬFZ
J
,
q+
5
$ÕçSåZFéCb¹£Ä
2
YVD
W&[$VDW¾
,
VDWxõO
。
Ìm
(eÎyHÙ$
5
Yʵxõ±ÞVDW
。
hr
,
u
bcÄ
UPLCESIMS/MS
UO©
!VDW$VDWæF
、
VDW8ýF
、
VDW!
、
VDW¾
、
VDW
5
,̹ʵÄ!õ
#úî
、
LÜ
、
$
,
éhHöÏVDW,XÄôõ
,
D®°,ÄÍw/ÐÜ
。
[
~=
]
[1]
h|
,
Òf
,
9f¢
,
Ö
.
VDW,诰
3
[J].
ëW=A,
,2014,10(9):37.
[2]
C®¢
,
5?
.
VDWÄ,诰Ժy¯°
[J].
$%,
`
,2010,19(19):85.
[3]
)çN
,
$£v
.
VDWÄÄÅê°Ò4ê^aµî
[J].
;,2013,42(9):1007.
[4]
à$Í
,
èBi
,
k±<
,
Ö
.
VDW~>×¾Õk#Ü°
Ä
[J].
$,X
,2015,28(1):10.
[5]
ñ^B
,
k±<
,
à$Í
,
Ö
.
VDWÇ
3
,ÈÉÒU®m»
Ym$VDWæFÄ
[J].
$Æ,
,2005,36(7):1065.
[6]
üo/
.
VDW_ʵ
[D].
Î
:
Îègo
,
2013.
[7]
¯
,
ßc~
,
§é
,
Ö
.
ÎyHÙ¥s_ʵ
[J].
$,X
,2012,35(7):1083.
[8]
,
,
!+
,
«<
.
ÎyHÙ_ʵÄ
[J].
$Æ
,
,2011,42(1):46.
[9]
hê
,
ë®
.
VDWæFÄ,诰
[J].
,3
,
2005,29(4):156.
[10]
<ì
,
²0H
,
7Bí
,
Ö
.
VDW$ب8ýGʵÄ
(Ⅱ)[J].,k,2011,46(8):942.
[11]
îIÏ
,
:c.
,
ïC
,
Ö
.
VDWuËÉÄ,¬½.
[J].
$,,èÔÄÅ
,2011,27(1):33.
[12]
!
,
,
,
¤Í
,
Ö
.
VDWÒ4ê®ÿ[ºc¬
3
[J].
$%$A,ví-.
,2014,21(8):126.
[13]
jâØ
,
ðy
.
VDW®±ÄÅÒ4êÍ{
[J].
!
b,
,2012,24(1):18.
[14]
ß^õ
.
VDW®±ÄÒ4êÔºXP
[J].
Z
A,
,2008,8:47.
[15] CarterBZ,MakDH,SchoberWD,etal.Triptolideinduces
caspasedependentceldeathmediatedviathemitochondrial
pathwayinleukemiccels[J].Blood,2006,108(2):630.
[16]
ñÛn
.
ÎyHÙѹË.º¹¯°f±
[D].
;
<
:
;,2014.
[17]
à$Í
,
ñ^B
,
k±<
,
Ö
.
VDW,X$VDWæFÛ
[J].
$%$,-.
,2006,31(24):2016.
[18]
OU
,
è?
,
ï VDW,X±Ä
HPLC
ÆÇq¥
[J].
,ɵî-.
,2009,29(5):702.
[19]
!Ø
,
Kñ
,
zÊ<
,
Ö
.HPLC
`aq¥äHªÊµµî
öÏÒUZFVDW,Xôõ
[J].
$%×Pê°,
,
2014,31(11):1338.
[20] YangY,WangHJ,JianY,etal.Chemicalprofilingandquanti
ficationofChinesemedicinalformulaHuangLianJieDudecoc
tion,asystematicqualitycontrolstrategyusingultrahighperform
anceliquidchromatographycombinedwithhybridquadrupoleor
bitrapandtriplequadrupolemassspectrometers[J].JChroma
togrA,2013(1321):88.
[
-0
]
·3741·