全 文 ：药物分析
HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量
刘慧琼 1 ,李国成 2 ,卢绮雯 1 ,王定勇 1
(1.广东药学院 药科学院 ,广东 广州 510006;2.中山大学附属第二医院 药剂科 ,广东 广州
510120)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定独子藤中雷公藤红素的含量 , 为雷公藤红素的药用植物资源开发
提供依据。方法 采用 SupelcoDiscoveryC
18
柱(25 cm×4.6 mm, 5 μm), 流动相为甲醇-5%(体积分数)
H
3
PO
4
水溶液(体积比 80∶20),流速为 1.0 mL· min-1 ,检测波长为 426 nm。 结果 雷公藤红素在 40 ～
200μg· mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 1)。独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为
0.055 5%,雷公藤红素的平均回收率为 97.6%, RSD=1.78% (n=6)。结论 该方法简便 、准确 、灵敏度
高 、重现性好 ,可用于独子藤中雷公藤红素的含量测定;独子藤中雷公藤红素含量较高 ,可作为雷公藤红
素的资源植物加以开发利用。
关键词:独子藤;雷公藤红素;高效液相色谱法;成分分析
中图分类号:R291.5　文献标识码:A　doi:10.3969/j.issn.1006-8783.2010.05.014
文章编号:1006-8783(2010)05-0489-03
DeterminationoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbbyHPLC
LIUHui-qiong1 , LIGuo-Cheng2 , LUYi-wen1 , WANGDing-yong1
(1.SchoolofPharmacy, GuangdongPharmaceuticalColege, Guangzhou, Guangdong510006, China;
2.DepartmentofPharmacy, SecondHospitalofSunYet-senUniversity, Guangzhou, Guangdong510120,
China)
Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbbyHPLCfor
developingthemedicinalresourcesofcelastrol.MethodsAnexternalstandardmethodbyHPLCwith
DiscoveryC18 column(25 cm×4.6 mm, 5 μm)wasemployed.Themobilephasewasconsistedof
methanol-5%(φ)phosphoricacidsolution(80︰ 20)(ξ)attheflowrateof1.0 mL· min-1.The
detectionwavelengthwas426nm.ResultsItshowedgoodlinearityintherangeof40-200 μg· mL-1(r=
0.999 1).ThecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbwas0.055 5%, andtheaverage
recoveryrateofcelastrolwas97.6%(RSD=1.78%, n=6).ConclusionThemethodissimpleand
accurate, sensitiveandreproducibleandcanbeusedinthequalitycontrolofCelastrusmonospermusRoxb.
ThecontentoftripterineinCelastrusmonospermusRoxbwashigh, whichcanbeexploidedastheherbal
resource.
Keywords:CelastrusmonospermusRoxb;tripterine;HPLC;assay
收稿日期:2010-06-07
作者简介:刘慧琼(1978 -), 女 , 讲师 , 从事天然药物化学研
究 ,电话:020-39352140, Email:moonlhq@163.com。
　　独子藤 (CelastrusmonospermusRoxb.)为卫矛
科南蛇藤属植物 ,分布于我国福建 、广东 、云南 、贵
州 、广西等省区及越南和印度等地 ,主要生长于海
拔 1 000 m以上的林带中 [ 1] 。研究表明独子藤的化
学成分主要为生物碱和木栓烷型三萜类化合物 ,其
中木栓烷型三萜类化学成分对风湿病 、白血病和皮
肤病均有较好疗效[ 2] 。雷公藤红素为木栓烷型三
萜类化合物 ,是雷公藤片 、雷公藤多苷片等治疗类风
湿病制剂的有效成分之一 ,主要来源于中药雷公藤
的根皮 ,具有抗炎 、免疫抑制及抗肿瘤等多种药理活
　 广东药学院学报
　 JournalofGuangdongPharmaceuticalCollege　Oct.2010, 26(5)
性 [ 3] 。中美科学家于 2006年联合发现雷公藤红素
的抗癌新机制[ 4] ,引发了雷公藤红素抗癌活性研究
的热潮 。我们在独子藤的化学成分研究中发现该植
物根中富含雷公藤红素 ,是一种潜在的雷公藤红素
植物资源 ,具有重要开发价值 。但至今尚未见有关
独子藤中雷公藤红素含量测定的文献报道 。本文建
立了独子藤中雷公藤红素的含量测定方法 ,对合理
开发独子藤植物资源 、促进雷公藤红素的深入研究 ,
均具有重要意义 。
1　仪器与试药
1.1　仪器
ShimadzuLC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛
津公司), SPD-10AT型紫外 -可见检测器(日本岛津
公司), HW-2000色谱工作站;Milipore溶液过滤器;
Milipore0.45 μm滤膜;AY120电子分析天平
(Shimadzu公司);RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生
化仪器厂)。
1.2　试药
雷公藤红素对照品(自制 ,经 HPLC法测定纯度
≥98%);独子藤于 2008年 10月采自广东省阳春
市 , 由广东药学院李书渊教授鉴定为独子藤
CelastrusmonospermusRoxb.;硅胶 (柱层析硅胶 ,青
岛海洋化工有限公司);甲醇为色谱纯;水为超纯
水;其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:SupelcoDiscoveryC18柱(25 cm×4.6
mm, 5μm);流动相:甲醇 -体积分数 5%H3PO4水溶
液(体积比 80∶20);流速:1.0 mL· min-1;检测波
长:426 nm;柱温:25 ℃;进样量:20 μL。色谱图见
图 1。
2.2　对照品贮备液的制备
精密称取雷公藤红素对照品 5.0 mg,置 25 mL
容量瓶中 ,加适量甲醇溶解并定容 ,摇匀 ,得到质量
浓度为 0.20 mg· mL-1的雷公藤红素对照品贮
备液 。
2.3　供试品溶液的制备
取独子藤药材适量 ,粉碎过 40目筛 ,精密称取
10.0g,装入 100 mL带塞三角瓶中 ,加入三氯甲烷
超声提取 3次 ,每次 50 mL,每次 30 min。静置 ,滤
取上清液 ,旋转蒸发仪上浓缩至干 。称取 4.0 g硅
胶装柱(1.5cm×10 cm),以三氯甲烷 1 mL超声溶
解样品 ,上样 。先以三氯甲烷 50mL进行洗脱 ,弃去
洗脱液 ,再用三氯甲烷 -甲醇(体积比 95∶5)100 mL
洗脱 ,收集洗脱液 ,回收溶剂 ,旋转蒸发仪上浓缩至
干。残渣用甲醇溶解并定容于 50 mL容量瓶中 ,
0.45 μm微孔滤膜滤过 。平行操作 5份 ,作为 1 ～ 5
号供试品溶液 。
A.对照品;B.供试品
图 1　雷公藤红素的 HPLC色谱图
Figure1　HPLCchromatogramsofreference
2.4　线性关系的考察
分别精密吸取 “2.2”项下对照品贮备液 1、2、3、
4、5 mL置于 5 mL容量瓶中 ,分别用甲醇溶解并定
容 ,摇匀 ,制得系列对照品溶液。依次取上述溶液各
20 μL进样 ,依法测定 。以雷公藤红素的峰面积积
分值(A)为纵坐标 ,质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准
曲线 ,得回归方程为 A=5.5886×103ρ-2.0127 ×
10
4(r=0.999 1)。结果表明 ,雷公藤红素在 40 ～
200 μg· mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系 。
2.5　精密度试验
精密吸取同一雷公藤红素对照品溶液 20 μL,
连续进样 6次 , 测得雷公藤红素的峰面积 RSD为
1.96%,结果表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,分别于 0、2、4、6、8、12 h进
样 ,依法测定 ,结果雷公藤红素峰面积的 RSD为
2.98%,表明供试品溶液在 12h内稳定 。
490 广东药学院学报　 第 26卷　
2.7　重复性试验
取同一批次的独子藤药材 ,称取 5份 ,按 “2.3”
项下方法处理并进样测定 ,结果雷公藤红素峰面积
的 RSD为 2.59%,表明本方法重复性良好 。
2.8　加样回收率试验
取独子藤药材 6份 ,各 5 g,精密称定 , 分别按
低 、中 、高不同质量精密加入雷公藤红素对照品 ,按
“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,依法测定 ,计算回
收率 ,结果见表 1。
表 1　加样回收率试验
Table1　Resultsofrecoverytests(n=6)
编号 m(样品)/g
m(样品中的量)/
mg
m(加入量)/
mg
m(测得量)/
mg
回收率 /
%
平均回
收率 /%
RSD/
%
1 5.045 8 2.800 4 1.32 4.103 5 98.7
2 5.036 9 2.795 5 1.46 4.246 1 99.4
3 5.086 3 2.822 9 2.82 5.507 4 95.2 97.6 1.78
4 5.098 5 2.830 0 2.67 5.386 6 95.8
5 5.017 2 2.784 5 5.58 8.302 7 98.9
6 5.046 7 2.800 9 5.29 7.963 8 97.6
2.9　样品测定
分别精密吸取 “2.3”项下 1 ～ 5号供试品溶液
20 μL,注入色谱仪 ,依法测定。每份测 3次 ,计算 ,
结果其雷公藤红素的质量分数分别为 0.054 7%、
0.056 2%、0.055 3%、0.054 0%、0.057 2%,平均值
为 0.055 5%, RSD为 2.26%。
3　讨论
3.1　本研究对不同样品前处理方法效果进行了考
察 ,比较了三氯甲烷超声提取后直接进样与三氯甲
烷超声提取后经硅胶柱层析纯化再进样的色谱图 。
结果显示 ,前者杂质峰数目较多 ,对色谱柱的污染较
大;而后者能有效去除其他极性杂质 ,雷公藤红素色
谱峰与其他峰分离良好 ,测定无干扰 。
3.2　本研究在参照文献 [ 5 -7]的基础上 ,考察了
不同流动相的分离效果。结果表明流动相为甲醇-
体积分数 5%H3PO4水溶液(体积比 80∶20)时 ,雷公
藤红素的峰形对称且能与其他成分良好分离 ,同时
亦有利于独子藤中其他成分的含量测定。
3.3　本文方法测得独子藤中雷公藤红素的平均质
量分数为 0.055 5%,相对较高 ,提示可将独子藤作
为雷公藤红素的药用植物资源加以开发利用 ,具有
重要意义 。且雷公藤红素的毒性很大 ,建立并完善
雷公藤红素的含量测定方法 ,亦有助于安全合理地
利用独子藤药材。
参考文献:
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(责任编辑:刘晓涵)
491　第 5期　 刘慧琼 ,等.HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量