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当归多糖铁复合物在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内药动学比较研究
刘金玉1 ,张
玉2 , 王凯平1 *  ,李石军2 ,刘茂昌1 , 曾
芳1
( 1
华中科技大学同济医学院药学院,湖北 武汉
430030; 2
华中科技大学同济医学院协和医院 药剂科,湖北 武汉
430022)
摘
要:目的
比较当归多糖铁复合物 ( APIC) 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学差异, 为优化临床给
药方案提供参考。方法
采用低铁饲料并辅以定期放血法建立缺铁性贫血模型, 缺铁性贫血大鼠与正常大鼠分别
随机分为 APIC 低、中、高剂量 ( 5
83、8
75、17
5 mg/ kg) 组, ig 给药, 以原子吸收法测定各时间点血清铁浓度, 用
DAS 2
0 软件求算药动学参数,并采用 SPSS 13
0 软件对同剂量组的缺铁性贫血大鼠和正常大鼠的主要药动学参
数进行 t检验。结果
APIC 在两种不同生理状况下大鼠的药动学过程均符合二室模型, 3个剂量组的缺铁性贫血
大鼠的血清铁浓度在 4 h 以后均显著高于健康大鼠, 3个剂量组的 CL/ F、t1/ 2
与正常组均有显著差异 ( P< 0
05) ,
但只有高剂量组的 t1/ 2与正常组有显著差异。结论
APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学存在显
著差异,并且这种差异与剂量有一定的关系。
关键词:当归多糖铁复合物; 药动学; 缺铁性贫血
中图分类号: R285
61


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2010) 09 1672 05
In vivo pharmacokinetic comparison of Angelica sinensis polysaccharideiron complex
in irondeficiency anemia rats and normal rats
LIU Jinyu1 , ZHANG Yu2 , WANG Kaiping 1 , LI Shijun2 , LIU M aochang1 , ZENG Fang 1
( 1
School of Pharmacy, T ongji Medical Colleg e, H uazhong U niversit y of Science and Techno log y, Wuhan 430030, China;
2. Department of Pharmacy, Wuhan Union H ospital, T ongji Medical Colleg e, H uazhong Univ ersity of
Science and T echnolog y, Wuhan 430022, China)
Abstract: Objective
T o study the pharmacokinet ic dif ferences of A ng el ica sinensi s poly saccharide
iron complex ( APIC) in irondef iciency anem ia ( IDA) rats and no rmal rats. Methods
The IDA model rats
w ere established by feeding ir ondef iciency diet and periodic bleeding , IDA rats and normal rats w ere ran
dom ly dev ided into three g roups, respect iv ely . In APIC low , medium, and high ( 5. 83, 8. 75, and 17. 5
mg/ kg ) dosage gr oups, serum iron concentrat ion w as assayed by atomic absorpt ion spect rometry af ter ig
administ ration of A PIC, the pharmacokinetic parameters w ere analy zed by DAS 2. 0 sof tw are. T he stat ist i
cal test w as carr ied out by SPSS 13. 0 to compare the main pharmacokinet ic parameters ( ttest ) betw een
IDA rats and normal rats o f the same dosage. Results
T he concentrat iont ime curves o f APIC in all
groups w ere fit ted to tw ocompartment open model. M ar ked dif ferences of ir on concentrat ion in serum
were found 4 h af ter administ ration betw een IDA rats and normal rats, the serum iron concentrat ion in
IDA rats w as significant ly higher than that in normal rats ( P< 0
05) . In low , medium , and high dosage
groups t1/ 2
of the IDA rats w as significant ly longer than that o f the normal rats, but there w as marked
1672 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091222





















基金项目:湖北省自然基金重点项目 ( 2008CDA064)作者简介:刘金玉( 1985 ! ) ,女,湖南衡阳人,硕士研究生,主要研究药物新剂型及其生物有效性。
T el : 15871397942
Email: cherrylan yu@ 163. com
* 通讯作者
王凯平
T el: ( 027) 63559222
Email: w kpzcq@ 163. com
dif ference of t1/ 2only in high dosage, CL/ F of the IDA rats w as significant ly low er than that of the rats
( P< 0
05) . Conclusion
Data indicates there are signif icant differences in APIC pharmacokinet ics betw een
IDA rats and normal rats, and the dif ferences have a litt le r elat ionship on the dosage.
Key words: A ngelica sinensis poly saccharideiron complex ( APIC) ; pharmacokinet ics; ir ondef iciency
anemia ( IDA)


多糖铁复合物 ( poly saccharideiron complex ,
PIC) 是以生物大分子多糖为配体的铁剂, 不仅具有
理想的配合性, 有效避免了游离亚铁离子刺激胃肠
道所产生的消化道不良反应, 并且当其释放铁之后
配体多糖具有多方面的生物活性, 可被吸收利用, 因
而成为目前研究的热点 [ 12] 。以力蜚能 ( Niferex )
为代表的多糖铁复合物制剂迅速进入临床应用阶
段[ 3] ,与现在的补铁剂相比,副作用小,补铁效果好;
有很好的造血功能, 可迅速提高血红素水平, 是比较
理想的铁补充剂 [ 4]。
本课题组以当归多糖和三氯化铁为主要原料合
成当归多糖铁复合物 ( A ngel ica sinensi s polysac
char ideiron complex, APIC) , 其合成条件温和, 工
艺简单; APIC 质量分数可达 99% 以上,水溶性好,
热稳定性好,体内吸收快、消除慢[ 5] ; 前期实验已考
察了 APIC 对溶血大鼠和缺铁性贫血大鼠的疗
效[ 67] ,结果表明 APIC 对大鼠贫血状态的改善较力
蜚能更好,且机体铁代谢的相关指数水平也更接近
正常水平。本实验比较 APIC 在缺铁性贫血大鼠与
正常大鼠体内的药动学差异, 为临床给药方案提供
参考。
1
材料
1
1
仪器、试剂与药品: Spect rAA ! 240 FS 原子吸
收光谱仪 (美国 Varian ) , TGL ! 16 台式离心机
(上海安亭科学仪器厂) , CD ! 1700 全自动血液分
析仪 (美国雅培公司)。APIC (自制) , 牛血清标准
参考物质[中国预防医学科学院环境卫生监测所, 含
铁量 ( 1
57 ∀ 0
24) mg/ L] , 铁元素标准溶液 (国家
标准物质研究中心, 标准值 1 000 g/ L) ,其他所用试
剂均为分析纯, 实验用水为双蒸水。
1
2
实验动物: SD 大鼠 48 只, 雄性, 体质量
( 200 ∀ 20) g ,由华中科技大学同济医学院动物实验
中心提供。
1
3
低铁饲料:参考美国分析化学家协会( AOAC)
推荐的低铁饲料配方配制低铁基础饲料。本实验以
玉米淀粉(等量玉米粉和玉米渣混合)为主要成分配
制低铁基础饲料, 配方如下:玉米淀粉约 99% ,食盐
约为 0
7%, 氯化胆碱约 0
1% , 混合维生素约
0
1%, 微量元素的 0
1% , 其平均含铁量为 10
4
mg/ kg。
2
方法与结果
2
1
APIC 的制备: 称取当归多糖 2
0 g、柠檬酸三
钠 0
5 g ,溶于 60 mL 蒸馏水中,置 70 # 水浴中搅
拌。调节 pH 值为碱性, 再缓缓加入 2 mo l/ L 三氯
化铁溶液,当反应液中出现红棕色不溶沉淀时, 立即
停止滴加三氯化铁溶液,继续搅拌 1 h,停止搅拌后
趁热离心,得深红棕色上层液体,加入约两倍量的无
水乙醇,稍稍振荡,溶液中出现有红棕色物质,静置
使沉淀,倾去上层淡黄色透明液体, 滤过, 所得沉淀
干燥,得 APIC 约 2
0 g。按照∃中国药典%2005年
版对 A PIC 中的铁与多糖进行定量检测, 含铁量为
33
7% ,含多糖量为 12
5%。
2
2
血清铁测定方法的建立
2
2
1
原子吸收光谱条件: 元素基体为 Fe; 仪器
类型为火焰; 火焰类型为空气乙炔; 空气流量
13
50 L/ min;乙炔气流量 2
00 L/ m in;波长 248
3
nm;狭缝 0
2 nm;灯电流 5
0 mA;灯位 4。
2
2
2
血样处理: 所取血样离心 ( 8 000 r/ m , 10
m in) ,取上层血清 0
2 mL 用双蒸水稀释至 2 mL,
混合均匀,待测。
2
2
3
标准曲线的制备:取 6 只 10 mL 试管, 每管
中加入标准牛血清 0
2 mL,每份中各加入不同体积
铁标准溶液 ( 1 000 g/ L ) ,用双蒸水稀释至 5 mL,配
成质量浓度相当于 0
2、0
4、0
6、0
8、1
0、2
0 mg/
L 的血清标准品溶液,测定吸光度 ( A ) 值,以 A 值
为纵坐标,对应的质量浓度 ( C) 为横坐标, 绘制标
准曲线, 进行线性回归, 得回归方程: C= 0
054 8
A + 0
000 5, r= 0
999 2。
2
2
4
准确性试验: 牛血清标准物质中含铁量为
( 1
57 ∀ 0
24) mg/ L , 按本实验方法条件测定牛血
清标准物质中含铁量, 测定值为 ( 0
154 6 ∀ 0
01)
mg/ L ( n= 5) , RSD 为 6
57% ,实验方法可靠。
2
2
5
精密度试验: 取牛血清标准物质 15 份, 各
加入一定量的铁标准溶液,配成高、中、低 3 种质量
浓度 ( 0
9、0
6、0
15 mg/ L ) 的血清铁标准品溶液,
每种质量浓度 5 份。分别在同一日内测定和连续
1673 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
5 d 内测定,计算日内精密度和日间精密度, 日内精
密度 RSD 分别为 0
9%、5
1%、5
8% ( n= 5) ,日间
精密度 RSD 分别为 6
4%、8
6%、6
9% ( n= 5) ,
RSD均小于 15%,符合国家对生物样品测定的要求。
2
2
6
回收率试验:取牛血清标准物质 15份,各加
入一定量的铁标准溶液, 配成低、中、高 ( 0
2、0
4、
0
8 mg / L ) 3 种质量浓度的血清标准品溶液, 每种
质量浓度 5 份,按 2
2
1 条件测定 A 值,依据标准
曲线计算检测量。以检测量与加入量的比值计算相
对回收率。上述 3种质量浓度回收率在 96
5% ~
114
7% ( n= 5) , 说明该法具有较好的准确度, 符合
分析要求。
2
3
缺铁性贫血大鼠模型的建立 [ 89] : 挑选血象正
常的大鼠, 眼眶静脉取血测血清铁 ( SI)。称体质
量,分养于塑料笼内,室内温度为 ( 20 ∀ 2) # , 饲以
低铁饲料,自由饮用双蒸水,每隔一天眼眶静脉放血
1~ 1
5 mL。每周称体质量并定时测量血清铁浓
度,待血清含铁量减半时,采用血细胞自动分析仪测
定血红蛋白 ( Hb)、红细胞压积 ( HCT )、平均红细
胞体积 ( MCV)、平均红细胞血红蛋白量 ( M CH )、
平均红细胞血红蛋白浓度 ( M CHC) 及红细胞体积
分布宽度 ( RDW)。整个试验过程中严格避免铁污
染。造模大鼠的一般状态: 缺铁组的大鼠在第 2 周
开始出现皮肤苍白, 皮毛粗糙、稀疏、容易脱落,体质
量开始下降,耳、脚爪出现明显苍白,表现稍狂躁, 喜
欢咬木盖子, 甚至互相伤残, 并随着实验时间的延
长,上述症状更加明显。造模至 1个月,采用血细胞
自动分析仪测定血液中各指标, 结果见表 1。可见,
模型建立前后相比较, 大鼠 Hb、HCT、MCV、MCH
及 MCH C 均显著下降, RDW 增加, 对实验数据进
行 t 检验,各项指标均具有统计学意义,表明造模组
大鼠具有明显的缺铁性贫血症状, 缺铁性贫血模型
构建成功。
2
4
动物分组与实验:缺铁性贫血模型大鼠 21 只,
健康大鼠 21只分别随机分成低、中、高剂量 (剂量
以药物所含铁的量为标准,分别为 5
83、8
75、17
5
mg/ kg) 组, 禁食 12 h, 整个实验过程中不禁水, 各
组分别 ig A PIC 溶液。分别在给药前及给药后
0
5、1、1
5、2、3、4、5、6、7 h 从大鼠眼眶静脉取血[ 10]
0
5 mL, 放置 30 m in 后按&血样处理∋项下处理。
2
5
药动学数据处理结果,以各时间点血清铁浓度
(减去零时刻血清铁浓度的净增值) 为纵坐标, 时间
为横坐标绘制平均血清铁浓度时间关系曲线, 见图
1。应用 DAS 2
0 软件对血清铁浓度时间数据进
行处理,经 F 检验拟合优度,铁浓度拟合值与实测
值相关性良好, A IC 最小原则作为判别标准[ 11] , 计
算药动学参数。结果表明, APIC 在缺铁性贫血模
型大鼠与正常大鼠体内药动学过程均符合二室模
型,其主要药动学参数见表 2。采用 SPSS 13
0 对
同剂量组模型大鼠与正常大鼠的主要药动学参数 t
检验后发现: 3 个剂量组的模型大鼠的血清铁浓度
在 4 h 以后均显著高于正常大鼠 ( P< 0
05) , 3个剂
量组的 t1/ 2
均显著大于正常大鼠 ( P< 0
05) , 但只
有高剂量组的 t1/ 2显著大于正常大鼠 ( P< 0
05) ,
表 1
大鼠造模前后血常规及体质量变化 ( x∀ s, n= 21)
Table 1
Changes in hematological indices and body weight of rats before and after modeling ( x∀ s, n= 21)
时
间 Hb/ ( g L- 1) HCT/ % M CV/ fL MCH/ pg MCHC/ ( g L- 1 ) RDW SI/ ( mg L- 1 ) 体质量/ g
造模前 139
20 ∀ 9
15 45
16 ∀ 3
13 65
86 ∀ 1
42 20
34 ∀ 0
54 308
40 ∀ 3
91 34
06 ∀ 0
63 3
90 ∀ 0
85 207
20 ∀ 25
40
造模后 107
80 ∀ 7
79* * * 38
08 ∀ 2
66* * * 56
34 ∀ 3
86* * * 15
96 ∀ 3
86* * * 283
20 ∀ 8
67* * * 39
50 ∀ 7
45 1
32 ∀ 0
93* * * 170
70 ∀ 25
70* * *


与造模前比较: * * * P < 0
001


* * * P < 0
001v s premodelin g
与正常组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01
* P< 0
05
* * P< 0
01 v s n orm al group
图 1
血清铁浓度时间关系曲线 (x ∀ s, n= 7)
Fig. 1
Mean serum iron concentrationtime curves ( x ∀ s, n= 7)
1674 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
表 2
大鼠 ig APIC的药动学参数 (x ∀ s, n= 7)
Table 2
Pharmacokinetic parameters of APIC after ig administration in rats (x ∀ s, n= 7)
参
数 单
位 低剂量组正
常 缺铁性贫血
中剂量组
正
常 缺铁性贫血
高剂量组
正
常 缺铁性贫血
t1/2 h 1
03 ∀ 0
23 2
09 ∀ 0
78 1
02 ∀ 0
36 1
96∀ 1
58 0
82 ∀ 0
17 2
04 ∀ 1
69*
t1/2
h 1
32 ∀ 0
20 3
38 ∀ 1
09* * 1
60 ∀ 0
81 4
46∀ 2
14* * 1
07 ∀ 0
18 4
50 ∀ 1
54* *
VL/ F L kg - 1 0
22 ∀ 0
32 1
74 ∀ 0
83 0
60 ∀ 0
58 1
18∀ 0
55 0
62 ∀ 0
60 0
68 ∀ 0
06*
CL / F L h- 1 kg- 1 0
38 ∀ 0
13 0
29 ∀ 0
10* 0
41 ∀ 0
09 0
20∀ 0
10* * 0
80 ∀ 0
12 0
13 ∀ 0
02* *
AUC (0t ) mg h L- 1 18
10 ∀ 5
13 25
40 ∀ 2
09* * 18
60 ∀ 4
26 23
60∀ 5
88 19
10 ∀ 2
29 27
50 ∀ 3
81*
t1/2Ka h 0
62 ∀ 0
20 0
64 ∀ 0
38 0
58 ∀ 0
26 0
62∀ 0
24 0
57 ∀ 0
29 0
51 ∀ 0
08
tmax h 2
20 ∀ 0
45 1
70 ∀ 0
45 2
00 ∀ 0
61 1
60∀ 0
22 1
80 ∀ 0
27 1
50 ∀ 0
00
Cmax g mL- 1 5
27 ∀ 1
36 5
10 ∀ 0
48 5
62 ∀ 0
76 5
10∀ 1
61 5
91 ∀ 0
84 6
13 ∀ 0
90


与正常组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01


* P< 0
05
* * P < 0
01 v s normal group
3个剂量组的 CL/ F 均小于正常组大鼠 ( P<
0
05)。说明 APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠
体内的药动学过程存在显著差异,并且这种差异与
剂量有一定的关系。
3
讨论


本实验采用低铁饲料喂养, 辅以定期少量放血
建立缺铁性贫血模型,并对此模型大鼠的一般形态,
各项指标与造模前比较, 从而说明缺铁性贫血模型
的建立。这种方法比单纯低铁饮食或单纯放血等方
便快捷准确。


实验表明 APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠
体内的药动学过程有显著差异。高、中、低剂量缺铁
性贫血大鼠的 t1/ 2
均显著大于正常大鼠, 血清铁浓
度在 4 h 以后还保持在较高水平, AU C 也显著大于
正常大鼠,而 CL/ F 小于正常大鼠,这样可长时间维
持体内对铁的需求。研究表明: 机体主要是通过控
制铁吸收来维持体内的铁稳态, 而铁吸收率主要是
受机体铁储量及造血速度影响 [ 12]。在缺铁状态时,
机体通过各个方面提高铁吸收率满足机体的铁需
求:在正常情况下,铁的吸收主要是在十二指肠和空
肠上段,但缺铁状态时,空肠远端也可吸收[ 12] , 这在
一定程度上可延长吸收时间; 缺铁性贫血大鼠的胃
肠蠕动加强,肠组织铁的量显著降低, cAMP/ cGMP
大于正常组, 肠收缩功能亢进,肠推进率增大 [ 1314] ,
这在一定程度上可提高吸收速率;大鼠缺铁贫血时
EPO 生成增加, hepcidin 表达减少, 十二指肠基底
膜侧 T fR 表达随之升高 [ 1516] ,铁从肠道细胞内经基
底膜转运至细胞外间隙增多, 十二指肠细胞内铁浓
度降低,从而促进肠铁吸收。铁进入肠黏膜细胞后
有两个去向:一是与细胞内的转铁蛋白结合, 进入血
管;二是与胞内去铁蛋白结合形成铁蛋白,贮存于细
胞浆中。细胞内铁蛋白的合成受铁调节, 铁的量低
抑制其合成,使得与去铁蛋白结合的铁量减少而进
入血管内的铁量增加[ 1718] ,这也与清除率减少一致。
3个剂量组的 APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常
大鼠的药动学差异方向是一致的, 但程度上存在差
别。3个剂量组缺铁性贫血大鼠的 t1/ 2
、AU C 均大
于正常大鼠, 但 t1/ 2只在高剂量组有显著差异,
AU C 在高、低剂量组有差异,这种差异与剂量的具
体关系还需进一步研究。
本实验只对缺铁性贫血大鼠与健康大鼠的药动
学过程进行了比较, 对于不同程度缺铁性贫血大鼠
的药动学过程还需进一步研究。
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二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子表达
及神经细胞凋亡的影响
杨
杰,周芝文,杨期东,曾
进, 郑丽君* 
(中南大学湘雅医院 神经内科,湖南 长沙
410008)
摘
要:目的
探讨二苯乙烯苷 ( TSG) 对缺血再灌注大鼠的神经保护作用及分子机制。方法
线栓法制备大鼠
大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,再灌注后 6 h、24 h、48 h、7 d 观察动物神经行为学变化并评分,采用原位末端脱
氧核苷酸转移酶标记法 ( T UNEL ) 检测神经细胞凋亡; 免疫组化法检测神经生长因子 ( NGF ) 蛋白表达。结果
神经功能评分显示模型组各时间点均有明显的神经功能缺损症状, 除 6 h 时间点外, 两个剂量 TSG 治疗组其余各
时间点神经功能评分明显低于模型组,差异显著 ( P< 0
05) ;与模型组相比, 除 7 d 时间点外, 两个剂量 TSG 组其
余各时间点凋亡细胞数均减少,差异非常显著 ( P< 0
01) ;与模型组相比, 两个剂量 TSG 组各时间点 NGF 表达均
升高,差异非常显著 (P < 0
01)。结论
TSG 能够增加脑缺血再灌注大鼠缺血周边区 NGF 蛋白表达, 拮抗神经细
胞凋亡,改善神经功能。
关键词:二苯乙烯苷; 脑缺血再灌注; 神经生长因子; 细胞凋亡
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2010) 10 1676 04


经典理论认为中枢神经系统损伤后不能再生,
但目前研究证实当给损伤的中枢神经提供适当的条
件后也可再生, 从而认识到脑缺血的治疗和预防是
可行的。研究发现在脑缺血损伤早期应用药物提高
脑内神经生长因子 ( ner ve grow th facto r, NGF) 的
表达水平, 对神经再生和功能的恢复具有积极意
义[ 1]。亦有研究明确 NGF 对细胞凋亡具有抑制作
用。二苯乙烯苷 ( 2, 3, 5, 4)四羟基二苯乙烯2O

D葡萄糖苷, tet rahydro xy st ilbene g lucoside, T SG)
是中药何首乌的活性成分[ 23]。现代药理学研究证
明, T SG 具有抗氧化、抗衰老、增强免疫、调节血脂、
抗动脉粥样硬化、提高学习记忆能力、抗炎、抗肿瘤、
护肝、刺激黑色素合成以及诱导 AD 小鼠内源性
NGF 增加的作用 [ 49] ,而 TSG 对脑缺血后 NGF 表
达及神经细胞凋亡影响的研究未见报道。本研究旨
在观察 TSG 对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区
NGF 表达及神经细胞凋亡的影响, 从而为临床脑保
护剂的研制和开发提供实验依据。
1
材料与方法
1
1
药物、试剂与仪器: T SG 由湖南中医研究所制
剂室提供,经高效液相色谱法提取分离、纯化,测定
其质量分数为 70% , 4 # 冰箱保存, 临时制备成
12、24 mg/ mL 溶液备用。T UNEL 试剂盒购自德
国 Roche 公司。兔抗鼠 NGF 抗体购自 Millipore
公司;兔 SABC 浓缩型免疫组化试剂盒购自武汉博
士德生物工程有限公司; DAB 显色剂购自北京中杉
金桥生物工程有限公司。恒低温组织切片机购自美
国 AO 公司; 生物光学显微镜照相机购自日本
Olympus; HPIAS ! 1000 彩色病理图像分析系统购
自武大影像工程公司。
1
2
实验动物分组与给药: 清洁级雄性 SD 大鼠
96 只,体质量 200~ 300 g (购自湖南农业大学实验
1676 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20100115





















基金项目:湖南省自然科学基金资助项目 ( 08J J3083)作者简介:杨
杰( 1965 ! ) ,女,湖南省长沙市人,副教授,博士,主要研究方向为脑血管疾病。
T el : 13755138437
Email: yangjie6523@ 163. com