全 文 ：基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系
顾地周,冯 颖,顾美影, 王艳萍,姜云天¹
(通化师范学院 生物系,吉林 通化 134002)
摘 要: 目的 以手参茎尖为外植体,研究手参体细胞胚胎发生体系。方法 应用均匀设计法筛选其最适合的胚
性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果 手参茎尖胚性愈伤组织及胚性
细胞复合体诱导最适宜的培养基为: CM + 6-BA 11 0 mg/ L+ IAA 21 0 mg / L+ 2, 4-D 01 1 mg / L ,诱导率为 98% ;体
胚发育及植株再生最适宜的培养基为 : CM+ 6-BA 11 00 mg / L+ IAA 01 10 mg/ L ,体胚萌发率为 100% ,萌发的体胚
在发育培养基上继续培养 50 d 后全部发育成完整植株。结论 对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观
察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。
关键词: 手参;均匀设计; 胚性细胞复合体;体细胞胚; 植株再生
中图分类号: R2841 1 文献标识码: A 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0989- 05
Uniform design for in vitro somatic embryogenesis and plant regeneration
of Gymnadenia conopsea
GU D-i zhou, FENG Ying, GU M e-i ying, WANG Yan-ping, JIAN G Yun-t ian
( Depar tment o f Bio lo gy , T onghua No rmal University, T onghua 134002, China)
Abstract: Objective U sing stem t ip of Gymnadenia conop sea in this experiment to invest igate somat ic
embryogenesis and plant regenerat ion in vit ro1 Methods Unifo rm dedign for the most suitable media for
embryogenic callus induction and embr yogenic cell complex, development of somat ic embryo and plant
regener at ion w ere screened1 Results The results show ed that Chatur vedi and M it ra ( CM ) + 6-BA 11 0
mg/ L+ IAA 21 0 mg/ L+ 2, 4-D 01 1 mg / L w as f it for embryogenic cal lus and embryogenic cell complex in-
duct ion1 Percentag e w as 98% ; The medium o f development of somat ic embryo and plant reg ener at ion w as
CM+ 6-BA 11 00 mg/ L+ IAA 01 10 mg/ L . Percentag e w as 100% and converted into plant lets w ith shoots
and r oots after 50 d culture on the same medium1 Conclusion The observat ion o f morpho st ructure and u-l
t rast ructure pr oves the process of somat ic embryogenesis of G1 conop sea1
Key words: Gymnad enia conop sea ( L1 ) R1 Br1 ; uniform design; embr yogenic cell complex; somat ic
embryo; plant reg eneration
手参 Gymnadenia conop sea ( L1 ) R1Br1 别名
手掌参、巴掌参,是兰科手参属草本植物, 5中国物种
红色名录6中定为近危种, 5吉林省野生动植物保护
管理暂行条例6中定为省级一类重点保护植物, 是长
白山区野生珍稀濒危药用植物[ 1]。手掌参根块中含
有对羟基苯甲醇、香草酸、对羟基苯甲醛、腺嘌呤核
苷、对甲氧基苯基 B-D-葡萄糖苷、对甲基苯基 B-D-
葡萄糖苷、对羟基苯基苄基 B-D-葡萄糖苷、蔗糖、十
八烷、丁香酚、B-谷甾醇、5-羟甲基糠醛、正丁基吡喃
果糖苷、薯蓣皂苷和果糖等化学成分 [ 2~ 4]。其根入
药,具抗过敏、抗氧化等作用,主治慢性肝炎、神经衰
弱、肺虚咳嗽、虚痨消瘦、久泻、失血、带下等 [ 4]。其
花序造型奇特, 花色泽艳丽,可开发用于花坛、花境
的绿化,也可用于鲜切花, 是上好的观赏园艺品种。
手参在长白山区数量非常稀少 [ 5]。因其种子不易获
得,其常规繁殖主要靠分蘖方式, 繁殖系数小, 可操
作性极差。组培快繁主要是通过器官发生途径由外
植体分化不定芽然后再生植株, 具有增殖系数高等
优点[ 6, 7] ,但仍存在外植体诱愈伤组织周期较长、获
得无菌苗速度较慢、且无菌苗长期连续增殖极易发
生退化和变异等缺点。而相对于器官发生过程, 体
细胞胚胎发生途径是培养体细胞经历与合子胚发育
#989#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
¹ 收稿日期: 2009-08-15 基金项目:国家科技攻关计划引导项目( 2005BA741C)作者简介:顾地周( 1973 ) ) ,男,吉林通化人,讲师,主要从事长白山区珍稀濒危植物和药用植物研究。 E-mail: gudizh ou@ 1631 com
相似的过程形成胚性细胞复合体, 然后萌发进而发
育为完整植株。不仅繁殖系数高, 而且遗传稳定性
强,可用于人工种子的制作, 大大提高种苗生产效
率,并可用于遗传转化,直接通过体胚发生途径获得
手参转基因植株。目前,国内外关于植物体细胞胚
胎发生研究的报道较多[ 8~ 12] , 在前人报道的基础
上,研究了手参体细胞胚胎发生体系, 以期明确高
效、稳定的体胚诱导、发育及成熟萌发条件;同时对
体胚发生发育过程的形态及超微结构进行研究, 为
深入了解手参体胚发生的形态学及形态调控技术提
供依据,为提高种苗生产率和制作手参人工种子奠
定基础。本实验采用均匀设计法对其体胚诱发及发
育的培养基进行了筛选,结果对其开发和利用可能
有一定的参考意义。
1 材料与方法
11 1 试材:手参新生茎尖。
11 2 方法
11 21 1 培养条件:以 CM 为基本培养基, 附加蔗糖
分别为 20 g / L ,琼脂 81 0 g/ L, pH 51 5,附加植物生
长调节物质, 温度控制在( 26 ? 2) e ,暗光培养。
11 21 2 材料处理: 将手参茎尖剪下,在超净工作台
上用 70%酒精涮洗 10 s,再用含 3%链霉素的次氯
酸 ( 01 1%)溶液浸泡 10 m in,无菌水冲洗 8次,用无
菌滤纸将外植体表面的水分吸干, 切除受杀菌消毒
剂损害部分后留 2 mm 锥状茎尖作为外植体备用。
11 21 3 胚性愈伤组织及胚性细胞复合体的诱导:将
锥状茎尖切面部朝下接种到附加不同质量浓度细胞
分裂素 6-BA 和生长素 IAA、NAA、2, 4-D的 CM 培
养基上进行胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱发培
养,观察胚性愈伤组织形成情况。以筛选最合适的
诱导培养基。
11 21 4 体细胞胚发生发育及植株再生:将含有胚性
细胞复合体胚性愈伤组织转接到附加 6-BA、IAA、
IBA、NAA的 CM 培养基上进行体胚发生及发育培
养,筛选最佳的体胚发生发育培养基。培养到一定
时期后,待胚性愈伤组织表面产生鱼雷状突起时,将
突起剥离下来,再转接到体胚发生培养基中继续培
养,使体胚继续发育并萌发后形成完整的植株。同
时,结合电镜观察体胚产生的部位及发育情况(球形
胚、盾形胚、子叶胚和再生植株)。
11 21 5 结果观察:采用数码相机对含外植体各阶段
的形态变化进行拍摄。同时, 对不同阶段培养物进
行扫描电镜观察, 拍摄。
11 21 6 数据分析与处理: 采用均匀设计 ( U niform
Design)软件。
2 结果与分析
21 1 不同激素配比对含胚性愈伤组织及胚性细胞
复合体诱导的影响: 以 CM 为基本培养基, 附加不
同质量浓度的 6-BA、IAA、NAA、2, 4-D(由预实验
可知: 6-BA 质量浓度控制 01 1~ 11 0 mg / L , IAA、
NAA、2, 4-D质量浓度均控制在 0~ 21 0 mg/ L ) , 将
手参幼茎尖接种到不同培养基中进行胚性愈伤组织
诱导培养。为了提高手参胚性愈伤组织诱导的速度
和诱导率,采用均匀设计法[ 13] , 每个处理数为 30,选
用 U 10 ( 108 )均匀表(表 1) , 同时考察了细胞分裂素
6-BA和生长素 IAA、NAA、2, 4-D的质量浓度交叉
配比对诱导率的影响,结果见表 2。
表 1 U10 ( 104 )设计因素及水平
Table 1 Factors and levels of U10 ( 104 ) design
水平 因 素/ ( m g # L
- 1)
X 1 X 2 X 3 X 4
1 01 10 01 00 01 00 0100
2 01 20 01 10 01 10 0110
3 01 30 01 25 01 25 0125
4 01 40 01 50 01 50 0150
5 01 50 01 75 01 75 0175
6 01 60 11 00 11 00 1100
7 01 70 11 25 11 25 1125
8 01 80 11 50 11 50 1150
9 01 90 11 75 11 75 1175
10 11 00 21 00 21 00 2100
X 1- 6-BA 浓度 X 2-IAA 浓度 X 3-NAA 浓度 X 4-2, 4-D 浓
度,表 2同
X 1- 6-BA concent ration X 2-IAA con cent rat ion X 3-NAA con-
cent rat ion X 4-2, 4- D concent rat ion T ab le 2 is sam e
表 2 U10 ( 104 )均匀设计试验安排及结果
Table 2 U10 ( 104 ) Uniform design and result
处理号 因 素/ ( mg # L
- 1)
X 1 X 2 X 3 X 4
Y (诱导率) /
%
1 01 10 01 25 01 50 01 75 521 00
2 01 20 11 00 11 50 21 00 601 00
3 01 30 11 75 01 00 01 50 791 00
4 01 40 01 00 01 75 11 75 441 00
5 01 50 01 50 11 75 01 25 651 00
6 01 60 11 25 01 10 11 50 721 00
7 01 70 21 00 11 00 01 10 901 00
8 01 80 01 10 21 00 11 25 571 00
9 01 90 01 75 01 25 01 00 731 00
10 11 00 11 50 11 25 11 00 831 00
将所得数据经均匀设计软件处理得回归方程:
Y= 491 0+ 121 7 X 1 + 161 5 X 2 + 01 955 X 3 - 41 82
X 4 ,样本容量 N = 10, 显著性水平 A= 01 01, 复相关
系数 ( R ) = 01 996 7, 检验值 F t = 1851 9, 临界值
F ( 01 01, 4, 5) = 111 39, F t> F ( 01 01, 4, 5) , 显著, 回归方程有
#990# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
意义。对各方程项进行显著性检验可知: 检验值
F ( 3) = 11 307, 临 界值 F ( 01 01, 1, 5) = 161 26, F ( 3) [
F ( 01 01, 11 5) , 此方程项不显著。剔除不显著方程项,新
建回归方程继续计算: 得回归方程 Y= 491 6+ 131 4
X 1 + 161 2 X 2- 41 65 X 4 , R= 01 995 8, 检验值 F t=
2351 4, 临界值 F ( 01 01, 3, 6) = 91 780, F t > F ( 01 01, 3, 6) , 回
归方程显著。同理对各方程项进行显著性检验可
知:各方程项对 Y 值均影响显著。求得实验范围内
的最佳条件为: X 1 = 11 0, X 2 = 21 0, X 3 = 0, X 4 =
01 1,在此组合基础上求得最优解: Y = 951 0, 此解为
回归方程的解析解,按公式 Y= y ? uA # s(其中uA为
正发布的双侧分位数, s 为剩余标准差)计算出优化
值区间估计为 Y = 951 0 ( ? 61 05) , 即 881 95% ~
1011 05%。用实验得到的优化值 6-BA 11 0 mg/ L+
IAA 21 0 mg/ L+ 2, 4-D 01 1 mg/ L 进行验证试验,
幼茎尖接种到诱导培养基 15 d后逐渐增粗,继续培
养至 30 d由白色转为绿色, 45 d后完全形成愈伤组
织,表面光滑致密呈鲜绿色(图 1-a) , 培养至 60 d时
部分愈伤组织表面逐渐形成颗粒状的小突起, 愈伤
组织转为黄绿色(图 1-b)。通过扫描电镜( SEM )观
察确定:表面光滑致密呈绿色的愈伤组织是含有胚
性细胞复合体的胚性愈伤组织(图 2-a, b) , 小突起
是体胚发育的前期即球形胚(图 2- c)。统计诱导率
达 98%以上, 在估计区间范围内, 且比所有实验 Y
值都大,说明实验结果是正确的。因此,手参幼茎尖
诱导含胚性细胞复合体的胚性愈伤组织最佳培养基
为: CM + 6-BA 11 0 mg/ L+ IAA 21 0 mg / L+ 2, 4-D
01 1 mg / L。
a-胚性愈伤组织 b-含有球形胚的胚性细胞复合体 c, d-体细胞胚萌发 e-体细胞胚萌发后发育为完整植株
a-embryonic callu s b- emb ryon ic cel l complex w ith globular em bryo c, d- somatic cell embryo germinat ion
e-somat ic em bryos developing a complete plant after g erminat ion
图 1 手参胚性愈伤组织及体细胞胚诱导发生发育各阶段的形态结构
Fig1 1 Morphostructure of embryonic callus and inducing developing somatic embryogenesis in various stages of G1 conopsea
a-含胚性细胞复合体的胚性愈伤组织 b-胚性细胞复合体 c-含球形胚的胚性细胞复合体 d-盾形胚 e-子叶胚 f-再生植株
a-embryonic callus w ith embryonic cell s complex b- emb ryon ic cel l complex c- emb ryon ic cel l complex w ith globular em bryo
d- emb ryon ic cel l complex w ith scutellate embryo e-cotyledonary embryo f-regenerat ion plant
图 2 手参体细胞胚诱发及发育各阶段组织结构扫描电镜观察
Fig1 2 SEM Observation of induction and development of G1 conopsea somatic embryo in dif ferent stages
21 2 不同激素配比对体细胞胚发育及植株再生的
影响:以 CM 为基本培养基, 附加不同质量浓度的
6-BA、NAA、IAA(由预实验可知:质量浓度范围均
控制在 01 1~ 11 0 mg/ L ) ,为了提高手参体胚的发育
及萌发速度和萌发率, 采用均匀设计法,每个处理数
为 30。选用 U 10 ( 108 )均匀表(表 3) ,同时考察了细
胞分裂 6-BA 和生长素 IAA、NAA的质量浓度交叉
配比对萌发率的影响, 结果见表 4。
将所得数据经均匀设计软件处理得回归方程:
Y= 621 4+ 391 9 X 1- 141 1 X 2- 21 02 X 3 , 样本容量
N = 10, 显著性水平 A= 01 01, R= 01 998 7, 检验值
F t= 7781 7, 临界值 F01 01 ( 3, 6) = 91 780, F t > F01 01
( 3, 6) ,回归方程显著。对各方程项进行显著性检验
可知: 检验值 F ( 3) = 41 250, 临界值 F01 01 ( 1, 6) =
131 75, F ( 3) [ F01 01 ( 1, 6) , 此方程项不显著, 需要剔
除。剔除不显著方程项, 新建回归方程继续计算: 得
回归方程 Y= 611 1+ 401 2 X 1 - 141 0 X 2 , 复相关系
数R= 01 997 8, 检验值 F t = 7961 2, 临界值 F01 01 ( 2,
7) = 91 547, F t > F01 01 ( 2, 7) ,回归方程显著。同理,
对各方程项进行显著性检验可知: 各方程项均显著。
#991#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
表 3 U10( 103 )设计因素及水平
Table 3 Factors and levels of U10( 103 ) design
水 平 因 素/ ( mg # L
- 1)
X 1 X 2 X 3
1 01 10 01 10 01 10
2 01 20 01 20 01 20
3 01 30 01 30 01 30
4 01 40 01 40 01 40
5 01 50 01 50 01 50
6 01 60 01 60 01 60
7 01 70 01 70 01 70
8 01 80 01 80 01 80
9 01 90 01 90 01 90
10 11 00 11 00 11 00
X 1- 6-BA 浓度 X 2-IAA 浓度 X 3-NAA 浓度,表 4同
X 1-6-BA con cen t rat ion X 2-IAA concent rat ion X 3- NAA con-
cent rat ion T ab le 4 is sam e
表 4 U10( 103 )均匀设计试验安排及结果
Table 4 U10( 103 ) Uniform design and result
处理号 因 素/ ( mg # L
- 1)
X 1 X 2 X 3
Y (诱导率)
/ %
1 01 10 01 50 01 70 571 50
2 01 20 11 00 01 30 551 00
3 01 30 01 40 11 00 671 00
4 01 40 01 90 01 60 641 50
5 01 50 01 30 01 20 781 00
6 01 60 01 80 01 90 741 00
7 01 70 01 20 01 50 871 50
8 01 80 01 70 01 10 851 00
9 01 90 01 10 01 80 951 00
10 11 00 01 60 01 40 911 50
根据回归方程求出 Y 的最优组合为: X 1= 11 00, X 2
= 01 1, 在此组合基础上求得最优解: Y= 991 9,按公
式 Y= y ? uA# s计算出优化值区间估计为 Y= 991 9
( ? 31 73) , 即 961 17~ 1031 63。用实验得到的优化
值 6-BA 11 00 mg/ L+ IAA 01 10 mg/ L 进行验证试
验。将含有胚性细胞复合体的胚性愈伤组织切割成
适当的小块转接到附加 6-BA 11 00 mg/ L 和 IAA
01 10 mg / L 的 CM 培养基上进行体胚发育及萌发培
养,胚性细胞复合体在此组合的培养基上培养 20 d
后开始呈现出明显的发育状态, 由淡黄色逐渐转为
浅绿色,继而转为鲜绿色,继续培养至 35 d 后,有绿
色圆锥体出现(图 1-c)。通过电镜观察确定:绿色圆
锥体是胚性细胞复合体表现球形胚发育产生的盾形
胚(图 2-d)和早期子叶胚(图 2-e) , 说明体胚开始转
向植株萌发阶段。统计萌发率为 100% , 在估计区
间范围内,且比所有实验 Y 值都大, 说明实验结果
是正确的。因此, 手参体细胞胚发育及萌发的最佳
培养基为: CM+ 6-BA 11 00 mg/ L+ IAA 01 10 mg/ L。
植株再生可将胚性愈伤组织表面产生的鱼雷状
的小芽锥剥离下来, 再转接到培养基: CM + 6-BA
11 00 mg / L+ IAA 01 10 mg/ L 中继续培养 35 d 由
鱼雷状变成小植株(图 1-d) , 50 d后小植株全部发
育成完整的大植株(图 1-e)。同时通过电镜观察证
实了鱼雷状的小芽锥为子叶胚(图 2-f)。
21 3 炼苗和移栽:待苗根长至 41 0 cm 时,从培养瓶
中取出试管苗, 在含有 10 mg / L 高锰酸钾溶液中洗
去苗上残留的琼脂, 然后植入经 50倍杀毒矾消毒过
的腐烂松针与泥炭土按 3B 1混合的基质中, 用薄膜
覆盖以保湿保温, 湿度保持在 80% , 温度控制在
( 20 ? 2) e ,每天自然光照 10 h, 3 d后通风换气, 7 d
后揭膜,每天早晚喷洒清水各 1 次, 成活率达 98%
以上。
21 4 扫描电镜观察:由扫描电镜下可以观察到含胚
性细胞复合体的胚性愈伤组织表面致密(图 2- a) , 而
胚性细胞复合体形成后呈颗粒状半埋于愈伤组织中
(图 2-a, b) ,其表面光滑(图 2-b, c)。胚性细胞复合
体中的单一细胞继续发育形成球状突起并浮在胚性
细胞复合体表面,这些突起是体细胞胚发育过程形
成的球形胚(图 2-c) , 随着培养时间的延长, 体细胞
胚会经过球形胚(图 2-c)、盾形胚(图 2- d)、子叶胚
(图 2-e, f)等发育阶段, 最终萌发成完整植株, 且每
个体细胞胚最终都能独立发育成完整的植株。
3 讨论
植物离体培养的外部条件影响着体胚的发生和
发育。本实验对影响体胚发生过程的植物生长调节
剂因素进行了研究。关于体胚诱导的外植体因素,
在其他植物上已有较多研究, 大多数植物只有处于
一定发育阶段的某些器官的外植体才易于诱导形成
胚性细胞复合体 [ 14]。本研究结果表明, 手参茎尖较
适宜胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导。体胚发
生不同阶段所需植物生长调节剂种类和浓度存在差
异,较高质量浓度的 IAA、较低质量浓度的 2, 4-D
和一定质量浓度的 6-BA 在手参胚性愈伤组织诱导
阶段是必需的, 但添加过高质量浓度的 2, 4-D 会导
致外植体迅速黄化导致细胞死亡,不能形成胚性愈
伤组织。原因可能是高浓度 2, 4-D会诱导外植体生
成乙烯等气体, 加速外植体的衰老。添加 6-BA 有
利于外植体保持较高的活性,不添加 6-BA, 外植体
会逐渐黄化而失去脱分化能力。植物生长调节剂还
影响体胚的发育进程, 体胚发育培养基中添加适当
质量浓度的6-BA,一方面消除胚性愈伤组织中 2, 4-
D的影响,另一方面保持胚性愈伤组织的活性,促使
体胚进一步发育[ 15] 。体胚发生过程的扫描电镜观
#992# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
察表明,手参体细胞胚胎发生过程具有和合子胚发
生相似的阶段,胚性愈伤组织及胚性细胞复合体形
成后,继续发育经历球形胚、盾形胚、子叶胚等发育
阶段。研究中发现球形胚形成后与其周围组织之间
产生了结构上的隔离, 这正是体细胞胚胎发生的先
决条件。球形胚形成后,两极同时发育,呈现明显的
两极性;且每个体细胞胚最终都能萌发成完整的植
株,具有相对的独立性。这两个特征是区分器官发
生和体胚发生的标志。手参体胚发生的形态学和超
微结构观察表明, 本研究初步建立了相对稳定的手
参体细胞胚胎发生体系,为进一步完善体胚发生调
控体系和阐明体胚发生发育机制提供了基础。
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三七不同变异类型中皂苷的差异研究
孙玉琴1 ,陈中坚1, 2¹ ,黄天卫1 ,崔秀明1 ,王朝梁1
( 11 文山三七研究院栽培研究所 云南三七农业工程实验室,云南 文山 663000;
21 文山苗乡三七实业有限公司, 云南 文山 663000)
摘 要:目的 三七的根部颜色、茎杆颜色、复叶柄弯曲程度、复叶数、根形、叶形、茎数存在不同的变异类型, 分析
它们对皂苷量的影响, 为三七育种确定选育目标。方法 在云南文山的 6 个三七产区采样 289 份, 逐一标记植株
变异类型, 用 H PLC 法测定人参皂苷 Rg 1、Rb1 和三七皂苷 R1 共 3个单体皂苷,在同一立地条件、同一栽培措施的
基础上,对比分析 7种不同变异类型对三七皂苷量的影响。结果 紫根、复叶柄平展型、长形根、宽叶等 4 种变异
类型三七的皂苷量高, 双茎三七的皂苷量低于单茎三七, 三七的茎杆颜色及复叶数的多少对皂苷积累无规律性。
结论 紫根三七、复叶柄平展型三七、长形根三七、宽叶三七 4 种变异类型三七可以作为优质三七品种选育的目
标。
关键词: 三七;变异类型; 皂苷;育种目标
中图分类号: R2841 1 文献标识码: A 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0993- 05
三七 Panax notog inseng ( Burk1 ) F1 H1 Chen
是五加科人参属植物, 为多年生植物,是我国特有的
名贵中药材, 主产于云南文山。现代药理研究证实,
三七皂苷( Panax notoginseng saponins, PNS)对多
种动物脑缺血及再灌注损伤有良好保护作用, 同时
三七皂苷还具有降低血黏度、抑制血小板聚集、扩张
血管、降血脂等作用[ 1] , 目前对三七研究有不少报
道[ 2, 3]。三七人工种植已经有400余年的历史,目前
#993#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
¹ 收稿日期: 2009-09-15 基金项目:国家科技支撑计划项目( 2006BAI06A12-14) ;云南省人才培引计划( 2006PY02-33) ;云南省重点产业创新工程( 2008IF006)作者简介:孙玉琴( 1975 ) ) ,女,吉林临江人,助理研究员,硕士,从事三七栽培和育种研究。 T el : ( 0876) 8881540
* 通讯作者 陈中坚 Tel: ( 0876) 8881230 E-m ail: 08765173@ 1631 com