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白芍和赤芍HPLC指纹图谱比较研究



全 文 :(叶与叶、茎与茎)及同一产地、同一品种淫羊藿药材
的不同生长部位(茎与叶)的淫羊藿苷量及指纹图谱
的比较分析可知:  淫羊藿药材的不同生长部位(茎
与叶)中淫羊藿苷的量存在较大差异,叶片中淫羊藿
苷的量较高,茎中偏低,因此应综合淫羊藿药材叶与
茎部位中淫羊藿苷的量及叶与茎的比例来评价不同
产地、不同品种的淫羊藿药材的质量。  不同淫羊
藿药材的茎与叶的比例存在较大差异, 建议建立基
于茎与叶不同比例要求及药材品种来源的新的淫羊
藿药材商品规格划分标准。 由指纹图谱比较可
知,叶片中淫羊藿苷的量较高,其余色谱峰代表的化
学成分的量不一定高,当评价不同产地、不同品种淫
羊藿药材化学品质时, 应同时比较叶与茎的化学质
量差异,综合各有效指标,进行整体评价。
基于本研究结果,建议应该建立基于综合茎与
叶比例、茎与叶中淫羊藿苷的量等因素的淫羊藿药
材商品规格划分标准, 以建立基于叶与茎中淫羊藿
苷测定及指纹图谱的! 一测多评∀的不同产地、不同
品种的淫羊藿药材的化学区分模式及质控方法, 以
期为淫羊藿药材的大质量观研究奠定基础 [ 6]。
参考文献:
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白芍和赤芍 HPLC指纹图谱比较研究
高 # 明1 ,赵 # 镭2 ,赵光树1 * 
( 1 浙江大学医学院附属第一医院, 浙江 杭州 # 310003; 2 浙江大学医学院附属儿童医院,浙江 杭州 # 310003)
摘 # 要:目的 # 通过建立白芍和赤芍药材的 HPLC指纹图谱,进一步完善芍药野生品与栽培品药材的质量评价方
法。方法 # 采用 H PLC 测定了 11 批白芍和和 11 批赤芍样品,并建立标准对照指纹图谱, 按国家药典委员会提供
的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对样品的相似度进行评价。色谱条件:固定相为 Kromasil 1005C18 ( 250 mm
∃ 4 6 mm, 5 m) ; 流动相为乙腈0 3%H 3PO 4 梯度洗脱;检测波长为 220 nm,参比波长为 290 nm; 柱温 35 % ; 体
积流量 0 8 mL / min。结果 # 建立的 HPLC 指纹图谱能区别白芍和赤芍。结论 # 本法简单、快捷, 为科学评价和控
制芍药野生品与栽培品药材的质量提供了依据, 为同来源于芍药的赤芍和白芍的临床应用提供依据。
关键词:赤芍; 白芍;指纹图谱; RPH PLC
中图分类号: R282 7 # # # 文献标识码: A # # # 文章编号: 02532670( 2010) 11190403
# # 白芍为毛茛科植物芍药 Paeonia lacti f lor a
Pall 的干燥根; 赤芍为毛茛科植物芍药 P lacti 
f lor a Pall 或川赤芍 P vei tchi i Lynch 的干燥
根[ 1]。一般认为,芍药野生品的根直接干燥就是赤
芍,而栽培品的根去皮水煮后即为白芍。白芍总
苷[ 2]、赤芍总苷 [ 34] 均含有芍药苷( paeoniflo rin)、芍
药内酯苷 ( albif lorin)、羟基芍药苷( ox ypaeonif lor
in)、苯甲酰芍药苷( benzoylpaeoniflo rin)等单萜类
化合物。本实验以白芍总苷胶囊(商品名: 帕夫林,
TGPC)为外参照, 建立白芍、赤芍的标准对照指纹
图谱以考察白、赤芍药材之间的成分差异,为完善赤
芍、白芍质量控制提供科学依据。
1 # 仪器与试药
1 1 # 仪器: Agilent1200 高效液相色谱系统:
G1322A脱气机, G1311A 四元泵, G1329A 自动进
样仪, G1316A 柱温箱, G1315D DAD 检测器, 安捷
伦 Chemstat ion色谱工作站; KQ300DB型数控超声
波清洗器(江苏昆山超声仪器公司) ; H2050R 高速
冷冻离心机 (长沙湘仪离心机有限公司) ; M ET
TLER AE163分析天平( Met t ler Toledo 仪器有限
公司)。中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药
典委员会)。
&1904& 中草药# Chinese Traditional and Herbal Drugs# 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100226# # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # #作者简介:高 # 明,男,硕士,研究方向为中药成分分析。Tel: ( 0571) 87236540 # Email: 48871550@ QQ com
* 通讯作者 # 赵光树 # T el: ( 0571) 87236539 # Email: fi shlczl@ yahoo com cn
1 2 # 试药:白芍对照药材(批号 120905 ∋ 200508)、
赤芍对照药材(批号 121093 ∋ 200402)、芍药苷对照
品(批号 110736 ∋ 200526)、苯甲酸对照品 (批号
100419 ∋ 200301) ,均为中国药品生物制品检定所提
供;芍药内酯苷购自天津中新药业研究中心; 白芍总
苷胶囊(批号 081101, 深圳朗生医药有限公司) ; 乙
腈为色谱纯( M erck公司) ;水为重蒸水, 其他试剂为
分析纯。试验用药材均由浙江大学医学院附属第一
医院提供, 并经笔者鉴定均为正品, 均为芍药
P lacti f lora Pal l 的干燥根。来源见表 1。
表 1 # 样品来源及编号
Table 1 # Sample source and number
白芍 赤芍
编号 批号 产地 编号 批号 产地
B1 Y0902 # 安徽 # C1 20090612 内蒙古
B2 081207 浙江 # C2 20090422 内蒙古
B3 090723 浙江 # C3 090107 # 内蒙古
B4 090824 浙江 # C4 090504 # 内蒙古
B5 080101 浙江 # C5 090516 # 内蒙古
B6 080828 浙江 # C6 090405 # 内蒙古
B7 090529 安徽 # C7 20090705 内蒙古
B8 080928 浙江 # C8 20090828 内蒙古
B9 090623 浙江 # C9 20090622 内蒙古
B10 080107 浙江 # C10 20090422 内蒙古
B11 120905 ∋ 200508 中检所 C11 121093 ∋ 200402 中检所
# # 注:中检所为中国药品生物制品检定所
2 # 方法与结果
2 1 # 色谱条件: 色谱柱为 Kromasil 1005C18 ( 250
mm ∃ 4 6 mm , 5 m) ; 流动相: 乙腈 ( A )0 3%
H 3PO 4 ( B)梯度洗脱, 0~ 7 min, 流动相 A 为 8% ,
7~ 14 m in,流动相 A 为 8% ( 15%, 14~ 35 min, 流
动相 A 为 15% ( 22%, 35~ 45 m in, 流动相 A 为
22% (25%, 45~ 50 min,流动相 A 为 25% ( 8% ,
50~ 60 min, 流动相 A 为 8% ; 体积流量 0 8 mL/
min; 柱温 35 % ; 进样量为 10 L; 检测波长为 220
nm ,参比波长为 290 nm;记录时间: 60 m in。
2 2 # 溶液的配制
2 2 1 # 对照品溶液的制备: 称取芍药苷、芍药内酯
苷、苯甲酸对照品适量, 精密称定, 置量瓶中, 加
50%甲醇制成 120、50 g/ mL 的溶液, 即得,作为对
照品溶液。
2 2 2 # 供试品溶液的制备:取样品粉末0 2 g, 精密
称定,置 25 mL 量瓶中,加 50%甲醇 20 mL,浸渍 4
h后,超声处理 45 min, 取出,放至室温, 用 50%甲
醇稀释至刻度,摇匀,离心, 即得。
2 2 3 # 参比溶液的制备: 称取白芍总苷适量,精密
称定,置量瓶中, 加 50%甲醇制成 400 g / mL 的溶
液,即得,作为参比溶液。
2 3 # 精密度试验: 称取白芍和赤芍样品粉末( B10
和 C4) 0 2 g,按! 2 2 2∀供试品制备方法制备,精密
吸取 10 L 在上述色谱条件下连续进样 6次,记录
指纹图谱,并按国家药典委员会提供的中药色谱指
纹图谱相似度评价系统[ 4] 对其相似度进行评价,以
对照图谱为对照进行计算, 结果相似度均大于
0 998, 表明精密度良好。
2 4 # 重现性试验: 称取白芍和赤芍样品粉末( B10
和 C4) , 按! 2 2 2∀供试品制备方法平行制备 6份,
精密吸取 10 L, 在上述色谱条件下进行分析,处理
方法同上,结果相似度均大于 0 990,表明本法具有
较好的重现性。
2 5 # 稳定性试验:取供试品溶液, 在相同的条件下
分别于 0、5、10、15、20、25 h 进样分析,记录指纹图
谱,数据处理方法同上, 结果相似度均大于 0 990,
表明样品在 25 h内稳定。
2 6 # 白芍、赤芍药材 HPLC 指纹图谱共有模式的建
立:取11批白芍样品和11批赤芍样品粉末,按! 2 22∀
供试品制备方法制备,精密吸取 10 L 在上述色谱条
件下进样分析,记录指纹图谱,根据)中药注射剂指纹
图谱研究的技术要求(暂行)∗规定,进行指纹图谱相似
度的比较,制成标准对照指纹图谱,见图1。
8芍药内酯苷 # 10芍药苷 # 14苯甲酸
8albif lorin # 10paeonif lorin # 14ben zyl acid
图 1 # 白芍(A)和赤芍(B)HPLC指纹图谱共有模式及白芍总苷胶囊(C)HPLC图谱
Fig 1 # HPLC Fingerprint common pattern of Paeoniae Alba Radix ( A) and Paeoniae Rubra Radix (B)
and HPLC chromatogram of total glucosides of paeony capsules ( C)
&1905&中草药# Chinese Traditional and Herbal Drugs# 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
2 7 # 样品指纹图谱的测定:以上述生成的白芍和赤
芍标准对照指纹图谱作对照, 按国家药典委员会提
供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价,对 11
批白芍和 11批赤芍样品进行了指纹图谱相似度的
测定,结果见表 2。
表 2 # 样品相似度测定结果
Table 2 # Similarity analysis of samples
编号 相似度 编号 相似度
B1 0995 C1 0 940
B2 0997 C2 0 987
B3 0998 C3 0 995
B4 0998 C4 0 985
B5 0997 C5 0 987
B6 0998 C6 0 992
B7 0992 C7 0 983
B8 0986 C8 0 987
B9 0996 C9 0 978
B10 0990 C10 0 984
白芍对照药材 0999 赤芍对照药材 0 995
3 # 讨论
3 1 # 白芍和赤芍的主要活性成分为单萜类成分, 故
选择白芍总苷作为有效部位参照;另在制定白芍和
赤芍的 HPLC指纹图谱时, 选择芍药苷、芍药内酯
苷及苯甲酸作为内参照物。
3 2 # 本实验参考相关文献方法[ 23, 5]采用梯度洗脱,
既缩短了分析时间, 又可提供更多的信息。另 2010
年版)中国药典∗及相关文献报道[ 23] , 白芍和赤芍的
检测波长均为 230 nm,但在上述波长下进行试验时
发现,色谱图基线噪音大,杂质干扰多,故考虑背景
扣除。采用 Ag ilent 1200 HPLCDAD在 190~ 400
nm 波段扫描, 结果表明选择 220 nm 作为检测波
长, 290 nm 作为参比波长,基线噪音及杂质干扰均
变小,另在 220 nm 波长处,各特征峰均有较高的相
应值,可以检出相对较多的成分。
3 3 # 根据所记录的白芍和赤芍样品的 H PLC指纹
图谱与相应的标准对照指纹图谱比较, 样品与指纹
图谱共有模式之间的相似度以 220 nm 波长(参比
波长 290 nm)下基于峰面积值的夹角余弦法计算,
均高于 0 98,样品之间具有较高的相似性。
3 4 # 白芍和赤芍的 HPLC 指纹图谱分别有 24和
22个共有峰, 从色谱图上可判断, 白芍和赤芍均有
白芍总苷的特征成分( 10 和 11 号峰) , 赤芍中的芍
药苷的量远高于白芍; 从白芍和赤芍的标准对照指
纹图谱看,白芍图谱上的 4、5、8、9、16、17 号峰可以
作为白芍的特征峰用于区别白芍和赤芍, 也为芍药
根野生品和栽培品的区别提供依据。
参考文献:
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