全 文 ：
药理与临床

积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞增殖活性的影响及其机制探讨
吕婷婷,刘
芳* ,陈
燕,姜旭东
(华中科技大学同济医学院附属协和医院 血液病研究所, 湖北 武汉
430022)
摘
要:目的
探讨积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞株 RPMI 8226 细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其机制。
方法
MTT 法检测积雪草酸对肿瘤细胞的抗增殖作用; Hoechest33258 染色法检测细胞凋亡的形态学变化;流式
细胞术 ( FCM ) 检测细胞凋亡及细胞周期的变化; RT-PCR 法检测细胞 sur viv in 和 bc-l 2 mRNA 表达水平的变化。
结果
积雪草酸在浓度 10~ 70
mol/ L 显著抑制 RPMI 8226 细胞的增殖, 呈时间及浓度依赖性,作用 24、48、72 h
的 IC50值分别为 ( 42
25
4
57)、( 24
88
3
51)、( 19
83
2
88)
mo l/ L。积雪草酸可诱导细胞发生凋亡,出现典
型的凋亡小体。积雪草酸诱导细胞发生早期凋亡, 并呈浓度依赖性。积雪草酸 25~ 40
mo l/ L 能将 RPMI 8226
细胞阻滞在 G2期, G 2期细胞比例随积雪草酸浓度增大而逐渐增高。积雪草酸使 surv ivin 和 bc-l 2 mRNA 表达下
降,并与细胞的凋亡程度呈负相关。结论
积雪草酸能通过调控细胞周期的进程和诱导细胞凋亡从而抑制 RPM I
8226 细胞增殖 ,其诱导凋亡的机制可能与下调 surv ivin 和 bc-l 2 的转录水平有关。
关键词:积雪草酸; 多发性骨髓瘤; RPMI 8226; 细胞凋亡; survivin; bc-l 2
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1484-05
Effect of asiatic acid on proliferation of multiple myeloma cells and its mechanism
L
T ing- t ing , LIU Fang, CHEN Yan, JIAN G Xu-dong
( Inst itute of H emat olo g y, Union H ospital, T ongji Medical Colleg e, H uazhong Univ ersity
of Science and Technolog y, Wuhan 430022, China)
Abstract: Objective
T o explore the ef fect o f asiat ic acid on cell pro lifrerat ion, apoptosis, and cells
cycle of human mult iple myeloma cells RPMI 8226, and its ant itumo r mechanism . Methods
MTT Assay
w as used to assess the ef fect of asiat ic acid on cells prol iferat ion; Hoechest 33258 staining w as studied to
evaluate the morpholog ical changes in RPM I 8226 cells induced by asiat ic acid; F low cytometry w as used to
analyze the induction apoptosis and cell cycle ar rest of asiat ic acid; RT-PCR was applied to detect the chan-
ges of survivin and bc-l 2 mRNA expression lev els. Results
A siatic acid signif icantly inhibited the cell pro-
l iferat ion o f RPM I 8226 in
mol/ L gr ade level, in a time- and dose-dependent manner. T he IC50 values of
RPM I 8226 cells w ere ( 42. 25
4. 57) , ( 24. 88
3. 51) and ( 19. 83
2. 88)
mol/ L for 24, 48, and 72 h.
Asiat ic acid could induce apoptosis, and cell show ed typical apopto tic features. Asiat ic acid induced apop-
to sis in a dose-dependent manner. Cel ls t reated w ith asiat ic acid 25
40
mol/ L were blocked in the G2
phase. The expression of surv iv in and bc-l 2 mRNA was decreased in RPM I 8226 cel ls, and the extent of
apoptosis w as a negat ive cor relat ion w ith the dose of asiatic acid. Conclusion
Asiat ic acid could inhibit the
pro liferat ion by inducing apoptosis and r egulat ing cell cycle process. T he mechanism of induct ion apoptosis
is associated w ith up-regulat ion of surv iv in and bc-l 2 t ranscript ion level.
Key words: asiat ic acid; multiple myeloma; RPM I 8226 cell line; apopto sis; surv iv in; bc-l 2


多发性骨髓瘤 ( mult iple myeloma) 是骨髓浆
细胞恶性增殖性疾病,由于发病机制的复杂, 多药耐
药的出现, 缓解率不高。因此, 研制低毒,新型药物
靶点的抗骨髓瘤药物, 具有重要的临床价值。研究
表明三萜类化合物被认为是一种极具前景的抗肿瘤
药物[ 1]。积雪草酸 ( asiat ic acid) 是积雪草中量较
高的五环三萜酸,具有广泛的生物学活性。长期以
来,积雪草酸主要用于治疗皮肤创伤和慢性溃疡,随
着对其药理活性的研究, 发现积雪草酸还具有抗阿
尔茨海默病、抗肝纤维化、抗肿瘤等作用[ 2-5]。目前

1484
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2009- 12-12





















基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30472267)作者简介:吕婷婷( 1983
) ,女,湖北人,华中科技大学协和医院血液科在读硕士研究生,研究方向为恶性血液病,现于湖北省襄樊市中心医院血液科工作。
Tel: 13886256502
E-mail: vict558@ sohu. com
* 通讯作者
刘
芳
E- mai l: l iufang1@ medmail. com. cn
国外学者陆续报道了积雪草酸对肝癌细胞、乳腺癌
细胞、黑色素瘤细胞、成胶质细胞瘤等具有显著的抑
制作用[ 6-9] ,但对血液病肿瘤的作用, 国内外文献均
未见报道。本实验以多发性骨髓瘤细胞株 RPMI
8226 为研究对象, 观察积雪草酸对细胞增殖、细胞
凋亡、细胞周期的影响,并探讨可能的作用机制。
1
材料与方法
1
1
药 品与试剂: 积 雪草酸 ( 购于 Sigma-
Aldrich) ,溶解于二甲基亚砜 ( DM SO) 中,配成 50
mmo l/ L ,等量分装, 置于 - 20
保存, 临用前解
冻。MT T、DMSO、核酸核糖酶 A ( RNase A)、碘化
丙啶 PI ( Sigma 公司) , RPMI 1640 培养液、T rizol
试剂 ( Invit rogen 公司) , 新生胎牛血清 (杭州四季
青公司) , Annex in/ PI 试剂盒 (南京凯基生物科技
发展有限公司) , Hoechest 33258 (武汉凌飞公司) ,
RNA 酶反转录试剂盒 ( Toyobo 公司) , masterm ix、
marker (天根公司) , PCR 引物由上海生工生物工
程公司合成。
1
2
仪器和设备: CO 2培养箱 (德国 Heraeus 公
司) , XDS
1 倒置相差显微镜 ( Olympus 公司) ,
BH
2型荧光显微镜 ( Olympus公司) ,酶标仪 (美
国 Biotech Instuments公司) , 流式细胞仪 (美国 BD
公司) , TC
3000 PCR仪 (英国 Techne ) , GDS
8000
型凝胶电泳分析系统 (英国 UVP 公司)。
1
3
细胞培养:多发性骨髓瘤细胞 RPM I 8226 (本
所常规保存 ) 置于含有 10% 新生胎牛血清的
RPM I 1640 培养液,在 37
、5% CO2饱和湿度条
件下培养。每 2~ 3 d 更换培养基,取对数生长期细
胞进行实验。
1
4
MT T 试验: 将处于对数生长期 RPM I 8226
细胞,以 3
105 / mL 密度接种于 96 孔板。分成对
照组 (不加药物处理) 和实验组共 8个组,实验组积
雪草酸浓度分别为 10、20、30、40、50、60、70
mol/ L。
每孔 200
L,每个浓度设 5 个复孔。置 CO2培养箱
处理 24~ 72 h 后,每孔加入 MTT 溶液 ( 5 mg/ mL)
20
L,孵育 4 h,终止培养,弃去孔内培养液, 每孔加
入 150
L DMSO, 振荡 10 m in, 使结晶充分溶解。
在 490 nm 波长下用酶标仪测定各孔吸光度 ( A )
值。计算抑制率。


抑制率= ( 1- 实验组 A 值/对照组 A 值)
100%
1
5
流式细胞术检测: 取对数生长期细胞, 分为对
照组 (积雪草酸浓度为 0
mol/ L ) 和实验组, 实验
组积雪草酸浓度分别为 35、40、45
mol/ L , 每组细
胞浓度为 1
106 / mL,处理 24 h后,用 Annexin/ PI
双标法检测细胞凋亡。
取对数生长期细胞, 分为对照组 (积雪草酸浓
度为 0
mol/ L ) 和实验组(积雪草酸为 25、35、40

mo l/ L ) 共 4 个组, 各组细胞用 70% 冷乙醇固定
24 h 后, 磷酸缓冲液 ( PBS) 洗涤, 加入 PBS 440

L, RN ase A 10
L 孵育 30 min, 加入 PI 染色液
50
L, 4
避光 30 min后进行流式细胞术检测,用
cel l modifit 软件分析细胞周期。
1
6
Hoechesst 33258 染色法检测:将细胞分为对
照组 (积雪草酸浓度为 0
mol/ L ) 和处理组 (积雪
草酸浓度为 35、40
mol/ L) ,积雪草酸干预培养 24
h。收集细胞离心, PBS 洗涤一次, 用 - 20
预冷
乙醇固定 4
过夜。离心后 PBS 洗涤一次, 200

L PBS 重悬, 将细胞滴片于经 10% 多聚赖氨酸预
处理的玻片上。待细胞干燥后加 10
g/ mL Hoe-
chesst 33258 40
L,室温避光孵育 30 m in 后, 在显
微镜下观察细胞的形态变化。
1
7
RT-PCR 检测:取对数生长期细胞, 分为对照
组 (积雪草酸浓度为 0
mo l/ L) 和实验组 (积雪草
酸浓度分别为 35、40、45
mol/ L) 共 4 个组。各组
处理 24 h 后, 离心收集细胞。按 Invit rog en 公司的
试剂盒说明书规定的操作步骤提取总 RNA。用紫
外分光光度计测定 RNA 纯度, 并进行 RNA 的定
量。逆转录反应, 按照逆转录试剂盒说明书的步骤。
PCR 引物通过 Olig o6 软件设计, 由上海生工生物
工程公司合成。sur vivin 上游序列: 5
- TCCCT G-
GCT CCTCTA CT GTT-3
, 下游序列 5
-GGCAG-
GCT AGGGACGAC-3
,扩增产物 645 bp;
1-actin
上游序列: 5
- CT GTCCCT GTAT GCCT CTG-3
, 下
游序列 5
-AT GTCACGCACGATT T CC-3
, 扩增产
物 218 bp。 bc-l 2 上 游 序 列: 5
-GCCGGCGA-
CGACTT CT-3
, 下 游序 列 5
-A GGTGCCGGT-
TCAGGTACT C-3
,扩增产物 257 bp;
2-actin 上游
序列: 5
-GAGCTACGAGCT GCCT GA CG-3
, 下游
序列 5
-CCT AGAAGCAT TT GCGGTGG-3
, 扩增
产物 426 bp。25
L 反应体系 ( survivin, bc-l 2,
-
act in) : mastermix 12. 5
L, 上下游引物各 1
L,
cDNA 2
L, ddH 208. 5
L。sur vivin 反应条件为
94
预变性 5 min, 94
变性 30 s, 57
退火 30
s, 72
延伸 30 s, 扩增 35个循环。72
总延伸 7
m in。bc-l 2 反应条件为 94
预变性 5 m in, 94

变性 30 s, 59
退火 30 s, 72
延伸 30 s,扩增 30
个循环。72
总延伸 7 min。以
-actin 为内参。

1-act in 反应条件为 94
预变性 5 min, 94
变

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中草药
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第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
性 30 s, 53
退火 30 s, 72
延伸 30 s,扩增 35
个循环。
2-act in 反应条件为 94
预变性 5 m in,
94
变性 30 s, 60
退火 30 s, 72
延伸 30 s,
扩增 30 个循环。取 PCR 产物 5
L 在 2% 琼脂糖
凝胶上电泳, 紫外线凝胶成像系统上观察摄影, 用
Band Scan 4. 0 软件进行灰度扫描。用总灰度表示
各条带的 RNA 表达量, 比较各泳道的目的条带和
内参
-actin 的灰度比, 作为目的条带的 mRNA 的
相对水平。
1
8
统计学方法: 每个实验均重复 3 次, 应用
SPSS 11
0软件进行统计学分析, 数据以 x
s 表
示,组间比较采用 t 检验。
2
结果
2
1
积雪草酸对 RPM I 8226 细胞增殖的影响:
MT T 结果显示积雪草酸对 RPM I 8226 细胞增殖
有明显的抑制作用, 呈浓度及时间依赖性 (图 1)。
积雪草酸实验组的细胞活力均低于对照组, 具有统
计学意义 ( P < 0
05)。且随着积雪草酸的浓度增
大,细胞活力降低,说明积雪草酸抑制 RPMI 8226
的增殖作用呈浓度依赖性;在同一药物浓度下,处理
24、48、72 h 后细胞活力不同, 差别显著 ( P <
0
05) ,说明具有时间依赖性。积雪草酸作用 24、
48、72 h 的 IC50值分别为 ( 42
25
4
57)、( 24
88

图 1
积雪草酸对 RPMI 8226 细胞增殖的抑制作用
(x
s, n= 3)
Fig. 1
Inhibition of asiatic acid on proliferation
of RPMI 8226 cells ( x
s, n= 3)
3
51)、( 19
83
2
88)
mol/ L。
2
2
积雪草酸对 RPM I 8226 细胞凋亡的影响:
Annex in/ PI 双标检测法显示, 随着积雪草酸浓度的
增大, RPM I 8226 细胞发生凋亡, 主要表现为早期
凋亡率的增加。35、40、45 mol/ L 积雪草酸作用
RPM I 8226 细胞 24 h 后, 其早期凋亡率分别上升
为 ( 7
22
2
77) %、( 20
37
3
46) %、( 66
68

5
21) % , 与对照组细胞的早期凋亡率 [ ( 1
58

0
38) % ]比较,差异显著 ( P< 0
05)。从 35 mo l/ L
开始积雪草酸对 RPM I 8226 细胞的促凋亡作用明
显增强。结果见图 2。
A~ D- 0、35、40、45
m ol
L- 1积雪草酸
A
D- 0, 35, 40, an d 45
m ol
L - 1 asiat ic acid
图 2
积雪草酸对 RPMI 8226 细胞凋亡的影响
Fig. 2
Effect of asiatic acid on apoptosis of RPMI 8226 cells
2
3
Hoechest 33258染色结果:积雪草酸对 RPMI
8226 细胞有促凋亡作用。35、40
mo l/ L 积雪草酸
处理细胞 24 h 后, 经 Hoechest 33258 染色后,在荧
光显微镜下观察,细胞核呈现明显的晚期凋亡特征,
染色质浓缩,核碎裂成大小不等的圆形小体, 并被细
胞核膜所包裹, 即凋亡小体。随着药物浓度的增加,
凋亡特征越显著,细胞核裂解为碎块,具有正常细胞
形态的细胞越少。见图 3。
2
4
积雪草酸对 RPM I 8226 细胞周期的影响: 不

凋亡小体

apoptot ic body
图 3
积雪草酸作用 RPMI 8226 24 h的细胞形态学变化
Fig. 3
Morphological changes of RPMI 8226 cells
treated by asiatic acid for 24 h

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第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
同浓度的积雪草酸作用于 RPM I 8226 细胞 24 h
后,细胞周期发生改变, 主要阻滞在 G2期。35、40

mol/ L 的积雪草酸作用显著 ( P< 0
05) , G 2期细
胞比例在 25
mo l/ L 浓度下变化不明显,见表 1。
表 1
积雪草酸对 RPMI 8226 细胞周期的影响 ( x
s, n= 3)
Table 1
Effect of asiatic acid on cell cycles
of RPMI 8226 cells ( x
s, n= 3)
组
别 C/
(
mol
L- 1)
细胞周期/ %
G1 G2 S
对照 0 46
01
1
89 5
21
2
37 48
78
2
08
积雪草酸 25 49
64
2
88 7
31
3
78* 43
05
3
67
35 29
09
2
45 26
55
3
89* 44
35
3
03
40 44
63
4
32 54
05
5
66* 1
32
0
34


与对照组比较: * P< 0
05


* P< 0
05 v s con tr ol group
2
5
积雪草酸对 RPMI 8226细胞 survivin 和 bc-l
2 mRNA 表达的影响:积雪草酸作用于 RPM I 8226
细胞 24 h后,可使 surv iv in和 bc-l 2 mRNA 表达下
降。随着药物浓度的增加, sur vivin 和 bc-l 2 mRNA
表达也下降, 呈剂量依赖性。35、40、45
mo l/ L 积
雪草酸组 survivin 与
-act in 的比 值分别 为
0
756
0
044、0
592
0
034、0
125
0
018, 显著
低于对照组的比值 1
121
0
049 ( P< 0
05)。bc-l
2 与
-act in 的比值为 0
369
0
051、0
121

0
037、0
053
0
011, 与对照组的比值 0
736

0
057比较显著降低,见图 4。说明积雪草酸能下调
survivin 和 bc-l 2的基因表达。
图 4
积雪草酸对 RPMI 8226 细胞 survivin和
bc-l 2 mRNA 表达的影响 ( x
s, n= 3)
Fig. 4
Effect of asiatic acid on expression of survivin and
bc-l 2 mRNA of RPMI 8226 cells ( x
s, n= 3)
3
讨论


积雪草酸是从药用植物积雪草中提取的三萜
酸,属于五环三萜酸类化合物中的乌苏烷型。有报
道证实积雪草酸对实体瘤具有显著的增殖抑制作
用,如肝癌细胞、乳腺癌细胞、黑色素瘤细胞、结肠癌
细胞等[ 10] 。本实验结果表明积雪草酸对骨髓瘤细
胞也具有明显的增殖抑制作用,有效浓度在
mo l/
L 级,这与积雪草酸对实体瘤的有效作用浓度级别
相同。而且积雪草酸对骨髓瘤细胞增殖抑制作用呈
剂量及时间依赖性,作用 24、48、72 的 IC50值分别
为 ( 42
25
4
57)、( 24
88
3
51)、( 19
83
2
88)

mo l/ L。本实验研究发现积雪草酸能够诱导骨髓
瘤细胞凋亡, 主要表现为早期凋亡率的增加。当积
雪草酸达 45
mo l/ L, 总凋亡率为 ( 89
27

5
18) % ,说明其是一种强效的抗肿瘤药物。
肿瘤细胞的周期与细胞增殖密切相关, 主要表
现在 G1 / S、G2 / M 两个检测点的调控。本实验结果
显示,积雪草酸在 25~ 40
mo l/ L ,随着药物浓度的
增加, G 2期的细胞比例由 ( 5
21
2
37) % 上升为
( 54
05
5
66) % ,可将 RPM I 8226细胞阻滞在 G2
期。积雪草酸对肿瘤细胞周期的 G2 / M 期检测点
的调控在其他肿瘤细胞系中也有报道。Hsu 等[ 7]
研究表明积雪草酸可以将乳腺癌细胞阻滞在 S-G2 /
M 期, 其具体的机制与增强 P21/ Cdc2的相互作用,
降低 Cdc2、Cdc25c、cyclinB1、cyclinA 的表达有关。
细胞凋亡是细胞自身调节的主动性死亡过程,
细胞凋亡过程受到抑制是肿瘤发生、发展机制之一。
因此细胞凋亡成为肿瘤治疗研究的一个重要领域,
凋亡相关基因也成为抗肿瘤药物机制研究的重点。
surv ivin 基因是近年发现的人类凋亡抑制蛋白家族
( inhibitor of apoptosis family, IA Ps) 的新成员,具
有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂增殖的功能。sur-
vivin 基因的组织分布具有明显的细胞选择性: 胚胎
组织和绝大多数肿瘤细胞都表达, 而在分化正常成
熟组织细胞中几乎不表达。临床研究发现,骨髓瘤
细胞高表达 survivin, 骨髓瘤患者表达率和表达水
平显著高于正常人[ 11]。由于 survivin 基因的肿瘤
细胞选择性和骨髓瘤细胞中的高表达性, 因此 sur-
vivin 有可能成为多发性骨髓瘤治疗研究中的一个
新的分子靶点。surv iv in 的调控机制复杂, 能在多
个水平进行调控, 野生型 p53 在转录水平进行负调
控,能抑制 surv iv in 表达 [ 12]。在积雪草酸的抗肿瘤
文献中, p53 表达是否增强存在争议。Yong 等 [ 6]研
究发现积雪草酸能通过升高细胞内 Ca2+ 的水平,从
而增强 p53 的表达诱导肝癌细胞发生凋亡。而积
雪草酸诱导乳腺癌细胞凋亡中, p53 水平没有明显
变化[ 7]。原癌基因 bc-l 2 是 bc-l 2 家族中一种常见
的凋亡抑制基因。bc-l 2 不仅能通过调节线粒体通
路抑制凋亡,而且过度表达可抑制放射线、化疗药等

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诱导的细胞凋亡, 也是肿瘤细胞耐药的主要机
制[ 13]。总之, IAP 家族 surv iv in 和抗凋亡蛋白家族
bc-l 2 是细胞凋亡的重要调控基因,分别作用于凋亡
调节的不同层次。survivin 作用于 bc-l 2 的下游, 直
接抑制蛋白酶 caspase-9、caspase-7、caspase-3 的活
性,抑制细胞凋亡。bc-l 2 通过调节引起线粒体破裂
的离子失衡干扰细胞色素从线粒体的释放从而阻断
蛋白酶连锁反应的激活。本实验结果显示, 积雪草
酸能下调 sur vivin 和 bc-l 2 mRNA 水平,从而发挥
促凋亡作用。但是否与增强 caspase-9、caspase-7、
caspase-3 的活性, 是否与调控 survivin、bc-l 2 表达
的 p53、Ca2+ 的水平有关, 尚需进一步的证实与
研究。
综上所述, 积雪草酸能通过调控细胞周期的进
程和诱导细胞凋亡来抑制 RPM I 8226 细胞增殖。
表明积雪草酸作为一种新型的抗肿瘤药物, 在多发
性骨髓瘤治疗中具有潜在的应用前景。
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黄芪提取物对糖尿病大鼠冠状小动脉平滑肌张力的影响
李湘晖1, 2 ,航鹏洲1 ,郭
薇1 , 杜智敏1, 2*
( 1
哈尔滨医科大学附属第二医院 临床药学药物研究所, 黑龙江 哈尔滨
150086;
2
黑龙江省普通高校药物研究重点实验室,黑龙江 哈尔滨
150086)
摘
要:目的
研究黄芪醇提取物对糖尿病大鼠冠状小动脉平滑肌张力的影响。方法
通过 ip 小剂量链脲佐菌
素 ( STZ) 及高脂饮食的方法诱导 2 型糖尿病大鼠模型, 应用离体小动脉灌流技术研究去除血管内皮后, 累积浓度
黄芪醇提取液对正常大鼠和糖尿病大鼠冠状小动脉平滑肌基础张力的影响; 观察黄芪醇提取物对苯肾上腺素
( PE) 或 KCl预收缩的微血管环的作用。结果
ST Z 和高脂饮食可致Wistar 大鼠形成 2 型糖尿病, 模型大鼠体质
量与对照组比较明显减少,模型组大鼠与对照组大鼠相比血清胆固醇 ( TC)、甘油三酯 ( TG) 和游离脂肪酸 ( FFA)
差异具有统计学意义 (P< 0
05) ,糖化血红蛋白 ( H bA lc) 和空腹血糖值明显增高, 并出现高脂血症 ( P< 0
05)。
黄芪醇提取物对糖尿病大鼠冠状小动脉环有舒张作用; 对 PE 和 KCl 预收缩的去内皮冠状小动脉产生浓度依赖性
舒张作用。结论
黄芪醇提取物对糖尿病大鼠冠状小动脉有舒张作用。
关键词:黄芪; 糖尿病; 冠状小动脉; 血管舒张
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1488-05

1488
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2010- 01-15





















基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30371647)作者简介:李湘晖( 1975
) ,女,黑龙江人,主管药师,硕士,研究方向为临床药学。
T el : ( 0451) 86605835
E-mail: xianghuili@ sina. com
* 通讯作者
杜智敏
T el: ( 0451) 86605353
Fax: ( 0451) 86665559
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