全 文 ：2.6　线性关系考察:精密吸取上对照品储备液
0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、3.0 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,加过
膜甲醇稀释至刻度 ,分别精密吸取 10 μL ,注入液相
色谱仪 ,每种浓度连续进样 2针 ,按上述色谱条件进
行分析 ,测定峰面积。以质量浓度为纵坐标 ,峰面积
值为横坐标 , 进行回归。大黄素回归方程为 Y =
5.22×10-5 X +0.14 , r=0.999 7;大黄酚回归方程
为Y =4.27×10-5 X -0.181 , r=0.999 7。大黄素
在 0.076 ～ 0.380 mg ,大黄酚在 0.194 ～ 0.970 mg
与峰面积呈现良好的线性关系。
2.7　精密度试验:精密吸取供试品溶液 ,按照上述
色谱条件连续重复进样 5 次 ,每次 10 μL 测定峰面
积积 分值 , 结果大 黄素质量分 数的 RSD 为
0.981%,大黄酚质量分数的 RSD为 1.236%。
2.8　稳定性试验:取供试品溶液分别于 1 、3 、6 、8 、
12 、18 、24 h ,按上述色谱条件测定峰面积。结果表
明 ,样品溶液于 24 h 内 , 色谱峰面积无明显变化。
大黄素质量分数的 RSD为 0.594%,大黄酚质量分
数的 RSD为 0.714%,因此供试品溶液在 24h内基
本稳定 。
2.9　重现性试验:取供试品约 1g ,精密称定 , 共 6
份 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,大黄素质量分数的
RSD为 1.59%,大黄酚质量分数的 RSD为 1.41%。
2.10　加样回收试验:取化坚止痛膜约 1g ,精密称
定 ,共 6份 ,每份中加入对照品储备液 10mL ,制备供
试品溶液 ,测定 ,计算大黄素及大黄酚的加样回收率 ,
结果大黄素平均回收率为 95.87%,大黄酚平均回收
率为 100.17%, RSD分别为0.816%、0.605%。
2.11　样品测定:取不同批号的样品 ,制备供试品溶
液 ,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 ,按上述色
谱条件测定峰面积积分值 ,计算质量分数 ,结果见表1。
表 1　化坚止痛膜中大黄素和大黄酚的测定结果
Table 1　Determination of emodin and chrysophanol
in Huajian Zhitong Pellicle
批号 大黄素 、大黄酚总量/(mg· g -1)
090421 288.68
090422 299.84
090423 275.78
3　讨论
本涂膜剂中含有 PV A ,若去除不干净 ,则极易
产生乳化现象 ,因此其去除干净与否直接影响定量
实验 。查阅文献报道[ 3] 采用 95%乙醇超声提取处
理样品 ,结果表明本方法可去除 PVA 的干扰 ,能将
有效成分提取完全 ,对测定无影响 。
经实验验证表明样品加热时间过长 、水浴温度
过高易使残留物焦化 ,故三氯甲烷萃取液须减压回
收即可避免焦化现象产生 。
参考文献:
[ 1] 　王本祥.现代中药药理学[ M].天津:天津科学技术出版社 ,
1997.
[ 2] 　王云娇 ,李武毅 ,张永云.清火片中大黄素和大黄酚的 HPLC
法测定[ J] .中草药 , 2006 , 37(7):1034-1035.
[ 3] 　佟　杰 ,李　进 , 陈　涛,等.HPLC法测定银屑灵涂膜剂中 5
种蒽醌类成分的含量[ J].天津中医药 2007 , 24(5):419-421.
HPLC法测定抗骨增生片中柚皮苷
朱　克 ,吴立成 ,周玲娜①
(浙江省金华市食品药品检验所 , 浙江 金华 321000)
摘　要:目的　建立抗骨增生片中柚皮苷的测定方法。方法　采用高效液相色谱法 , Eclipse XDB-C18(150 mm×
4.6 mm , 5μm)色谱柱 ,乙腈-水(17∶83)为流动相 , 体积流量 1.0 mL/ min ,检测波长 283 nm ,柱温 35 ℃, 进样量 5
μL 。结果　柚皮苷在 0.0376 ～ 2.408 μg 线性关系良好 , r=0.999 9 ,平均加样回收率为 97.68%, RSD为 0.92%。
结论　该方法简便 、快速 、准确 , 为测定抗骨增生片中柚皮苷的测定提供了可靠的方法。
关键词:抗骨增生片;柚皮苷;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:B　　　文章编号:0253-2670(2010)06-0914-03
　　抗骨增生片由熟地黄 、鹿衔草 、骨碎补(烫)、鸡
血藤等 7味中药制成 ,补肾 ,活血 ,止痛 ,用于肥大性
脊椎炎 ,颈椎病 ,跟骨刺 ,增生性关节炎等 。柚皮苷
为骨碎补的主要有效成分。本实验采用 HPLC 对
抗骨增生片的柚皮苷进行了测定 ,方法操作简便 ,结
果准确 ,可用于抗骨增生片的质量控制 。
·914· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 6 期 2010年 6月
①收稿日期:2009-09-03　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作者简介:朱　克 ,(1974—),男 ,浙江金华人 ,主管中药师 , 1996年毕业于浙江中医学院中药专业 ,从事中药检验工作。
Tel:(0579)82301314　E-mail:zkis sjmn@163.com
1　仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪(带自动进样), UV
检测器;梅特勒-托利多 XS —105Du型电子天平。
柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号
110722-200107);抗骨增生片(吉林巨仁堂药业股份
有限公司 ,批号 071109 、080401 、080711)。乙腈 、甲
醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其余试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验:Eclipse XDB-
C18(150 mm ×4.6 mm , 5 μm)色谱柱 , 乙腈-水
(17∶83)为流动相 ,体积流量 1.0 mL/min ,检测波
长 283 nm ,柱温 35 ℃,进样量5 μL。理论板数按柚
皮苷峰计不低于 4 000 。
2.2　对照品溶液的制备:精密称取柚皮苷对照品
11.59 mg ,置 50 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,精密量取 5 mL 置 20 mL 量瓶中 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得 57.95 μg/mL 柚皮苷对
照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备:取本品 10片 ,去糖衣 ,精
密称定 ,研细 ,取约 1g ,精密加入甲醇 10 mL ,称定
质量 ,超声处理 30 min ,放冷 ,再称定质量 ,用甲醇
补足减失的质量 ,滤过 ,取续滤液 ,即得 。
2.4　阴性干扰试验:处方中去骨碎补 ,同法制备缺
少骨碎补的阴性样品 ,按供试品溶液的制备方法制
得相应的阴性溶液 ,依法进行测定 ,见图 1结果阴性
不干扰。
1-柚皮苷
1-narrigin
图 1　柚皮苷对照品(A)、抗骨增生片(B)和阴性对照(C)的 HPLC图谱
Fig.1　HPLC Chromatograms of narrigin reference substance(A), Kanggu Zengsheng Tablets(B), and negative sample(C)
2.5　线性关系的考察:精密称取柚皮苷对照品适量 ,
分别制成 7.525 、15.05 、60.2 、240.8、481.6μg/mL溶
液 ,各进样 5 μL ,依上述色谱条件测定峰面积。以
柚皮苷峰面积积分值为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,计
算得回归方程 Y =8.821 X +0.032 , r=0.999 9 ,表
明柚皮苷在 0.037 6 ～ 2.408 μg 时与峰面积具有良
好的线性关系 。
2.6　精密度试验:精密吸取供试品溶液(批号
071109)5μL ,重复进样 6次 ,结果柚皮苷峰面积值
的 RSD为 0.21%。
2.7　稳定性试验:取供试品溶液(批号 071109),分
别在 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、4.0 、6.0…24 h , 各进样 5
μL ,记录柚皮苷峰面积积分值 , 计算其 RSD 为
1.07%。结果表明 ,供试品溶液中的柚皮苷色谱峰
在 24h内稳定性良好 。
2.8　重现性试验:取批号 071109样品 6份 ,各 1g ,
精密称定 ,制备供试品溶液 ,分别进行测定 ,记录柚
皮苷峰面积并计算 。结果显示柚皮苷平均质量分数
为 511.5 μg/g , RSD为 1.27%。
2.9　回收率试验:取批号 071109 样品 6份 ,各约
1.0 g ,精密称定 ,分别精密加入 231.8 μg/mL 柚皮
苷对照品溶液 2 、2.5 、3 mL ,制备供试品溶液 ,分别
进样 , 记录峰面积并计算 , 结果平均回收率为
97.68%, RSD为 0.92%。
2.10　样品测定:取 3 批样品 ,依法制成供试品溶
液 ,分别精密吸取柚皮苷对照品溶液和供试品溶液
各 5 μL ,按上述色谱条件测定 ,以外标法计算样品
中柚皮苷的质量分数 ,结果见表 1。
表 1　抗骨增生片中柚皮苷的测定结果(n=3)
Table 1　Determination of narrigin in Kanggu
Zengsheng Tablets(n=3)
批号 柚皮苷/(μg·g -1) RSD/ %
071109 512.73 1.02
080401 522.47 0.96
080711 517.87 1.16
3　讨论
3.1　流动相的优选:采用《中国药典》2005年版一部
骨碎补项下柚皮苷的测定方法中的流动相甲醇-醋
酸-水(35∶4∶65)[ 1] ,结果本品中柚皮苷与相邻色谱
峰基线分离度差 ,经过调整流动相为乙腈-水(20∶
80)、乙腈-水(17∶83),结果用乙腈-水(17∶83)流动
·915·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 6 期 2010年 6月
相测定 ,本品中柚皮苷与相邻色谱峰基线分离效果
好 ,阴性不干扰 ,故确定流动相为乙腈-水(17∶83)。
3.2　供试品的制备方法的优选[ 1 , 2] :曾考察了加甲
醇回流提取 3 h和加甲醇超声提取 30 min ,其结果
基本一致 ,而超声提取操作简便 ,故采用超声处理。
又对不同超声时间(10 、15 、20 、30 min)进行了比较
研究 ,结果确定提取时间以超声处理(功率 250 W ,
频率 35 kHz)30 m in最佳 。
参考文献:
[ 1] 　中国药典[ S].一部.2005.
[ 2] 　李玉仿 ,林月英.高效液相色谱法测定骨仙片中柚皮苷[ J].
中草药 , 2007 , 38(7):1019-1020.
高效液相色谱法测定愈风宁心分散片的溶出度
何三民1 ,石森林2① ,陈方伟2
(1.金华市中心医院 ,浙江 金华 321000;2.浙江中医药大学 , 浙江 杭州 310053)
摘　要:目的　考察愈风宁心分散片中葛根素的体外溶出度。方法　参照《中国药典》 2005 年版第二部附录 XC 溶
出度测定法第二法(桨法), 以脱气蒸馏水 500m L为溶出介质 , 温度控制在 37 ℃±0.5 ℃,转速 100 r/ min , 采用高
效液相色谱法进行检测。 结果　葛根素在 0.123 2 ～ 1.108 8 μg 呈良好线性关系 , 平均回收率 98.8%, RSD 为
2.14%, 50 min 时葛根素的溶出接近 90%。结论　愈风宁心分散片的溶出度符合规定。
关键词:愈风宁心分散片;葛根素;溶出度;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:B　　　文章编号:0253-2670(2010)06-0916-02
　　愈风宁心片是葛根经加工制成 ,具有解痉止痛 ,
增强脑及冠脉血流量的作用 ,临床上用于高血压 、头
晕 、头痛冠心病等症 。愈风宁心片主要有效成分是
以葛根素为代表的葛根异黄酮 ,且葛根素亦是多个
经典解表葛根复方中解表药效组分之一[ 1] 。然而葛
根异黄酮类水溶性差 ,脂溶性也不理想 ,因而口服吸
收较差 ,口服途径在动物体内的生物利用度很低[ 2] 。
分散片为在水中能迅速崩解并均匀分散的片剂(要
求在(21±1)℃下水中 3 min即可崩解分散 ,并通过
180μm 孔径的筛网),加水中分散后饮用 ,也可咀嚼
或含服[ 3] 。分散片具有比普通片稳定性好 ,生物利
用度较高等优点[ 4] 。为了提高愈风宁心片中葛根素
的生物利用度 ,笔者研制了愈风宁心分散片 ,由于口
服固体制剂的生物利用度与药物的溶出度密切相
关 ,本实验对愈风宁心分散片的溶出度进行考察 。
1　仪器与试药
美国 Agi lent1100 液相色谱仪 , 浙江大学
N2000色谱工作站 。葛根素(批号 110752-200209 ,
中国药品生物制品检定所),愈风宁心分散片(批号
20090201 ,自制)。甲醇为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其
余试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　葛根素的 HPLC 测定法的建立
2.1.1　对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品约
6 mg ,于100 mL量瓶中加甲醇定容至刻度 ,即得。
2.1.2　供试品溶液的制备:取本品 6片 ,照溶出度测
定法(《中国药典》2005年版二部附录 XC 第二法)以
脱气蒸馏水 500 mL为溶剂 ,转速为 100 r/min ,依法
操作 ,经 45 min时 ,取样 2 mL ,立即滤过 ,续滤液经
高速离心后 ,取上清液 ,即得。
2.1.3　测定波长的选择:取葛根素对照品液适量 ,
进行紫外扫描 ,结果葛根素其在 249 nm 波长处有
最大吸收 ,综合有关文献资料选择 250 nm 作为测
定波长。
2.1.4　色谱条件:Aichrom Reliasil C18色谱柱(250
mm ×4.6 mm , 5 μm)色谱柱 , 流动相为甲醇-水
(25∶75);体积流量 1.0 mL/min;柱温 40 ℃,检测
波长 250 nm 。
2.1.5　线性范围的考察:精密吸取葛根素对照品溶
液2 、4 、6 、8 、10 、14 、18μL 进样 ,测定峰面积 ,以进样
量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准线 ,结果葛
根素进样量在 0.123 2 ～ 1.108 8 μg 与峰面积呈很
好的线性关系 ,回归方程为Y =1.77×104 +3.0×
106 X , r=0.999 9。
·916· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 6 期 2010年 6月
①收稿日期:2009-11-23　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作者简介:何三民(1962—),男 ,浙江义乌人 ,副主任中药师 ,主要从事中药制剂新技术和新剂型的研究。
Tel:13506582061　E-mai l:hsn82552720@126.com＊通讯作者　石森林　Tel:13157106148　E-m ail:p jstone@163.com