全 文 ：诱导培养条件显著改变甘草愈伤组织
次生代谢产物的多样性
刘凤彩１，吕建明２，吴秀祯１，２，张卫１，２
（１天津大学 化工学院，天津 ３０００７２；２天津艾赛博生物技术有限公司，天津 ３００４５７）
［摘要］ 采用化学分析和高效液相色谱（ＨＰＬＣ）相结合的方法评价典型愈伤组织诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代
谢产物多样性的影响，这些诱导培养条件包括甘草种属（胀果甘草和光果甘草）、外植体（胚轴和子叶）、光照条件（２４ｈ光照
和２４ｈ黑暗）和２种激素组合。以化学成分总黄酮为指标，采用单因素方差分析法（ＯｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ）评价不同诱导培养条件
下获得的甘草愈伤组织的总黄酮含量，结果显示甘草种属、外植体和光照条件对甘草愈伤组织中总黄酮的含量影响显著（Ｐ＜
００５）。采用ＨＰＬＣ指纹图谱的差异度评价不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响发现：诱导培养条
件对愈伤组织的次生代谢产物的多样性有显著影响，激素组合（差异度＝０３７）和光照条件（差异度 ＝０４５）对甘草愈伤组织
次生代谢产物的多样性影响最大。上述结果对选择合适的愈伤组织和细胞系培养生产甘草药用次生代谢产物或活性组分具
有重要的指导意义。
［关键词］ 甘草；愈伤组织；药用次生代谢产物；ＨＰＬＣ；指纹图谱；差异度
［收稿日期］ ２０１３０５２１
［通信作者］ 张卫，教授，Ｔｅｌ：（０２２）６５３７８４０８，Ｆａｘ：（０２２）
６５３７８４０９，Ｅｍａｉｌ：ｗｚｈａｎｇ＠ａｃｅｌｂｉｏｃｏｍ
［作者简介］ 刘凤彩，硕士研究生，Ｔｅｌ：（０２２）６５３７８４０８，Ｅｍａｉｌ：ｆｅ
ｎｙｌｉｕ＠１２６ｃｏｍ
甘草是世界上最古老也是最常用草本药材之
一，大量使用和长期过度开发使得世界上的野生甘
草资源面临枯竭的危机。甘草植物细胞和组织培养
是生产药用材料尤其是其活性成分的一种有意义的
技术。但是到目前为止，所有有关甘草细胞诱导和
培养的研究报道只关注愈伤组织诱导条件对细胞中
某类特定的次生代谢产物合成的影响［１５］，未见关于
不同诱导条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性
影响的报道。尽管诱导培养获得的细胞与野生或人
工种植的甘草药材含有相似的活性次生代谢产物，
但是如果它们的次生代谢产物有显著差异，它们的
药用价值是不相同的。同时，作为一个培养生产中
药植物药用成分或组分的技术，合适的细胞株系建
立和选择与其次生代谢产物多样性密切相关。因
此，本实验旨在利用一种简单快速的方法来评价不
同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样
性的影响，具体来说是结合对愈伤组织的总黄酮化
学分析和ＨＰＬＣ指纹图谱分析来定性定量评估不同
诱导培养条件下甘草愈伤组织的次生代谢产物多样
性的差异以及甘草愈伤组织与道地种植的甘草药材
的差异，从而为高产药用次生代谢产物以及植物细
胞作为替代药材的甘草细胞株系的筛选提供实验
依据。
１ 材料与方法
１１ 样品 甘草种子和三年生甘草根均购自新疆
神农有限公司，经天津中医药大学李天祥教授鉴定
为胀果甘草（ＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａＢａｔ，ＧＩ）和光果甘草
（ＧｇｌａｂｒａＬ，ＧＧ）；乙腈（ＮＯ１００２６９，ＳＫＣｈｅｍｉ
ｃａｌｓ，Ｋｏｒｅａ）和冰乙酸（天津光复精细化工研究所）
均为色谱级；实验中所用到的其他的化学品除有特
别说明外，均为分析级药品。
１２ 种子萌发 挑选充实饱满的胀果甘草和光果
甘草种子，用玻璃砂研磨去除表面蜡质种皮，自来水
冲洗７～１０遍，用７５％的乙醇消毒２０ｓ后，用无菌
水冲洗５～７遍，接着用３６８ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＨｇＣｌ２溶液
消毒７～８ｍｉｎ，再用无菌水冲洗７～１０遍，用无菌滤
纸吸干种子表面水分后接种到 ＭＳ０（不添加激素）
琼脂培养基上［６］，置于黑暗条件下，２５℃培养。３ｄ
后，种子萌发出新鲜的嫩芽。
１３ 愈伤组织诱导和继代 胚轴和子叶是文献中
最常用的甘草愈伤组织诱导的２种外植体，成功率
较高［１２，７］。本研究选择这２种外植体进行研究，将
萌发１１ｄ后的无菌苗胚轴切成约０５ｃｍ的小段，
·６５０４·
第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３
子叶切成约 ０５ｃｍ２的小块接种到诱导培养基上
（ＭＳ基本培养基＋激素＋质量分数为３％的蔗糖＋
质量分数为０７％的琼脂），ｐＨ５８。根据文献选择
的其他典型的愈伤组织诱导的激素组成和光照条件
见表１［２，５，８］。２５℃培养，８ｄ后，进行第１次继代，
继代的愈伤组织的培养条件和培养基组成与愈伤组
织诱导相同，继代周期为２１ｄ［９］。
表１ 本研究选择的典型的甘草愈伤组织的诱导和培养条件
Ｔａｂｌｅ１ Ｓｅｌｅｃｔｅｄｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｓｐ
处理 激素／ｍｇ·Ｌ－１ 光照条件 甘草种属外植体
Ａ２，４Ｄ１＋６ＢＡ１＋ＫＴ０５ 黑暗，２４ｈ ＧＩ 胚轴
Ｂ２，４Ｄ１＋６ＢＡ１＋ＫＴ０５ 黑暗，２４ｈ ＧＧ 胚轴
Ｃ２，４Ｄ１＋６ＢＡ１＋ＫＴ０５ 黑暗，２４ｈ ＧＩ 子叶
Ｄ２，４Ｄ１＋６ＢＡ１＋ＫＴ０５ 光照／１０００ｌｘ，２４ｈ ＧＩ 子叶
Ｅ６ＢＡ１＋ＮＡＡ１ 光照／１０００ｌｘ，２４ｈ ＧＩ 子叶
１４ 愈伤组织分析样品的制备 不同诱导条件下
获得的甘草愈伤组织连续继代４次，生长稳定后，取
培养１个周期的愈伤组织，４５℃干燥至恒重，然后
将愈伤组织研磨成粉末，取０２ｇ甘草愈伤组织粉
末加入１０ｍＬ７０％乙醇，室温下放置２４ｈ，超声提取
３０ｍｉｎ，放冷至室温，补足溶液到刻度，取上清过
０４５μｍ滤膜备用。
１５ 总黄酮含量的测定 准确量取２ｍＬ样品溶
液，加入０５ｍＬ质量分数为１０％ＫＯＨ，涡旋混匀，
室温下放置５ｍｉｎ，加７０％乙醇到１０ｍＬ，涡旋混匀，
室温下放置９０ｍｉｎ，以７０％乙醇为空白对照，在４００
ｎｍ波长下测定样品吸光度，以甘草苷为对照品绘制
标准曲线。
１６ ＨＰＬＣ色谱分析条件 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相
色谱仪（配有Ｇ１３１４Ａ紫外检测器、Ｇ１３１１四元梯度
泵、Ｇ１３７９Ａ在线脱气装置、Ｇ１３２９Ｂ自动进样器），
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００化学工作站；色谱柱为 ＡｐｏｌｏＣ１８柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，粒径 ５μｍ）。检测波长 ２５４
ｎｍ；流速为１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测温度为２５℃；进样量
２０μＬ，流动相 Ａ乙腈，Ｂ１％醋酸溶液，流动相梯度
为０ｍｉｎ，９０％ Ｂ；１５ｍｉｎ，８０％ Ｂ；３５ｍｉｎ，７０％ Ｂ；
４５ｍｉｎ，５０％ Ｂ；５０ｍｉｎ，４０％ Ｂ；５５～６５ｍｉｎ，３０％ Ｂ；
７０ｍｉｎ，５０％ Ｂ；７５ｍｉｎ，７０％ Ｂ；８０ｍｉｎ，９０％ Ｂ。
１７ 数据分析 本实验中的所有数据都是采用至
少３个重复，以 珋ｘ±ｓ表示。采用单因素方差法
（ＯｎｅＷａｙＡＮＯＶＡ）分析不同诱导培养条件对甘草
愈伤组织总黄酮含量的影响。采用中药指纹图谱相
似度评价系统（２００４，Ａ版）分析愈伤组织次生代谢
产物的多样性的差异。
２ 结果与讨论
２１ 不同诱导培养条件对甘草愈伤组织总黄酮含
量的影响 为考察不同诱导培养条件对甘草愈伤组
织总黄酮含量的影响，分别选取了一些典型的诱导
条件包括甘草种属、外植体、光照条件和激素组合进
行了５组试验，见表１。其中，处理组 Ａ和 Ｂ，Ｃ和
Ｄ，Ａ和Ｃ，Ｄ和Ｅ分别考察２种甘草种属、光和暗条
件、２种外植体、２种激素组合对甘草愈伤组织总黄
酮含量的影响，结果见图１。
图１ ＧＧ和 ＧＩ道地药材甘草根和５种典型诱导条件获得
的甘草愈伤组织中总黄酮的含量的比较
Ｆｉｇ１ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｃａｌｕｓｉｎ
ｄｕｃｅｄｆｒｏｍｆｉｖｅｓｅｌｅｃｔｅｄｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｔｈａｔｏｆ
ｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎａｌｒｏｏｔｓｏｆＧＩａｎｄＧＧ
在本研究中，采用甘草苷为对照品，以甘草苷的
浓度Ｃ为横坐标，以吸光度 Ａ为纵坐标，测得甘草
苷对照品的回归曲线为 Ｙ＝ ００１５８Ｘ，Ｒ２ ＝
０９９９１，实验表明对照品质量浓度在２０～１００μｇ·
Ｌ－１与吸光度Ａ呈良好的线性关系。检测栽培甘草
根和甘草愈伤组织中总黄酮的含量，结果表明，５种
诱导培养条件下获得的愈伤组织中总黄酮的质量分
数为１５～６０ｍｇ·ｇ－１干重，比相同种属栽培甘草根
中总黄酮的含量（ＧＩ为１２０ｍｇ·ｇ－１干重，ＧＧ为５５
ｍｇ·ｇ－１干重）要低很多。相同培养条件下，不同种
属的甘草诱导的愈伤组织中总黄酮的含量不同，胀
果甘草诱导的愈伤组织（处理Ａ）中总黄酮为２５ｍｇ
·ｇ－１干重，高于光果甘草诱导的愈伤组织（处理Ｂ）
·７５０４·
第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３
中总黄酮的１５ｍｇ·ｇ－１干重；２４ｈ连续光照条件下
诱导培养的愈伤组织（处理 Ｄ）总黄酮的质量分数
（６０ｍｇ·ｇ－１干重）要远高于２４ｈ黑暗条件下（处理
Ｃ）培养的愈伤组织总黄酮（２０ｍｇ·ｇ－１干重），这与
杨世海等［９］利用乌拉尔甘草下胚轴为外植体在白
色光照（荧光灯连续照射）和黑暗（２４ｈ）培养愈伤
组织进行有效成分分析时，得出的愈伤组织在光照
条件下合成的黄酮类化合物的总量是黑暗条件下合
成的化合物总量的２倍的结论一致。处理 Ｄ，Ｅ的
甘草愈伤组织中总黄酮含量都很高，但相差不大，见
图１。在选取考察的５个诱导培养条件中，胀果甘
草的子叶为外植体在光照下诱导时选取的这２个激
素都比较适合进行甘草愈伤组织总黄酮的生产。实
验结果采用单因素方差分析法（ＯｎｅＷａｙＡＮＯＶＡ）
进行分析，甘草种属、外植体和光照条件对甘草愈伤
组织中总黄酮的含量具有极其显著的影响，然而，激
素组合对甘草愈伤组织中总黄酮的含量无显著影
响，见表２。植物细胞中黄酮类化合物的合成受诱
导培养条件的影响，这与杨世海等［１０］以乌拉尔甘草
胚轴为外植体，以不同类型的培养基、不同培养基
ｐＨ、培养基中添加不同激素等条件诱导并培养甘草
愈伤组织，得到的愈伤组织中黄酮类化合物的含量
不同的结论一致。
表２ 典型诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多
样性影响的显著性统计分析
Ｔａｂｌｅ２ Ｉｍｐａｃｔｏｆｓｅｌｅｃｔｅｄｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎ
ｄｉｔｉｏｎｓｏｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｓｐ．ｃａｌｕｓ
处理组 总黄酮含量Ｐ 次生代谢产物多样性的差异度
Ａ／Ｂ ３７×１０－５ ０２７
Ｃ／Ｄ １４×１０－６ ０４５
Ａ／Ｃ １０×１０－３ ０１６
Ｄ／Ｅ ６０×１０－２ ０３７
注：甘草次生代谢产物差异显著（０１５≤差异度 ＜０３）；甘草次
生代谢产物差异非常显著（差异度≥０３）。
２２ 甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性的差异
本文采用中药指纹图谱相似度评价系统（２００４，Ａ
版）通过比较愈伤组织样品ＨＰＬＣ图中的峰面积、峰
数量计算ＨＰＬＣ图的相似度，从而获得其差异度。５
种典型诱导培养条件下甘草愈伤组织的次生代谢产
物的多样性组成的ＨＰＬＣ图。用７种甘草黄酮及三
萜类化合物作为对照品检测诱导培养的甘草愈伤组
织的化合物组成，结果显示活性次生代谢产物甘草
苷［１１］、异甘草苷、甘草素［１２］、甘草查尔酮Ａ［１３］、甘草
酸以及异甘草素［１４］都存在于本实验中培养的甘草
愈伤组织中，见图２。
ａ６种对照品的色谱图；ｂ处理 Ａ中的愈伤组织指纹图谱；ｃ处理
Ｂ中的愈伤组织指纹图谱；ｄ处理 Ｃ中的愈伤组织指纹图谱；ｅ处
理Ｄ中的愈伤组织指纹图谱；ｆ处理 Ｅ中的愈伤组织指纹图谱；
１甘草苷；２异甘草苷；３甘草素；４甘草查尔酮 Ａ；５甘草酸；
６异甘草素。
图２ ５种典型诱导培养条件获得的甘草愈伤组织的指纹
图谱
Ｆｉｇ２ ＨＰＬＣＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｃａｌｉ
ｉｎｄｕｃｅｄｕｎｄｅｒｆｉｖｅｓｅｌｅｃｔｅｄｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
采用中药指纹图谱相似度评价系统计算不同诱
导培养条件下的愈伤组织指纹图谱间的相似度，差
异度为１减去相似度值。首先，分析对甘草愈伤组
织总黄酮含量具有极其显著影响的诱导培养条件
（甘草种属、光照条件和外植体），结果显示，甘草种
属（差异度＝０２７）、光照条件（差异度＝０４５）对甘
草愈伤组织次生代谢产物的多样性具有非常显著的
影响，诱导培养条件外植体（差异度 ＝０１６）对甘草
愈伤组织次生代谢产物的多样性具有显著的影响；
接着，分析对甘草愈伤组织总黄酮含量无显著影响
的诱导培养条件（激素组合），结果表明，激素组合
对甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性具有非常显
著影响（差异度＝０３７），见表２。
采用中药指纹图谱相似度评价系统还可以得出
甘草愈伤组织指纹图谱之间的共有峰和非共有峰。
·８５０４·
第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３
分析对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性具有显著
影响的诱导培养条件，结果显示不同的诱导培养条
件下的甘草愈伤组织指纹图谱间共有峰及非共有峰
的数量并没有显著的差别（Ａ和 Ｂ，Ａ和 Ｃ，Ｃ和 Ｄ，
Ｄ和Ｅ）。
进一步对甘草愈伤组织中的峰面积占总峰面积
百分比大于５％的色谱峰进行分析，可以看出相同
色谱峰在不同指纹图谱中的峰面积是不同的，即同
一化合物在不同的愈伤组织中含量是不同的，例如
化合物３和化合物６分别在诱导培养条件 Ｃ，Ｄ中
含量最高，每个指纹图谱中出现在３８１７ｍｉｎ的化
合物的峰面积都远远高于其他４种化合物的峰面
积。分别将每个指纹图谱中５个化合物的峰面积相
加在一起进行分析，结果显示对甘草愈伤组织中５
种主要化合物的总含量影响由大到小依次为光照条
件、激素组成、外植体和甘草种属。
综上所述，对甘草愈伤组织中总黄酮的含量具
有显著影响的诱导培养条件对次生代谢产物的多样
性也具有显著的影响［１５］，对甘草愈伤组织中总黄酮
含量影响小的诱导培养条件对次生代谢产物的多样
性也有可能会有显著影响（表２），这是因为甘草愈
伤组织中的次生代谢产物除黄酮外，还有许多其他
的化合物。在这４种诱导培养条件中，光照条件对愈
伤组织次生代谢产物的多样性的影响最显著（差异
度＝０４５），这可能是因为一些甘草次生代谢产物的基
因只有在光照条件下才能表达，黑暗条件下这些基因
不表达或黑暗条件抑制这些基因的表达［１６］。
２３ 甘草愈伤组织与人工栽培的甘草药材次生代
谢产物多样性的比较 三年生胀果甘草和光果甘草
中许多次生代谢产物的含量都高于甘草愈伤组织，
然而，甘草愈伤组织中也有部分次生代谢产物的含
量高于人工种植的甘草，如异甘草苷和甘草素见图
２，３。以人工种植的胀果甘草的指纹图谱为对照图
谱，计算典型诱导培养下的甘草愈伤组织指纹图谱
与同种属的人工种植的胀果甘草根指纹图谱的相似
度，进而计算差异度，结果处理 Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ中的甘草
愈伤组织与人工种植的胀果甘草的指纹图谱差异度
分别为０９０，０９５，０９４，０８６；以人工种植的光果
甘草的指纹图谱为对照图谱，处理 Ｂ与它的指纹图
谱差异度为０９２，可以看出甘草愈伤组织次生代谢
产物的多样性与人工种植的甘草药材之间差别极其
显著。
ａ光果甘草；ｂ胀果甘草。
图３ 人工种植甘草根指纹图谱
Ｆｉｇ３ ＨＰＬＣＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆｆｉｅｌｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ
Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａｒｏｏｔｓ
３ 结论
本实验采用总黄酮化学分析和ＨＰＬＣ指纹图谱
分析相结合的方法成功评价了典型诱导培养条件对
甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响，不同诱
导培养条件下的愈伤组织次生代谢产物的多样性也
明显不同，光照条件（差异度 ＝０４５）和激素组成
（差异度＝０３７）对愈伤组织次生代谢产物的多样
性影响最大。比较甘草愈伤组织的指纹图谱和人工
种植的甘草根的指纹图谱，可以发现一些新的色谱
峰，至于这些色谱峰所对应的化合物是不是新的化
合物，需要结合ＨＰＬＣＭＳＮＭＲ等方法进一步分析，
如果产生系列新的化合物可以进一步建立一个新的
化合物库，为药用植物资源的深度开发提供来新的
资源。
［参考文献］
［１］ 杨世海，陶静，刘晓峰，等培养基中碳源和氮源对甘草愈
伤组织生长和黄酮类化合物合成的影响［Ｊ］中国中药杂
志，２００６，３１（２２）：１８５７
［２］ 杨会琴，李敬，戴翠萍，等甘草愈伤组织及其代谢产物甘
草酸的研究［Ｊ］河北师范大学学报：自然科学版，２００６，３０
（３）：３４６
［３］ 杨世海，刘晓峰，马世华，等不同理化因子对甘草愈伤组
织生长和黄酮类化合物合成的影响［Ｊ］吉林农业大学学
报，２００６，２８（１）：４７
［４］ 杨世海，刘晓峰，果德安，等不同附加物对甘草愈伤组织
培养中黄酮类化合物形成的影响［Ｊ］中国中药杂志，２００６，
４１（２）：９６
［５］ 曹君迈，赵海燕，张嫱，等培养条件对甘草不同外植体愈
伤组织中黄酮形成的影响［Ｊ］安徽农业科学，２００９，３７
（３）：９８５
·９５０４·
第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３
［６］ ＭｕｒａｓｈｉｇｅＴ，ＳｋｏｏｇＦＡｒｅｖｉｓｅｄｍｅｄｉｕｍｆｏｒｒａｐｉｄｇｒｏｗｔｈａｎｄ
ｂｉｏａｓｓａｙｗｉｔｈｔｏｂａｃｃｏｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］ＰｈｙｓｉｏｌＰｌａｎｔ，１９６２，５：
４７３
［７］ 刘昕，王清，余斌不同外源激素对胀果甘草愈伤组织诱导
及褐化的影响［Ｊ］甘肃农业学报，２０１０，４５（６）：８８
［８］ 刘颖，魏景芳，李冬杰甘草愈伤组织培养中激素优化组合
的研究［Ｊ］中草药，２００６，３７（６）：９３１
［９］ 曹君迈，陈彦云，任贤，等乌拉尔甘草不同外植体来源愈
伤组织生长状况和含糖量的研究［Ｊ］作物杂志，２００７（５）：
１６
［１０］ 杨世海，刘晓峰，果德安培养基及培养条件对甘草愈伤组
织生长和黄酮类化合物合成的影响［Ｊ］吉林农业大学学
报，２００５，２７（３）：２８９
［１１］ ＳｅｏＣＳ，ＬｅｅＪＡ，ＪｕｎｇＤＹ，ｅｔａｌＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎ，ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，ａｎｄｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｎｂｙＨＰＬＣｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ
ａｒａｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆＰｙｕｎｇｗｉｓａｎ
［Ｊ］ＡｒｃｈＰｈａｒｍＲｅｓ，２０１１，３４：２０３
［１２］ ＷａｎｇＳＹ，ＧｕｏＭ，ＣｏｎｇＪＸ，ｅｔａｌＦａｃｉｌｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｆｏｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎａｎｄｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ［Ｊ］
ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２０１３，１２８２：１６７
［１３］ ＮａｇａｉＨ，ＨｅＪＸ，ＴａｎｉＴ，ｅｔａｌＡｎｔｉｓｐａｓｍｏｄｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｌｉｃｏ
ｃｈａｌｃｏｎｅＡ，ａｓｐｅｃｉｅｓｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａ
ｒｏｏｔｓ［Ｊ］ＪＰｈａｒｍＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００７，５９：１４２１
［１４］ ＫｉｍＪＹ，ＰａｒｋＳＪ，ＹｕｎＫＪ，ｅｔａｌＩｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｓＬＰＳｉｎｄｕｃｅｄｉＮＯＳ
ａｎｄＣＯＸ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｉａｔｈｅａｔｅｎｕａｔｉｏｎｏｆＮＦｋａｐｐａＢｉｎＲＡＷ
２６４７ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］ＥｕｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８４：１７５
［１５］ ＤｏｎｇＹＹ，ＧａｏＷＹ，ＺｈａｎｇＪＺ，ｅｔａｌＱｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒ
ａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｉｃｏｒｉｃｅ（Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａ
ｕｒａｌｅｎｓｉｓＦｉｓｃｈ）ａｆｔｅｒｓｐａｃｅｆｌｉｇｈｔｂｙＨＰＬＣＤＡＤ［Ｊ］Ｒｅｓ
ＣｈｅｍＩｎｔｅｒｍｅｄ，２０１２，３８：１７１９
［１６］ ＡｅｒｔｓＲＪ，ＤｅＬｕｃａＶＰｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｌｉｇｈｔｒｅｇｕ
ｌａｔｉｏｎｏｆｖｉｎｄｏｌｉｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ［Ｊ］Ｐｌａｎｔ
Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９２，１００：１０２９
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｍｐａｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｃａｌｕｓｃｅｌｌｉｎｅｓｏｆＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｓｐ
ＬＩＵＦｅｎｇｃａｉ１，ＬＶＪｉａｎｍｉｎｇ２，ＷＵＸｉｕｚｈｅｎ１，２，ＺＨＡＮＧＷｅｉ１，２
（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２，Ｃｈｉｎａ；
２ＴｉａｎｊｉｎＡｃｅｌｂｉｏＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ，Ｌｔｄ，ＴｉａｎｊｉｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｉｎｔＡｃａｄｅｍｙｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ，
Ｔｉａｎｊｉｎ３００４５７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｔｈｅｐｕｒｐｏｓｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａ
ｂｏｌｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｃａｌｕｓｃｅｌｌｉｎｅｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｓｐ．（Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａ）ｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙ
ｓｉｓａｎｄＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ．ＴｈｅｓｅｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｃｌｕｄｅｄｔｗｏＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｓｐｅｃｉｅｓ，ｔｗｏｔｙｐｅｓｏｆｅｘｐｌａｎｔｓ，ｌｉｇｈｔａｎｄｄａｒｋ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄｔｗｏｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆｈｏｒｍｏｎｅｓ．Ｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｗａｓｆｉｒｓｔｌｙｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｔｈｅｃａｌｕｓｂｙ
ｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｃａｌｕｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙＧｌｙｃｙｒｈｉｚａ
ｓｐｅｃｉｅｓ，ｌｉｇｈｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｏｒｍｏｎｅｓ．Ｔｈｅｃａｌｕｓｗａｓｆｕｒｔｈｅｒｅｖａｌｕａｔｅｄｕｓｉｎｇｄｉｖｅｒｓｉｔｙｆａｃｔｏｒｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｃｏｍｐａｒ
ｉｓｏｎｏｆＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆｔｈｅｓｅｃａｌｕｓｃｅｌｌｉｎｅｓ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｆａｃｔｏｒｖａｒｉｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｆｏｒｃａｌｉｉｎｄｕｃｅｄｕｎｄｅｒｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｉｔｈ
ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｂｅｉｎｇａｔ０．４５ｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｏｒｍｏｎｅｓ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｐｒｏｖｉｄｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｋｎｏｗｌｅｄｇｅｆｏｒｔｈｅｓｅｌｅｃ
ｔｉｏｎｏｆｓｕｉｔａｂｌｅｃａｌｕｓｃｅｌｌｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｒｂｉｏａｃｔｉｖｅｆｒａｃｔｉｏｎｓｂｙｉｎｖｉｔｒｏ
ｃｕｌｔｕｒｅｏｆＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｓｐ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａ；ｃａｌｕｓ；ｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；ＨＰＬＣ；ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｆａｃｔｏｒ
ｄｏｉ：１０．４２６８／ｃｊｃｍｍ２０１３２３１３
［责任编辑 吕冬梅］
·０６０４·
第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３