全 文 ：·资源与鉴定·
中药材锁阳的 ＩＴＳ２条形码分子鉴定研究
侯典云１，２，宋经元２，石林春２，杨培２，陈士林２，３，姚辉２
（１河南科技大学 农学院，河南 洛阳 ４７１００３；２中国医学科学院 北京协和医学院
药用植物研究所 濒危药材繁育国家工程实验室，北京１００１９３；
３中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：应用ＤＮＡ条形码技术准确、快速鉴定中药材锁阳及其混伪品。方法：采用试剂盒法提取药材的基因组
ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增其核糖体ＤＮＡ的内转录间隔区（ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ２，ＩＴＳ２）并进行双向测序，应用ＣｏｄｏｎＣｏｄｅＡｌｉｇｎｅｒＶ
３７１对测序峰图进行校对拼接，比较ＩＴＳ２序列的ＧＣ含量，采用ＭＥＧＡ５０计算种内、种间 Ｋｉｍｕｒａ２ｐａｒａｍｅｔｅｒ（Ｋ２Ｐ）遗传距
离，通过中药材ＤＮＡ条形码鉴定系统比对和构建ＮＪ系统聚类树进行鉴定分析。结果：锁阳药材的ＩＴＳ２序列长度为２２９ｂｐ，
种内变异较小，平均Ｋ２Ｐ遗传距离为０００３，锁阳药材及其混伪品的种间平均Ｋ２Ｐ遗传距离为０７６０，种间最小Ｋ２Ｐ遗传距离
明显大于锁阳种内的最大Ｋ２Ｐ遗传距离。中药材ＤＮＡ条形码鉴定系统比对和ＮＪ树鉴定结果均表明ＩＴＳ２序列可区分锁阳及
其混伪品。结论：ＩＴＳ２条形码可有效鉴定中药材锁阳及其混伪品，且具有较好的稳定性和准确性，为保障临床安全用药提供
了新的技术手段。
［关键词］ 锁阳；ＤＮＡ条形码；ＩＴＳ２；分子鉴定
［收稿日期］ ２０１３０５１３
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（８１１３００６９）；国家高技术研究
发展计划（８６３）项目（２０１２ＡＡ０２１６０２）；教育部长江学者和创新团队
发展计划项目（ＩＲＴ１１５０）
［通信作者］ 姚辉，Ｔｅｌ：（０１０）５７８３３１９４，Ｆａｘ：（０１０）５７８３３０３８，
Ｅｍａｉｌ：ｓｃａｕｙａｏｈ＠ｓｉｎａｃｏｍ
中药材锁阳ＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａ为锁阳科Ｃｙｎｏｍｏ
ｒｉａｃｅａｅ植物锁阳ＣｙｎｏｍｏｒｉｕｍｓｏｎｇａｒｉｃｕｍＲｕｐｒ的干
燥肉质茎。具有补肾阳，益精血，润肠通便之功效。
用于肾阳不足，精血亏虚，肠燥便秘等［１］，是藏族、
蒙古族和维吾尔族等民族的特有药材［２］。研究表
明，锁阳在防癌、抗肿瘤、提高机体免疫力、抑制人体
免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）等方面也有重要作用［３４］。在
我国，锁阳以野生为主，主要分布在宁夏、新疆、甘
肃、青海、内蒙古等西北地区［５］。近年来，由于锁阳
价格不断攀升，药材市场上出现地黄 Ｒｅｈｍａｎｎｉｎｅ
Ｒａｄｉｘ、湖北地黄 ＲｅｈｍａｎｎｉａｈｅｎｒｙｉＮＥＢｒｏｗｎ、裂
叶地黄 ＲｐｉａｓｅｚｋｉＭａｘｉｍ等混伪品［６］，另外，锁阳
又常被做为肉苁蓉ＣｉｓｔａｎｃｈｅｓＨｅｒｂａ的伪品使用［７］，
严重影响了用药安全。目前已采用性状鉴别、显微
鉴别、薄层色谱等技术对锁阳及其混伪品进行了鉴
别［８９］。然而，传统的鉴定方法需要较高的专业水平
和丰富的经验，为保障药材质量，确保临床用药安全
有效，亟待应用快速有效的方法对锁阳及其混伪品
进行鉴定。
ＤＮＡ条形码（ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇ）技术以稳定的基
因组信息为依据，有望实现对物种鉴定的标准
化［１０１１］。２０１０年，Ｃｈｅｎ等［１２］首次提出把 ＩＴＳ２作为
药用植物鉴定的标准 ＤＮＡ条形码。Ｙａｏ等［１３］提出
ＩＴＳ２序列可作为植物物种鉴定的通用条形码。Ｓｏｎｇ
等对ＩＴＳ２序列的鉴定机制进行了初步研究［１４］。目
前，ＩＴＳ２序列已在多种药用植物及药材的鉴定中得
到了应用［１５２０］。本研究应用 ＩＴＳ２序列对药材锁阳
及其混伪品进行鉴定研究，为锁阳药材的快速准确
鉴定提供保障，也为临床用药安全奠定基础。
１ 材料
本研究所用材料共７个物种３１个样品，包括试
验样品及ＧｅｎＢａｎｋ下载序列。其中，锁阳药材样品
１１个，地黄药材样品６个，湖北地黄样品２个，裂叶
地黄样品２个，肉苁蓉 ＣｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａＭａ样品３个，
管花肉苁蓉Ｃｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｃｈｅｎｋ）Ｗｉｇｈｔ样品４个，沙
苁蓉ＣｓｉｎｅｎｓｉｓＧＢｅｃｋ样品３个。所有材料经中
国医学科学院药用植物研究所林余霖研究员鉴定，
凭证样品保存于中国医学科学院药用植物研究所。
实验材料及序列的ＧｅｎＢａｎｋ登录号见表１。
２ 方法
２１ ＤＮＡ提取 锁阳药材用 ７５％乙醇擦拭表面
后，取约３０ｍｇ加入３％的 ＰＶＰ４０（聚乙烯吡咯烷
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表１ 研究材料及其ＩＴＳ２序列信息
Ｔａｂｌｅ１ ＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄｔｈｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＩＴＳ２ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
基原植物拉丁名 单倍型 序列长度／ｂｐ ＧＣ的量／％ ＧｅｎＢａｎｋ登录号 采集地
Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８１７ 安徽亳州药材市场
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８１８ 安徽亳州药材市场
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８１９ 北京某药店
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ２ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８２０ 北京某药店
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８２１ 新疆布尔津县
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ２ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８２２ 新疆高蕴县
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ３ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８２３ 宁夏中卫市
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＫＣ４６３８２４ 河北安国药材市场
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＨＱ２２２９８１ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＪＦ９１５３６８ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｃｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ Ａ１ ２２９ ４８０ ＪＦ９１５３６９ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｒｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８２５ 北京药用植物研究所
Ｒｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８２６ 北京药用植物研究所
Ｒｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８２７ 北京药用植物研究所
Ｒｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８２８ 河南温县
Ｒｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８２９ 河南温县
Ｒｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｂ１ ２３１ ６５８ ＫＣ４６３８３０ 河南温县
Ｒｈｅｎｒｙｉ Ｃ１ ２３０ ６４８ ＤＱ２７２４４７ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｒｈｅｎｒｙｉ Ｃ１ ２３０ ６４８ ＥＦ３６３６７１ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｒｐｉａｓｅｚｋｉ Ｄ１ ２３０ ６６１ ＥＦ３６３６７０ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｒｐｉａｓｅｚｋｉ Ｄ１ ２３０ ６６１ ＤＱ０６９３１６ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｅ１ ２２５ ６３１ ＪＦ９１５３８９ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｃｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｅ１ ２２５ ６３１ ＪＦ９１５３８８ 宁夏盐池县
Ｃｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｅ１ ２２５ ６３１ ＪＦ９１５３９０ ＧｅｎＢａｎｋ
Ｃｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ Ｆ１ ２２９ ５５０ ＧＱ４３４８５０ 宁夏永宁县
Ｃｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ Ｆ１ ２２９ ５５０ ＪＦ９１５３７８ 内蒙阿拉善左旗
Ｃｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ Ｆ１ ２２９ ５５０ ＪＦ９１５３７０ 内蒙阿拉善左旗
Ｃｔｕｂｕｌｏｓａ Ｇ１ ２３３ ５４９ ＪＦ９１５３８３ 内蒙呼和浩特
Ｃｔｕｂｕｌｏｓａ Ｇ１ ２３３ ５４９ ＪＦ９１５３７９ 内蒙磴口县
Ｃｔｕｂｕｌｏｓａ Ｇ１ ２３３ ５４９ ＧＱ４３４５６２ 安徽亳州药材市场
Ｃｔｕｂｕｌｏｓａ Ｇ１ ２３３ ５４９ ＧＱ４３４５６３ 内蒙磴口县
酮），用ＤＮＡ提取研磨仪（ＲｅｔｓｃｈＭＭ４００，Ｇｅｒｍａｎｙ）
研磨２ｍｉｎ（３０次／ｓ）后，用植物基因组 ＤＮＡ提取试
剂盒（ＴｉａｎｇｅｎＢｉｏｔｅｃｈＣｏ，Ｃｈｉｎａ）提取总 ＤＮＡ，５６
℃ 水浴过夜，其余步骤按照试剂盒说明进行。
２２ ＰＣＲ扩增及测序 ＩＴＳ２序列扩增用正向引物
为５′ＡＴＧＣＧＡＴＡＣＴＴＧＧＴＧＴＧＡＡＴ３′，反向引物为
５′ＧＡＣＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＴ３′［１２］。ＰＣＲ反应
体积为 ２５μＬ，包括 ２×ＥａｓｙＴａｑＰＣＲＳｕｐｅｒＭｉｘ
（ＴｒａｎｓＧｅｎＢｉｏｔｅｃｈＣｏ，Ｃｈｉｎａ）１２５μＬ，２５μｍｏｌ·
Ｌ－１引物各１μＬ、模板ＤＮＡ约５０ｎｇ，ｄｄＨ２Ｏ补足至
２５μＬ。ＰＣＲ扩增程序为：９４℃变性５ｍｉｎ；９４℃变
性３０ｓ，５６℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，４０个循环；
７２℃ 延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经纯化后，使用 ＡＢＩ
３７３０ＸＬ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＣｏ，ＵＳＡ）测序仪进行
双向测序。
２３ 数据处理 测序峰图利用 ＣｏｄｏｎＣｏｄｅＡｌｉｇｎｅｒ
Ｖ３７１（ＣｏｄｏｎＣｏｄｅＣｏ，ＵＳＡ）校对拼接，去除低质
量序列及引物区，获得 ＩＴＳ２序列。利用软件
ＭＥＧＡ５０（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｇｅｎｅｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓ）
分析比对［２１］，并基于 Ｋｉｍｕｒａ２ｐａｒａｍｅｔｅｒ（Ｋ２Ｐ）模
型进行种内种间遗传距离分析，用邻接（ＮＪ）法构
建系统聚类树，利用 ｂｏｏｔｓｔｒａｐ（１０００次重复）检验
各分支的支持率。登录中药材 ＤＮＡ条形码鉴定系
统（ｈｔｐ：／／ｗｗｗｔｃｍｂａｒｃｏｄｅｃｎ／）进行序列相似性搜
索（ＢＬＡＳＴ）［２２］。利用ＢＬＡＳＴ比对和 ＮＪ树对锁阳、
地黄和肉苁蓉药材及其同属近缘种进行鉴定分析。
３ 结果
３１ 锁阳药材基因组 ＤＮＡ提取及 ＰＣＲ扩增 提
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取的锁阳药材基因组 ＤＮＡ电泳检测显示条带呈弥
散状态，说明 ＤＮＡ降解严重。ＮａｎｏＤｒｏｐ检测结果
表明，所有锁阳药材基因组 ＤＮＡ的 Ａ２６０／Ａ２８０均在
１６～１８，仅有２个样品的 Ａ２６０／Ａ２３０小于２０，有少
量糖类物质的污染，但所有样品的ＤＮＡ浓度都大于
１０ｍｇ·Ｌ－１。所有样品的 ＰＣＲ电泳结果均显示较
亮条带，说明无论ＤＮＡ的降解或糖类及蛋白质的污
染都没有影响锁阳药材ＩＴＳ２序列的ＰＣＲ扩增。
３２ 锁阳药材及其混伪品的ＩＴＳ２序列分析 本研
究中１１个锁阳药材的 ＩＴＳ２序列长度均为２２９ｂｐ，
ＧＣ量为４８０％，序列变异较小，仅存在２个变异位
点，分为 ３个单倍型，单倍型 Ａ１序列全部与
ＫＣ４６３８１７相同，单倍型Ａ２的序列全部与ＫＣ４６３８２０
相同，ＫＣ４６３８２３为单倍型 Ａ３。基于 Ｋ２Ｐ模型的遗
传距离分析表明，锁阳种内变异较小，其 Ｋ２Ｐ遗传
距离为０～０００９，平均 Ｋ２Ｐ遗传距离为０００３。３１
份样本的种间变异较大，平均 Ｋ２Ｐ遗传距离为
０７６０，其中地黄与肉苁蓉种间的 Ｋ２Ｐ遗传距离为
００３２～０３５３，锁阳与地黄及肉苁蓉的种间 Ｋ２Ｐ遗
传距离为１０７６～１２６７。所有样本的种间最小遗
传距离明显大于锁阳的种内最大遗传距离。各样本
的ＩＴＳ２序列长度、ＧＣ量、单倍型及ＧｅｎＢａｎｋ登录号
见表１。
３３ 锁阳药材及其混伪品的ＩＴＳ２序列鉴定 利用
中药材 ＤＮＡ条形码鉴定系统对锁阳及其混伪品的
ＩＴＳ２序列进行比对，结果表明ＩＴＳ２序列可以准确区
分锁阳、地黄、肉苁蓉及其混伪品。基于 ＩＴＳ２序列
构建的ＮＪ系统聚类树见图１，结果显示，锁阳单独
聚为一支，地黄及其近缘种湖北地黄、裂叶地黄分别
聚为一支，肉苁蓉与其同属的管花肉苁蓉和沙苁蓉
也分别聚在一起，均表现出良好的单系性，ＮＪ树可
明确区分锁阳及其混伪品。因此，ＩＴＳ２序列作为条
形码可快速准确鉴别锁阳及其混伪品。
４ 讨论
分子生物学鉴定是应用 ＤＮＡ分子标记技术鉴
定中药原植物及其药材和饮片的方法，在物种鉴定
方面表现出了独特优势，如 ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇ
ｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）技术、ＲＡＰＤ（ｒａｎｄｏｍａｍ
ｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＤＮＡ），ＳＳＲ（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅ
ｐｅａｔ）技术等弥补和克服了传统鉴定方法的诸多缺
陷，得到了广泛的应用，但这些分子标记技术往往表
现出通用性低，可重复性不强的特点［２３］。与其他分
ｂｏｏｔｓｔｒａｐ１０００次重复，支上数值仅显示自展支持率≥５０％。
图１ 基于 ＩＴＳ２序列构建的锁阳及其混伪品的ＮＪ树
Ｆｉｇ１ ＮＪｔｒｅｅｂａｓｅｄｏｎＩＴＳ２ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍＣｙｎｏｍｏｒｉｕｍｓｏｎ
ｇａｒｉｃｕｍａｎｄｉｔｓａｄｕｌｔｅｒａｎｔｓ
子鉴定方法相比，ＤＮＡ条形码技术具有明显优势，
供试材料可以不受发育阶段、环境条件、存在形态等
影响；鉴定过程更加趋于标准化，操作简单等，在中
药鉴定领域中展示了广阔的应用前景［１１］。而且随
着ＤＮＡ条形码技术的逐步发展，研究者又提出了叶
绿体超级条形码的概念，并得到了初步应用［２４］。锁
阳应用历史悠久，是我国重要的民族中药，近年来，
随着其用量的逐渐增多，市场上混伪品时有出现，为
了确保临床用药安全，本研究采用ＤＮＡ条形码技术
对中药材锁阳及其常见混伪品进行鉴定研究。结果
表明ＩＴＳ２条形码序列可有效鉴别锁阳药材及其混
伪品，为锁阳药材鉴定的标准化奠定了基础，具有重
要的应用和参考价值。
直接从药用植物叶片中提取基因组 ＤＮＡ的方
法已相对成熟［１０］，而药材 ＤＮＡ的提取仍然需要探
索，能否获得药材的基因组 ＤＮＡ是中药材 ＤＮＡ条
形码技术研究的前提和基础，也是该技术在药材鉴
定领域推广应用的必要条件［１８，２５］。为了获得锁阳
药材的基因组ＤＮＡ，本研究对常用的试剂盒法进行
了如下改良：ＰＶＰ是酚类物质的络合物，可以与多酚
结合形成不溶的络合物，有效去除多酚，同时它还可
以和多糖结合，去除多糖，进而减少 ＤＮＡ中酚类和
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糖类物质的污染。经过摸索，本研究中加入３％的
ＰＶＰ４０，可以显著提高锁阳药材 ＤＮＡ的提取效果；
为了获得尽可能多的 ＤＮＡ，本研究采用５６℃水浴
过夜，使细胞裂解液充分裂解，可有效提高 ＤＮＡ提
取的成功率。另外，植物和真菌中广泛存在ＩＴＳ２片
段，如药材表面有真菌污染，ＰＣＲ扩增产物就有可
能是真菌的ＩＴＳ２片段，从而影响实验结果。锁阳药
材多成块状，硬度较大，而且表面经常伴有杂质，为
避免ＰＣＲ扩增过程中真菌的污染，首先用７５％乙醇
仔细擦洗其表面并刮去外皮，然后再用刀片刮取其
内部组织供提 ＤＮＡ用。结果显示，本研究获得的
ＩＴＳ２序列不存在真菌ＩＴＳ２序列的干扰，有效提高了
利用 ＤＮＡ条形码技术鉴定锁阳药材的稳定性和准
确性。
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取方法研究［Ｊ］世界科学技术———中医药现代化，２０１２，１４
（２）：１４３３
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第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３
ＭｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａｕｓｉｎｇＩＴＳ２ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇ
ＨＯＵＤｉａｎｙｕｎ１，２，ＳＯＮＧＪｉｎｇｙｕａｎ２，ＳＨＩＬｉｎｃｈｕｎ２，ＹＡＮＧＰｅｉ２，ＣＨＥＮＳｈｉｌｉｎ２，３，ＹＡＯＨｕｉ２
（１ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｏｌｅｇｅ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ４７１００３，Ｃｈｉｎａ；
２ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＢｒｅｅｄｉｎｇｏｆＥｎｄａｎｇｅｒｅｄＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，
ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ；
３ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａａｎｄｉｔｓａｎａｌｏｇｕｅｓｓｐｅｃｉｅｓｕｓｉｎｇＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：
ＴｏｔａｌｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍａｌｍａｔｅｒｉａｌｓｕｓｉｎｇｔｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔ．Ｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ２（ＩＴＳ２）ｒｅｇｉｏｎｓｗｅｒｅ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄｕｓｉｎｇｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ），ａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅｄｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌｙ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｓｓｅｍｂｌｙａｎｄ
ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅＣｏｄｏｎＣｏｄｅＡｌｉｇｎｅｒ３．７．１．ＴｈｅＫｉｍｕｒａ２Ｐａｒａｍｅｔｅｒ（Ｋ２Ｐ）ｄｉｓｔａｎｃｅｓａｎｄＧＣ
ｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅｃｏｍｐｕｔｅｄｕｓｉｎｇＭＥＧＡ５．０．Ｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｅｓｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒ
ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄｎｅｉｇｈｂｏｒｊｏｉｎｉｎｇ（ＮＪ）ｔｒｅｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＩＴＳ２ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｅｎｇｔｈｓｏｆＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａｗｅｒｅ２２９ｂｐ．
ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｓｏｆＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａｗｅｒｅ０．００３．ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎＣｙｎｏ
ｍｏｒｉＨｅｒｂａａｎｄｉｔｓａｄｕｌｔｅｒａｎｔｓｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅ０．７６０．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅｉｓｌａｒｇｅｒｔｈａｎｔｈｅ
ｍａｘｉｍｕｍｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ．ＴｈｅｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＮＪｔｒｅｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａａｎｄｉｔｓａｄｕｌｔｅｒａｎｔｓｓｐｅｃｉｅｓｃａｎｂｅｅａｓｉｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＩＴＳ２ｒｅｇｉｏｎｉｓａｎｅｆｉｃｉｅｎｔｂａｒｃｏｄｅｆｏｒ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｙｎｏｍｏｒｉＨｅｒｂａ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅａｎｅｗｔｅｃｈｎｉｑｕｅｔｏｅｎｓｕｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓａｆｅｔｙｉｎｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＣｙｎｏｍｏｒＩＨｅｒｂａ；ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇ；ＩＴＳ２；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｄｏｉ：１０．４２６８／ｃｊｃｍｍ２０１３２３０７
［责任编辑 吕冬梅］
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第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３