全 文 ：鹿筋胶原对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用
孙晓迪，李银清，赵雨，曲毅，张鹤，曲晓波
（长春中医药大学，吉林 长春 １３０１１７）
［摘要］　目的：研究鹿筋胶原对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用。方法：以完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）诱导的Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠佐
剂性关节炎（ＡＡ）为研究对象，观察经鹿筋胶原治疗前后的足趾肿胀度、体重、血清中的ＩＬｌβ和ＴＮＦα炎性细胞因子、血清中
的ＭＤＡ含量和ＳＯＤ活力。结果：鹿筋胶原可显著抑制 ＡＡ大鼠原、继发性足肿胀度，抑制 ＡＡ大鼠炎性细胞因子 ＩＬｌβ和
ＴＮＦα分泌，增强ＳＯＤ活性，降低ＭＤＡ含量。结论：鹿筋胶原对弗氏佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎有明显的治疗作用。
［关键词］　鹿筋胶原；佐剂性关节炎
［收稿日期］　２００９０６１２
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划项目（２００７ＢＡＩ３８Ｂ０６）
［通信作者］　赵雨，Ｔｅｌ：（０４３１）８６１７２３００，Ｆａｘ：（０４３１）８６１７２３００，
Ｅｍａｉｌ：ｃｎｚｈａｏｙｕ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　类风湿性关节炎（ｒａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种慢
性、炎性、系统性的自身免疫性疾病，表现为外周
多关节持续性和进行性的滑膜炎和血管翳的形
成，继而引起软骨损坏和侵蚀，最终导致关节畸
形。鹿筋是鹿科动物梅花鹿 ＣｅｒｖｕｓｎｉｐｐｏｎＴｅｍ
ｍｉｎｃｋ或马鹿 Ｃ．ｅｌａｐｈｕｓＬ．的四肢干燥筋，始载
于《唐本草》，用于风湿关节痛等［１］，现代研究表
明鹿筋中主要成分是胶原蛋白［２］。胶原蛋白对
维护细胞、组织、器官的正常功能和损伤修复有
重要作用［３］。胶原随年龄的增长在体内的含量
不断减少，使结缔组织失去弹性柔韧性，从而导
致一些疾病的发生，如关节炎等［４］。本实验主要
研究鹿筋胶原对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用。
１　材料
１．１　鹿筋胶原制备　梅花鹿鹿筋（吉林省双阳鹿
乡镇购买）去肉、皮、毛后，采用醋酸浸提使其膨胀，
水煮提取，胃蛋白酶酶解，离心，上清冻干，即得鹿筋
胶原蛋白，胶原蛋白含量为８０％。
１．２　动物　Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，清洁级，体重（２００±
２０）ｇ，由吉林大学实验动物中心提供［ＳＣＸＫ（吉）
２００８０００５］。
１．３　试剂　完全弗氏佐剂（ＣＦＡ，北京鼎国生物技
术有限公司，批号 ９７０１１１８２）；ＳＯＤ测定试剂盒
（南京建成生物工程研究所，批号０８１１０２）、丙二醛
（ＭＤＡ）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批
号０８０８１２）；肿瘤坏死因子放射免疫分析药盒（北京
普尔伟业生物科技有限公司，批号 ０９０１０３）、碘
［１２５Ｉ］白细胞介素１β放射免疫分析药盒（北京普尔
伟业生物科技有限公司，批号０８１０２２）；泼尼松（河
北张家口云峰制药厂，批号０７１１１２）。
１．４　仪器　ＡＥＬ２００型电子天平（日本岛津株式会
社）；ＤＴ１００型、ＤＴ２０００型电子天平（美国双杰）；
ＬＤ５２Ａ型离心机（北京医用离心机厂）；ＧＣ２０１０型
γ射线免疫计数器（科大创新股份有限公司中佳分
公司）；７５１Ｇ型紫外分光光度计（上海分析仪
器厂）。
２　方法
２．１　大鼠ＡＡ模型的制备　Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠６０只，
按体重随机分组，每组１０只。分为正常对照组、模
型对照组、鹿筋胶原高、中、低剂量组、泼尼松组。除
正常对照组外每只大鼠右足跖皮内注０１ｍＬ弗氏
完全佐剂致炎，正常对照组注射等量生理盐水。致
炎前以窄带尺测量雄性大鼠左和右后足跖周长一
次，以此数值做正常对照值。造模同时，鹿筋胶原
高、中、低剂量组分别按０４，０２，０１ｇ·ｋｇ－１剂量
灌胃给药，泼尼松组按００３ｇ·ｋｇ－１剂量灌胃给药，
正常对照组和模型对照组按１０ｍＬ·ｋｇ－１剂量灌胃
蒸馏水，连续给药３５ｄ。
２．２　观测指标　一般情况：仔细观察造模及药物治
疗前后大鼠体毛色泽、神志、四肢活动、食量增减、体
重变化。足肿胀度：致敏后每隔２ｄ测量大鼠右侧
及左侧足肿胀程度，以给药前后大鼠足肿胀差值为
佐剂关节炎的肿胀度。血清指标：３５ｄ后水合氯醛
麻醉，腹主动脉取血测定各组血清中的ＩＬｌβ，ＴＮＦα
和ＳＯＤ，ＭＤＡ含量。抑制率（％）＝（模型组含量 －
·５３１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　２３
　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
给药组含量）／模型组含量 ×１００％，升高率（％）＝
（给药组含量－模型组含量）／模型组含量×１００％。
２．３　统计方法　所有计量资料以 珋ｘ±ｓ表示，模型
对照组与正常对照组之间，各给药组、阳性对照组与
模型对照组之间差异采用ｔ检验。
３　结果
３．１　一般情况观察　各组大鼠在摄食、活动度、毛
色、二便等方面无明显差异。造模前、造模后每天测
量大鼠体重，所测体重经统计学处理，同实验阶段大
鼠体重之间无显著性差异。
３．２　原发性足肿胀测量　由表１得知，各组注射佐
剂侧足爪从第１天起持续肿胀３ｄ左右，而后肿胀
逐渐消退，第６天起再次持续肿胀。与模型组比较，
从给药后第１２天开始，鹿筋胶原各剂量组均能降低
大鼠右后足肿胀度。与泼尼松组比较，鹿筋胶原高、
中剂量组右后足肿胀度比较相近，没有统计学差异。
说明鹿筋胶原对大鼠原发性足肿胀具有明显的抑制
作用。
表１　鹿筋胶原对佐剂性关节炎雄性大鼠右后足跖肿胀度的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
肿胀度／ｃｍ
０ｄ ３ｄ ６ｄ ９ｄ １２ｄ １５ｄ
模型　　 － ２４６±０１６ ０４６±０１３ ０２７±０１４ ０３０±０１９ ０４０±００９ ０４８±０１３
鹿筋胶原 ０４ ２４８±００４ ０４３±０１４ ０２１±０１４ ０２９±０１２ ０２７±０１５１） ０３６±０１１１）
０２ ２４２±０１１ ０４０±０１２ ０２３±００９ ０２２±０１４ ０２８±０１２１） ０３９±０１４
０１ ２４７±００８ ０５０±０１６ ０２４±０１５ ０３３±０１４ ０３２±０１１ ０４２±００９
泼尼松　 ００３ ２４５±０１３ ０３７±０１２ ０２５±０１４ ０２６±００８ ０２６±００９２） ０３０±０１２２）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
肿胀度／ｃｍ
１８ｄ ２１ｄ ２４ｄ ２７ｄ ３０ｄ ３３ｄ ３５ｄ
模型　　 － ０４７±０１１ ０５１±０１４ ０４７±０１３ ０４４±０１８ ０５３±０１６ ０４７±０１６ ０５４±０１１
鹿筋胶原 ０４ ０３０±０１４１） ０３８±０１０１） ０３１±０１２１） ０３８±０１３ ０３６±０１６１） ０３４±０１４１） ０３５±０１４２）
０２ ０３７±０１７ ０３６±０１２１） ０３１±０１１１） ０３９±０１９ ０３４±０１７１） ０３２±０１６１） ０３７±０１２２）
０１ ０３８±０１２ ０４０±０１２ ０３６±０１１） ０４１±０１２ ０３８±０１２１） ０３５±００９２） ０３９±０１０２）
泼尼松　 ００３ ０３１±０１５１） ０３３±０１０２） ０２９±０１３２） ０２９±０１２２） ０２８±００８３） ０２７±０１２２） ０２７±０１３３）
　　注：与模型组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１，３）Ｐ＜０００１（表２同）。
３．３　继发性足肿胀测量　由表２得知，各组大鼠
给药前左后足肿胀度无明显差异；与空白对照组
比较，各组在给药后第１２天发生继发性反应。与
模型组比较，鹿筋胶原各剂量组均能降低大鼠左
后足肿胀度。与泼尼松组比较，鹿筋胶原高、中、
低剂量组左后足肿胀度比较相近，没有统计学差
异。说明鹿筋胶原对大鼠继发性足肿胀具有抑制
作用。
表２　鹿筋胶原对佐剂性关节炎雄性大鼠左后足跖肿胀度的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
肿胀度／ｃｍ
０ｄ ３ｄ ６ｄ ９ｄ １２ｄ １５ｄ
模型　　 － ２４２±０１０ ００６±００７ ００６±００５ ０１０±０１１ ０１６±００８ ０２７±００７
鹿筋胶原 ０４ ２４６±００５ ００５±００９ ００２±００６ ００３±００９ ０１４±０１１ ０２３±００８
０２ ２４２±０１１ ００７±００７ ０００±０１０ ００３±０１２ ０１２±０１２ ０２３±０１８
０１ ２４７±０１０ ００２±０１０ ００１±０１５ ００１±０１４ ０１５±０１７ ０２５±０１４
泼尼松　 ００３ ２４３±０１３ ００１±００３ ００１±００５ ００２±００８ ０１１±００８ ０２０±０１１
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
肿胀度／ｃｍ
１８ｄ ２１ｄ ２４ｄ ２７ｄ ３０ｄ ３３ｄ ３５ｄ
模型对照 － ０３１±０１０ ０３４±０１３ ０３０±００９ ０３８±０１０ ０３１±０１４ ０３１±０１１ ０３６±０１０
鹿筋胶原 ０４ ０２１±０１２ ０２４±０１２ ０１６±０１２１） ０１９±０１０３） ０２０±００８１） ０２２±０１５ ０２６±０１６
０２ ０２２±０１５ ０２６±０１７ ０２４±０１７ ０２２±０１２２） ０２２±０１２ ０２４±０１７ ０２５±０１４
０１ ０２２±０１８ ０２５±０１４ ０２０±００９１） ０２３±０１３２） ０２５±０１７ ０２２±０１５ ０２５±０１０１）
泼尼松　 ００３ ０１８±０１５１） ０２０±０１８ ０１５±０１４１） ０１７±０１３３） ０１８±０１２１） ０１８±００９ ０１８±０１１２）
·６３１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　２３
　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
３．４　血清中 ＩＬｌβ，ＴＮＦα检测　由表 ３得知，模
型对照组与正常对照组比较血清中 ＩＬ１β和ＴＮＦα
水平明显升高（Ｐ＜００５）。鹿筋胶原各剂量组与
模型对照组相比，均能明显降低 ＩＬ１β和 ＴＮＦα水
平（Ｐ＜０００１）。与泼尼松组比较，鹿筋胶原高剂
量组炎性因子比较相近，没有统计学差异。说明
鹿筋胶原可以有效地抑制 ＩＬ１β和 ＴＮＦα炎性因
子的分泌。
表３　鹿筋胶原对佐剂性关节炎雄性大鼠血清中细胞因子含量的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ＩＬ１β
／ｎｇ·Ｌ－１
ＩＬ１β抑制率
／％
ＴＮＦα
／ｎｇ·Ｌ－１
ＴＮＦα抑制率
／％
正常　　 － ０２４５±００６５ － ０９２７±０３１４ －
模型　　 － ０３０７±００５６１） － １２２８±０２８０１） －
鹿筋胶原 ０４ ０２０７±００４８４） ３２５７ ０６２６±０１８８４） ４９０２
０２ ０２２９±００９６２） ２５４１ ０８５１±０２７９３） ３０７０
０１ ０２６０±００６１ １５３１ ０９２９±０１９４２） ２４３５
泼尼松　 ００３ ０１８５±００７５４） ３９７４ ０５９６±０１８６４） ５６３５
　　注：与正常对照组比较１）Ｐ＜００５；与模型对照组比较２）Ｐ＜００５，３）Ｐ＜００１，４）Ｐ＜０００１。
３．５　血清中 ＭＤＡ含量和 ＳＯＤ活力的检测　由表
４得知，与空白对照组比较，模型对照组 ＳＯＤ活性
显著降低、ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜００５，Ｐ＜
００１）。与模型对照组比较，鹿筋胶原高、中剂量
组均能明显降低血清中 ＭＤＡ含量（Ｐ＜００１，Ｐ＜
０００１），低剂量组对 ＭＤＡ含量影响小，没有统计
学意义；高剂量组能显著升高 ＳＯＤ活性（Ｐ＜
００５），中、低剂量组对 ＳＯＤ活力影响较小。与泼
尼松组比较，鹿筋胶原高、中剂量组 ＳＯＤ活性，
ＭＤＡ含量比较相近，没有统计学差异。说明鹿筋
胶原在一定剂量上可有效提高 ＳＯＤ活力和降低
ＭＤＡ含量。
表４　鹿筋胶原对佐剂性关节炎雄性大鼠血清ＳＯＤ活力和ＭＤＡ含量的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ＳＯＤ
／Ｕ·ｍＬ－１
ＳＯＤ升高率
／％
ＭＤＡ
／μｍｏｌ·Ｌ－１
ＭＤＡ抑制率
／％
正常　　 － １２８８±６７０ － ３７８９±１５４ －
模型　　 － １２２５±５７２１） － ４２３１±３７６２） －
鹿筋胶原 ０４ １２９９±６４５３） ６０４ ３４８０±２４２５） １７７５
０２ １２７７±６１７ ４２４ ３６０６±２０３４） １４７７
０１ １２３５±１３７６ ０８２ ３９２９±３２７ ７１４
泼尼松　 ００３ １３３２±７２８４） ８７３ ３２８６±４３７５） ２３０４
　　注：与正常对照组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与模型对照组比较３）Ｐ＜００５，４）Ｐ＜００１，５）Ｐ＜０００１。
４　讨论
４．１　ＡＡ大鼠模型的建立　ＡＡ大鼠是目前广泛
应用的类风湿性关节炎模型之一。该模型以多发
性关节炎为特征，原发病变主要是局部急性炎症
反应，并于致炎后１０～１２ｄ开始出现继发病变，同
时出现以细胞免疫变化为主的免疫功能紊乱［５］。
本研究结果表明，ＡＡ大鼠模型组原发性、继发性
足肿胀非常明显，血清中可检测出高含量的 ＩＬ１β
和 ＴＮＦα炎症细胞因子。这些结果表明 ＡＡ大鼠
模型建立成功。
４．２　鹿筋胶原对ＡＡ大鼠原、继发性足肿胀的影响
　ＲＡ病理表现复杂多样，以关节的炎性肿胀、变
形、滑膜增生、骨及软骨破坏为主。因此，测量足趾
肿胀度是常用的判定指标。本实验结果表明，与模
型对照组比较，给药组在造模后１２ｄ开始出现显著
性差异，连续给药３５ｄ，鹿筋胶原各剂量组能显著减
轻ＡＡ大鼠原、继发性足跖肿胀程度。
４．３　鹿筋胶原对 ＡＡ大鼠炎性细胞因子的影响　
ＩＬ１，ＴＮＦα是ＲＡ发病机制中居中心地位的促炎性
因子，具有诱导炎症、酶的释放、纤维细胞增生及组
织损伤的作用［６］。本研究结果表明，与模型组比
较，鹿筋胶原各剂量组能明显抑制血清中 ＩＬ１和
ＴＮＦα炎性因子的释放。
４．４　鹿筋胶原对 ＡＡ大鼠血清 ＳＯＤ，ＭＤＡ含量的
·７３１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　２３
　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
影响　在对类风湿关节炎患者和动物模型的研究中
发现自由基在 ＲＡ的病理生理中起到重要的作用。
在炎症发展过程中，抗氧化能力的降低和氧自由基
等的增加引发脂质过氧化，形成脂质过氧化物如丙
二醛（ＭＤＡ），导致细胞结构的破坏，从而影响酶类
及ＤＮＡ的功能［７］。本实验结果表明，与模型对照组
比较，鹿筋胶原组血清中 ＳＯＤ含量显著升高，ＭＤＡ
含量显著降低，说明鹿筋胶原对 ＡＡ大鼠有显著的
治疗作用。
本研究从模型的整体角度出发，证明鹿筋胶原
对ＡＡ大鼠有明显的抗炎消肿作用，能减轻或减缓
炎性反应，抑制 ＡＡ急性病期的进一步发展和自由
基介导的脂质过氧化反应对关节的损伤。本研究对
揭示鹿筋胶原治疗ＡＡ大鼠作用机制及开发创新药
物具有重要意义。
［参考文献］
［１］　苏敬．唐本草［Ｍ］．上海：上海卫生出版社，１９５７：２１０．
［２］　刘邦强，卢振，高音，等．三品同名异物鹿筋的代替使用鉴别及
应用［Ｊ］．中国民族民间医药杂志，２００５（７４）：１７３．
［３］　蒋挺大，张春萍．胶原蛋白［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００１：
１８６．
［４］　唐传核，彭志英．胶原的开发及利用［Ｊ］．肉类研究，２０００（３）：
３９．
［５］　ＢｉａｎＲＬ．Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｉｍｍｕｎｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌ
ｐｒａｃｔｉｃｅ［Ｍ］．北京：北京医科大学 中国协和医科大学联合出
版社，１９９２．
［６］　侯丽萍，周晓莉，田永峰，等．通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大
鼠血清ＩＬ１β，ＩＬ６，ＴＮＦα的调节［Ｊ］．浙江中医药杂志，２００９，
４４（２）：９６．
［７］　阳洁，刘华钢．中药抗炎作用分子机制研究进展［Ｊ］．广西医
学，２００５，１２（３）：２０８．
［责任编辑　张宁宁］
·８３１３·
第３４卷第２３期
２００９年１２月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　２３
　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９