全 文 ：ＳｕｉｔａｂｉｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＰａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ’ｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａ
ｂａｓｅｄｏｎＴＣＭＧＩＳⅠ
ＣＨＥＮＳｈｉｌｉｎ１，ＺＨＯＵＹｉｎｇｑｕｎ１，２，ＸＩＥＣａｉｘｉａｎｇ１，ＺＨＡＯＲｕｎｈｕａｉ２，ＳＵＮＣｈｅｎｇｚｈｏｎｇ３，ＷＥＩＪｉａｎｈｅ１，
ＬＩＵＺｈａｏｑｉｎ３，ＧＡＯＷｅｉｗｅｉ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｈｉｎａＮａｔｉｏｎａｌＧｒｏｕｐＣｏｒｐ．ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ＆ＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ；
３．ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｕｒｖｅｙｉｎｇａｎｄＭａｐｐｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｕｐｐｌｙｔｈｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｄａｔａｆｏｒｔｈｅｃｈｏｉｃｅｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓ’ｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａｔｈｒｏｕｇｈａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅ
ｓｕｉｔａｂｌｅａｒｅａｆｏｒＰａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ’ｇｒｏｗｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴＣＭＧＩＳⅠ（Ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎ
ａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｄｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａｏｆＰ．ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍＷｉｓｃｏｎｓｉｎ
ｓｔａｔｅｏｆＵＳＡ，ｏｎｅｏｆｔｈｅｏｒｉｇｉｎｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａｏｆｔｈｅｇｅｏａｕｔｈｅｎｔｉｃｃｒｕｄｅｄｒｕｇｓ，ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄａｎａｌｙｔｉｃａｌａｒｅａａｎｄｓｏｍｅ
ｋｅｙｆａｃｔｏｒｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｓｕｃｈａｓａｖｅｒａｇｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｌｔｉｔｕｄｅ，ｓｏｉｌｔｙｐｅ，ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎｔｏｂｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ．Ｒｅ
ｓｕｌｔ：ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅａｒｅａｆｏｒＰ．ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ’ｇｒｏｗｔｈｉｎＣｈｉｎａｉｓｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔａｔｕｓ．Ｉｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓｉｎ
ｔｈｅｎｏｒｔｈｅａｓｔａｎｄｔｈｅｎｏｒｔｈｏｆＣｈｉｎａ，ａｎｄｐａｒｔｏｆＳｈａｎｘｉｐｒｏｖｉｎｃｅｉｓａｌｓｏｓｕｉｔａｂｌｅｂｕｔｔｈｅｆｉｅｌｄａｒｅａｉｓｓｍａｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔｏｆＰ．ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍｉｎＣｈｉｎａｓｈｏｕｌｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｉｎｔｈｅｎｏｒｔｈｅａｓｔａｎｄｔｈｅｎｏｒｔｈｏｆＣｈｉｎａ．ＴｈｅＴＣＭＧＩＳⅠｉｓｖａｌｕａｂｌｅｔｏｔｈｅａｎａｌｙ
ｓｉｓｏｆｓｕｉｔａｂｌｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａａｎｄｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＴＣＭＧＩＳⅠ；ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｒｅａ；Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ ［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０１２７
［基金项目］ 河南省重点科技攻关项目（０６２３０３０７００，０５２４４２０００１）
［通讯作者］ 李明军，Ｔｅｌ：（０３７３）３３２８１８９，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｍｉｎｇｊｕｎ２００２＠２６３．ｎｅｔ
培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导及
牛膝多糖含量的影响
李明军１，２，李 萍１，３，张晓丽１，赵喜亭１
（１．河南师范大学 生命科学学院，河南 新乡 ４５３００７；
２．华中农业大学 园艺植物生物学教育部重点实验室，湖北 武汉 ４３００７０；
３．佐今明药业集团，河南 新乡 ４５３０００）
［摘要］ 目的：研究培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导形成及牛膝多糖含量的影响。方法：以怀牛膝无菌苗
的叶片、茎段为材料，采用正交设计研究基本培养基，碳源，２，４二氯苯氧乙酸（２，４Ｄ）、６苄基腺嘌呤（６ＢＡ）、Ｎ苯
基Ｎ′噻二唑５脲（ＴＤＺ）、水解酪蛋白（ＣＨ）对愈伤组织诱导和多糖含量的影响。结果：诱导叶片愈伤组织形成的
适宜培养基为Ｂ５＋２ｍｇ·Ｌ
－１２，４Ｄ＋０５ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１葡萄糖＋１ｇ·Ｌ－１ＣＨ，诱导茎段愈伤组织形
成的适宜培养基为Ｂ５＋２ｍｇ·Ｌ
－１２，４Ｄ＋１ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１葡萄糖 ＋０５ｇ·Ｌ－１ＣＨ；有利于叶片愈伤
组织中多糖含量提高的培养基是ＬＳ＋１ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋１ｍｇ·Ｌ－１ＴＤＺ＋３０ｇ·Ｌ－１蔗糖，有利于茎段愈伤组织中多
糖含量提高的培养基是ＬＳ＋１ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ＋０５ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋１ｍｇ·Ｌ－１ＴＤＺ＋３０ｇ·Ｌ－１葡萄糖。结论：初步
建立了怀牛膝叶片、茎段诱导愈伤组织的适宜培养条件，为通过植物组织细胞培养途径生产牛膝多糖提供了依据。
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
［关键词］ 怀牛膝；愈伤组织；多糖；培养基成分；正交设计
［中图分类号］Ｒ２８４．１，Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０７４５０５
怀牛膝 ＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢｌ．为苋科牛膝属
植物，主产于河南省的温县、武陟、博爱等地（古怀
庆府所辖），是我国著名的“四大怀药”之一。其根
含有多种化学成分，包括多糖类、皂苷类、植物甾酮
类、黄酮类、生物碱及香豆素等，具有补肝肾、强筋
骨、通血脉、降血压及镇痛、引药下行和泻浊通淋等
功效［１］。牛膝多糖（Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｐｏｌｙｓａｃ
ｃｈａｒｉｄｅｓ，ＡＢＰＳ）是一种免疫调节剂，具有抗肿瘤和
抗凝血的作用，临床应用前景十分看好［２］。
国内外对怀牛膝的研究主要集中于成分分析、
药理作用、栽培措施等方面［３５］，关于组织培养方面
的研究报道较少［６］。近年来，本研究室对怀牛膝的
愈伤组织诱导、分化及植株再生进行了研究［７，８］，本
实验在前期研究工作的基础上进一步就培养基成分
对怀牛膝愈伤组织诱导形成及愈伤组织中 ＡＢＰＳ含
量的影响进行研究，以期筛选出适宜的愈伤组织诱
导和提高ＡＢＰＳ含量的培养基，为建立高效的 ＡＢＰＳ
离体生产体系提供技术基础。
１ 材料
怀牛膝种子来自河南省温县农业科学研究所，
经温县农科所王天亮高级农艺师鉴定为怀牛膝１号
品种。
２ 方法
２．１ 无菌体系的建立 参照文献［７］中的方法，建
立怀牛膝的无菌培养体系。
２．２ 培养基的设计 采用 Ｌ１８（３
７）正交设计，研究
基本培养基，碳源，２，４Ｄ，６ＢＡ，ＴＤＺ，ＣＨ６种因素３
个水平对怀牛膝叶片、茎段愈伤组织诱导形成和
ＡＢＰＳ含量的影响（表１）。培养基中碳源为３０ｇ·
Ｌ－１，冷凝脂７ｇ·Ｌ－１，ｐＨ５８～６２。
表１ 因素水平
水平
Ａ
基本
培养基
Ｂ
碳源
Ｃ
２，４Ｄ
／ｍｇ·Ｌ－１
Ｄ
６ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
Ｅ
ＴＤＺ
／ｍｇ·Ｌ－１
Ｆ
ＣＨ
／ｇ·Ｌ－１
１ ＭＳ 蔗糖 ０ ０ ０ ０
２ ＬＳ 葡萄糖 １ ０５ ０１ ０５
３ Ｂ５ 白砂糖 ２ １ １ １
２．３ 愈伤组织的诱导 将无菌苗的叶片切成０５
ｃｍ×０５ｃｍ的小块，茎段切成０５ｃｍ长的切段，根
据试验设计安排１８组培养基，每组培养基接种１５
个外植体，重复３次。培养室温度为（２５±２）℃，光
照强度为２０００ｌｘ，光周期为１４ｈ·ｄ－１。定期观察
愈伤组织开始形成的时间，进行出愈率和形态指标
如愈伤组织的颜色、生长势的统计。出愈率（％）＝
形成愈伤组织的外植体数／接种的外植体数 ×
１００％。
２．４ ＡＢＰＳ含量的测定 在叶片、茎段愈伤组织形
成高峰期（即诱导培养２３ｄ）时提取多糖并测定含
量。ＡＢＰＳ的提取方法为：称取０１ｇ愈伤组织加水
研磨呈匀浆状，加入１ｍＬ２ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ溶液于
７５～８０℃下水浴３０ｍｉｎ，离心取上清，加入２倍体
积的８０％ Ｃ２Ｈ５ＯＨ溶液沉淀过夜，离心得沉淀，加
水溶解后即得样品液，每组重复３次。ＡＢＰＳ含量测
定采用蒽酮硫酸比色法［９］。
２．５ 数据处理 运用 Ｅｘｃｅｌ，ＳＰＳＳ软件对试验数据
进行极差分析、方差分析和最小显著差数（ＬＳＤ）法
多重比较。
３ 结果与分析
３．１ 培养基成分对叶片和茎段愈伤组织诱导影响
叶片培养７ｄ时，大部分叶缘微微向上翘起；８
ｄ时，１，７，１２，１４，１８号培养基中开始产生雪花状、
无色透明的愈伤组织，分布在叶片背面；１２ｄ时，２，
５，６，８，１２，１４号培养基中形成块状愈伤组织，呈白
色、黄色、黄绿色，多分布在叶片切口及叶缘处；茎
段诱导培养６ｄ时，出现不同程度的膨大，１，９，１１，
１２，８，１７号培养基中茎段切口处相继形成块状愈
伤组织，呈白色、黄色、绿色；２０ｄ时，１３，１６，１８号
培养基中分化出绒毛状幼根；２３ｄ时，愈伤组织的
生长均达到高峰，２，６，７，８，１０，１１，１２，１３，１４，１６，１８
号培养基中叶片出愈率均为１００％，其中８，１２，１４
号培养基出愈量最大；２，７，９，１０，１２，１４，１６，１７，１８
号培养基中茎段出愈率均为 １００％，其中 ２，８，１７
号培养基中出愈量最大（表２）；２７ｄ时，愈伤组织
开始褐化。
采用极差分析、方差分析研究６种因素对怀牛
膝叶片和茎段出愈率的影响效应及其差异显著性
（表３，４）。结果表明，其影响效应依次为２，４Ｄ＞
基本培养基 ＞ＣＨ＞碳源 ＞６ＢＡ＞ＴＤＺ和基本培养
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表２ 培养基成分对叶片和茎段愈伤组织诱导的
影响（培养２３ｄ）
Ｎｏ
开始出愈时间／ｄ
叶片 茎段
出愈率／％
叶片 茎段
出愈量
叶片 茎段
１ ８ ６ ７３３ ９３３ ＋
２ ９ ８ １００ １００
３ １０ ７ ９３７５ ８６７ ＋ ＋
４ ９ ７ ７３３ ６０ ＋ ＋
５ ９ ７ ８０ ８０
６ ９ ７ １００ ５３３
７ ８ ８ １００ １００
８ ９ ７ １００ ９４１
９ １０ ６ ８６７ １００ ＋
１０ ９ ７ １００ １００
１１ ９ ６ １００ ９３３
１２ ８ ７ １００ １００
１３ ９ ７ １００ ８０
１４ ８ ６ １００ １００
１５ １０ ７ ８０ ６０ ＋ ＋
１６ ８ ６ １００ １００
１７ １１ ６ ９１ １００
１８ ８ ６ １００ １００
注：＋表示愈伤组织量少；表示多；表示较多；表示很多
基＞碳源 ＞ＣＨ＞２，４Ｄ＞ＴＤＺ＞６ＢＡ；各因素对叶
片出愈率影响差异不显著；基本培养基对茎段出愈
率影响达到显著水平，其他各因素影响不显著。对
３种基本培养基进行ＬＳＤ法多重比较，Ｂ５与ＬＳ对茎
段出愈率的影响达到了极显著差异，ＭＳ与 ＬＳ达到
显著差异。
综上分析得到各因素的最适水平组合即叶片和
茎段诱导愈伤组织形成的适宜培养基分别为 Ｂ５＋２
ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ＋０５ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１葡
萄糖＋１ｇ·Ｌ－１ＣＨ和Ｂ５＋２ｍｇ·Ｌ
－１２，４Ｄ＋１ｍｇ
·Ｌ－１６ＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１葡萄糖＋０５ｇ·Ｌ－１ＣＨ。
３．２ 培养基成分对怀牛膝叶片和茎段愈伤组织中
ＡＢＰＳ含量的影响
叶片和茎段愈伤组织生长２３ｄ时测定愈伤组
织中ＡＢＰＳ含量（图１）。其中叶片以４号培养基愈
伤组织中ＡＢＰＳ含量最多，达到（７１２±０７２）ｍｇ·
ｇ－１，５，９，１６，１７号培养基中较多；茎段以５号培养
基中最多，达到（６０９±０５３）ｍｇ·ｇ－１，２，１４，１６号
培养基中较多。
表３ 叶片和茎段出愈率的极差分析
均值
叶片
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ
茎段
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ
珋ｘ１ ９４５１ ９１１０ ８４０５ ９５５５ ９４０５ ９０００ ９５５５ ８８８８ ８４４３ ８９９８ ８６７８ ９４５７
珋ｘ２ ８８８８ ９５１７ ９６６７ ９２２２ ９３３３ ９５１７ ７２２２ ９４５７ ９３３３ ８５６８ ９３３３ ８５５５
珋ｘ３ ９６２８ ９３４１ ９８９６ ９１９１ ９２２９ ９４５１ ９９０２ ８３３３ ８９０２ ９１１２ ８６６７ ８６６７
极差 ７４０ ４０７ １４９１ ３６４ １７６ ５１７ ２６８０ １１２４ ８９０ ５４４ ６６６ ９０２
表４ 叶片和茎段出愈率的方差分析
方差来源 自由度
叶片 茎段
离差平方和 方差 Ｆ 离差平方和 方差 Ｆ Ｐ
Ａ ２ １７９１０ ８９５５ ０８３ ２５４９４１ １２７４７１ １１６６ ＜００５
Ｂ ２ ４９９２ ２４９６ ０２３ ３７８５９ １８９３０ １７３ ＞００５
Ｃ ２ ７７３３８ ３８６６９ ３５７ ２３７７１ １１８８６ １０９ ＞００５
Ｄ ２ ４８９４ ２４４７ ０２３ ９８６０ ４９３０ ０４５ ＞００５
Ｅ ２ ９３８ ４６７ ００４ １７４７３ ８７３７ ０８０ ＞００５
Ｆ ２ ９４９１ ４７４６ ０４４ ２８９９２ １４４９６ １３３ ＞００５
误差 ５ ５４０８９ １０８１８ ５４６７２ １０９３４
总变异 １７ １６９６５２ ４２７５６８
注：Ｆ００５＝５７９，Ｆ００１＝１３２７；各因素对叶片出愈率影响的差异不显著
采用极差分析、方差分析研究６种因素对怀牛
膝叶片和茎段愈伤组织中ＡＢＰＳ含量的影响效应及
其差异显著性（表５，６）。结果表明，其影响效应依
次为碳源＞６ＢＡ＞２，４Ｄ＞基本培养基 ＞ＣＨ＞ＴＤＺ
和２，４Ｄ＞ＣＨ＞６ＢＡ＞ＴＤＺ＞碳源 ＞基本培养基；
各因素对叶片愈伤组织中ＡＢＰＳ含量影响差异不显
著；６ＢＡ，ＴＤＺ，ＣＨ３因素对茎段愈伤组织中 ＡＢＰＳ
含量的影响显著，２，４Ｄ达到极显著水平，其他因素
影响不显著。分别对２，４Ｄ，６ＢＡ，ＴＤＺ，ＣＨ的３个
水平进行ＬＳＤ法多重比较，添加２，４Ｄ，６ＢＡ与不
添加时对茎段愈伤组织中ＡＢＰＳ含量的影响均达到
显著差异；添加１ｍｇ·Ｌ－１ＴＤＺ与不添加时差异显
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著；不添加ＣＨ与添加１ｇ·Ｌ－１ＣＨ时差异达到
图１ 不同培养基中叶片和茎段愈伤组织中
ＡＢＰＳ含量（培养２３ｄ）
显著，其他差异不显著。
综合以上分析得到各因素的最适水平组合即利
于叶片和茎段愈伤组织中ＡＢＰＳ含量提高的适宜培
养基分别为 ＬＳ＋１ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋１ｍｇ·Ｌ－１
ＴＤＺ＋３０ｇ·Ｌ－１蔗糖和ＬＳ＋１ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ＋０５
ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ＋１ｍｇ·Ｌ－１ＴＤＺ＋３０ｇ·Ｌ－１葡萄
糖。
４ 讨论
４．１ 基本培养基对愈伤组织诱导和多糖含量影响
表５ 叶片和茎段愈伤组织中ＡＢＰＳ含量的极差分析
均值
叶片
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ
茎段
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ
珋ｘ１ ４０８ ５２４ ５１１ ４０７ ４２７ ４９６ ２９９ ３１２ ２３０ ２４８ ２６１ ３６７
珋ｘ２ ５０３ ４００ ４００ ４４４ ４７６ ４３４ ３５３ ３５７ ３７０ ３５３ ３１７ ３１６
珋ｘ３ ４６９ ４５６ ４６９ ５２８ ４７６ ４５０ ２８４ ２６６ ３３６ ３３５ ３５７ ２５３
极差 ０９５ １２４ １１１ １２１ ０４９ ０６２ ０６９ ０９１ １４０ １０５ ０９６ １１４
表６ 叶片和茎段愈伤组织中ＡＢＰＳ含量的方差分析
方差来源 自由度
叶片茎段
离差平方和 方差 Ｆ 离差平方和 方差 Ｆ Ｐ
Ａ ２ ２７９２３ １３９６２ １４６ １６１４０ ０８０７０ ３７８ ＞００５
Ｂ ２ ４６４３８ ２３２１９ ２４２ ２４４９４ １２２４７ ５７４ ＞００５
Ｃ ２ ３７６８９ １８８４４ １９６ ６４１６３ ３２０８１ １５０３１） ＜００１
Ｄ ２ ４５５２６ ２２７６３ ２３７ ３７５７５ １８７８７ ８８０２） ＜００５
Ｅ ２ ０９５１７ ０４７５９ ０５０ ２８０１３ １４００６ ６５６２） ＜００５
Ｆ ２ １２５２６ ０６２６３ ０６５ ３９３６８ １９６８４ ９２２２） ＜００５
误差 ５ ４７９６３ ０９５９３ １０６７０ ０２１３４
总变异 １７ ２２７５８１ ２２０４２３
注：Ｆ００５＝５７９，Ｆ００１＝１３２７；各因素对叶片愈伤组织中ＡＢＰＳ含量影响的差异不显著
杨世海等［１０］发现 Ｂ５较 ＭＳ更利于甘草愈伤组
织的诱导，本研究也发现Ｂ５较ＭＳ，ＬＳ利于怀牛膝叶
片和茎段诱导形成愈伤组织，这可能与 Ｂ５中烟酸含
量较多有关，而烟酸能够起到刺激愈伤组织生长的
作用［１１］。本研究还发现在这３种培养基中ＬＳ有利
于愈伤组织中多糖含量的提高。这表明适宜于愈伤
组织诱导和多糖含量提高的基本培养基是不同的，
要得到高含量ＡＢＰＳ的愈伤组织需要分步进行。
４．２ 碳源对愈伤组织诱导和多糖含量的影响
王晓玲等［１２］用葡萄糖作碳源比蔗糖更有利于
苎麻下胚轴愈伤组织的诱导。本研究也发现有利于
怀牛膝叶片、茎段愈伤组织诱导和茎段愈伤组织中
ＡＢＰＳ含量提高的碳源均为葡萄糖。这表明葡萄在
愈伤组织诱导方面较其他碳源更为有效，其原因可
能是葡萄糖为单糖，较二糖（蔗糖等）更利于细胞吸
收。
４．３ 植物生长调节剂及水解酪蛋白对愈伤组织诱
导和多糖含量的影响
２，４Ｄ是常用的、作用较强的生长素类植物生
长调节剂，其主要作用是诱导愈伤组织的形成、胚状
体的产生等。６ＢＡ，ＴＤＺ同属细胞分裂素类，其主
要作用是促进细胞分裂，与生长素配合使用时，能更
好的诱导愈伤组织的形成［１３］。ＣＨ是多种氨基酸的
混合物，作为有机氮源，对愈伤组织的生长有促进作
用［１４］。本研究中发现这几种因素对怀牛膝叶片和
茎段愈伤组织诱导的影响程度不同，分别为 ２，４
Ｄ＞ＣＨ＞６ＢＡ＞ＴＤＺ和 ＣＨ＞２，４Ｄ＞ＴＤＺ＞６ＢＡ，
其中２ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ与０５～１ｇ·Ｌ－１ＣＨ是诱导
愈伤组织的适宜浓度；刘君等［１５］在草地早熟禾芽愈
伤组织诱导中发现，各因素的影响程度为２，４Ｄ＞
ＣＨ＞６ＢＡ，其中１ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ与１ｇ·Ｌ－１ＣＨ
是其最适浓度。这表明２，４Ｄ与ＣＨ对愈伤组织的
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诱导均有重要的作用，６ＢＡ与 ＴＤＺ则有一定的作
用，它们的影响效应因材料及外植体选择的不同而
又有差异。本研究还发现２，４Ｄ，６ＢＡ与ＴＤＺ对怀
牛膝茎段愈伤组织中 ＡＢＰＳ的含量有重要影响，与
不添加时均有显著差异。
［参考文献］
［１］ 任重伦．怀牛膝研究概况［Ｊ］．基层中药杂志，１９９６，１０（４）：
４６．
［２］ 吕小兰，赖小平，郭 惠，等．牛膝多糖研究进展［Ｊ］．实用临
床医学，２００５，６（２）：１３７．
［３］ ＭａｒｃｏｎｅＭＦ，ＪａｈａｎｉａｖａｌＦ，ＡｌｉｅｅＨ，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｓｅｅｄ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００３，８１
（１）：７．
［４］ ＳｕｎＨＸ．ＡｄｊｕｖａｎｔｅｆｅｃｔｏｆＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｓａｐｏｎｉｎｓｏｎ
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Ｅｆｅｃｔｏｆｍｅｄｉｕｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｎｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｃａｌｉｆｒｏｍＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａ
ＬＩＭｉｎｇｊｕｎ１，２，ＬＩＰｉｎｇ１，３，ＺＨＡＮＧＸｉａｏｌｉ１，ＺＨＡＯＸｉｔｉｎｇ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｅｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；
３．ＺｕｏｊｉｎｍｉｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＧｒｏｕｐ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３０００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｍｅｄｉｕｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｎｔｈｅｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎ
ｃａｌｉｆｒｏｍＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｌｅａｖｅｓａｎｄｓｔｅｍｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｅｘｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｓｉｘｋｉｎｄｓｏｆｆａｃｔｏｒｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｂａｓａｌｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ，ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ，２，４Ｄ，６ＢＡ，ＴＤＺ，ＣＨｏｎｔｈｅｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＡＢＰＳｉｎｃａｌｉｏｎｔｈｅｈｉｇｈ
ｇｒｏｗｔｈｐｏｉｎｔｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｄａｔａｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈｒａｎｇｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｖａｒｉａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｏ
ｌｅａｆ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｍｅｄｉｕｍｏｆｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｗａｓＢ５ｗｉｔｈ２ｍｇ·Ｌ－１２，４Ｄ，０．５ｍｇ·Ｌ－１６ＢＡ，３０ｇ·Ｌ－１ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄ１ｇ·Ｌ－１
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Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｍｅｄｉａｏｆｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｓｔｅｍｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆＡ．ｂｉｄｅｎｔａｔａａｓｅｘｐｌａｎｔｓａｎｄｗｉｔｈａｖｉｅｗ
ｔｏａｎｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｙｔｉｓｓｕｅａｎｄｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａ；ｃａｌｕｓ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ｍｅｄｉｕｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｍｅｔｈｏｄ
［责任编辑 张宁宁］
·９４７·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８