全 文 ：积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肾损伤的保护作用
郑佳佳! 张丽娜! 吴孟娇! 李晓会! 张力*! 万敬员!
,重庆医科大学 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室! 重庆 &$$$#%
*,重庆医科大学 病理生理教研室! 重庆 &$$$##
$摘要%!目的&探讨积雪草苷对盲肠结扎穿孔!-M-BSSNDB@N.1 B1Q AT1-@TCM$ <`E所致小鼠脓毒症诱导的急性肾损伤的影
响) 方法&&( 只昆明小鼠随机分为假手术组&<`E模型组&<`El积雪草苷 $& /D.ZDe治疗组) 记录一般情况及 *& ? 死
亡率$并于手术后 *& ?$试剂盒测血清尿素氮!TCMB1N@C.DM1$G];&肌酐!-CMB@N1N1M$!N1@MCSMTZN14#$:`4#$ 免疫印迹法检测肾脏诱导型一氧化氮合酶!N1QT-N\SM1N@CN-.6NQMO51@?BOM$N;L8蛋白含量$并取肾脏组织
作组织学分析) 结果&与 <`E模型组相比$积雪草苷降低了脓毒性小鼠死亡率$且剂量依赖性地减轻肾脏组织损伤$降低了血
清G];$血清 :`4# 及肾脏中N;L8蛋白含量有关)
$关键词%!脓毒症*积雪草苷*盲肠结扎穿孔*肾损伤
$稿件编号%!*$$7$$$$
$基金项目%!国家自然科学基金项目!)$$$&#)
$通信作者%!!万敬员$副教授$RMS# !$*)#(&($)($U4/BNS#05+B1
2-b/T,MQT,-1
!!脓毒症是由病原微生物及其产物诱导的全身炎
症反应综合症$严重威胁人类的生命) 急性肾损伤
!B-T@MZNQ1M5N10TC5$3J:是脓毒症较普遍而严重的
并发症) 据预测脓毒症诱导的 3J:发病率将随着
人类年龄增加而增加$且伴有脓毒症的 3J:病人死
亡率极高+, ) 而目前对各种肾损伤的治疗仍无有
效措施$因此寻求一种有效的治疗 3J:的药物迫在
眉睫) 积雪草苷!BONB@N-.ONQM属三萜皂苷类化合
物$是中药积雪草的主要活性成分之一) 临床上积
雪草苷多用于伤口愈合的治疗&皮肤病等+*, ) 本实
验针对积雪草苷对炎症有效的特点$观察积雪草苷
对 <`E模型中小鼠脓毒症致急性肾损伤的影响)
!材料
U!药品和试剂!积雪草苷!纯度 r7j$广西昌
洲天然植物开发有限公司$批号 *$$#$*$*G];$
检测试剂盒!德国 GM1QMC公司*G<3蛋白定量试
剂盒!ENMC-M公司*诱导型一氧化氮合酶!N;L8抗
体!3\-B/公司)
U!仪器!)J)$ 型超低温离心机!8ND/B公司*
E3<)$$ 型垂直型电泳槽和湿式电转膜槽!GN.4>BQ
公司*$ 型酶标仪!GN.4>BQ公司)
U&!动物!成年昆明种小鼠$体重 ( k** D$# k(
周龄$由重庆医科大学实验动物中心提供$合格证号
8!方法
U!分组!&( 只昆明种小鼠随机分为 & 组# 假手
术组&<`E模型组&<`El积雪草苷 $& /D.ZDe
干预组$每组 * 只) <`E模型组和 <`El积雪草苷
$& /D.ZD
e组分别于造模前注射 $g* /` 生理
盐水和相应浓度的积雪草苷$共注射 次) 假手术
组除不结扎&穿刺盲肠外$其余操作同 <`E模型组)
U!造模!$g)j戊巴比妥钠腹腔注射麻醉!)$ /D
.ZD
e
$沿腹中线正中作长 S-/切口$开腹后小心
分离盲肠$寻找盲肠与小肠及大肠交界处$然后用 $
号丝线环形结扎盲肠$结扎完毕后应仔细检查保持肠
道通路正常$用 ( 号针头在酒精灯上烧红$在与肠系
膜相对的盲端肠壁浆膜面迅速贯通穿刺一次造 * 个
孔$挤出少许肠内容物后将盲肠放回腹腔$逐层缝合
腹壁切口并即刻背部皮下注射生理盐水 /` 以补充
术中体液丢失) 术后将小鼠分笼饲养$禁食不禁水)
U&!一般情况的观察和 *& ? 死亡率!小鼠造模后
观察其精神状态&行为活动等情况$每 * ? 记录小鼠
死亡情况)
U_!血清中 G];$眼球取血$离心后取血清$按试剂盒说明书操作检测
G];$.*(&.
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U$!血清中 :`4# 检测!*& ? 后摘除眼球取血$离
心后取血清$按照 U`:83试剂盒操作$检测血清 :`4#
水平)
U)!免疫印迹法检测肾组织N;L8蛋白表达!小鼠
造模 *& ?后处死$取 $$ /D左肾上极组织$研磨后
裂解细胞提取蛋白$G<3法蛋白定量) 取蛋白 &$

D上样$8I84E3FU电泳后$转移至硝酸纤维素膜
上$室温下封闭 ?*加入一抗$& h冰箱封闭过夜*
次日脱洗 ) 次$二抗孵育 ?$再脱洗 次后$U<` 显
色$K光片曝光$洗片)
U%!肾组织病理学检查!小鼠于造模 *& ? 处死后
取左肾上极组织$&j多聚甲醛固定后梯度乙醇脱
水&脱钙后石蜡包埋切片$YU染色$光学显微镜! m
&$$下观察肾组织形态变化)
U`!统计学方法!所有数值均采用
#
?p&表示) 应
用 838分析软件对两样本均数进行 !检验) >o
$g$ 为差异具有统计学意义)
&!结果
&U!一般情况!盲肠结扎穿孔后小鼠表现出精神
萎靡&嗜睡&躁动&寒颤&竖毛等$* ? 后更加明显)
打开腹腔可见盲肠肿胀&变黑$发生坏死及粘连*肝
脏充血水肿$与腹腔脏器广泛粘连$还可见黄白色浑
浊脓液或血性带恶臭渗出液)
&U!*& ?内死亡率!与假手术组相比$<`E模型组
小鼠死亡率!$j明显升高$而积雪草苷干预可计
量依赖性地降低 <`E小鼠死亡率$积雪草苷 $&
/D.ZD
e组死亡率分别为 &g%j$*j)
&U&!积雪草苷对血清 G];$假手术组$<` E模型组血清 G];和 升高*相比于模型组$积雪草苷 /D.ZDe干预
组 G];和 o$g$ $且这一
降低 效 应 在 & /D. ZDe 组 中 更 加 显 著
!>o$g$ !表 )
&U_!积雪草苷对血清中:`4#的影响!与假手术组
表 !积雪草苷对小鼠血浆G];$#
?p&$)f#
分组
G];=/D.Q`
e
e
:`4#=1D.`
e
假手术 &g% p)g& $g( p$g$) *#g) pg*
<`E模型 (g% p$g) $g% p$g )7%g# p$g
<`El积雪草苷 /D.ZDe #g( p7g* $g& p$g$( *##g& p%(g)$
<`El积雪草苷 & /D.ZDe )(g& p#g#* $g) p$g$#* #&g7 p&#g%*
!!注#与 <`E模型组相比>o$g$*与 <`El积雪草苷 /D.ZDe组相比*>o$g$)
相比$<`E模型组血清中 :`4# 水平显著升高*而积
雪草苷干预组剂量依赖性地降低血清 :`4# 水平$且
这一效应具有显著性差异!>o$g$!表 )
&U$!积雪草苷对肾脏组织N;L8蛋白表达的影响!
<`E模型组中肾组织 N;L8 蛋白表达明显高于假手
术组*而在积雪草苷干预组 N;L8 在肾脏中的过量
表达被抑制$且在积雪草苷 & /D.ZDe干预组中
抑制性效应更加显著 !图 )
&U)!肾脏组织的病理改变!光镜下假手术组肾小
3,假手术组*G,<`E模型组* <,<`El积雪草苷 /D.ZDe组*
I,<`El积雪草苷 & /D.ZDe组)
图 !积雪草苷对肾脏组织N;L8蛋白含量的影响
球和肾小管结构清晰完整$肾间质未见充血及炎性
细胞浸润) <`E模型组小鼠肾小球体积增大$大量
肾小管上皮细胞肿胀坏死$肾间质有严重充血$并可
见大量炎性细胞浸润*而积雪草苷作用后肾小管坏
死及间质充血减轻$肾脏仅有少量炎性细胞浸润$症
状明显轻于模型组$且这些效应在 <`El积雪草苷
& /D.ZD
e组中更加显著!图 *)
3,假手术组*G,<`E模型组* <,<`El积雪草苷
/D.ZD
e组*I,<`El积雪草苷 & /D.ZDe组)
图 *!积雪草苷减轻肾组织病理改变!YU$m&$$
.)(&.
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_!讨论
在小鼠盲肠结扎穿孔模型中$大量细菌及内毒
素经肠道移位进入血液$激活单核巨噬细胞系统$引
起R;H4
&
$:`4#$释放$进而激发机体一系列的炎症反应$并形成全身
炎症反应综合症$甚至导致多器官功能障碍综合征
的发生) 其病理过程与临床脓毒症患者的病理特征
极其相似$因此 <`E模型是用于筛选治疗或预防脓
毒症致肾损伤药物的经典模型) 有文献报道积雪草
苷具有抗炎的作用$并能有效治疗自身免疫病&肠炎
等+*, ) 然而积雪草苷在脓毒症中的研究尚未见报
道$因此本实验通过复制 <`E动物模型来探究积雪
草苷在脓毒症诱导的急性肾损伤中是否具有保护性
效应及其可能的作用机制)
造模后$<`E模型组死亡率较假手术组显著升
高$而积雪草苷可计量依赖性地降低脓毒性小鼠死
亡率$表明积雪草苷对 <`E小鼠具有保护作用)
G];和 血清中含量高低可一定程度地反映肾功能的变化)
在小鼠 <`E模型中$血清 G];和 高$同时伴随着严重的肾损伤$而当血清 G];和 水平降低时可相应地减轻肾损伤+), ) 本研究中 <`E
模型组血清G];$伴有严重的肾损伤$而积雪草苷干预后血清中
G];$应减轻$提示了积雪草苷在脓毒症致肾损伤中具有
重要保护作用)
:`4# 是一种多效应的促炎细胞因子$主要由单
核细胞$巨噬细胞和内皮细胞等合成$具有启动并维
持炎症反应的功能) 大量的研究表明 :`4# 是肾损
伤的重要细胞因子并在其病理过程中发挥了重要作
用) 在急性肾损伤患者和动物模型中$血清 :`4# 水
平都显著升高+&, ) 而 M`M等发现在小鼠 <`E模型
中+,以及a.?B11MO等发现在脓毒症患者中+#, $循环
中 :`4# 含量降低均能减轻肾损伤) 本研究中 <`E
模型组血清 :`4# 含量明显高于假手术组$积雪草苷
对血清 :`4# 含量表现出明显的剂量依赖性降低作
用$从而对肾损伤发挥了一定的保护性效应)
N;L8是一种重要的炎症介质$在肾脏中持续地
表达于肾小球系膜细胞&单核和巨噬细胞等)
YMM/OZMCZ等发现 N;L8 在脓毒症诱导的 3J:中起
着至关重要的作用$其在脓毒症中的激活可影响肾
脏血液动力学甚至引起过亚硝酸盐相关的肾小管损
伤+%, ) 在脓毒症患者和动物模型中$N;L8 在肾脏中
的表达水平均显著上调$然而 >MQQ5等发现在 <`E
小鼠中选择性抑制 N;L8 表达可显著减轻脓毒症诱
导的肾功能障碍+(47, ) 本研究中 <`E组小鼠肾组织
N;L8含量显著高于假手术组$并伴随着肾组织严重
损伤$然而积雪草苷可剂量依赖性的降低肾组织N;4
L8的表达从而在一定程度上削弱肾脏损伤)
综上所述$积雪草苷对 <`E小鼠脓毒症诱导的
3J:有明显的保护作用$该作用可能与其抑制促炎
因子 :`4# 释放及肾脏 N;L8 表达有关$其具体信号
机制还需进一步探讨)
$参考文献%
+,!XT $` F.ZQM1 ;$ 9B5MT6E>,UdNQM1-MP.C@?MC.SM.PCMB-@NdM
1N@C.DM1 OAM-NMON1 A.S5/N-C.\NBSOMAONO4N1QT-MQ CM1BSAMCN@T\TSBC
-BANSBC5Q5OPT1-@N.1 B1Q @T\TSBCN10TC5+V,,V3/8.-;MA?C.S$
*$$%$ (!## ($%,
+*,!李洪忠$万敬员$张力$等,积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎
的抑制作用+V,,药学学报$*$$%$&*!%##7(,
+),!朱雪琦$王蕾$刘清泉$等g血必净注射液对脓毒症大鼠肾保
护作用的研究+V,,中国危重病急救医学$ *$$#$ ( !#
#($,
+&,! N`T JI$ 3S@/B11 <$ 8/N@OF$ M@BS,8MCT/N1@MCSMTZN14# B1Q N14
@MCSMTZN14( BCMMBCS5\N./BCZMCO.PB-T@MZNQ1M5N10TC5B1Q ACMQN-@
AC.S.1DMQ /M-?B1N-BSdM1@NSB@N.1 N1 -?NSQCM1 T1QMCD.N1D-BCQNB-
OTCDMC5# 3-BOM4-.1@C.SO@TQ5+V,,>$&,
+,! M`MYR$ U/BSBB1Q AC.@M-@OBDBN1O@CM1BSB1Q ?MAB@N-N10TC5N1 /TCN1MOMA@N-AMCN4
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$责任编辑!张宁宁%
.(&.
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