全 文 ：黄连解毒汤有效成分对缺氧／复氧时脑微血管
内皮细胞核因子κＢ的影响
袁拯忠１，朱陵群２，庞 鹤２，单泽松１，王硕仁２，高永红２，牛福玲２
（１．温州医学院 附属第一医院，浙江 温州 ３２５０００；
２．北京中医药大学 东直门医院 中医内科学教育部重点实验室，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧／复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法：
建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧４ｈ复氧１２ｈ损伤模型。用０１２８，００６４，００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷，００２８，
００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷和００２４，００１２，０００６μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱分别作用于损伤的细胞，采用免疫细胞
化学方法和图象定量分析技术检测核因子κＢ（ＮＦκＢ）亚单位 ｐ６５的表达，计算平均吸光度和平均面积，比较 ＮＦ
κＢ蛋白表达的变化，计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较ＮＦκＢ核移位的变化。结果：模型组
ＮＦκＢ蛋白表达和核移位显著高于正常组（Ｐ＜００１）。所有给药组的平均吸光度值低于模型组，但差异无统计学
意义。所有给药组的平均面积均低于模型组（Ｐ＜００１）。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组
（Ｐ＜００１，Ｐ＜００１）。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组（Ｐ＜００１）。结论：栀子苷、黄芩苷和
小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧／复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞，其保护机制之一是抑制 ＮＦκＢ
蛋白表达和核移位。
［关键词］ 脑微血管内皮细胞；缺氧／复氧；核因子κＢ；栀子苷；黄芩苷；小檗碱
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０６０６６００５
［收稿日期］ ２００７０５１２
［基金项目］ 国家人事部留学回国人员科技活动基金 （２００２
年）；教育部科学技术研究重点项目 （０３０３０）
［通讯作者］ 王硕仁，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１３１９６，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒ
ｗａｎｇ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
中风病错综复杂的临床表现与脑缺血再灌注
损伤后的炎症反应密切相关。核因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒ
ｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦκＢ）调控着与炎症反应密切相关
的多种因子和黏附分子的表达。所以 ＮＦκＢ被认
为是脑缺血再灌注炎症机制的核心调控因素和血管
内皮细胞受损的始动机制之一。本实验采用免疫细
胞化学的方法，原位观察 ＮＦκＢ亚单位 ｐ６５的变
化，探讨黄连解毒汤有效成分栀子苷、黄芩苷和小檗
碱对 ＮＦκＢ活化、蛋白表达及其核转录的影响，研
究其作用机制。
１ 材料
１．１ 动物 ＳＤ大鼠，雄性，体重６０～７０ｇ，北京维
通利华公司提供，许可证号ＳＣＸＫ（京）２００２０００３。
１．２ 试剂 ＤＭＥＭ培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司）。胎牛
血清（北京元亨圣马生物技术研究所，批号０４０３１６）。
明胶、胶原酶Ⅰ、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸 （Ｓｉｇｍａ
公司）。ＰＢＳ，Ⅷ因子相关抗原抗体、过氧化物酶标记
的链霉卵白素抗兔染色试剂盒（北京中杉金桥有限公
司）。ＮＦκＢｐ６５兔多克隆抗体（美国 Ｓａｎｔａｃｒｕｚ公
司，北京中杉金桥有限公司代理，ＳＣ８００８）。
１．３ 仪器 ＭＴ－２型 ＯＬＹＭＰＵＳ倒置显微镜（日
本）。ＢＸ６０型 ＯＬＹＭＰＵＳ荧光显微镜（日本）。日
本电子公司 ＳＥＭ－６０００Ｆ型电镜（日本）。ＮＡＰ
ＣＯ５４１０型二氧化碳培养箱（美国）。ＪＪＴ－１３００型
超净工作台（北京）。ＬＤ４－２型落地式电子离心机
（北京）。ＨＲ－８８０Ｍ型微波炉（山东）。
１．４ 药物 栀子苷（批号 １１０７４９２００３０９，纯度
９９％）、黄芩苷（批号１１０７１５２００２１２，纯度９９％）、小
檗碱（批号１１０７１３２００２０８，纯度９９％）均由中国药
品生物制品检定所提供。无水乙醇（国产分析纯）。
小檗碱溶解于无水乙醇，黄芩苷、栀子苷溶解于
ＤＭＥＭ培养基，然后３种单体在缺氧给药时用Ｋｒｅｂｓ
溶液稀释到实验需要的浓度，而在复氧给药时用
ＤＭＥＭ培养基稀释到实验需要的浓度。乙醇浓度
控制在１％以内［１］。
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２ 方法
２．１ 脑微血管内皮细胞的培养和鉴定［１］ ４只
６０～７０ｇ大鼠，乙醚麻醉后消毒断头取脑。置于含
ＤＨａｎｋ’ｓ的培养皿中，去除软脑膜和血管。取大脑
皮质用剪刀剪碎后，以玻璃匀浆器进行匀浆。将匀
浆液过１００目筛网，收集滤液。过２００目筛网，收集
筛网上的微血管组织。将上述含有微血管组织的培
养液吸入离心管中，１５００ｒ·ｍｉｎ－１室温离心，１５
ｍｉｎ。弃上清，向沉淀中加入 ０２％胶原酶Ⅰ ＋
０１％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）５ｍＬ消化２０ｍｉｎ，其间
观察微血管段的消化情况。再用上述条件离心，弃
上清，细胞沉淀用培养基洗２次，加入含内皮细胞生
长因子（ＥＣＧｓ）和３０％胎牛血清的完全培养液６ｍＬ
重悬，接种在预先以２％明胶包被的培养瓶中进行
原代培养，４８ｈ后第１次换液。在原代培养过程中，
将微血管内皮细胞团以外的细胞用机械划除法去除
而纯化细胞。待细胞基本汇合后，以０１％胰酶 ＋
０１％乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）消化２０ｍｉｎ，传代培养
２周，以 ４～５代细胞用于实验。倒置显微镜下观
察：传代培养后观察细胞呈长梭形，汇合状态呈单层
“铺路石”状。Ⅷ因子抗体间接免疫荧光鉴定阳性。
扫描电镜观察到细胞表面有短粗而丰富的微绒毛，
证明是脑微血管内皮细胞。
２．２ 建立缺氧／复氧损伤模型［１］ 大鼠脑微血管
内皮细胞按１×１０５个／ｍＬ种植于９６孔板中，每孔
１００μＬ，第 ２天进行造模。以 ＷａｎｄｏｎｇＺｈａｎｇ［２］方
法稍加改进。造模以 ＰＢＳ洗细胞 ２遍，换无糖的
Ｋｒｅｂｓ溶液（ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ＮａＣｌ１１９，ＫＣｌ４７，ＫＨ２ＰＯ４
１２，ＮａＨＣＯ３２５，ＣａＣｌ２２５，ＭｇＣｌ２１）置于自制的３７
℃密闭缺氧罐中，持续通入９５％ Ｎ２＋５％ＣＯ２，流量
保持在０５Ｌ·ｍｉｎ－１。再复氧时将细胞换无血清的
ＤＭＥＭ培养液置正常培养箱中（空气 ＋５％ＣＯ２）。
缺氧时间为４ｈ，再复氧时间为１２ｈ。缺氧／复氧损
伤后，倒置显微镜下可见大量微血管内皮细胞变圆
脱落，漂浮在培养基中，贴壁细胞变形、皱缩呈团簇
状，界限不清，细胞间隙增宽，某些融合部分断裂，较
正常细胞有明显的改变。给药组在缺氧和复氧前加
入不同剂量的栀子苷、黄芩苷和小檗碱。对照组换
用无血清ＤＭＥＭ培养基在正常培养箱中培养１６ｈ。
２．３ 分组［１］ 正常组，模型组，０１２８，００６４，
００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷组，００２８，００１４，０００７
μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷组和 ００２４，００１２，０００６μｍｏｌ
·ｍＬ－１小檗碱组。
２．４ 免疫细胞化学染色 参照北京中杉金桥生物
技术有限公司ＳＰ法试剂盒说明书：固定好的细胞玻
片，室温放置３０ｍｉｎ，加入 ＰＢＳ洗涤 ３ｍｉｎ×３次，
３％ Ｈ２Ｏ２去离子水室温避光孵育１５ｍｉｎ，蒸馏水冲
洗，ＰＢＳ浸泡 ５ｍｉｎ，微波修复 ３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤 ３
ｍｉｎ×３次，滴加封闭血清室温孵育１５ｍｉｎ，倾去，滴
加１∶１００稀释的 ＮＦκＢｐ６５兔多克隆抗体，４℃过
夜，ＰＢＳ洗涤３ｍｉｎ×３次，滴加生物素标记的的羊
抗兔ＩｇＧ，３７℃孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤３ｍｉｎ×３次，
滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，３７℃孵育１５
ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤３ｍｉｎ×３次，ＤＡＢ显色工作液在光镜
下显色５ｍｉｎ，自来水充分冲洗，梯度乙醇脱水，二甲
苯透明，中性树脂封片。
２．５ 图象分析 在 ＢＸ６０型 ＯＬＹＭＰＵＳ显微镜下，
选择２０×物镜，利用ＳＰＯＴⅡ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ．
Ｉｎｃ软件成相，用 ＭｅｔａＭｏｒｐｈＵｎｉｖｅｒｓａｌｉｍａｇｉｎｇｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎ软件进行图象分析：阳性细胞（细胞胞核和
胞浆着色的细胞为阳性细胞）表达的平均面积和平
均吸光度（Ａ）；计算核移位百分率（细胞核着色的细
胞在所有细胞中所占的百分数）；计算细胞核与细
胞浆的透光度比值。
２．６ 统计学处理 实验数据以 珋ｘ±ｓ表示，ＳＰＳＳ
１００统计软件进行数据统计和方差分析检验。
３ 结果
３．１ 细胞形态学观察 倒置显微镜下可见：加药各
组细胞与模型组比较，仅见少量细胞变圆、脱落，漂
浮在培养基中，细胞间隙稍增宽。贴壁细胞的形态
与正常细胞基本保持相似，但是每种药物的不同浓
度组间细胞形态差异不明显。见图１。
３．２ 不同剂量药物对脑微血管内皮细胞 ＮＦκＢ
ｐ６５蛋白表达的影响 细胞形态学观察：各组细胞
胞浆均可见棕黄色颗粒。模型组大部分细胞胞核颜
色深染，有些胞核颜色深于胞浆。正常组细胞胞核
几乎没有染色。各给药组只有小部分细胞胞核深
染，大部分细胞胞核无着色。
模型组的Ａ值显著高于正常组，差异有统计学
意义（Ｐ＜００１）。各给药组的 Ａ值与模型组相比，
有下降的趋势而差异无统计学意义。各给药组的Ａ
值较正常组显著升高，差异有统计学意义（Ｐ＜
００１）。模型组的平均面积显著高于正常组，差异
有统计学意义（Ｐ＜００１）。与模型组相比，各给药
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图１ 各组细胞的形态学观察（×１００）
Ａ．模型组；Ｂ．正常组；Ｃ．栀子苷０１２８μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｄ．栀子苷００６４μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｅ．栀子苷００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１组；
Ｆ．黄芩苷００２８μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｇ．黄芩苷００１４μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｈ．黄芩苷０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｉ．小檗碱００２４μｍｏｌ·ｍＬ－１组；
Ｊ．小檗碱００１２μｍｏｌ·ｍＬ－１组；Ｋ．小檗碱０００６μｍｏｌ·ｍＬ－１组
组的平均面积均低，且有统计学意义（Ｐ＜００５，Ｐ＜
００１）。除０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷组的平均面积
高于正常组且差异有统计学意义（Ｐ＜００５）外，其
余各给药组与正常组无显著差异。见表１。
表１ 不同剂量药物对脑微血管内皮细胞ＮＦκＢｐ６５
蛋白表达的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
分组
剂量
／μｍｏｌ·ｍＬ－１
Ａ
平均面积
／μｍ２
模型 － ００７７±０００５ ０４０９±００６１
正常 － ００６８±０００１２） ０２０８±００７３２）
栀子苷 ０１２８ ００７２±０００１４） ０２０４±００６３２）
００６４ ００７１±０００１４） ０２２７±００４３２）
００３２ ００７４±０００２４） ０２２２±００５２２）
黄芩苷 ００２８ ００７３±０００１４） ０２１０±００４２２）
００１４ ００７６±０００１４） ０３０２±００５７１）
０００７ ００７６±０００１４） ０３１９±００５１１，３）
小檗碱 ００２４ ００７３±０００２４） ０２８３±００３５２）
００１２ ００７５±０００２４） ０２８０±００４３２）
０００６ ００７３±０００１４） ０２３７±００３７２）
注：与模型组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与正常组比３）Ｐ＜
００５，４）Ｐ＜００１
３．３ 不同剂量药物对脑微血管内皮细胞 ＮＦκＢ核
移位的影响 模型组核移位百分率显著高于正常组
和各个给药组（Ｐ＜００１），而各给药组的核移位百
分率也都高于正常组（Ｐ＜００１）。细胞核与细胞浆
的吸光度（Ａ）的比值是模型组最低，正常组和各给
药组与之相比均升高，差异有统计学意义（Ｐ＜
００１），而各给药组和正常组之间无显著差异。见
表２。
表２ 不同剂量药物对脑微血管内皮细胞ＮＦκＢ核
移位的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
分组
剂量
／μｍｏｌ·ｍＬ－１
核移位
／％
Ａ
模型 － ０８１７±００６２ ０９７１±００１９
正常 － ００５９±００３１１） １０１８±００２０１）
栀子苷 ０１２８ ０１６２±００１６１，２） １０２８±００１４１）
００６４ ０１４６±００２３１，２） １０２４±００１５１）
００３２ ０１４１±００１２１，２） １０２６±００１８１）
黄芩苷 ００２８ ０１６９±００２０１，２） １０２８±００１０１）
００１４ ０１４９±００１３１，２） １０２４±００１３１）
０００７ ０１４２±００１７１，２） １０３０±００１８１）
小檗碱 ００２４ ０１３２±００１９１，２） １０３０±００１２１）
００１２ ０１５２±００２２１，２） １０２８±００２３１）
０００６ ０１６０±００２５１，２） １０２３±００２４１）
注：与模型组比１）Ｐ＜００１；与正常组比２）Ｐ＜００１
４ 讨论
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ＮＦκＢ是由２种 Ｒｅｌ家族蛋白构成的二聚体，
Ｒｅｌ家族成员包括ｐ５０，ｐ６５，ＲｅｌＢ，ＣＲｅｌ及 ｐ５２，这些
蛋白质均具有能与 ＤＮＡ结合的特性［３］。ＮＦκＢ二
聚体中，ｐ６５含有反式激活区，在启动基因中起主要
作用［４］，并且在细胞中最普遍，表达最丰富。当细
胞受到缺血再灌注等多种外界信号刺激时 ＮＦκＢ
开始激活。ＮＦκＢ在活化并移位后才可以高效诱导
多种细胞因子、黏附分子和趋化因子等的表达，同时
对参与炎症反应放大与延续（即级联瀑布效应）的
多种酶的基因表达也具有重要的调控作用［５］。脑
缺血再灌注损伤后，ＮＦκＢ活化和核转录［６］，致使多
种黏附分子表达增加［７］，白细胞在黏附分子的介导
下引发炎症级联反应。研究发现，包括 ＩＣＡＭ１和
ＶＣＡＭ１在内的多种黏附分子的基因中均含有转录
因子ＮＦκＢ的连接部位，并通过ＮＦκＢ调节基因表
达［８］。
本研究结果表明，正常大鼠脑微血管内皮细胞
ＮＦκＢ表达较弱，主要位于细胞浆，只有极少部分转
位至细胞核，免疫细胞化学的方法“原位”显示了生
理情况下内皮细胞ＮＦκＢ低表达、低活化和低活性
的“三低”状态。这种“三低”状态可能是 ＮＦκＢ维
持其正常生理功能，调控体内多个靶基因的表达，参
与众多生理过程所必需的。但是在缺氧／复氧损伤
后ＮＦκＢ蛋白表达明显升高，这与相关研究的结果
一致［９１１］。适当浓度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱不
但可以明显抑制 ＮＦκＢ活化后蛋白的高表达而且
能明显抑制ＮＦκＢ移位到胞核中，从而抑制核转录
过程。这一结果提示：栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄
连解毒汤有效成分保护脑微血管内皮细胞的机制与
抑制ＮＦκＢ活化、蛋白表达和核转录的一系列过程
有关。
［参考文献］
［１］ 袁拯忠，朱陵群，庞 鹤，等．黄连解毒汤有效成分对缺氧／复
氧时脑微血管内皮细胞的保护作用［Ｊ］．中国中药杂志，
２００７，３２（３）：２４９．
［２］ ＺｈａｎｇＷＤ，ＳｍｉｔｈＣａｔｈｅｒｉｎｅ，ＳｈａｐｉｒｏＡｎｔｈｏｎｙ，ｅｔａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｎｈｕｍａｎｃｅｒｅｂｒｏｍｉｃｒｏｖａｓｃｕ
ｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓａｎｄａｓｔｒｏｃｙｔｅｓｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｓｉｍｕｌａｔｅｄｉｓｃｈｅ
ｍｉａｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１０１（２）：１４８．
［３］ ＣｈｅｎＦ，ＣａｓｔｒａｎｏｖａＶ，ＳｈｉＸ．Ｎｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｒｏｌｅｏｆｎｕ
ｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢｉｎｃｅｌｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，２００１，
１５９（２）：３８７．
［４］ ＳｃｈｍｉｔｚＭＬ，ＢａｅｕｅｒｌｅＰＡ．Ｔｈｅｐ６５ｓｕｂｕｎｉｔｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒ
ｔｈｅｓｔｒｏｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＮＦｋａｐｐａＢ［Ｊ］．
ＥＭＢＯＪ，１９９１，１０（１２）：３８０５．
［５］ ＧｏｅｂｅｌｅｒＭ，ＧｉｌｉｔｚｅｒＲ，ＫｉｌｉａｎＫ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈ
ｗａｙｓｒｅｇｕｌａｔｅＮＦＫａｐｐａＢｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｎｏ
ｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｒｌｇｅｎｅｉｎｐｒｉｍａｒｙｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ
［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００１，９７（１）：４６．
［６］ 田 晔，万 琪，刘勇红，等．核因子κＢ在原代神经细胞缺血
再灌注的表达［Ｊ］．第四军医大学学报，２００３，２４（７）：５９７．
［７］ ＳｔｅｐｈｅｎｓｏｎＤ，ＹｉｎＴ，ＳｍａｌｓｔｉｇＥＢ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ
ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢｉｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｎｅｕｒｏｎｓａｆｔｅｒｆｏｃａｌｃｅｒｅｂｒａｌ
ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．ＪＣｅｒｅｂＢｌｏｏｄＦｌｏｗＭｅｔａｂ，２０００，２０（３）：５９２．
［８］ ＫｉｍＣＤ，ＫｉｍＹＫ，ＬｅｅＳＨ，ｅｔａｌ．Ｒｅｂａｍｉｐｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｎｅｕｔｒｏ
ｐｈｉｌａｄｈｅｓｉｏｎｔｏｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
ｃｅｌｓｖｉａｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＪＰｈａｒ
ｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，２０００，２９４（３）：８６４．
［９］ ＢｅｒｔｉＲ，ＷｉｌｉａｍｓＡＪ，ＭｏｆｅｔＪＲ，ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅ
ＲＴＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈ
ｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＣｅｒｅｂＢｌｏｏｄＦｌｏｗ
Ｍｅｔａｂ，２００２，２２（９）：１０６８．
［１０］ ＳｈｅｎＷ，ＺｈａｎｇＣ，ＺｈａｎｇＧ．ＮｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｓ
ｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＮＭＤＡａｎｄｎｏｎＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄＬｔｙｐｅｖｏｌｔａｇｅ
ｇａｔｅｄＣａ２＋ｃｈａｎｎｅｌｆｏｌｏｗｉｎｇｓｅｖｅｒｅｇｌｏｂａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｒａｔｈｉｐｐｏ
ｃａｍｐｕｓ［Ｊ］．ＢｒａｉｎＲｅｓ，２００２，９３３（１）：２３．
［１１］ ＳａｎｔｉｚｏＲＡ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＳ，ＹｅＳ，ｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｏｎ
ｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｄｈｅｓｉｏｎａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｆｏｒｅｂｒａｉｎｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，
２０００，３１（９）：２２３１．
ＥｆｅｃｔｏｆｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＨｕａｎｇｌｉａｎＪｉｅｄｕｄｅｃｏｃｔｉｎｇｏｎＮＦκＢ
ｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄ
ｂｙｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ
ＹＵＡＮＺｈｅｎｇｚｈｏｎｇ１，ＺＨＵＬｉｎｇｑｕｎ２，ＰＡＮＧＨｅ２，ＳＨＡＮＺｅｓｏｎｇ１，ＷＡＮＧＳｈｕｏｒｅｎ２，ＧＡＯＹｏｎｇｈｏｎｇ２，ＮＩＵＦｕｌｉｎｇ２
（１．ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＤｏｎｇｚｈｉｍｅｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，
ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
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Ｍａｒｃｈ，２００８
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅｏｎｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎ
ａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｏｄｅｌｏｆｈｙｐｏｘｉａｆｏｕｒｈｏｕｒｓａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎ
ａｔｉｏｎｔｗｅｌｖｅｈｏｕｒｓｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅｉｎｊｕｒｅｄｃｅｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ（０１２８，
００６４，００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１），ｂａｉｃａｌｉｎ（００２８，００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１）ａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅ（００２４，００１２，０００６μｍｏｌ·
ｍＬ－１）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ６５ｓｕｂｕｎｉｔｏｆＮＦκＢｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｉｍａｇｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌ
ｙｓｉｓ．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｅａｎｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙａｎｄｍｅａｎａｒｅａ．ＴｈｅｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＮＦκＢ
ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｓａｎｄｒａｔｉｏｓｏｆｌｉｇｈｔｔｒａｎｓｍｉｔａｎｃｅｏｆｃｙｔｏｐｌａｓｍａｎｄｃｅｌｎｕｃｌｅｕｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ｂｏｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＮＦκＢｏｆｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄ
（Ｐ＜００１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｍｅａｎｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙｏｆａｌｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｔｈｅｓｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉ
ｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｍ．Ａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｍｅａｎａｒｅａｏｆａｌｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜
００１）．Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆａｌｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｉｓｎｏｔｏｎｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｂｕｔｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔ
ｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒａｔｉｏｓｏｆｌｉｇｈｔｔｒａｎｓｍｉｔａｎｃｅｏｆｃｙｔｏｐｌａｓｍａｎｄｃｅｌｎｕｃｌｅｕｓｏｆａｌ
ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｄ（Ｐ＜００１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｅｄｔｈａｔｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅｃｏｕｌｄ
ｐｒｏｔｅｃｔｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｉｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｉｎｊｕｒｙ．Ｏｎｅｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｌｉｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ
ｂｏｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＮＦκＢ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ；ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ；ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ；ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ；ｂａｉｃａｌｉｎ；
ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０６１０
［基金项目］ 国家科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩＯ６Ａ２００９）
［通讯作者］ 姚新生，Ｔｅｌ：（０２０）８５２２５８４９，Ｅｍａｉｌ：ｙａｏｘｉｎｓｈｅｎｇ＠ｖｉｐ．ｔｏｍ．ｃｏｍ；栗原博，Ｔｅｌ：（０２０）８５２２１３５２，Ｅｍａｉｌ：ｈｉｒｏｓｈｉ＿ｋｕｒｉｈａｒａ＠
１６３．ｃｏｍ．
广东凉茶颗粒对拘束负荷诱发小鼠应激性
肝损伤的保护作用
宝 丽１，姚新生１，２，何蓉蓉１，栗原博２
（１．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 １１００１６；
２．暨南大学 中药及天然药物研究所，广东 广州 ５１０６３２）
［摘要］ 目的：研究广东凉茶颗粒对拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤的保护作用。方法：将实验小鼠随机分
成正常对照组、拘束模型组、维生素Ｃ２５０ｍｇ·ｋｇ－１给药组、广东凉茶颗粒５００，２５０ｍｇ·ｋｇ－１给药组。１８ｈ拘束负
荷后诱发小鼠应激性肝损伤，分别用赖氏法测定小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）活性，硫代巴比妥酸法测定肝
组织和血浆丙二醛（ＭＤＡ）水平，ＨＰＬＣ法测定谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量，比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）活
性、谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）活性，Ｇｒｉｅｓｓ化学法测定一氧化氮（ＮＯ）水平和荧光酶标仪测定抗氧化能力指数
（ＯＲＡＣ）。结果：与拘束负荷模型组相比，广东凉茶颗粒可以明显降低因拘束负荷引起的小鼠血浆 ＡＬＴ活性
（９２７５±１９１ｖｓ３９２９±２５６，３２６９±１４６）Ｕ·Ｌ－１，保护拘束负荷诱发的应激性肝损伤。此外，广东凉茶颗粒有
效地提高应激小鼠肝组织中ＯＲＡＣ指数、ＧＳＨ含量、ＧＳＨＰＸ及ＧＳＴ活性，降低ＭＤＡ和 ＮＯ水平。结论：广东凉茶
颗粒对拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤具有一定的保护作用，其作用机制可能部分来自于减少拘束负荷小鼠氧化
应激水平和改善组织脂质过氧化过程。
·４６６·
第３３卷第６期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ６
Ｍａｒｃｈ，２００８