全 文 :酸碱对药大黄与附子在大黄附子汤中配伍的
化学研究
段秀俊,裴妙荣,裴香萍
(山西中医学院 中药系,山西 太原 030024)
[摘要] 目的:考察酸碱对药大黄与附子在大黄附子汤中配伍后酸、碱性成分的变化情况。方法:采用高效液相色
谱法对大黄、附子单味药提取液、大黄附子对药提取液及全方提取液中蒽醌类成分和乌头生物碱类成分的提取量进行了测
定。结果:对大黄而言,蒽醌类成分的提取量随着单药、对药及全方的配伍变化,水煎滤过、水煎离心逐渐减低,乙醇回
流蒽醌类成分的提取总量逐渐升高。水煎煮单药与对药、对药与全方之间的变化趋势均明显。对附子而言,水煎煮只检测
到单酯型乌头生物碱,乙醇提取既可检测到单酯型乌头生物碱,又可检测到双酯型乌头生物碱;乌头生物碱的提取量随着
单药、对药及全方的配伍变化,水煎滤过、水煎离心逐渐减低,乙醇回流变化不明显;水煎煮单药与对药、对药与全方之
间的变化趋势均明显。结论:大黄、附子单煎和乙醇回流、大黄、附子对药煎煮或和乙醇回流、大黄附子汤全方煎煮和乙
醇回流,酸、碱性成分的提取量发生有规律的变化。
[关键词] 大黄;附子;大黄附子汤;酸碱对药;配伍化学
[收稿日期] 20090000
[基金项目] 国家自然科学基金项目 (30472125)
[通信作者] 裴妙荣,教授。Tel:(0351)2272180,Fax:(0351)
2272269,Email:peimr602@163.com
附子伍大黄,源于张仲景的 《金匾要略·腹
满·寒痛·宿食病脉证治第十》,二者在方剂中经
常配伍使用,如大黄附子汤,温脾汤、附子泻心
汤、附子鳖甲汤等方剂的组成均有大黄和附子。大
黄主要含有酸性的蒽醌类成分,附子主要含有乌头
生物碱类成分,它们是一对酸碱对药。徐氏等曾采
用紫外分光光度法研究了大黄对附子的解毒作用,
结果为在一定范围内,大黄对附子的解毒作用随着
大黄剂量的增加而增加[1];他们还曾采用紫外分
光光度法研究过大黄附子汤中诸药的不同组合及煎
法对乌头碱含量的影响,结果为大黄能佐制附子的
毒性,细辛对乌头碱的含量无影响[2];另有人也
曾研究过大黄附子或大黄附子汤配伍蒽醌类成分含
量变化情况[34]。为深入了解含酸碱对药方剂酸、
碱性成分的配伍变化规律性,本研究系统研究了大
黄与附子在大黄附子汤中蒽醌类成分及乌头生物碱
类成分的配伍变化情况。
1 材料
Waters515系列高效液相色谱仪;2996二极管
阵列检测器;M32色谱工作站。大黄为蓼科植物掌
叶大黄RheumpalmatumL.的干燥根及根茎、购自
四川省五块石药材市场;附子为毛茛科植物乌头
AconitumcarmicaeliDebx.的子根,采自四川省江
油县;细辛为马兜铃科植物北细辛 Asarumhetero
tropoidesFr.Schmidtvar.mandshuricum(Maxim.)
Kitag.的根及根茎,由辽宁中医药大学贾天柱教
授提供。以上药材均由山西中医学院裴香萍老师鉴
定为正品。芦荟大黄素 (批号 110795200605)、
大黄酸 (批号 0757200206)、大黄素 (批号
110756200110)、大黄酚 (批号 110796200310)、
大黄素甲醚 (批号 110758200408)、乌头碱 (批
号 110720200410)、新乌头碱 (批号 110799
200404)、次乌头碱 (批号110798200404)、甘草
酸单铵盐 (批号110731200510)等化学对照品购
自中国药品生物制品检定所。色谱测定用水为重蒸
水,甲醇为色谱纯,其他所用试剂均为分析纯。
2 方法
实验发现,水提取液和乙醇提取液均可检测到
蒽醌类成分。由于煎煮时发生水解,水提取液中只
可检测到单酯类乌头生物碱,检测不到双酯类乌头
生物碱,而乙醇提取液中既可检测到单酯类乌头生
物碱,还可检测到双酯类乌头生物碱。故建立了蒽
醌类成分及两类乌头生物碱的检测方法。
2.1 大黄附子汤配伍研究提取液的制备
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按大黄附子汤处方比例 (大黄、附子、细辛
质量比为3∶3∶1)[5],精密称取大黄、附子单味
药、大黄与附子对药、大黄附子汤全方,分别加水
煎煮2次,一部分提取液双层纱布滤过,作为水煎
煮液,一部分提取液经离心处理,作为水煎离心
液。精密称取单味药、对药及全方,分别加 95%
乙醇回流提取2次,每次1h,作为乙醇提取液。
2.2 蒽醌类成分的含量测定方法
2.2.1 色谱条件[69]
色谱柱HypersilBDSC18(46mm×200mm,5
μm);流动相甲醇01%磷酸 (80∶20);流速10
mL·min-1;检测波长254nm;柱温 室温。
2.2.2 对照品溶液的配制
精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄
酚、大黄素甲醚对照品,分别加甲醇制成 0056,
0046,0056,006g·L-1的溶液,摇匀,045
μm滤膜过滤后作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
分别取相当于大黄15g的上述水提取液,浓
盐酸调pH至2,水浴水解1h,放冷,二氯甲烷萃
取5次,第1次50mL,第2~5次40mL,二氯甲
烷液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶
内,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为检测总蒽醌的
水煎液与水煎离心液的供试品溶液;浓盐酸调 pH
至2后不水解直接萃取制备检测游离蒽醌的供试品
溶液。分别取相当于大黄 15g的上述乙醇提取
液,蒸干,残渣加水转移至分液漏斗中,同上制备
检测总蒽醌与游离蒽醌乙醇提取液的供试品溶液。
2.2.4 方法学考察
以检测总蒽醌类成分的大黄附子汤水煎液供试
品溶液作为方法学考察的供试品溶液。实验对线性
范围、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等方
法学指标进行了考察。其中芦荟大黄素在00070
~704μg、大黄酸在00053~528μg、大黄素
在00052~516μg、大黄酚在 00052~522
μg、大黄素甲醚在00029~294μg内均呈良好
的线性,相关系数分别为 09995,09993,
09992,09994,09993,回归方程的处理采用
了加权最小二乘法;5种蒽醌类成分精密度试验
RSD 分 别 为 17%,16%,18%,15%,
18%;12h稳定性试验 RSD分别为 11%,
11%,14%,10%,13%;重复性试验 RSD
分别为 18%,14%,11%,15%,10%;芦
荟大黄素平均回收率为10106%,RSD14%;大
黄酸平均回收率为 9881%,RSD23%;大黄素
平均回收率为 9870%,RSD21%;大黄酚平均
回收率为10033%,RSD19%;大黄素甲醚平均
回收率为9832%,RSD22%。
2.3 乌头生物碱类成分的含量测定方法
2.3.1 色谱条件[1012]
HypersilBDSC18柱 (46mm×150mm,5
μm);检测波长230nm;流速10mL·min-1;柱
温室温;其中双酯型乌头生物碱的流动相甲醇水
(65∶35),水中含008%三乙胺;单酯型乌头生物
碱的流动相甲醇水 (42∶58),水中含02%三乙
胺、03%冰醋酸。
2.3.2 对照品溶液的配制
精密称取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对照
品,分别加甲醇制成028,040,022g·L-1的
溶液,摇匀,045μm滤膜过滤后作为对照品溶
液。
2.3.3 供试品溶液的制备
分别取相当于附子30g的上述水提液,加浓
盐酸调 pH至 2,用乙醚萃取 2次,每次 50mL,
弃去乙醚液,水层用浓氨水调pH至10,用乙醚萃
取4次,第1次50mL,以后每次40mL,合并乙
醚液,蒸干,残渣加二氯甲烷甲醇 (70∶30)溶
解并转移至5mL量瓶内,加二氯甲烷甲醇 (70∶
30)稀释至刻度,摇匀,作为水煎液与水煎离心
液的供试品溶液;分别取相当于附子30g的上述
乙醇提取液,蒸干,残渣加水转移至分液漏斗中,
同法萃取制备乙醇提取液的供试品溶液。
2.3.4 方法学考察结果
以检测乌头生物碱的大黄附子汤乙醇回流供试
品溶液及水煎滤过供试品溶液分别作为双酯型乌头
生物碱及单酯型乌头生物碱方法学考察的供试品溶
液。
2.3.4.1 双酯型乌头生物碱 实验对线性范
围、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等方法
学指标进行了考察。其中乌头碱在00504~1008
μg、新乌头碱在03008~6016μg、次乌头碱在
01024~2048μg内呈良好线性,相关系数分别
为09996,09995,09996;3种乌头类生物碱
精密度试验RSD分别为19%,11%,10%;24
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h稳定性试验 RSD分别为 13%,10%,15%;
重复性试验RSD分别为11%,23%,19%;乌
头碱平均回收率为 9718%,RSD21%;新乌头
碱平均回收率为10142%,RSD18%,次乌头碱
平均回收率为9946%,RSD21%。
2.3.4.2 单酯型乌头生物碱 由于未取得单酯
型乌头生物碱的化学对照品,故采用新乌头碱作为
外标参照物考察了稳定性与重复性。供试品溶液在
24h内稳定性良好,RSD分别为单酯型新乌头碱
21%、单酯型乌头碱 12%、单酯型次乌头碱
11%;重复性试验 RSD分别为单酯型新乌头碱
11%、单酯型乌头碱 20%、单酯型次乌头碱
22%。
3 配伍研究测定结果
3.1 大黄、附子单味药、大黄附子对药及大黄附
子汤全方水煎液测定结果
游离蒽醌、总蒽醌及单酯型乌头生物碱类成分
的提取量随着单药、对药、全方的配伍变化,水煎
液及水煎离心液降低趋势均明显 (见表1,2)。
对药煎煮离心液和全方煎煮离心液较对药煎煮
液和全方煎煮液中蒽醌类成分及单酯型乌头生物碱
类成分的提取量明显减少 (见表1,2)。
表1 水煎煮蒽醌类成分提取量 mg
处理方法 配伍方式 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 总计
水煎液游离蒽醌 单药 1319 2189 1593 1553 1072 7726
对药 1118 1751 1509 1419 1016 6813
全方 0803 1634 1179 0830 0436 4882
水煎离心游离蒽醌 对药 0997 1478 0988 1373 0884 5720
全方 0570 1437 0742 0302 0261 3312
水煎液总蒽醌 单药 3558 2426 4105 3883 1982 15954
对药 2875 2096 3524 3491 1957 13943
全方 2285 1882 2577 1849 0952 9545
水煎离心总蒽醌 对药 2306 1811 2614 2106 1332 10169
全方 2089 1735 2370 1583 0857 8634
表2 水煎煮单酯型乌头生物碱提取量 mg
处理方法
配伍
方式
新乌头
碱型
乌头
碱型
次乌头
碱型
总计
水煎液 单药 1244 0412 0612 2268
对药 0973 0285 0266 1524
全方 0766 0198 0146 1110
水煎离心 对药 0755 0234 0204 1193
全方 0595 0150 0143 0888
3.2 大黄、附子单味药、大黄附子对药及大黄汤
全方乙醇回流提取测定结果
游离蒽醌及总蒽醌提取量随着单药、对药、全
方的配伍变化有所升高,但变化不明显。且乙醇回
流蒽醌类成分的提取量均不及相应的水煎煮 (见表
3,4)。
单酯型乌头生物碱类成分提取量均随着单药、
对药、全方的配伍变化逐渐降低,双酯型乌头生物
碱类成分则逐渐升高 (见表3,4)。
表3 乙醇提取蒽醌类成分提取量 mg
测定类型 配伍方式 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 总计
游离蒽醌 单药 0125 0066 0146 0181 0035 0553
对药 0213 0145 0395 0393 0106 1252
全方 0229 0160 0410 0441 0115 1355
总蒽醌 单药 1369 0647 1632 2097 0828 6573
对药 1548 0718 2331 2307 1034 7938
全方 1789 0750 2583 2385 1215 8722
4 讨论
样品液中蒽醌类及乌头生物碱类成分的含量测
定方法参照有关文献报道的方法[612]建立。由于未
取得的单酯型乌头生物碱的化学对照品,参考文献
[12]的方法分别将乌头碱、次乌头碱、新乌头碱
的化学对照品进行水解,用水解物的色谱峰与供试
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液的色谱峰进行了比对,确定了单酯型乌头生物碱
的出峰位置。而单酯型乌头生物碱的定量分析以新
乌头碱作为外标参照物。经考察结果表明所建立的
方法精密度高、稳定性好,准确可靠,简便易行。
水提取液中总蒽醌类成分与乌头生物碱类成分
随着单药、对药、全方的配伍变化,提取量降低趋
势
表4 乙醇提取乌头生物碱提取量 mg
测定类型
配伍
方式
新乌头
碱型
乌头
碱型
次乌头
碱型
总计
单酯型乌头生物碱 单药 0418 0275 0223 0916
对药 0220 0126 0116 0462
全方 0159 0119 0072 0350
双酯型乌头生物碱 单药 1357 0189 0531 2077
对药 1363 0280 0780 2423
全方 1502 0391 0844 2737
明显 (蒽醌类成分对药与全方的提取量分别为单
味药的 874%,598%;乌头生物碱类成分对药
与全 方 的 提 取 量 分 别 为 单 味 药 的 672%,
489%)。从单药与对药的提取量变化情况看,酸
碱对药大黄与附子在合煎时形成了沉淀,导致酸、
碱性成分提取量减损;全方较对药提取量也降低,
说明大黄附子汤中细辛的加入对蒽醌类成分与乌头
生物碱类成分形成沉淀起到了促进作用。由于大黄
中所含蒽醌类成分的量 (176%)远较附子中所
含乌头生物碱的量 (013%)为多,而使蒽醌类
成分对乌头生物碱提取量的影响 (乌头生物碱对
药煎煮较单药煎煮提取量下降3283%)比乌头生
物碱对蒽醌类成分的提取量影响 (蒽醌类成分对
药煎煮较单药煎煮提取量下降1261%)更大,由
此可加深对治疗寒积便秘的大黄与附子相伍的合理
性的理解,大黄既能佐制附子刚燥之性,又不影响
本身荡涤泻下作用的发挥。细辛剂量虽小,但在方
中的作用也不可少。
为考察大分子复合物稳定性,对煎液的处理设
计了两种方式,一种是纱布滤过,保留煎煮过程中
形成的沉淀;另一种是将煎液离心处理,除去提取
液中的全部沉淀物。酸、碱性成分形成大分子复合
物结构的稳定性可以通过比较煎煮液和煎煮离心液
中酸、碱性成分含量的方法来考察。若大分子复合
物结构不稳定,测定过程中的酸或碱处理可使其解
离,含有不溶性的大分子复合物沉淀的水煎液的检
测量就会比已除去不溶性沉淀的水煎离心液高。实
验结果表明:对药煎煮离心液和全方煎煮离心液比
对药煎煮液和全方煎煮液中蒽醌类成分及乌头生物
碱类成分的提取量均有所下降 (对药煎煮液与水
煎离心液,蒽醌类成分的提取量分别为单味药的
874%与637%,乌头生物碱的提取量分别为单
味药的672%与526%;全方煎煮液与水煎离心
液,蒽醌类成分的提取量分别为单味药的598%
与541%,乌头生物碱的提取量分别为单味药的
489%与391%),说明保留在水煎液中的单酯型
乌头生物碱类成分与蒽醌类成分形成的大分子复合
物,在采用酸、碱处理时可部分解离。
乙醇回流提取全方和对药的总蒽醌量均略高于
单味大黄,说明乙醇作为提取溶媒,不宜于酸碱性
成分发生相互反应。单味大黄乙醇回流总蒽醌提取
量仅为水煎煮的412%,说明乙醇不利于蒽醌类
成分的提取。由此可见,大黄在复方中应用时,应
与其他药味分开选用水为溶媒煎煮提取。
实验结果表明全方乙醇回流乌头生物碱的提取
量是水煎煮的28倍,而单药乙醇回流为水煎煮的
13倍,可见乌头生物碱在乙醇中的溶解度高。对
含酸碱对药的处方,若单纯考虑生物碱类成分的转
移率,应考虑用乙醇回流提取,可保证生物碱类成
分被充分提出。
附子中双酯型乌头生物碱在水煎煮时几乎全部
水解,在煎煮液中已检测不到。而乙醇回流可使药
材中近一半 (494%)的双酯型乌头生物碱被保
留,且随着单药、对药、全方的配伍变化,双酯型
乌头生物碱的提取量还有所增加 (2077→2423→
2737)。此实验结果说明 双酯型乌头生物碱在乙
醇中较为稳定,不易水解成单酯和原碱型乌头生物
碱,即乙醇作为提取溶媒可抑制乌头类生物碱酯键
的水解;大黄、细辛中所含的成分增加了双酯型乌
头生物碱在乙醇中的溶解度;以乙醇作为提取溶媒
蒽醌类成分与乌头生物碱类成分不易形成大分子复
合物。
水煎液提 取 游 离 蒽 醌 对 药 比 单 药 下 降
1181%,总蒽醌对药比单药下降 1261%。表明
游离蒽醌与结合蒽醌均可与乌头生物碱类成分发生
化学反应,且难易程度没有明显差异。
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Compatabilitychemistryofacidalkalinepairmedicineof
DahuangandFuziinDahuangFuzidecoction
DUANXiujun,PEIMiaorong,PEIXiangping
(DepartmentofChineseMateriaMedica,ShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Taiyuan030024)
[Abstract] Objective:TodeterminethechangepaternofalkalineandacidcomponentsofDahuangandFuziindiferent
combinatuions.Method:ThecontentsofanthraquinonesandaconitealkaloidsweredeterminedbyHPLCinsamplesofDahuangex
tracts,Fuziextracts,DahuangandFuzipairmedicinesextracts,andextractsofwholerecipe.Result:Asfordahuang,thecontentsof
anthraquinonesweredecreasedwithchangesofcombination:higherindecoctionsofDahuangalone,thenindecoctionsofpairmedi
cines,andtheleastindecoctionsofwholerecipe.AsforFuzi,monoesteraconitealkaloidscouldbedetectedinwaterextracts,and
bothbiesterandmonoesteraconitealkaloidscouldbedetectedinethanolextracts.Thecontentsofaconitealkaloidsweredecreasedwith
changesofcombinations:fromfuzialonetopairmedicines,andwholerecipe.Thechangepaternwasmoreapparentwhenextractedin
waterdecoction.Conclusion:Thecontentsofalkalineandacidcomponentswerechangedwithdiferentextractmethodsanddiferent
combinations.
[Keywords] Dahuang;Fuzi;acidalkalinepairmedicine;DahuangFuzidecoction;compatabilitychemistry
[责任编辑 周 驰]
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