全 文 ：水母雪莲中秋水仙碱含量测定中前处理方法研究
王莉１，２，安黎哲１，杨建２，胡延萍２，谢小龙２，李毅２
（１．中国科学院 寒区旱区环境与工程研究所，甘肃 兰州 ７３００００；
２．中国科学院 西北高原生物研究所，青海 西宁 ８１０００８）
［摘要］　目的：筛选水母雪莲中秋水仙碱的最适提取方法。方法：采用不同浓度的 ＨＣｌ，Ｈ２ＳＯ４预浸水母雪莲药材，再加
入氯仿浸提秋水仙碱；以ＨＰＬＣ测定秋水仙碱含量。结果：测定结果显示００３ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ预浸处理的药材秋水仙碱的质量
分数为００１４６％，显著高于其他处理。水母雪莲药材经不同时间（１０，２０，３０，４０ｍｉｎ）超声波提取秋水仙碱，ＨＰＬＣ测定结果差
异不明显。但与氯仿浸提的结果相比较，超声波提取的供试液中秋水仙碱的含量要明显低。结论：水母雪莲药材经００３ｍｏｌ
·Ｌ－１ＨＧ预浸后再由氯仿浸提１２ｈ，可有效提取其中的秋水仙碱。
［关键词］　水母雪莲；秋水仙碱；ＨＰＬＣ；超声波提取
［收稿日期］　２００８１１２５
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划（２００７ＢＡＤ６４Ｂ０４）
［通信作者］　李毅，Ｔｅｌ：（０９７１）６１０１４５４，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｙｉ＠ｎｗｉｐｂ．ａｃ．ｃｎ
　　水母雪莲ＳａｕｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａＭａｘｉｍ．是藏药中的
名贵药材［１］。分布于西藏、云南、四川等地。从２０
世纪８０年代，人们对水母雪莲的化学成分进行了深
入的研究。其主要含有黄酮类、生物碱类、内酯类等
成分［２６］。水母雪莲中的生物碱类种类繁多，其中秋
水仙碱具有多种药理作用，对癌症、原发性痛风有特
异的作用［５，７］。秋水仙碱提取方法可分为水提法，
稀酸提取法、有机溶剂提取法和超临界流体萃取法。
在提取过程中对样品进行预处理有利于秋水仙碱的
提取，王慧春等采用氨水预浸氯仿提取的方法从水
母雪莲原植物和愈伤组织中提取生物碱，并在提取
液中检测出秋水仙碱［８］。本实验分别以氨水和酸
溶液对样品进行预浸处理，比较不同预处理中秋水
仙碱测定量的差异；研究不同提取方法对水母雪莲
中秋水仙碱提取的影响，选出最适提取条件和测定
条件。
１　材料
安捷伦１１００型ＨＰＬＣ系统，包括：在线脱气泵，
高压溶剂输送二元泵，柱温箱，ＤＡＤ检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ
液相色谱工作站。秋水仙碱对照品 Ｓｉｇｍａ公司。
ＨＰＬＣ级甲醇购自 ＭＥＲＣＫ公司，氯仿 ＡＲ级、氨水
ＡＲ级、ＨＣＬＡＲ级均购自天津精细化工有限公司。
水母雪莲样品：全草采自青海省祁连山。药材
由中国科学院西北高原生物研究所卢学峰副研究员
鉴定，为凤毛菊属植物水母雪莲Ｓ．ｍｅｄｕｓａ植株。
２　方法与结果
２．１　高效液相色谱条件　ｚｏｂａｘＣ８柱（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ）。流动相甲醇水（Ｂ）梯度洗脱：０～
３ｍｉｎ，３０％～５０％（Ａ）；３～５ｍｉｎ，５０％ ～６０％（Ａ）；
５～９ｍｉｎ，６０％ ～８０％（Ａ）；１０ｍｉｎ，８０％（Ａ）；流速
１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２４５ｎｍ，柱温 ３０℃。
２．２　药材中秋水仙碱的提取　称取水母雪莲药材
粉末约３３００ｍｇ，于２ｍＬ心管中，分别加入１００μＬ
２５％ ～２８％氨水（做为对照）、不同浓度的 ＨＣｌ
（００１，００３，００５，００８，０１，０３，０５，０８，１０ｍｏｌ
·Ｌ－１），Ｈ２ＳＯ４（０１，０２，０３，０４，０５ｍｏｌ·Ｌ
－１）
对药材预浸润，每一处理做５个重复。然后，加入
９００μＬ的氯仿常温下浸提１２ｈ，取５００μＬ提取液
置于新的离心管中，４０℃水浴蒸干，加入３００μＬ甲
醇溶解，经０４５μｍ的滤膜过滤，取滤液用于 ＨＰＬＣ
检测（见表１）。
称取水母雪莲药材粉末约３３００ｍｇ，于２ｍＬ心
管中，加入１００μＬ，００３ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ浸润药材粉末
进行前处理，加入９００μＬ氯仿后分别进行浸提１２ｈ
和超声波（功率７０Ｗ，频率４０Ｈｚ）提取，每一处理做
５个重复。超声处理时间分别为１０，２０，３０，４０ｍｉｎ，之
后各样品取５００μＬ提取液置于新的离心管中，４０℃
水浴蒸干，加入３００μＬ甲醇溶解，经０４５μｍ的滤膜
过滤，取滤液用于ＨＰＬＣ检测见表２。
２．３　线性关系考察　精密称取秋水仙碱对照品，用
甲醇，配成含秋水仙碱００５２０ｍｇ·ｍＬ－１对照品溶
液。逐级稀释成６个浓度梯度的对照品溶液。分别
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第３４卷第１７期
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　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
表１　不同浓度ＨＣｌ，Ｈ２ＳＯ４前处理对秋水仙碱含量
测定的影响
浓度／ｍｏｌ·Ｌ－１ 样品量／ｍｇ 秋水仙碱／％
ＨＣＬ００１ ３３００ ００１２５±０００１５ａｂ
ＨＣＬ００３ ３３００ ００１４６±０００１２ａ
ＨＣＬ００５ ３１７２ ００１１５±０００１９ｂ
ＨＣＬ００８ ３１００ ００１１０±０００１６ｂ
ＨＣＬ０１０ ３３００ ０００８０±０００１０ｃ
ＨＣＬ０３０ ３４００ ０００３７±０００１９ｄ
ＨＣＬ０５０ ３２００ ０００１６±００００８ｄ
ＨＣＬ０８０ ３１００ ０００１６±００００４ｄ
ＨＣＬ１００ ３５３３ ０００２１±０００１１ｄ
Ｈ２ＳＯ４０１０ ３１００ ０００２１±０００１２ｄ
Ｈ２ＳＯ４０２０ ３２００ ０００２５±００００５ｄ
Ｈ２ＳＯ４０３０ ３１００ ０００２６±０００２１ｄ
Ｈ２ＳＯ４０４０ ３４３３ ０００１５±００００８ｄ
Ｈ２ＳＯ４０５０ ３２７４ －
　　注：平均值±ＳＤ，每列中不同字母代表在 Ｐ＜００５水平上差异
显著；－：未检查到。
表２　超声波处理时间对秋水仙碱含量的影响
处理时间／ｍｉｎ 样品量／ｍｇ 秋水仙碱／％
１０ ３２６７ ０００９０±００００３ｃ
２０ ３３３３ ０００９７±００００６ｂｃ
３０ ３３３３ ００１０９±０００１６ｂ
４０ ３３６７ ００１０５±０００１５ｂ
对照 ３３３３ ００１４５±０００３０ａ
　　注：平均值±ＳＤ，每列中不同字母代表在 Ｐ＜００５水平上差异
显著；对照·氯仿浸提１２ｈ。
取各个浓度溶液１０μＬ进样，以进样量为横坐标，各
自的峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为
Ｙ＝１５０８５６８８７Ｘ＋２２２７９７０１，ｒ＝０９９９９。结果
表明秋水仙碱进样在０００５３２４８～０５２μｇ内与峰
面积呈良好的线性关系。
２．４　精密度试验　精密吸取秋水仙碱对照品溶液，
按２．１所述色谱条件重复进样５次，每次进样量均
为１０μＬ，测定峰面积。秋水仙碱峰面积的 ＲＳＤ
２０％，表明精密度良好。
２．５　重复性试验　精密称取同一批样品，先加入
１００μＬ００３ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ溶液浸润，再加入氯仿浸
提１２ｈ，分别制备５份供试品溶液。精密吸取供试
品溶液１０μＬ，按照色谱条件进行分析。依据峰面
积测定秋水仙碱质量分数为００１４５％，ＲＳＤ２４％。
２．６　稳定性试验　取同一份供试品溶液，分别于
０，４，８，１２，２４ｈ测定，测得的峰面积变化趋势不明
显，ＲＳＤ０９２％ ，表明在室温、避光条件下供试品溶
液２４ｈ内稳定。
２．７　回收率试验　精密称取已测知秋水仙碱含量
的样品５份，再分别精密加入一定量的对照品，按
２．２所述供试品溶液的制备方法加入１００μＬ００３
ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ溶液浸润，再加入氯仿浸提１２ｈ。按
２．１所述色谱条件进样分析。计算回收率秋水仙碱
的平均回收率为９８％，ＲＳＤ１８％ 。
２．８　不同处理中秋水仙碱含量检测　吸取不同处
理得到的供试溶液１０μＬ分别进样，按２．１中色谱
条件进行测定。根据峰面积按外标法计算含量，不
同样品中秋水仙碱含量结果见表１，２。
３　讨论
水母雪莲药材粉末经氨水和不同浓度的 ＨＣｌ，
Ｈ２ＳＯ４预浸处理，用氯仿进行萃取。提取液经 ＨＰＬＣ
的检测，结果显示各提取液中秋水仙碱的含量明显
不同。方差分析结果显示不同处理间差异显著
（Ｆ＝３９２７３，Ｐ＜００５），０５ｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ２ＳＯ４预处理
的样品的提取液中无法测定秋水仙碱的含量，而样
品经００１～００８ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ预浸其提取液中秋水
仙碱的含量明显高于Ｈ２ＳＯ４处理的样品，也显著高于
氨水前处理的样品中秋水仙碱的含量（０００２３±
０００１４）％。药材经００３ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ预处理后，
提取液中秋水仙碱含量最高为 （００１４６±
０００１２）％。在本研究中笔者发现水母雪莲药材用
稀盐酸（００３ｍｏｌ·Ｌ－１）进行前处理后，经氯仿浸提
能够更有效的提取出秋水仙碱。
水母雪莲药材粉末经００３ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ预浸，
加入氯仿进行超声波提取。超声波处理时间对提取
液中秋水仙碱含量无明显影响，其中超声处理 ３０
ｍｉｎ秋水仙碱的含量相对高一些。但与对照（氯仿
浸提１２ｈ）相比差异显著，超声波提取方法中提取
液中秋水仙碱的含量要明显低很多。
在此试验中所采用的梯度洗脱条件，能够方便、
快简的测定水母雪莲中秋水仙碱的含量。
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［责任编辑　周　驰］
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