全 文 :·研究论文·
柱前衍生化法评价不同品种和产地
柴胡药材和饮片的质量
李媛媛1,秦雪梅1,王玉庆2,岳建英3,郝建平4
(1.山西大学 化学化工学院 药学系,山西 太原 030006;
2.山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801;
3.山西省生物研究所,山西 太原 030006;4.山西大学 生命科学与技术学院,山西 太原 030006)
[摘要] 目的:通过对大量柴胡药材和柴胡饮片样品中柴胡总皂苷和柴胡皂苷a,d的含量进行测定评价不同
产地、不同品种柴胡样品的质量优劣。方法:分光光度法测定柴胡总皂苷的含量;柱前衍生化 HPLCUV测定柴胡
皂苷a,d的含量。结果:红柴胡、黑柴胡的皂苷类成分较北柴胡低,竹叶柴胡几乎检不出柴胡皂苷;北柴胡的柴胡
皂苷a的质量分数主要在0100%~0330%,柴胡皂苷d0200%~0400%,柴胡总皂苷100%~200%;粗根无
分支柴胡皂苷成分明显低于细根或粗根多分支柴胡药材。结论:建议北柴胡的柴胡皂苷 a的含量不得低于
0100%,柴胡皂苷d不得低于0200%,柴胡总皂苷不得低于100%;北柴胡的适宜产区为山西中部的太谷,山西
南部的芮城,平陆,万荣,山西东南部的长治,甘肃的陇西,礼县等地;选育北柴胡品种时优先选取根粗且多分支的
品种。
[关键词] 柴胡;柴胡皂苷;分光光度法;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号]R2841 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)03023704
[收稿日期] 20061130
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30570174);山西省自然
科学基金项目(20051085);山西省科技攻关项目(0510772)
[通讯作者] 秦雪梅,Tel:(0351)7011202,Email:qinxm@
sxu.edu.cn
《中国药典》2005年版一部规定柴胡为伞形科
柴胡属植物北柴胡BupleurumchinenseDC.和狭叶柴
胡B.scozonerifoliumWild.的干燥根,具有解表和
里、疏肝解郁、升举阳气之功效[1]。目前,野生柴胡
药材资源已近枯竭,商品以栽培为主,其中北柴胡种
植面积明显大于红柴胡,以甘肃和山西两省为主要
种植区[2]。
由于各地栽培北柴胡的种源十分混杂,有效成
分含量差异悬殊,商品柴胡饮片多以次充好,因此需
要对各产地柴胡及各地药店购置的商品柴胡的品质
进行评价,为制订柴胡有效成分的含量标准,品种优
选及适宜种植地区的选择提供了科学数据。作者采
用酸化柱前衍生化法,建立了稳定的柴胡皂苷 a,d
含量测定方法,避免了已有的柴胡皂苷 a,d的
HPLCUV以210nm作为检测波长的紫外检测的末
端吸收区中杂质峰干扰和测定方法不稳定的缺点,
并结合已有的比色法测定柴胡总皂苷,对所收集的
大量柴胡药材和柴胡饮片样品进行测定,从单一有
效成分和总成分两方面对柴胡品质进行评价。
1 仪器与试药
1.1 仪器与试剂
紫外可见分光光度计;分析天平;恒温水浴锅;
Waters1525高效液相色谱仪;Waters2487双波长紫
外检测器;Breeze色谱工作站。柴胡皂苷 a对照品
(批号110777200405,中国药品生物制品检定所),
柴胡皂苷 d对照品(批号110778200402,中国药品
生物制品检定所),乙腈(迪马公司),其余试剂均为
分析纯。
1.2 样品
不同产地、来源的柴胡药材和饮片共计57个样
品,由秦雪梅教授购于当地并鉴定,见表1,2。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液的制备 称取各样品粗粉05
g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入 25mL的 2%
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KOHCH3OH超声30min,放冷,滤过,以2%KOH
CH3OH溶液定容至25mL量瓶中,摇匀,即得。
2.1.2 柴胡皂苷 a对照品溶液的配制 精密称取
柴胡皂苷a174mg,置于10mL棕色量瓶中,用甲
醇稀释至刻度,摇匀。
2.1.3 柴胡皂苷d对照品溶液的配制 精密称取
柴胡皂苷d194mg,置于10mL棕色量瓶中,用甲
醇稀释至刻度,摇匀。
2.2 分光光度法测定柴胡总皂苷
2.2.1 标准曲线的绘制 精密量取 194mg·
mL-1柴胡皂苷 d对照品溶液 25,30,50,75,100,
125,150μL,蒸去溶媒后加1%对二甲氨基苯甲醛
乙醇溶液01mL,蒸干,加85%磷酸4mL,70℃下
加热30min,冷却至室温,以水为空白,以545nm为
检测波长,测定吸光度[3]。以吸光度值为纵坐标,
柴胡皂苷d的质量浓度为横坐标,绘制标准曲线,得
回归方程Y=0003651X-0039001,r=09996。
2.2.2 样品的测定 精密量取2.1.1项下的供试
品溶液10mL,置蒸发皿中,水浴上蒸干,残渣加正
丁醇饱和的水10mL溶解,置分液漏斗中,用水饱和
的正丁醇提取3次,每次用量分别为20,10,10mL,
合并正丁醇层,置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,定
容至10mL量瓶中,摇匀。再移取此甲醇溶液05
mL,蒸去溶媒后加1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液
01mL,蒸干,加 85%磷酸 4mL,70℃下加热 30
min,冷却至室温,以水为空白,在545nm处测定吸
光度[3],测定结果见表1,2。
2.3 HPLCUV测定柴胡中柴胡皂苷a,d的含量[4]
2.3.1 色谱条件 色谱柱:HypersilODSC18柱
(46mm×200mm,5μm);柱温为室温;UV检测波
长240,250nm;流动相乙腈水(40∶60);流速 10
mL·min-1。
2.3.2 标准曲线的绘制 精密量取 194mg·
mL-1柴胡皂苷 d对照品溶液10,20,30,40,50,60,
70,80μL,置于5mL量瓶中,加入4%HClCH3OH
溶液1mL,摇匀后静置于室温下反应4h,再加2%
KOHCH3OH溶液 15mL,用甲醇稀释至刻度,摇
匀。分别取20μL上述溶液注入色谱仪,按2.3.1
项下的色谱条件测定峰面积。以峰面积值为纵坐
标,柴胡皂苷 d的质量浓度为横坐标,绘制标准曲
线,得回归程 Y=13705X+35496,R2=09993。
取174mg·mL-1柴胡皂苷a对照品溶液重复上述
表1 柴胡药材样品中各成分质量分数
No. 采集地(种源)
生长
年限
采集
时间
柴胡
皂苷a
/%
柴胡
皂苷d
/%
柴胡
总皂苷
/%
1 山西平陆(-)a 2 2005 0227 0350 192
2 山西平陆(-)b 2 2005 0347 0443 219
3 山西长治(亳州) 2 2005 0270 0304 156
4 山西长治(万荣) 2 2005 0250 0269 145
5 山西长治(安国) 2 2005 0476 0521 282
6 山西长治(亳州) 2 2005 0202 0284 133
7 山西长治(陵川) 2 2005 0277 0259 125
8 山西陵川(陵川) 2 2005 0204 0336 106
9 山西陵川(-) 3 2003 0197 0271 130
10山西陵川(万荣) 3 2003 0216 0283 134
11山西陵川(万荣) 2 2004 0231 0299 129
12山西方山北武当山(野生) - 2004 0120 0198 111
13山西方山(野生) - 2005 0118 0172 096
14山西方山(野生) - 2004 0135 0200 102
15山西太谷(左权) 2 2004 0202 0162 132
16山西太谷(左权) 2 2005 0360 0489 254
17山西安泽(野生) - 2004 0126 0130 093
18山西灵丘(灵丘) 2 2005 0205 0318 116
19山西浑源(野生) - 2005 0249 0197 156
20山西左权(野生) - 2003 0272 0255 156
21山西左权(左权) 2 2003 0188 0225 126
22山西介休绵山(野生) - 2004 0163 0237 101
23山西新绛(新绛) 2 2005 0083 0183 122
24山西芮城(-) 2 2004 0323 0468 216
25山西万荣(万荣) 3 2003 0155 0369 130
26山西万荣(万荣) 2 2003 0272 0355 158
27山西万荣(野生) - 2003 0268 0301 190
28山西万荣(万荣) 2 2004 0110 0243 117
29山西万荣(万荣) 2 2005 0225 0206 165
30山西万荣(左权) 2 2005 0285 0205 155
31山西万荣(中柴1号) 2 2005 0319 0271 167
32黑龙江明水(-) 2 2004 0208 0230 164
33甘肃陇西首阳(-)a 2 2005 0229 0506 189
34甘肃陇西首阳(-)b 2 2005 0280 0444 146
35甘肃陇西首阳(-)c 2 2005 0303 0318 194
36甘肃陇西马河(-) 2 2003 0325 0361 210
37甘肃礼县 2 2003 0321 0500 168
38甘肃陇西首阳试验园(-) 2 2003 0390 0529 178
39甘肃陇西马河(-)花期采 1 2003 0388 0550 204
40山西方山(野生红柴胡) - 2005 0224 0306 161
41黑龙江明水(明水红柴胡) 2 2004 0042 0042 063
42黑龙江明水(明水红柴胡) 3 2004 0016 0017 062
43山西方山(野生黑柴胡) - 2005 0098 0103 082
44甘肃陇西马河(茎) 2 2003 0013 0026 025
45山西芮城(粗,根多分支) 2 2004 0219 0281 153
46山西芮城(粗,根不分支) 2 2004 0171 0263 124
47山西芮城(细,根多分支) 2 2004 0310 0371 156
48山西芮城(细,根不分支) 2 2004 0322 0444 199
注:1~39北柴胡;40~42红柴胡;43黑柴胡;44柴胡样品
的地上茎部分;45~48山西芮城柴胡按照根的粗细,分支多少的形
态学分类(参考文献[5]分类)
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表2 柴胡饮片样品中各成分质量分数
No. 购置地点
柴胡
皂苷a
/%
柴胡
皂苷d
/%
柴胡
总皂苷
/%
推测柴胡
类型
49 河北安国药材市场 0037 0088 100 红柴胡
50 陕西西安朱雀药店 0124 0149 088 北柴胡
51 陕西西安莲湖区中医 0148 0175 097 北柴胡
52 陕西商洛致和堂药店 0100 0115 078 北柴胡
53 陕西商洛民生大药房 0286 0287 206 北柴胡
54 山西太原晋济堂药店 0172 0174 121 北柴胡
55 山西太原黄河大药房 0166 0168 110 北柴胡
56 山西太原一心堂大药房 0070 0186 133 黑柴胡
57 四川成都得元堂沙湾店 0008 0016 026 竹叶柴胡
注:57提供商注明为竹叶柴胡
步骤,回归方程 Y=64364X+16408,R2 =
09995。
2.3.3 精密度试验 分别量取194mg·mL-1柴
胡皂苷d对照品溶液和174mg·mL-1柴胡皂苷 a
对照品溶液各30μL,置于5mL量瓶中,混匀,加入
4%HClCH3OH溶液1mL,摇匀后静置于室温下反
应4h,再加2%KOHCH3OH溶液15mL,用甲醇
稀释至刻度,摇匀。取20μL反应后柴胡皂苷混和
标准溶液按照同样的色谱条件进行 HPLC分析,连
续5次,得到柴胡皂苷 a,d的 RSD分别为099%,
151%,结果表明精密度良好。
2.3.4 稳定性试验 取1号样品05g,制备样品
溶液,于0,2,4,6,8,12h测定峰面积。结果柴胡皂
苷a,d峰面积的 RSD分别为195%和057%。结
果表明样品在12h内测定是稳定的。
2.3.5 重复性试验 精密称取1号样品6份,制备
样品溶液,测定峰面积,计算柴胡皂苷a,d峰面积的
RSD分别为122%,086%。结果表明样品测定符
合技术要求,重复性良好。
2.3.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品6
份,分别加入柴胡皂苷a,d对照品溶液,按样品的测
定项下操作,计算回收率,见表3。结果表明样品测
定的回收率良好,符合要求。
2.3.7 样品的测定 精密量取2.1.1项下供试品
溶液1mL,置于5mL量瓶中,加入4%HClCH3OH
溶液1mL,摇匀后静置于室温下反应4h,再加2%
KOHCH3OH溶液 15mL,用甲醇稀释至刻度,摇
匀,即得。临用前过045μm滤膜,作为样品溶液。
取20μL样品溶液注入色谱仪,按照2.3.1项下色
谱条件测定峰面积,计算其含量。结果见表1和表
表3 柴胡皂苷a,d的加样回收率
成分
取样量
/g
样品中
的量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
RSD
/%
柴胡皂苷a05012005810046401035 9780 163
0507000588004640105210004
0503400584005800117710238
0499900580005800116610101
0500500580006960136610193
0502300583006960128210050
0501200652005200118110175 133
0507000659005200117910077
0503400655006500132110246
0499900650006500132410375
05005006510078001430 9994
0502300653007800144410145
2,对照品、样品HPLC图谱见图1。
图1 对照品柴胡皂苷a,d和不同种类
柴胡药材的HPLC图
A.柴胡皂苷a对照品;B.柴胡皂苷d对照品;C.北柴胡样品;
D.黑柴胡样品;E.红柴胡样品;1柴胡皂苷a;2柴胡皂苷d
由图 1可见,在北柴胡、红柴胡和黑柴胡的
HPLC图谱上看出三者主要成分的峰数目和保留时
间均不相同,即成分组成有很大区别,因此可以从样
品测定的HPLC图谱上初步判断柴胡的种类。从柴
胡皂苷类成分的含量比较上可以看出,北柴胡的柴
胡总皂苷和柴胡皂苷 a,d的含量一般高于红柴胡、
黑柴胡和竹叶柴胡(2005年采山西方山野生红柴胡
除外),因此,以柴胡皂苷类提取物作为药用时应考
虑使用北柴胡。
另外,由表1中的39个北柴胡样品的测定结果
进行比较可以看出,测定样品中柴胡皂苷 a主要集
中在 0100% ~0330%,柴胡皂苷 d0200% ~
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0400%,柴胡总皂苷100% ~200%,此测定值与
相关文献报道结果一致[68]。
文献报道北柴胡根主要药用成分为柴胡皂苷,
分布于韧皮部及射线,根的韧皮部越发达,相对含量
就越高;而且柴胡皂苷在细根中含量高于主根[5]。
现将山西芮城收集的北柴胡进行分类,构成45~48
号样品,测定结果表明根粗无分支的柴胡的皂苷类
成分含量明显低于根粗且分支多的柴胡,而根细无
分支、根细多分支柴胡与根粗多分支柴胡无明显差
异。
3 结论与讨论
建议北柴胡的柴胡皂苷a的质量分数不得低于
0100%,柴胡皂苷 d不得低于 0200%,柴胡总皂
苷不得低于100%。
由于 40号山西方山柴胡样品经形态学和
HPLC图谱鉴定确为红柴胡,但其皂苷类成分含量
较高,优于当地所产北柴胡,且满足237项下关于
北柴胡皂苷类成分的限量要求,建议推广当地野生
红柴胡驯化种植,取代其余品种。
综合比较北柴胡的柴胡皂苷a,d和柴胡总皂苷
的含量确定其适宜产区为山西中部的太谷,山西南
部的平陆,芮城,万荣,山西东南部的长治;甘肃的陇
西,礼县。柴胡在花期采集的样品虽然有效成分的
含量与正常采收期的样品一致,但此时的产量很低,
从经济效益方面考虑,应该在入冬前的正常采收期
采收最佳。
[参考文献]
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[2] 秦雪梅,王玉庆,岳建英,等.栽培柴胡资源状况分析[J].中药
研究与信息,2005,7(8):30.
[3] 王兰霞,杨玲霞.甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察[J].中
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地柴胡中柴胡皂苷a,d的含量[J].中南药学,2004,2(4):198.
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[6] 张 岱.不同产地北柴胡中柴胡总皂甙含量比较[J].天津药
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[8] 李媛媛,秦雪梅,王玉庆,等.北柴胡不同农家栽培类型与有效
成分相关性研究[J].山西中医学院学报,2007,8(2):44.
DeterminationofcontentofsaikosideinBupleurumChinense
fromdiferentsources
LIYuanyuan1,QINXuemei1,WANGYuqing2,YUEJianying3,HAOJianping4
(1.SchoolofChemistryandChemicalEngineering,ShanxiUniversity,Taiyuan030006,China;
2.ColegeofAgriculture,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu030801,China;
3.ShanxiInstituteofbiology,Taiyuan030006,China;
4.SchoolofLifeScienceandTechnology,ShanxiUniversity,Taiyuan03006,China)
[Abstract] Objective:Todeterminethecontentsofsaikosaponina,dandsaikosaponinsinRadixBupleurifromdiferentand
assesstheirquality.Method:SaikosaponinaanddwereusedasthechemicalreferencesubstancetoestablishRPHPLCandvisible
spectrophotometrymethodsfordeterminationofcontentsofsaikosaponina,dandsaikosaponins.Result:ThequalityofB.chinense
wasbeterthanthatofB.scozonerifoliumandBsmishi;Thecontentsofa,saikosaponindandtotalsaikosaponininB.chinensewere
0.100%0.330%,0.200%0.400% and1.00%2.00%,respectively.Conclusion:Itistosuggestthattheminimalcontentsre
quirementsofsaikosaponina,dandsaikosaponinsinB.chinenseshouldbesetat0.100%,0.200% and1.00%,respectively;the
bestsuitableplantingareasareTaiguinthemiddleofShanxiprovince,Ruicheng,PingluandWanronginthesouthofShanxiprov
ince,andLongxi,LixianinGansuprovince.
[Keywords] Bupleurumchinense;saikosaponin;visiblspectrophotometrymethods;HPLC
[责任编辑 张宁宁]
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