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Vol.34，Issue 3
February，2009
第 34 卷第 3 期
2009 年 2 月
青藤碱脂质体的处方优化及制备工艺研究
王 岩 1*，丛振娜 1，刘清飞 2，凌家俊 3，周莉玲 3
（1. 广东药学院 中药药剂学教研室，广东 广州 510006；
2. 清华大学医学院 药物研究所，北京 100084；3. 广州中医药大学，广东 广州 510405）
[摘要] 目的：优化青藤碱脂质体的膜材处方，并进行制备工艺研究。方法：采用乙醚注入法制备脂质体，以包封率为
指标，采用混料均匀设计法优化其膜材处方，确定豆磷脂、胆固醇、维生素 E 等组分的用量。并在此基础上采用单因
素考察法进行制备工艺研究，包括缓冲液用量、制备温度、超声时间等。结果：最佳膜材处方为青藤碱:豆磷脂:胆固醇:
维生素 E 质量化（8.92:60.35:28.81:1.91），缓冲液用量为 50 mL·g-1膜材，制备温度为 50 ℃，超声时间为 20 min。结
论：按此优化处方及工艺制备的脂质体可获得满意的形态及包封率。
[关键词] 青藤碱脂质体；处方；制备工艺

*青藤碱（sinomenine）是从防己科植物青藤
Sinomenium acutum（Thunb）Rehd et wils 的藤茎中
提取的一种生物碱，为治疗风湿及类风湿性关节炎
的常用药物。由于其生物半衰期短，大鼠体内的 t1/2
仅为 48.50 min[1]，因此代谢较快。目前市场上青藤
碱的普通制剂，如片剂、注射剂等，需频繁用药才
能达到治疗效果，在临床应用受到一定的限制。
以脂质体为载体，将青藤碱制成关节局部应用
的经皮给药制剂，可减少药物的全身吸收，使药物
集中于皮肤角质层，形成药物贮库，缓缓向关节部
位释药，从而降低药物的毒副作用，提高其生物利
用度。而且脂质体本身的成分一般为体内所固有，
无皮肤刺激等毒副作用[2]。脂质体经皮给药制剂已
成为当前局部给药制剂发展的一个趋势。
本研究采用适合于批量生产的注入法制备青
藤碱脂质体，并采用混料均匀设计法优化青藤碱脂
质体的膜材处方，在此基础上进行制备工艺研究，
为青藤碱经皮给药制剂的研究开发提供实验依据。
1 仪器与材料
Summit P680 型高效液相色谱仪，PDA-100 型
二极管阵列检测器，ASI-100 型自动进样器（德国
Dionex 公司）；CQF-50 型超声波清洗器，中船七院
七二六所；JEM-2010HR 型高分辨透射电子显微镜，

[收稿日期] 2008-07-10
[基金项目] 国家自然科学基金项目（30672669，30772791）；广东省
自然科学基金项目（5300063）
[通信作者] *王岩，Tel：（020）39352169，E-mail：gdpuwy@126.com
日本 JEOL 公司；青藤碱对照品（中国药品生物制
品检定所，批号 0774-9904）；青藤碱结晶（自制，
制备工艺用）；大豆卵磷脂（上海伯奥生物科技有
限公司）；胆固醇（上海源聚生物科技有限公司）；
维生素 E（广州万利隆化工有限公司）。均匀设计软
件：UD3.0 版（中国数学会均匀设计分会）。
2 方法与结果
2.1 混料均匀设计法优选青藤碱脂质体膜材处方
2.1.1 膜材处方设计 处方以青藤碱、豆磷脂、
胆固醇、维生素 E（抗氧化剂）组成。以四者
在其变量范围内的百分含量作自变量，分别设
为 XA，XB，XC，XD，所得脂质体的包封率为因
变量，进行处方优化。经预试验确定 4 个自变
量组成范围，同时考虑归一化条件，给出均匀
设计的约束限制条件：
①2%≤XA≤20%，10%≤XB≤80%，5%≤
XC≤50%，0.5%≤XD≤2%
②XA+XB+XC+XD=100%
在该限制条件下进行 4 因素的混料均匀设计，
采用 U9（94）表，由 UD3.0 均匀设计软件安排试验，
因素水平见表 1。
2.1.2 脂质体的制备 采用注入法制备脂质体。按
表 1 中的处方比例（总量设定为 1 000 mg），称取
青藤碱、豆磷脂、胆固醇、维生素 E，加乙醚 50 mL
使溶解；另取 pH 7.4 磷酸盐缓冲液 50 mL，置烧杯
中，加热至 50 ℃并保持恒温，在不断搅拌下匀速


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表 1 U9（94）脂质体制备均匀设计及结果
试验号 XA/％ XB/％ XC/％ XD/％ 包封率/％
U1 14.62 62.30 22.50 0.58 69.11
U2 6.65 52.99 39.61 0.75 70.47
U3 4.76 46.31 48.02 0.91 58.94
U4 8.57 77.80 12.55 1.08 63.54
U5 12.55 67.83 18.37 1.24 65.22
U6 18.89 37.20 42.50 1.41 55.81
U7 2.91 62.76 32.76 1.58 70.73
U8 16.72 69.03 12.50 1.75 54.11
U9 10.54 54.06 33.49 1.92 75.05

注入乙醚溶液，加完后继续搅拌 1 h 至乙醚挥尽。
超声处理 10 min，即得乳白色脂质体混悬液。
2.1.3 脂质体包封率测定 按照前期建立的方法[3]
测定包封率。精密量取青藤碱脂质体混悬液 0.5
mL，加于 Sephadex G-50 凝胶柱顶部，以 pH 7.4
磷酸盐缓冲液洗脱，流速 1 mL·min-1，收集 4～11 mL
洗脱液，用氮气吹至体积约 0.5 mL，加无水乙醇定
容至 10 mL，摇匀。精密量取 10 µL 溶液，进样，
测定峰面积，用外标一点法计算青藤碱的含量，计
为 Mlip；另精密吸取青藤碱脂质体混悬液 0.5 mL，
用无水乙醇定容至 10 mL，摇匀。精密吸取 10 µL
溶液，同法测定，计为 Mtot，按下式计算包封率。
各处方下包封率测定结果见表 1，HPLC 见图 1。
包封率计算公式：包封率（EN%）=（Mlip/Mtot）×100%
Mlip 为脂质体中包封的青藤碱量；Mtot为脂质体
混悬液中所含青藤碱总量。

a. 青藤碱对照品；b. 青藤碱脂质体样品；1. 青藤碱。
图 1 青藤碱脂质体 HPLC 图

2.1.4 数据回归 由于 XA + XB + XC + XD = 100%，
如限定其中 3 个因素的水平，则另一因素的水平即
可确定。本实验选择 XA，XB，XC 含量为回归自变
量，对因变量包封率作配方回归，分别用一阶和二
阶规范多项式建立回归方程，求出最优回归子集，
并求其最优解。规范多项式计算公式如下：
一阶：
1
q
i i
i
xη β
=
= ∑ ；二阶：
1
q
i i ij i j
i i j
x x xη β β
= <
= +∑ ∑
一阶回归 结果：方 程 Y=73.41-67.94XA –
4.70XC，R=0.490 7，s=7.308 8。方差分析结果见表
2。查 F 临界值表，得 F0.05(2，6)，F=0.951 3，回归
方程无显著意义。
表2 一阶回归方差分析结果
方差来源 离差平方和 f 均方 F
SR 101.633 4 2 50.816 7 0.951 3
SE 320.513 4 6 53.418 9
ST 422.146 8 8

二阶回归结果：方程 Y=147.83-1 171.71XA+
1 150.17XAXB+1 455.91XAXC-119.57XBXC-285.93
XC XC，R=0.990 9，s=1.597 2。方差分析结果见
表 3。查 F 临界值表，得 F0.05(5,3)=9.01，F=
32.495 1，回归方程有显著意义。
表 3 二阶回归方差分析结果
方差来源 离差平方和 f 均方 F
SR 414.493 5 5 82.898 7 32.495 1
SE 7.653 3 3 2.551 1
ST 422.146 8 8

由回归处理结果可见，二阶回归复相关系数接
近于 1，残差标准差相对较小，结果有显著意义。
因此，选用二阶方程进行模型分析，求出最大解，
得出最优处方配比为：XA = 8.92%，XB = 60.35%，
XC = 28.81%，XD = 1.91%。将以上结果代入回归方
程，求得在此配比条件下的预测包封率 Y＝75.36%。
2.1.5 最佳配方的验证试验 按以上优选配方制
备青藤碱脂质体 3 批，分别测定包封率。结果该配
比下包封率分别为 73.39%，76.42%，72.56%，平
均值为 74.12%，RSD 2.74%。平均包封率为与预测
包封率接近，表明该处方合理。
2.2 缓冲液用量的筛选
按脂质体膜材的优选处方配比，称取青藤碱 89
mg，豆磷脂 604 mg，胆固醇 288 mg，维生素 E 19
mg，加乙醚 50 mL 使溶解，共制备 4 份；另分别取
磷酸盐缓冲液 25，50，75，100 mL，置烧杯中，加
热至 50 ℃并保持恒温，在不断搅拌下匀速注入乙


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醚溶液，加完后继续搅拌 1 h 至乙醚挥尽，超声处
理 10 min，得脂质体混悬液。分别测定包封率，结
果见表 4。可见脂质体缓冲液用量为 50 mL 时，所
得脂质体的包封率最高。
表 4 缓冲液用量筛选结果（ x ±s，n=3）
缓冲液量/mL 包封率/％
25 62.02±1.14
50 73.39±2.03
75 67.00±1.28
100 64.63±0.98

2.3 制备温度的选择
按上述优选处方称取青藤碱、豆磷脂、胆固醇、
维生素 E，加乙醚 50 mL 使溶解，共制备 4 份；另
取磷酸盐缓冲液 50 mL 4 份，置烧杯中，分别加热
至 40，50，60，70 ℃并保持恒温，在不断搅拌下
匀速注入乙醚溶液，加完后继续搅拌 1 h 至乙醚挥
尽，超声处理 10 min，得脂质体混悬液。分别测定
包封率，结果见表 5。可见制备温度为 50 ℃时，所
得脂质体的包封率最高。
表 5 制备温度对脂质体包封率的影响( x ±s，n=3)
制备温度/℃ 包封率/％
40 38.41±2.06
50 70.47±1.89
60 64.45±2.88
70 51.35±3.01

2.4 超声时间的选择
按上述优选处方称取青藤碱、豆磷脂、胆固醇、
维生素 E，共取 5 份，分别加乙醚 50 mL 使溶解；
另取磷酸盐缓冲液 50 mL，置烧杯中，加热至 50 ℃
并保持恒温，在不断搅拌下匀速注入乙醚溶液，加
完后继续搅拌 1 h 至乙醚挥尽，分别超声处理 5，
10，20，30，40 min，得脂质体混悬液。分别测定
包封率，结果见表 6。可见超声时间从 5～20 min
间包封率逐渐递增，而 20 min 后包封率逐渐递减，
因此超声时间确定为 20 min。
2.5 脂质体的形态观察
将青藤碱脂质体置透射电镜下观察。采用磷钨
染法制样，取 1 滴脂质体乳液滴于点滴反应瓷板的
凹槽内，将喷碳铜网置于试液上（膜面向下），1~2
min 后取出铜网，用滤纸从铜网边缘吸干多余液体；
表 6 超声时间对脂质体包封率的影响( x ±s，n=3)
超声时间/min 包封率/％
5 67.39±0.85
10 73.39±2.03
20 76.21±1.36
30 72.42±0.78
40 66.59±2.31

按上述同样方法，将该铜网放在染液滴上（4%磷钨
酸溶液，pH 6.5）约 30 s，用滤纸从铜网边缘吸干
多余染液，自然挥干，用透射电子显微镜观察并拍
摄照片，见图 2。从照片可以看出，不同粒径的脂
质体形态完整，双分子膜结构清晰，均属于单室脂
质体，经激光粒度分析仪测定，平均粒径约 200 nm。

图 2 青藤碱脂质体透射电镜照片

3 讨论
本研究前期已对青藤碱脂质体的制备方法进
行了筛选，比较了薄膜分散法、逆相蒸发法及乙醚
注入法的包封率，结果确定采用乙醚注入法进行制
备。本研究进一步采用有约束混料设计法优选注入
法制备脂质体的配方，并采用单因素考察法优选了
注入法工艺的制备条件，按优化后工艺制备的脂质
体包封率可达 76.21％。在实验中发现，外水相的
用量也影响脂质体的包封率，随着磷酸盐缓冲液用
量的增大，包封率呈下降趋势。可能由于脂质体在
外水相比例扩大后，溶液得到稀释，脂质体内被包
封的药物易从内向外渗漏。
究采用的混料均匀设计作为一种处方优化试
验方法，亦称为配方均匀设计，是均匀设计中的重
要组成部分。试验中，每个因素的贡献被表示为其
在处方中所占配比，所有因素总和为 100%。在此
条件下对各因素变量进行边界约束，并进行均匀设


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计，通过试验求出最优解，从而计算和推测最佳混
料比[4-5]。
与传统的均匀设计相比，混料均匀设计只需给
出期望的实验次数以及各因素的水平范围，不必给
出具体水平，所以各试验点的设置更具代表性和合
理性，试验次数更少，优化结果更加稳定和准确；
此外，在制剂处方配比设计中，传统的均匀设计优
化所确定的组分总用量不恒定，导致制剂的总量也
随之波动，从而造成总体积或重量的不确定性；而
有约束混料均匀设计可将处方组分总量设定为 100
％，在此前提下进行设计，并优化出最佳配比，从
而保证了处方总量的恒定，因此特别适用于复杂处
方的筛选及对经验处方的再优化[6-8]。

[参考文献]
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浓度法的相关性研究[J]. 中成药，1996，18（9）：1.
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[4] 张金廷. 混料均匀设计[J]. 应用概率统计，1993，9（2）：168.
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口腔崩解片[J]. 中国医药工业杂志，2005，36（1）：24.
[8] 余日跃，余 宙，胡王君，等. 混料均匀设计考察益智方对去卵
巢小鼠学习记忆的影响[J]. 中国临床药理学与治疗学，2004，9
（6）：680.


Study on optimization of formulation and preparation process of
sinomenine liposomes

WANG Yan1*，CONG Zhenna1，LIU Qingfei2，LING Jiajun3，ZHOU Liling3
(1. Section of Chinese Pharmaeeutics，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；
2. Materia Medica Institute of Medical School，Tsinghua University，Beijing 100084，China；3. Guangzhou University of
Traditional Chinese medicine，Guangzhou 510405，China)

[Abstract] Objective： To optimize the formulation and preparation process of sinomenine liposomes. Method: Method
of aether injection and mixture uniform design were adopted to determine the formulation of sinomenine liposomes is the proportion
of phospholipids，cholesterol and Vitamin E with the index of entrapment efficiency. And the single-factor test was used to study the
preparation process of the liposomes，including the volume of buffer solution，the preparation temperature and the ultrasonic time.
Result: The optimized formulation was that the ratio of sinomenine : phospholipids : cholesterol : vitamin E mass ratio was 8.92 :
60.35 : 28.81 : 1.91. The volume of buffer solution was 50 mL·g-1 membrane，the preparation temperature was 50 ℃， and the
ultrasonic time was 20 min. Conclusion: Satisfactory shape and entrapment efficiency of the liposomes can be obtained by the
optimized formulation and preparation process.
[Key words] sinomenine liposomes；formulation；preparation process
[责任编辑 周 驰]