全 文 ：ＨＰＣＥ法同时测定小儿清热止咳口服液中３个组分
刘 洋１，蒋 晔１，孙 捷２
（１．河北医科大学 药学院，河北 石家庄 ０５００１７；
２．河北医科大学 科技总公司，河北 石家庄 ０５００１７）
［摘要］ 目的：建立一种简单快速的小儿清热止咳口服液中麻黄碱、黄芩苷和甘草酸含量测定的毛细管电泳
法（ＨＰＣＥ）。方法：利用毛细管区带电泳紫外检测器测定３个指标成分的含量。电泳条件：以未涂层弹性融硅毛
细管（５０μｍ×５０ｃｍ，有效分离长度４５ｃｍ）为分离通道，２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂缓冲液（ｐＨ８６０）作为电泳介质，压力进
样，进样时间６ｓ，运行电压１０ｋＶ，电泳温度２５℃，检测波长１９２ｎｍ。结果：麻黄碱、黄芩苷、甘草酸分别在０００４～
０２２５，００２４～１５０，００２１～１３３ｍｇ·ｍＬ－１线性关系良好，三者加样回收率分别为９８３％，９８４％，９７１％。结论：
ＨＰＣＥ法同时测定了小儿清热止咳口服液中麻黄碱、黄芩苷和甘草酸的含量，方法简便、快速，结果准确，可用于小
儿清热止咳口服液的质量控制。
［关键词］ ＨＰＣＥ；小儿清热止咳口服液；麻黄碱；黄芩苷；甘草酸
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０２０１３３０３
［收稿日期］ ２００７０３２７
［通讯作者］ 蒋晔，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６６０６９，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｅ＠
ｈｅｂｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
小儿清热止咳口服液具有清热、宣肺之功效，主
要用于小儿外感、邪毒内盛等症状［１］。该制剂由麻
黄、苦杏仁、石膏、甘草、黄芩、板蓝根、北豆根等组
成。方中麻黄宣肺平喘，为君药；黄芩清热燥湿，为
佐药；甘草和中益气，为使药。该口服液的指标成分
如麻黄碱、黄芩苷的单组分测定方法已有报道［２，３］。
根据中医药理论，复方中药药效的发挥是各药味多
种组分共同作用的结果，它们含量的多少及之间的
比例关系都会影响其疗效，因此在评价、控制复方中
药质量时，多种指标成分同时测定比单一指标成分
测定更科学，能更好地表征药品的质量。本实验利
用ＨＰＣＥ法同时测定了小儿清热止咳口服液中麻黄
碱、黄芩苷和甘草酸的含量，为该制剂的快速准确测
定提供了更为科学的依据。
１ 仪器和试剂
ＣＬ１０２０型高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学仪
器有限公司），ＣＴ２２色谱信号采集器（南京千谱软
件公司），ｐＨＳ－２Ｃ型精密酸度计（上海雷磁仪器
厂），未涂层石英毛细管（５０ｃｍ×５０μｍ，河北永年
光纤厂，有效长度４５ｃｍ）。
盐酸麻黄碱、黄芩苷、甘草酸对照品（中国药品
生物制品检定所，批号分别为 １７１２４１２００５０６，
１１０７１５２００４１３，１１０７３１２００４０８），小儿清热止咳口
服液（汕头金石制药总厂，批号 ０６０４０２，０６０４０７，
０６０４１１），无水乙醇、硼酸、四硼酸钠均为分析纯，水
为重蒸水。
２ 方法
２．１ 电泳条件
毛细管（５０μｍ×５０ｃｍ，有效长度４５ｃｍ）；电泳
介质：２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１四硼酸钠溶液（ｐＨ８６０）；电压
１０ｋＶ；电流约８μＡ；试验温度２５℃；检测波长１９２
ｎｍ；进样时间６ｓ。试验前依次以０１ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧
化钠冲洗１０ｍｉｎ，以重蒸水冲洗１０ｍｉｎ，再以电泳介
质冲洗１０ｍｉｎ；每次进样前以电泳介质冲洗３ｍｉｎ。
２．２ 标准溶液的制备
分别取３种对照品适量，精密称定，置同一量瓶
中，用２０％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为
混合对照品储备液，其中麻黄碱、黄芩苷、甘草酸的
质量浓度分别为 ０２２５（１ｍｇ盐酸麻黄碱相当于
０８１９ｍｇ麻黄碱），１５０，１３３ｍｇ·ｍＬ－１。
２．３ 供试品溶液的制备
精密量取口服液０５ｍＬ，加入４５ｍＬ无水乙
醇，旋涡３ｍｉｎ，３０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ。上清液
用０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液２ｍＬ，加入无
水乙醇２ｍＬ，旋涡 ３ｍｉｎ，３０００ｒ·ｍｉｎ－１离心 １０
ｍｉｎ。上清液用０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液
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作为供试品溶液。
２．４ 检测波长选择
虽然麻黄碱、黄芩苷和甘草酸均含共轭结构，在
２５４ｎｍ均有较好吸收，但由于处方中麻黄用量较少，
麻黄碱色谱峰极小，黄芩苷、甘草酸色谱峰较大，测定
误差较大。当采用麻黄碱的末端吸收波长（１９２ｎｍ）
时，麻黄碱的检测灵敏度提高，且黄芩苷和甘草酸亦
有较好紫外吸收，三者检测的色谱峰大小合适，故最
终确定３种成分同时检测的波长为１９２ｎｍ。
２．５ 缓冲液体系对分离的影响
２．５．１ 缓冲液ｐＨ 调节 ｐＨ可以调节电泳中电迁
移和电渗平衡，达到增加分离度的目的。对于石英
毛细管而言，在 ｐＨ＞７的条件下对电渗流影响不
大，考察了缓冲液 ｐＨ８～９的条件下，样品分离情
况。结果表明，ｐＨ越高，带电离子电泳速度降低，带
电组分间分离度增加，但测定时间相应延长。在确
保分离度高的前提下尽量减少分析时间，最终确定
８６０为较优ｐＨ。
２．５．２ 缓冲液浓度 考察了不同浓度的四硼酸钠
溶液（４０，３０，２５，２０，１５，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）对分离情况
的影响。结果表明，随着缓冲液浓度降低，电渗流速
减小，带电离子电泳速度略有下降，带电组分间分离
度增加，但测定时间延长。最终确定选用２５ｍｍｏｌ
·Ｌ－１四硼酸钠溶液。
２．５．３ 有机溶剂比例 考察了缓冲溶液含不同体
积分数的无水乙醇对分离度的影响，分析样品在含
１０％，２０％，３０％，４０％，５０％乙醇的缓冲液中的分离
情况。结果表明，随着有机溶剂比例上升，电渗流速
显著减小，带电离子电泳速度无明显变化，整体耗时
显著增加，无法快速分离。相比而言不含有机溶剂
的缓冲液更优。
２．６ 操作电压对分离的影响
毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电
压。本实验考察了工作电压在５～２５ｋＶ３个组分
的分离情况，结果，随工作电压降低，带电离子电泳
速度比电渗流速度下降快，组分间分离度提高但耗
时增加。电压过高时产生焦耳热效应导致柱效和分
离度降低。故选用１０ｋＶ作电泳电压时分离度较好
且用时较短。
３ 结果
３．１ 线性关系考察
线性试验时以混合对照品储备液作为线性１号
工作溶液，采用倍比稀释法配制２～７号工作溶液。
按２．１项下电泳条件进样分析，结果表明，麻黄碱、
黄芩苷、甘草酸分别在 ０００４～０２２５，００２４～
１５０，００２１～１３３ｍｇ·ｍＬ－１线性关系良好，回归
方程分别为 Ｙ＝１００×１０６Ｘ＋５００×１０３，Ｙ＝
５０６×１０５Ｘ＋９８６×１０３，Ｙ＝１６１×１０５Ｘ＋２５６×
１０３，相关系数均不低于０９９９３。色谱图见图１。
图１ 小儿清热止咳口服液样品ＨＰＣＥ图
Ａ对照品；Ｂ样品；１麻黄碱；２黄芩苷；３甘草酸
３．２ 精密度试验
在上述电泳条件下，对同一混合对照品溶液连
续进样６次。结果麻黄碱、黄芩苷和甘草酸含量的
ＲＳＤ分别为１７％，１１％，１８％。
３．３ 稳定性试验
将供试品溶液分别在０，１，２，４，６，１２，２４ｈ进样分
析。结果，麻黄碱、黄芩苷和甘草酸含量的ＲＳＤ分别为
１９％，１７％，１８％，表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
３．４ 加样回收率试验
向已知麻黄碱、黄芩苷和甘草酸含量的口服液
中加入定量的３种对照品混合液，按２．３项下的方
法处理后进样测定，计算加样回收率，结果见表１。
３．５ 含量测定
采用上述优化分析条件，分别对３个批号的小
儿清热止咳口服液进行测定，结果见表２。
４ 讨论
小儿清热止咳口服液含量测定指标及测定方法
文献已有报道［２，３］，但所选择的测定指标均为１种
药材中１种指标。本实验建立了同时测定３种药材
中的指标成分的方法，用以表征小儿清热止咳口服
液的质量，不仅能反映制剂的工艺水平，而且能在一
定程度上反映出所用药材的质量。同时多组分测定
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表１ ３种指标成分回收率（ｎ＝６）
成分
原含量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
麻黄碱 １０５ １０７ １０４ ９８１ ９８３ ０５
１０５ １０６ １０４ ９８６
１０８ １０６ １０６ ９９１
１０７ １０１ １０２ ９８１
１１１ １０４ １０５ ９７７
１０８ １０２ １０３ ９８１
黄芩苷 ６３１ ６４５ ６３２ ９９１ ９８４ １６
６２９ ６２４ ６１９ ９８８
６１４ ６４８ ６２５ ９９０
６５４ ６２１ ６２８ ９８５
６４２ ６３１ ６３３ ９９５
６３８ ６１４ ５９７ ９５４
甘草酸 ８５１ ８４５ ８２４ ９７２ ９７１ ０４
８５４ ８２６ ８１８ ９７４
８５９ ８４９ ８２７ ９６８
８５０ ８３２ ８２０ ９７５
８６０ ８４０ ８２５ ９７１
８５５ ８４４ ８２０ ９６５
还可以反映传统中药的配伍状况，方法简单，结果准
确可靠，可用于小儿清热止咳口服液的质量控制。
有关小儿清热止咳口服液含量测定的文献以
ＨＰＬＣ为主。ＨＰＬＣ需对样品分离，纯化后才能上柱
分析，但不论是用蒸馏法提取［２］还是用大孔吸附树
脂柱萃取［３］，均较繁琐；指标成分在试验处理过程
中易有损失，产生测定误差。用 ＨＰＣＥ法测定时一
般可直接进样，不易污染毛细管柱。但是小儿清热
止咳口服液含有大量蜂蜜、蔗糖［１］等辅料，大量进
表２ 样品含量测定
批号
麻黄碱
／ｍｇ·ｍＬ－１
ＲＳＤ
／％
黄芩苷
／ｍｇ·ｍＬ－１
ＲＳＤ
／％
甘草酸
／ｍｇ·ｍＬ－１
ＲＳＤ
／％
０６０４０２ ０２１７ ０６ １２５ １７ １７０ １８
０２１５ １２１ １７６
０２１５ １２４ １７４
０６０４０７ ０２１７ ０７ １２５ １２ １７３ １３
０２１４ １２６ １７０
０２１６ １２８ １６９
０６０４１１ ０２１５ ０８ １２４ １３ １７１ ０９
０２１３ １２５ １６８
０２１６ １２２ １６９
入毛细管会影响背景电解质的黏度，进而影响电渗
流。
测定时需简易处理以除去辅料干扰。蜂蜜中以
糖为主，占６５％以上，且主要是蔗糖，所以去除辅料
干扰主要是除蔗糖。蔗糖是分子比较小的多羟基化
合物，具有强亲水性，极易溶于水，在亲水性比较强
的乙醇中难于溶解。３种待测组分在乙醇中均可
溶，所以采用醇沉法除糖。结果显示，醇沉法除糖后
用ＨＰＣＥ测定，３种组分回收率均较高。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２０００：３７３．
［２］ 王紫秋，包冬香，孙兰香．小儿清热止咳口服液中麻黄碱含量
的ＨＰＬＣ测定［Ｊ］．中成药，２００４，２６（３）：２５０．
［３］ 王治平，樊 化，孟祥平，等．固相萃取ＲＰＨＰＬＣ测定小儿清热
止咳口服液中黄芩苷的含量［Ｊ］．中成药，２００５，２７（１０）：附６．
Ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ３ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
ｉｎＸｉａｏ’ｅｒＱｉｎｇｒｅＺｈｉｋｅｏｒａｌｌｉｑｕｉｄｂｙｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
ＬＩＵＹａｎｇ１，ＪＩＡＮＧＹｅ１，ＳＵＮＪｉｅ２
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＧｅｎｅｒａｌＣｏｍｐａｎｙｏｆＨｅｉｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｐｈｅｄｒｉｎｅ，ｂａｉｃａｌｉｎ
ａｎｄｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｃａｃｉｄｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｎＸｉａｏｅｒＱｉｎｇｒｅＺｈｉｋｅｏｒａｌｌｉｑｕｉｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｎｕｎｃｏａｔｅｄｆｕｓｅｄｓｉｌｉｃａｃａｐｉｌａｒｙｃｏｌｕｍｎｏｆ
５０ｃｍ×５０μｍ（ｅｆｅｃｔｉｖｅｌｅｎｇｔｈ：４５ｃｍ）ｗａｓｕｓｅｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂｙｕｔｉｌｉｚｉｎｇａｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙｐｒｅｓｓ（５ｓ），ａｒｕｎｎｉｎｇ
ｖｏｌｔａｇｅｏｆ１０ｋＶａｎｄａ２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｓｏｄｉｕｍｔｅｔｒａｂｏｒａｔｅｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｔｐＨ８６０．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ１９２ｎｍ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗｅｒｅｉｎｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０００４０２２５ｍｇ·ｍＬ－１ｆｏｒｅｐｈｅｄｒｉｎｅ，００２４１５ｍｇ·ｍＬ－１ｆｏｒ
ｂａｉｃａｌｉｎａｎｄ００２１１３３ｍｇ·ｍＬ－１ｆｏｒｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ．Ｔｈｅｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅ９８３％，９８４％ ａｎｄ９７１％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ
ｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｐｈｅｄｒｉｎｅ，ｂａｉｃａ
ｌｉｎａｎｄｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｃａｃｉｄｉｎＸｉａｏｅｒＱｉｎｇｒｅＺｈｉｋｅｏｒａｌｌｉｑｕｉｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉ
ｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＸｉａｏｅｒＱｉｎｇｒｅＺｈｉｋｅｏｒａｌｌｉｑｕｉｄ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；Ｘｉａｏ’ｅｒＱｉｎｇｒｅＺｈｉｋｅｏｒａｌｌｉｑｕｉｄ；ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ；ｂａｉｃａｌｉｎ；ｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｃａｃｉｄ
［责任编辑 鲍 雷］
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