全 文 ：α葡萄糖苷酶抑制活性跟踪分离芙蓉菊中的活性成分
吴琦１，杨秀伟１，邹磊２，３，傅德贤３
（１．北京大学 天然药物及仿生药物国家重点实验室 药学院 天然药物学系，北京 １００１９１；
２．中国医药研究开发中心有限公司，北京 １０２２０６；
３．中国科学院 过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 １０００８０）
［摘要］　目的：研究芙蓉菊全草中具有抑制α葡萄糖苷酶活性的化学成分。方法：采用体外α葡萄糖苷酶抑制活性跟踪
方法和各种柱色谱技术进行化学成分的分离和纯化；应用各种谱学方法鉴定化合物的结构；对单体化合物进行α葡萄糖苷酶
抑制活性试验，确定活性成分。结果：芙蓉菊７０％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分和水溶性部分对α葡萄糖苷酶活性具有较
强的抑制作用，从两部分分离鉴定了５，７二羟基３′，４′，５′三甲氧基黄酮 （１），东莨菪素（２），艾菊素，粗毛豚草素（３），５，５′，７
三羟基３′，４′二甲氧基黄酮（４），柯伊利素（５），万寿菊黄素３，６，７三甲基醚（６），石杉黄素（７），东莨菪苷（８）和槲皮万寿菊
素３，６二甲醚（９）。其中，化合物２，３，５～７，９对α葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用，ＩＣ５０（μｍｏｌ·Ｌ
－１）值分别为（３４３６±
２０６），（１４６２８±１２４４），（２４６２６±８７３），（７４０６±３８３），（４２１９±５２５），（１３６２０±２５７３），强于同条件下的阳性对照药
阿卡波糖［ＩＣ５０＝（４８９２５±３８５５）μｍｏｌ·Ｌ
－１］。化合物１，４，８和艾菊素的ＩＣ５０值皆大于１０００μｍｏｌ·Ｌ
－１。结论：化合物５和
９为首次从该属植物中分离得到；化合物２，３，５～７，９对α葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用，其抑制作用类型属于竞争性
抑制作用，它们可能是芙蓉菊防治糖尿病的物质基础。
［关键词］　芙蓉菊；黄酮；α葡萄糖苷酶
［收稿日期］　２００９０４２３
［基金项目］　国家基础研究发展计划（９７３）项目（２００１ＣＢ５１００８）
［通信作者］　杨秀伟，Ｔｅｌ：（０１０）８２８０５１０６，Ｅｍａｉｌ：ｘｗｙａｎｇ＠ｂｊｍｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
　　菊科蕲艾属 ＣｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍＬｅｓｓ．植物全世界有
４种，产中亚、东亚、菲律宾和美国加尼福利亚，我国
引种有芙蓉菊Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍａｋｉｎｏ１种。广东
民间用芙蓉菊全草治疗糖尿病；叶入药治疗风寒感
冒、痈疽、疔疮；根入药治疗风湿性关节痛和胃脘冷
痛［１］。
食物中的多糖复合物可由淀粉酶水解为糊精
和寡糖，在肠吸收和进入血液循环之前进一步由
α葡萄糖苷酶（αｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ；又称 α葡萄糖苷水
解酶）水解，从低聚糖底物的非还原端切开 α１，４
糖苷键，释放出葡萄糖，在机体多种代谢功能中起
着关键的作用。它与因代谢紊乱失调引起的疾病
如糖尿病密切相关［２］，人们试图寻找合适的抑制
剂，如 １９９５年德国拜耳公司上市的阿卡波糖
（Ａｃａｒｂｏｓｅ；拜唐平）现已成为控制和调节α葡萄糖
苷酶活性的首选药物，以期对有关疾病进行防治。
但是，由于阿卡波糖能够引起某些严重的副作用，
以 α葡萄糖苷酶为靶分子，从中药或天然产物中
寻找 α葡萄糖苷酶抑制剂已成为一个世界性的热
点［３７］。本文以芙蓉菊全草治疗糖尿病为线索，研
究其是否存在抑制 α葡萄糖苷酶活性成分，阐明
其治疗糖尿病的物质基础。
１　仪器与试剂
ＪＥＯＬＡＬ３００ＯＶ型核磁共振波谱仪，ＴＭＳ为
内标，二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）ｄ６为溶剂；Ｆｉｎｎｉｇａｎ
ＴＲＡＣＥＭＳ（ＥＩ电离源，７０ｅＶ）质谱仪；ＨＺＳＨ型
恒温水浴振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有
限公司）；ＵＶｍａｘＫｉｎｅｔｉｃＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＲｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＣＡ，
ＵＳＡ）。９６孔板购自 ＣｏｒｎｉｎｇＣｏｓｔａｒ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，
ＭＡ，ＵＳＡ）公司。α葡萄糖苷酶（ＥＣ３２１２０，
０２８Ｋ１１８６）、对硝基酚αＤ吡喃葡萄糖苷（ｐｎｉｔｒｏ
ｐｈｅｎｙｌαＤｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，ＰＮＰＧ；０９７Ｋ２５８２）、对
硝基苯酚（ｐｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ，ＰＮＰ；０９７Ｋ２５８２）、牛血清
白蛋白（ＢＳＡ）、ＤＭＳＯ皆购自 Ｓｉｇｍａ公司；阿卡波
糖（ａｃａｒｂｏｓｅ，１００８０８２００５０１）购自中国药品生物
制品检定所；Ｎａ２ＣＯ３购自北京化学试剂公司。柱
色谱和薄层色谱用硅胶皆为青岛海洋化工厂产
品；大孔吸附树脂 Ｄ１０１为天津化学试剂二厂产
·６０２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
品；所用试剂皆为市售分析纯。
芙蓉菊样品采自广东芙蓉菊栽培基地，经中国
科学院植物研究所郭仲琛研究员鉴定为Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ
的全草，凭证标本存放在中国科学院过程工程研究
所标本室，标本号为２００３０８１００１。
２　方法
２．１　α葡萄糖苷酶抑制活性组分的跟踪分离
芙蓉菊干燥全草７０％乙醇提取物溶于水中，依
次用环己烷、醋酸乙酯（ＥｔＯＡｃ）和正丁醇（ＢｕＯＨ）萃
取，得相应萃取和残留水层，其制备过程详见文献
［８９］。
ＥｔＯＡｃ萃取物和残留水层对α葡萄糖苷酶活性
具有抑制作用，进行如下分离纯化。
取 ＥｔＯＡｃ萃取物 ３５０ｇ经硅胶柱色谱，环己
烷ＥｔＯＡｃ梯度洗脱，得 ５个流分。流分 ２反复经
硅胶柱色谱，石油醚丙酮（９∶１）和三氯甲烷
（ＣＨＣｌ３）ＥｔＯＡｃ（８∶１）洗脱，得到化合物５，７二羟
基３′，４′，５′三甲氧基黄酮（１，３０ｍｇ）。流分３经
硅胶柱色谱，ＣＨＣｌ３ＥｔＯＡｃ（９∶１）和石油醚丙酮
（９∶１）洗脱，得到东莨菪素（２ｇ，２）。流分４经硅
胶柱色谱，ＣＨＣｌ３丙酮梯度洗脱，分为 Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４
个部分。Ａ部分经硅胶柱色谱，环己烷ＥｔＯＡｃ（１∶
１）洗脱，得到艾菊素（５ｇ）。Ｂ部分再经硅胶柱色
谱，环己烷ＥｔＯＡｃ梯度洗脱，得到２个组分；前一
组分经制备性 ＨＰＬＣ纯化，得到粗毛豚草素（３，３０
ｍｇ）、５，５′，７三羟基３′，４′二甲氧基黄酮（４，３０
ｍｇ）和柯伊利素（５，２０ｍｇ）；后一组分用丙酮重结
晶，得到万寿菊黄素３，６，７三甲基醚（６，１ｇ），母
液经聚酰胺柱色谱，Ｈ２ＯＭｅＯＨ洗脱，得到４（２０２
ｍｇ），５（２０５ｍｇ）和６（５ｍｇ）。Ｄ部份再经聚酰胺
柱色谱，ＥｔＯＡｃＭｅＯＨ洗脱，得到石杉黄素（７，５０
ｍｇ，４′，５′，５，７四羟基３′甲氧基黄酮）。流分５经
硅胶柱色谱，ＣＨＣｌ３ＭｅＯＨ（５∶１）洗脱，得到东莨菪
苷（８，２００ｍｇ）。
残留水层部分５００ｇ经大孔吸附树脂柱色谱，依
次用 １０％，３０％，６０％，９５％乙醇水溶液梯度洗脱。
６０％乙醇水溶液洗脱部分再反复经硅胶柱色谱，
ＣＨＣｌ３ＭｅＯＨＨ２Ｏ（６∶３∶１）洗脱，得５个流分。流分２
经硅胶柱色谱，ＣＨＣｌ３ＭｅＯＨ（２０∶１）洗脱，得到东莨菪
素（３５ｍｇ）；流分３经聚酰胺柱色谱，ＣＨＣｌ３ＭｅＯＨ（３∶
１）洗脱，得到化合物１（３４ｍｇ）和槲皮万寿菊素３，６
二甲醚（９，２１ｍｇ）；流分４经硅胶柱色谱，ＣＨＣｌ３
ＭｅＯＨ（５∶１）洗脱，得到化合物８（３０ｍｇ）。
２．２　α葡萄糖苷酶抑制活性的试验方法
２．２．１　试验方法　按稍改良的方法［１０］在９６孔板
上进行，用ＵＶｍａｘＫｉｎｅｔｉｃＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＲｅａｄｅｒ于４０５ｎｍ
波长下测定吸光度Ａ值。
２．２．２　标准曲线制作　根据采用的反应体系，用
０１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸盐缓冲液（ｐＨ６８）配制 １０００
μｍｏｌ·Ｌ－１ＰＮＰ溶液，稀释成２５０，２００，１５０，１００，５０，
２５，１０，５，２，０μｍｏｌ·Ｌ－１系列浓度。分别取１０个不
同浓度的 ＰＮＰ溶液各１６０μＬ，加入０２ｍｏｌ·Ｌ－１
Ｎａ２ＣＯ３溶液８０μＬ，混匀，在４０５ｎｍ下测定Ａ值，测
４组取平均值。以Ａ值为纵坐标（Ｙ），ＰＮＰ浓度（Ｘ）
为横坐标，绘制标准曲线。
２．２．３　α葡萄糖苷酶活力的测定　根据所采用的
反应体系：１１２μＬ０１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸钾缓冲液（ｐＨ
６８），加入２０μＬ０８Ｕ·ｍＬ－１α葡萄糖苷酶溶液，
８μＬＤＭＳＯ，３７℃恒温１５ｍｉｎ后加入５０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１ＰＮＰＧ溶液２０μＬ，３７℃恒温反应１５ｍｉｎ。再加
入８０μＬ０２ｍｏｌ·Ｌ－１的Ｎａ２ＣＯ３溶液，于４０５ｎｍ波
长下测Ａ值。
酶活力单位定义：３７℃，ｐＨ６８条件下，每分钟
水解底物ＰＮＰＧ所产生１μｍｏｌ·Ｌ－１ＰＮＰ的酶量，
规定为１个酶活力单位（Ｕ）。
２．２．４　数据分析　按照抑制率％ ＝［１－（样品
Ａ试验组 －样品Ａ空白组）／（对照Ａ试验组 －对照Ａ空白组）］×
１００％计算抑制率，并用 ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ７５ＳＲ１软件计算
半数抑制浓度（ＩＣ５０）值。实验数据用 珋ｘ±ｓ表示（ｎ＝
４）。各组组间差异采用Ｆ检验 双样本方差分析后，
采用ｔ检验（Ｅｘｃｅｌ）进行组间的两两比较，以Ｐ＜００５
作为具有统计学意义的标准。
３　结果与讨论
３．１　结构鉴定
粗毛豚草素（ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ，３）和石杉黄素（ｓｅｌａｇｉｎ，
４′，５′，５，７四羟基３′甲氧基黄酮；７）的结构鉴定已
在文献［９］报道；通过与文献数据比较和与对照品
共ＴＬＣ分析，鉴定了艾菊素（ｔａｎａｃｅｔｉｎ）［１１１２］，５，７
二羟基３′，４′，５′三甲氧基黄酮（ｔｒｉｃｅｔｉｎ３′，４′，
５′ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ，１），５，５′，７三羟基３′，４′二甲氧
基黄酮（ａｐｏｍｅｔｚｇｅｒｉｎ，４），万寿菊黄素３，６，７三甲基
醚（ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ，６）［９］，东莨菪
素（ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ，２），东莨菪苷（ｓｃｏｐｏｌｉｎ，８）［１１］的化学
结构。
·７０２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
柯伊利素（ｃｈｒｙｓｏｅｒｉｏｌ，５）黄色粉末；ＥＩＭＳｍ／ｚ
３００［Ｍ］＋；１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，３００ＭＨｚ）δ：１２９６
（１Ｈ，ｓ，５ＯＨ），６９０（１Ｈ，ｓ，３Ｈ），６１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ
６），６５０（１Ｈ，ｓ，Ｈ８），７５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ２′），７５４（１Ｈ，
ｓ，Ｈ６′），６９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９０Ｈｚ，Ｈ５′），３８９（３Ｈ，
ｓ，３′ＯＭｅ）。以上１ＨＮＭＲ数据与文献［１３］报道的
数据一致，鉴定该化合物为柯伊利素。
槲皮万寿菊素３，６二甲醚（ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６
ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ，９）淡黄色粉末；１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，
３００ＭＨｚ）δ：１２７７（１Ｈ，ｓ，５ＯＨ），７５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２０Ｈｚ，Ｈ２′），７４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２０，８５Ｈｚ，Ｈ６′），
６８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８５Ｈｚ，Ｈ５′），６４３（１Ｈ，ｓ，Ｈ８），
３７６（３Ｈ，ｓ，３ＯＭｅ），３７２（３Ｈ，ｓ，６ＯＭｅ）。以上１Ｈ
ＮＭＲ数据与文献［１４］报道的数据一致，鉴定该化合
物为５，７，３′，４′四羟基３，６二甲氧基黄酮，即槲皮
万寿菊素３，６二甲醚。
以上化合物的化学结构如图１。
　 Ｒ１　 Ｒ２　 Ｒ３　 Ｒ４　 Ｒ５　 Ｒ６　 ２　 Ｒ＝Ｈ
１ Ｈ Ｈ Ｈ ＯＭｅＭｅ ＯＭｅ８ Ｒ＝βＤｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ
３ Ｈ ＯＭｅＨ Ｈ Ｈ Ｈ
４ Ｈ Ｈ Ｈ ＯＭｅＭｅ ＯＨ
５ Ｈ Ｈ Ｈ ＯＭｅＨ Ｈ
６ Ｍｅ ＯＭｅＯＭｅＯＨ Ｈ Ｈ
７ Ｈ Ｈ Ｈ ＯＭｅＨ ＯＨ
９ Ｈ ＯＭｅＯＭｅＯＨ Ｈ Ｈ
图１　芙蓉菊中化合物的结构式
３．２　α葡萄糖糖苷酶抑制活性
３．２．１　实验优化　反应体系按文献［１０］方法，对
α葡萄糖糖苷酶和底物 ＰＮＰＧ的浓度配比进行了
考察（表 １），即考察阳性对照药阿卡波糖的浓度
为１０００ｍｇ·Ｌ－１时对 α葡萄糖糖苷酶的抑制率。
发现在表１所示的１２个配比，阿卡波糖的抑制率
均大于６０％，抑制率大于８５％的有４组，即５～８
组。但在这些配比中，不加抑制剂阿卡波糖时
ＰＮＰ产生量有很大差别，导致 Ａ值有差别。为提
高检测灵敏度，选择阿卡波糖抑制率最高、ＰＮＰ产
量相对较大的配比，即 α葡萄糖苷酶和底物 ＰＮＰＧ
的浓度分别定为 ０８Ｕ·ｍＬ－１和 ５ｍｍｏｌ·Ｌ－１进
行实验。
表１　α葡萄糖苷酶、底物ＰＮＰＧ和阿卡波糖
温孵体系的优化
组号
酶浓度
／Ｕ·ｍＬ－１
底物浓度
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
抑制率
／％
Ａ值
１ １０ ７５ ６３３２ ２６８
２ １０ ５０ ７４６８ ２４３
３ １０ ２５ ７７０８ １５０
４ ０２ ７５ ８３４３ １０８
５ ０２ ５０ ８５６９ １０３
６ ０２ ２５ ８８３２ ０７５
７ ０８ ５０ ８９７６ ２２５
８ ０７ ５０ ８６９７ ２１５
９ ０６ ５０ ８１１１ ２０１
１０ ０５ ５０ ８２５０ １８６
１１ ０４ ５０ ７２０７ １６５
１２ ０３ ５０ ６３３３ １４８
３．２．２　标准曲线　以ＰＮＰ浓度（Ｘ）为横坐标，Ａ值
为纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线，得回归方程 Ｙ＝
０００７７Ｘ＋００１２３（ｒ＝０９９９０），线性关系良好；线
性浓度范围为０～２５０μｍｏｌ·Ｌ－１。
３．２．３　提取部位的 α葡萄糖苷酶抑制活性　从表
２试验结果可见，ＥｔＯＡｃ萃取物和残留水层的抑制
活性较好，其抑制率明显高于其他萃取物以及阳性
对照药物阿卡波糖［ＩＣ５０＝（３１５８６±２４８９）ｍｇ·
Ｌ－１］。
表２　芙蓉菊７０％乙醇提取物及其萃取物对
α葡萄糖苷酶抑制活性的筛选
试验部位 ＩＣ５０／ｍｇ·Ｌ－１
７０％乙醇提取物 １２６９４９±５５４５
环己烷萃取物 ８８９２１±１０９９３
醋酸乙酯萃取物 ２９２７８±４４３１）
正丁醇萃取物 １９１９４３±２８８１３
水溶性部位 ２０８１８±１３２９２）
阿卡波糖 ３１５８６±２４８９
　　注：与阳性对照组阿卡波糖比较１）Ｐ＜０００１，２）Ｐ＜００５。
３．２．４　活性部位中单体化合物对 α葡萄糖苷酶的
抑制活性　由表２筛选结果，证明醋酸乙酯萃取物
和水溶性部位对α葡萄糖苷酶具有抑制活性，从其
分离得到的单体化合物抑制活性的ＩＣ５０总结在表３。
除化合物１，４和８外，其他６个化合物的 ＩＣ５０值均
小于阳性对照药阿卡波糖，抑制活性由高到低的顺
序是：２＞７＞６＞９＞３＞５。从有活性的醋酸乙酯
萃取物中分离得到的艾菊素对 α葡萄糖苷酶活性
无抑制作用，ＩＣ５０＞１０００μｍｏｌ·Ｌ
－１。从水溶性部
位分离得到的３个化合物中，仅有化合物２对 α葡
·８０２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
萄糖苷酶活性有抑制作用。因此，芙蓉菊中对 α葡
萄糖苷酶活性有抑制作用的活性成分主要集中在
７０％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取物中。
表３　活性部位中单体化合物对α葡萄糖苷
酶抑制活性的ＩＣ５０
化合物 来源部位 ＩＣ５０／μｍｏｌ·Ｌ－１ ＩＣ５０／ｍｇ·Ｌ－１
阿卡波糖 　 ４８９２５±３８５５ ３１５８６±２４８９
１ 醋酸乙酯、水 　　＞１０００ ＞３４４
２ 醋酸乙酯、水 ３４３６±２０６１） ６６０±０４０１）
３ 醋酸乙酯 １４６２８±１２４４２） ４３８８±３７３１）
４ 醋酸乙酯 　　＞１０００ ＞３３０
５ 醋酸乙酯 ２４６２６±８７３１） ７３８７±２６２１）
６ 醋酸乙酯 ７４０６±３８３１） ２６６６±１３８１）
７ 醋酸乙酯 ４２１９±５２５２） １３３３±１６６１）
８ 醋酸乙酯、水 　　＞１０００ ＞７００
９ 水 １３６２０±２５７３２） ４７１３±８９０１）
　　注：与阳性对照组阿卡波糖比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜０００１。
３．２．５　抑制作用类型的研究　根据底物不同浓度
时的酶催化反应，求出１／［Ｓ］与１／Ｖ（［Ｓ］为底物浓
度，Ｖ为反应速度），绘图，并求出线性方程 Ｙ＝
３１９８５Ｘ＋２０３９３。则 Ｖｍａｘ＝０４９μｍｏｌ·Ｌ
－１·
ｓ－１，Ｋｍ＝１５７ｍｍｏｌ·Ｌ
－１（Ｋｍ为米氏常数）。对于
ＩＣ５０值大于阳性对照药阿卡波糖的６个化合物进行
了抑制作用类型的研究，受试化合物选取两个合适
的浓度，ＰＮＰＧ选取 ４个浓度，测定反应速度。按
ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ作图法，以１／［Ｓ］为横坐标，１／Ｖ为
纵坐标，分别绘制６个化合物抑制作用的动力学曲
线（图２～７）。从图２～７可以看出，所有化合物的
反应速度 Ｖｍａｘ随受试化合物浓度的增大而保持不
变，Ｋｍ增大，判断这些化合物对 α葡萄糖苷酶抑制
作用属竞争性抑制作用［１５１６］。根据竞争性抑制作
用动力学方程１／Ｋｍ′＝１／｛Ｋｍ（１＋［Ｉ］／Ｋｉ）｝（式中
［Ｉ］为抑制剂浓度），可求出受试化合物２，３，５～７，９
的抑制剂常数（Ｋｉ）值分别为：００７３，００４４，１７４７，
００６３，００４０，００５７ｍｍｏｌ·Ｌ－１。
图２　２的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
图３　３的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
图４　５的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
图５　６的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
图６　７的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
图７　９的ＬｉｎｅｗｅａｖｅＢｕｒｋ双倒数曲线
４　结论
选取生物活性跟踪的方法首次用 α葡萄糖苷
·９０２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
酶抑制活性体外筛选模型对芙蓉菊７０％乙醇提取
物及其不同极性萃取物抑制 α葡萄糖苷酶活性进
行了筛选，结果表明醋酸乙酯萃取物和水溶性部位
有较高的抑制活性。
从２个活性部位中分离得到的单体化合物包括
倍半萜、黄酮和香豆素等类化合物。其中，倍半萜类
化合物艾菊素、香豆素苷类化合物东莨菪苷、兼具
５，７二羟基和３′，４′二甲氧基取代基本结构的黄酮
类化合物５，７二羟基３′，４′，５′三甲氧基黄酮（１）和
５，５′，７三羟基３′，４′二甲氧基黄酮（４）对 α葡萄糖
苷酶活性无抑制作用。石杉黄素抑制 α葡萄糖苷
酶活性最高［ＩＣ５０＝（４２１９±５２５）μｍｏｌ·Ｌ
－１或
（１３３３±１６６）ｍｇ·Ｌ－１］。依据 ＩＣ５０值，本文中的
黄酮类化合物抑制 α葡萄糖苷酶活性由强到弱的
顺序是：７＞６＞９＞３＞５。
上述５个黄酮类化合物和香豆素类化合物东莨
菪素对α葡萄糖苷酶抑制作用属于竞争性抑制类
型，与阳性对照药阿卡波糖的抑制作用类型相同。
文献［１７］报道万寿菊黄素３，６，７三甲醚对体
外培养的大鼠胰岛分泌胰岛素功能有促进作用，综
合本文研究结果，其作用于降糖作用的多个环节，推
测其对糖尿病防治可能具有潜在的开发应用前景。
文献［１７］报道东莨菪素对体外培养的大鼠胰
岛分泌胰岛素功能有抑制作用，而本文结果东莨菪
素对α葡萄糖苷酶具有抑制活性，其在糖尿病防治
上的应用应慎重、综合考虑。
芙蓉菊中的黄酮类化合物可能是其防治糖尿病
的物质基础，有待整体药理学研究进一步证实。
［参考文献］
［１］　 江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海人民出版社，
１９７７：１０４７．
［２］　 ＨｏｒｉＳ，ＦｕｋａｓｅＨ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆαｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆＮｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｖａｌｉｏｌｓｍｉｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｒａｌａｎｔｉｄｉａ
ｂｅｔｉｃａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９８６，２９：１０３８．
［３］　 ＨｉｒｏｙｕｋｉＦ，ＴｏｍｏｈｉｄｅＹ，ＫａｚｕｎｏｒｉＯ．Ｅｆｉｃａｃｙａｎｄｓａｆｅｔｙｏｆ
Ｔｏｕｃｈｉｅｘｔｒａｃｔ，ａｎαｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｆｅｒｍｅｎｔｅｄ
ｓｏｙｂｅａｎｓ，ｉｎｎｏｎｉｎｓｕｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｄｉａｂｅｔｉｃｍｅｌｉｔｕｓ［Ｊ］．ＪＮｕｔｒ
Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００１，１２：３５１．
［４］　 ＭａｔｓｕｉＴ，ＵｅｄａＴ，ＯｋｉＴ，ｅｔａｌ．αＧｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｏｎ
ｏｆｎａｔｕｒａｌａｃｙｌａｔｅｄａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ．１．Ｓｕｒｖｅｙｏｆｎａｔｕｒａｌｐｉｇｍｅｎｔｓ
ｗｉｔｈｐｏｔｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００１，
４９：１９４８．
［５］　 ＫｉｍＫＹ，ＮａｍａＫＡ，ＫｕｒｉｈａｒａＨ，ｅｔａｌ．Ｐｏｔｅｎｔαｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｅｄａｌｇａＧｒａｔｅｌｏｕｐｉａｅｌｉｐｔｉｃａ［Ｊ］．
Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，６９：２８２０．
［６］　 ＬｅｅＳＳ，ＬｉｎＨＣ，ＣｈｅｎＣＫ．Ａｃｙｌａｔｅｄｆｌａｖｏｎｏｌｍｏｎｏｒｈａｍｎｏ
ｓｉｄｅｓ，αｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｆｒｏｍＭａｃｈｉｌｕｓｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．
Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，６９：２３４７．
［７］　 康文艺，张丽，宋艳丽．滇丁香中抑制α葡萄糖苷酶活性成分
研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００９，３４（４）：４０６．
［８］　 杨秀伟，邹磊，吴琦，等．芙蓉菊化学成分研究［Ｊ］．中国中药
杂志，２００８，３３（８）：９０５．
［９］　 傅德贤，邹磊，杨秀伟．芙蓉菊中黄酮类化学成分的研究［Ｊ］．
天然产物研究与开发，２００８，２０（２）：２６５．
［１０］　ＬｉＴｉｎｇ，ＺｈａｎｇＸｉａｏｄｏｎｇ，ＳｏｎｇＹｕｗｅｎ，ｅｔａｌ．Ａｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ
ｂａｓｅｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｆｏｒａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．
ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，２００５，１０（１０）：１１２８．
［１１］　ＷｕＱｉ，ＺｏｕＬｅｉ，ＹａｎｇＸｉｕｗｅｉ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖｅｌｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅａｎｄ
ｃｏｕｍａｒｉｎｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍ ｔｈｅｗｈｏｌｅｈｅｒｂｓｏｆＣｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍ
ｃｈｉｎｅｎｓｅ［Ｊ］．ＪＡｓｉａｎＮａｔＰｒｏｄＲｅｓ，２００９，１１（１）：８５．
［１２］　杨秀伟，吴琦，邹磊，等．芙蓉菊中艾菊素和草蒿素结构的
ＮＭＲ信号表征［Ｊ］．波谱学杂志，２００８，２５（１）：１１７．
［１３］　邹建华，杨峻山．短瓣金莲花的化学成分研究［Ｊ］．中国药学
杂志，２００５，４０１（１０）：７３３．
［１４］　滑艳，白茎绢．蒿黄酮类化合物的研究［Ｊ］．中国中药杂志，
２００６，３１（１０）：８２０．
［１５］　沈同，王镜岩．生物化学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，１９９０：２６３．
［１６］　ＧａｏＨｏｎｇ，ＨｕａｎｇＹｉｎａ，ＧａｏＢｏ，ｅｔａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｎα
ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｂｙＡｄｈａｔｏｄａｖａｓｉｃａＮｅｅｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００８，１０８
（３）：９６５．
［１７］　邹磊，吴琦，杨秀伟，等．芙蓉菊化学成分对体外培养大鼠胰
岛分泌胰岛素作用的研究［Ｊ］中国中药杂志，２００９，３４
（１１）：１４０１．
·０１２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙｇｕｉｄｅｄｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｆｒｏｍｗｈｏｌｅ
ｈｅｒｂｓｏｆＣｒｏｓｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ
ＷＵＱｉ１，ＹＡＮＧＸｉｕｗｅｉ１，ＺＯＵＬｅｉ２，３，ＦＵＤｅｘｉａｎ３
（１．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌ＆ＢｉｏｍｉｍｅｔｉｃＤｒｕｇｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｃｈｏｏｌｏｆ
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＮａｔｉｏｎａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲ＆ＤＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ；
３．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｒｏｃｅｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆ７０％ ａｑｕｅｏｕｓｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｔｈｅｗｈｏｌｅｐｌａｎｔｏｆＣｒｏｓ
ｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅｆｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙｇｕｉｄｅｄｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ
ｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｔｈｅｗｈｏｌｅｐｌａｎｔｏｆＣ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ．Ｔｈｅｄｒｉｅｄｗｈｏｌｅｐｌａｎｔｓｗｅｒｅ
ｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈ７０％ ａｑｕｅｏｕｓｅｔｈａｎｏｌ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｗａｓｓｕｓｐｅｎｄｅｄｉｎｗａｔｅｒａｎｄｔｈｅｎｆｕｒｔｈｅｒｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｙｗｉｔｈｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ，
ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ，ａｎｄｎｏｒｍａｌｂｕｔａｎｏｌ，ａｎｄｔｅｓｔｅｄｆｏｒｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆ
ｉｓｏｌａｔｅｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇＮＭＲａｎｄＭＳ，ａｎｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｄａｔａｏｆａｕｔｈｅｎｔｉｃｓａｍｐｌｅｓ．
Ａｌｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅａｓｓａｙｅｄｆｏｒｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｖｉｔｒｏ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅａｎｄｗａｔｅｒｌａｙｅｒ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｏｖｅｒｔｈｅｖａｒｉｏｕｓｓｔａｔｉｏｎａｒｙｐｈａｓｅｓ．Ｔｒｉｃｅ
ｔｉｎ３′，４′，５′ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（１），ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ（２），ｔａｎａｃｅｔｉｎ，ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ（３），ａｐｏｍｅｔｚｇｅｒｉｎ（４），ｃｈｒｙｓｏｅｒｉｏｌ（５），ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，
７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（６），ｓｅｌａｇｉｎ（７），ｓｃｏｐｏｌｉｎ（８），ａｎｄｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（９）ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｄｉｆｅｒ
ｅｎｔｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ２，３，５７ａｎｄ９ｆｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｗｉｔｈＩＣ５０
（μｍｏｌ·Ｌ－１）ｖａｌｕｅｓｏｆ（３４３６±２０６），（１４６２８±１２４４），（２４６２６±８７３），（７４０６±３８３），（４２１９±５２５）ａｎｄ
（１３６２０±２５７３），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｅｒｅａｓｓａｙｅｄａｓｔｈｅａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ａｐｏｓｉｔｉｖｅｄｒｕｇ，ａｃａｒｂｏｓｅ，ｓｈｏｗｅｄｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｗｉｔｈＩＣ５０ｖａｌｕｅｏｆ（４８９２５±３８５５）μｍｏｌ·Ｌ
－１ｉｎｔｈｅｓａｍｅａｓｓａｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｉｔｈｔｈｅａｂｏｖｅｔｅｓｔｃｏｍ
ｐｏｕｎｄｓ．ＴｈｅＩＣ５０ｖａｌｕｅｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｓ１，４，８ａｎｄｔａｎａｃｅｔｉｎｗｅｒｅａｌｍｏｒｅｔｈａｎ１０００μｍｏｌ·Ｌ
－１．Ｃｏｎｃｌｕｔｉｏｎ：Ｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ５
ａｎｄ９ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｕｓＣｒｏｓｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ．Ｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ２，３，５７，ａｎｄ９ｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃ
ｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔａｌｐｈａｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｖｉｔｒｏｉｎｔｈｅｓｉｍｐｌｅｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｍａｎｎｅｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄ
ｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｉｎｔｈｅｗｈｏｌｅｐｌａｎｔｏｆＣ．ｃｈｉｎｅｎｓｅｆｏｒｈｕｍａｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｃｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ；ｆｌａｖｏｎｅ；αｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
［责任编辑　王亚君］
·１１２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９