全 文 ：北柴胡药材质量分析与评价
朱再标１，３，梁宗锁１，２，杨东风２，段琦梅２
（１．中国科学院 教育部 水土保持与生态环境研究中心，陕西 杨凌 ７１２１００；
２．西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 ７１２１００；３．中国科学院 研究生院，北京 １０００４９）
［收稿日期］ ２００７０８２７
［基金项目］ 陕西省中药材指纹图谱与天然产物库研究中心
项目（２００５２００７）和教育部“新世纪优秀人才支持计划”
［通讯作者］ 梁宗锁，Ｔｅｌ：（０２９）８７０１４５８２，Ｅｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｚｓ＠
ｍｓ．ｉｓｗｃ．ａｃ．ｃｎ
柴胡在我国作为药材已有两千多年历史，在中
医临床上得到广泛应用。由于各地栽培柴胡的种源
十分混杂，质量差异悬殊，而中药材的质量优劣直接
影响中药疗效，故对其质量评价的研究已引起众多
研究者的重视，取得了大量的研究成果。但在众多
研究柴胡质量的文献中，各研究者的评价标准各异，
如柴胡皂苷 ａ（简称 ＳＳａ）［１］、柴胡皂苷 ｄ（简称
ＳＳｄ）［２］、ＳＳａ＋ＳＳｄ［３］、ＳＳａ＋柴胡皂苷ｃ（简称ＳＳｃ）
＋ＳＳｄ［４６］、柴胡总皂苷（简称 ＳＳｔ）［７］、ＳＳａ＋ＳＳｔ［８］、
挥发油＋ＳＳｔ＋醇浸出物 ＋总灰分［９］、ＳＳａ＋ＳＳｄ＋
ＳＳｔ＋醇浸出物＋总灰分 ＋酸不溶灰分［１０］等。在前
人对柴胡皂苷类成分指纹图谱研究中，通过比较不
同来源柴胡药材的指纹图谱，为鉴别和区分不同来
源的柴胡药材提供了新方法，为全面控制柴胡药材
的质量奠定了基础［１１１３］，但未能进一步将指纹图谱
定性和有效成分定量分析结合起来。而以中药药效
指纹图谱结合指标成分含量对中药材进行质量评价
或控制，既可以完善表述中药的整体性特征，又有别
于西药单一成分定量的质量控制模式［１４１５］。本研
究通过测定不同来源柴胡药材中 Ｓｓａ，ＳＳｄ和 ＳＳｔ含
量，结合柴胡皂苷类成分的 ＨＰＬＣ指纹图谱并进一
步分析前人的研究资料，探索北柴胡质量评价新方
法，以期为各地不同种柴胡的质量评价提供依据，为
进一步建立柴胡药材质量综合评价体系奠定基础。
１ 仪器与试药
ＵＶ－２８０２Ｈ型紫外可见分光光度计［尤尼柯
（上海）仪器有限公司］；Ｗａｔｅｒｓ１５２５二元高效液相
色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ２９９６二极管阵列检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ２
色谱分析软件，优普超纯水机（上海优普科技公
司）。ＳＳａ和ＳＳｄ对照品购自中国药品生物制品检
定所（批号１１０７７７２００４０４，１１０７７８２００５０５），乙腈为
色谱纯（美国Ｔｅｄｉａ公司），其余试剂均为分析纯。
１４个柴胡样品采自全国各主产区，由西北农林
科技大学生命科学院药用植物教研室鉴定，见表１。
表１ 不同品种、不同产地的柴胡样品
Ｎｏ 样品 采集地
１ 北柴胡 Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ 河北省石家庄市
２ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 黑龙江省牡丹江市
３ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 山西省陵川县
４ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 山西省左权县
５ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 甘肃省礼泉县
６ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省麟游县１
７ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省麟游县２
８ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省凤县岩湾乡
９ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省凤县河口镇
１０ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省宝鸡市
１１ 北柴胡 Ｂ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ 陕西省杨凌区
１２ 长白柴胡 Ｂ．ｋｏｍａｒｏｖｉａｎｕｍ 吉林省舒兰市
１３ 秦岭柴胡 Ｂ．ｌｏｎｇｉｃａｕｌｅ． 陕西省南郑县
ｖａｒ．ｇｉｒａｌｄｉ
１４ 狭叶柴胡 Ｂ．ｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉｕｍ 山西省太谷县
２ 试验方法
２．１ 柴胡皂苷类成分 ＨＰＬＣ指纹图谱获得及 ＳＳａ，
ＳＳｄ含量测定
２．１．１ 供试品溶液的制备［１０，１１］ 精密称取样品
粉末０５ｇ，置具塞锥形瓶中，加入２５ｍＬ２％氢氧
化钾甲醇溶液，超声提取 ３０ｍｉｎ，放冷，滤过，以
２％氢氧化钾甲醇溶液定容至２５ｍＬ量瓶中，即为
提取液。精密移取提取物溶液 ２ｍＬ，置于 １０ｍＬ
量瓶中，加入４％盐酸甲醇溶液２ｍＬ，摇匀后静置
于室温下反应４ｈ，再加２％氢氧化钾甲醇溶液３
ｍＬ，甲醇定容。临用前过０４５μｍ滤膜，即为供试
品溶液。
２．１．２ ＳＳａ和 ＳＳｄ对照品储备液及工作液制备
精密称定 ＳＳａ对照品，用甲醇配成１８６ｍｇ·ｍＬ－１
的储备液。精密量取该储备液０２ｍＬ，置于１０ｍＬ
量瓶中，加入４％盐酸甲醇溶液２ｍＬ，摇匀后静置
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于室温下反应４ｈ，再加 ２％氢氧化钾甲醇溶液 ３
ｍＬ，用甲醇定容，即为 ＳＳａ对照品工作液。另精密
称取ＳＳｄ对照品，用甲醇配成２００ｍｇ·ｍＬ－１的储
备液，其余步骤同上。
２．１．３ 色谱条件 ＷａｔｅｒｓＳｕｎＦｉｒｅＣ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为 Ａ乙腈Ｂ水，梯度
洗脱（０ｍｉｎ，１０％Ａ；５ｍｉｎ，２０％Ａ；１０ｍｉｎ，３５％Ａ；１５
ｍｉｎ，４０％Ａ；２５ｍｉｎ，５０％Ａ；３５ｍｉｎ，７５％Ａ；４０ｍｉｎ，
８５％Ａ；５０ｍｉｎ，１００％Ａ）；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测
波长２５２ｎｍ；柱温３０℃；进样量２０μＬ。
２．１．４ 线性关系考察 分别取２．１．２中 ＳＳａ对照
品工作液０，２，４，６，８，１０，１５，２０μＬ注入色谱仪，按
２．１．３项下的色谱条件测定峰面积。以峰面积值为
纵坐标Ｙ，ＳＳａ的浓度为横坐标Ｘ，绘制标准曲线，得
回归方程Ｙ＝１３７０５Ｘ＋３５４９６，ｒ＝０９９９６。同样，
取 ＳＳｄ对照品工作液重复上述步骤，得回归方程
Ｙ＝６４３６４Ｘ＋１６４０８，ｒ＝０９９９５。
２．１．５ 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样
６次，记录色谱图。各主要色谱峰相对峰面积的
ＲＳＤ介于０８％～２５％，相对保留时间的ＲＳＤ介于
０１％～１２７％，表明仪器精密度良好。
２．１．６ 重复性试验 取同一样品６份，按供试品溶
液制备方法进行制备，分别进样，记录色谱图。各主
要色谱峰相对峰面积的ＲＳＤ介于０８％～２８％，相
对保留时间的 ＲＳＤ介于０１％ ～１０％。表明方法
重复性良好。
２．１．７ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于
０，４，８，１２，２４ｈ进样分析，记录色谱图。各主要色谱
峰相对峰面积的ＲＳＤ介于０８％～２８％，相对保留
时间的 ＲＳＤ介于０１％ ～０６％，表明样品在 ２４ｈ
内稳定。
２．１．８ 回收率试验 精密称取已知 Ｓｓａ，ＳＳｄ含量
的北柴胡样品５份，分别加入一定量的 Ｓｓａ，ＳＳｄ对
照品，制成供试品溶液并按上述色谱条件分别测定。
Ｓｓａ，ＳＳｄ的回收率分别为９８０２％，９９９３％，ＲＳＤ分
别为１９２％，１１４％。
２．２ 分光光度法测定ＳＳｔ含量［１０，１１］
２．２．１ 样品的测定 精密量取２．１．１项下的提取
物溶液１０ｍＬ，置蒸发皿中于水浴上蒸干，残渣加正
丁醇饱和的水１０ｍＬ溶解，置分液漏斗中，用水饱和
的正丁醇提取３次，每次用量分别为２０，１０，１０ｍＬ，
合并正丁醇层，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定
容至１０ｍＬ量瓶中。再移取此甲醇溶液０５ｍＬ，蒸
去溶媒后加 １％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液 ０１
ｍＬ，蒸干，加８５％磷酸４ｍＬ，７０℃下加热３０ｍｉｎ，冷
却至室温。以水为空白，在５４５ｎｍ处测定吸光度。
２．２．２ 标准曲线的绘制 精密量取 ２００ｍｇ·
ｍＬ－１ＳＳｄ对照品储备液 ２５，５０，７５，１００，１２５，１５０
μＬ，用甲醇定容至１０ｍＬ，按样品测定方法测定吸光
度。以吸光度值为纵坐标 Ｙ，ＳＳｄ的浓度为横坐标
Ｘ，绘制标准曲线，得回归方程 Ｙ＝００１１６Ｘ＋
００２４４，ｒ＝０９９８８。
３ 结果
３．１ 不同柴胡样品Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳｔ含量比较
不同来源柴胡的 ＳＳａ、ＳＳｄ及 ＳＳｔ含量测定结
果见表２，差异较大（图１）。北柴胡的各项指标普
遍高于其他种柴胡，但在１１批不同产地的北柴胡
中，各项指标也差异显著，如采自陕西杨凌的北柴
胡 ＳＳａ含量是牡丹江样品的 ３９５倍，而 ＳＳｄ含量
是山西左权样品的４２９倍。若以 Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳｔ含
量为评价指标，采于陕西杨凌的北柴胡质量最高，
陕西宝鸡和河北石家庄的次之。山西太谷的狭叶
柴胡各项指标都远远低于其他样品。吉林舒兰的
长白柴胡中 Ｓｓａ，ＳＳｄ含量都仅高于太谷的狭叶柴
胡，ＳＳｔ含量也在 １４个样品中排在倒数第三。采
于陕西南郑的秦岭柴胡的 Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳｔ含量高于
舒兰的长白柴胡和太谷的狭叶柴胡，而与牡丹江
的北柴胡比较接近。
表２ 不同来源柴胡的ＳＳａ，ＳＳｄ，ＳＳｔ质量分数
ｍｇ·ｇ－１
来源 ＳＳａ ＳＳｄ ＳＳａ＋ＳＳｄ ＳＳｔ
河北石家庄 ３６６ｃ １２０６ｂ １５７３ｂ １８２９ｂｃ
黑龙江牡丹江 １９８ｄｅ ５７６ｇ ７７４ｆ １０９１ｄｅ
山西陵川 ２１５ｄｅ ４４５ｈ ６６０ｇ ７７８ｅｆ
山西左权 １７２ｄｅ ３９９ｈｉ ５７０ｇｈ １１１８ｄ
甘肃礼泉 ２２６ｄ ９３２ｅ １１５７ｄ １８４４ｂｃ
陕西麟游 １３５６ｃ １１１８ｃ １４７５ｃ １７５０ｃ
陕西麟游 ２２５２ｄ ７３５ｆ ９８８ｅ １１７６ｄ
陕西凤县岩湾乡 ４３８ｂｃ １０１７ｄ １４５５ｃ １７４９ｃ
陕西凤县河口镇 ３６３ｃ ８７２ｅ １２３５ｄ １９１８ｂｃ
陕西宝鸡 ４８３ｂ １１７３ｂｃ １６５６ｂ ２１３９ｂ
陕西杨凌 ７８３ａ １７１１ａ ２４９４ａ ２５４０ａ
山西太谷 ００９ｆ １１７ｊ １２６ｉ ４９３ｆ
吉林舒兰 １２５ｅ ３７０ｉ ４９５ｈ １０２３ｄｅ
陕西南郑 ２２６ｄ ５６８ｇ ７９４ｆ １０６７ｄｅ
注：同列中不同英文字母表示差异达显著水平（Ｐ＜００５）
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图１ １１批北柴胡皂苷类成分指纹图谱比较
３．２ 柴胡皂苷类成分 ＨＰＬＣ指纹图谱的建立与比
较
３．２．１ 共有峰的确定和对照指纹图谱的建立 对
１１个北柴胡样品进行测定分析，比较其色谱图，共
确定１８个共有峰（图１）。经对照品确认４号峰为
ＳＳｄ，８号峰为ＳＳａ。以４号峰为参照峰，计算其他各
峰相对保留时间，结果表明１８个共有峰相对保留时
间的ＲＳＤ均在１０％以下，且不同样品间各共有峰
光谱图较为一致，说明１８个共有指纹峰确认结果较
为可靠，可用于建立柴胡药材皂苷类成分对照指纹
图谱。选择共有模式生成法，并采用平均矢量算法，
生成的对照指纹图谱各共有峰相对保留时间（相对
峰面积）为：０７２４（００８７）；０８４７（００５５）；０９４４
（００１４）；１（１）；１０３１（０００８）；１０５０（００１６）；
１０６９（０００８）；１０９９（０３１６）；１２５９（００２２）；
１３７９（００２７）；１４８３（０００８）；１７４８（００４３）；
１７７５（００１６）；１９９０（００２８）；２０１２（００２２）；
２１０４（００１１）；２１７３（００１２）；２２７８（００１８）。
３．２．２ 不同来源柴胡皂苷类成分指纹图谱比较
１１批北柴胡的指纹图谱中共有峰相对保留时间具
有良好的一致性，图谱相似度高（图１），而不同种柴
胡的皂苷类成分指纹图谱差异较大（图２）。太谷产
狭叶柴胡 ５，６，９，１１号峰缺失，而在保留时间
５１６９２ｍｉｎ处多１个色谱峰；南郑的秦岭柴胡在保
留时间 １８７８５ｍｉｎ处多 １个色谱峰而缺少 １８号
峰；舒兰的长白柴胡分别在保留时间 ２３９９３，
３２１３８，３７９６６，４８４７１ｍｉｎ处各出现１个色谱峰，
而９，１７，１８号峰均未检测到。说明各种柴胡在皂苷
类成分的种类上有其自身特点，利用本方法建立的
指纹图谱可以很好的鉴别不同种的柴胡。
３．２．３ 相似度评价 将１１批北柴胡药材样品与计
图２ 不同种柴胡皂苷类成分指纹图谱比较
算得到的对照指纹图谱相比较，分别计算相关系数
和夹角余弦系数。结果表明１１批北柴胡药材的指
纹图谱与对照指纹图谱间的夹角余弦系数和相关系
数都在０９９以上，说明不同产地北柴胡皂苷类成分
相对含量较为一致，仅用相似度无法评价各产地北
柴胡药材的质量优劣。若考虑其他３种柴胡药材的
ＨＰＬＣ图谱比北柴胡多出的６个色谱峰，以这２４个
指纹峰的相对峰面积为基本数据（若某种柴胡缺失
某峰则记为０），以相关系数和夹角余弦系数为指标
对１４批不同来源柴胡药材进行相似度评价，则狭叶
柴胡、秦岭柴胡、长白柴胡的指纹图谱与北柴胡对照
指纹图谱间的相关系数和夹角余弦系数分别为
０８１０和 ０８２７，０９９７和 ０９９７，０９２６和 ０９２８。
说明狭叶柴胡和长白柴胡的皂苷类成分与北柴胡差
异较大，而秦岭柴胡与北柴胡较接近。
３．３ 北柴胡药材中柴胡皂苷类成分含量和指纹图
谱总峰面积之间的相关分析
对１１批北柴胡样品的 Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳａ＋ＳＳｄ和
ＳＳｔ含量以及皂苷类成分指纹图谱中１８个共有峰的
总峰面积做相关分析，发现相关系数多数在０９２以
上，最低的也达到了０８４６３。而在相关系数检验表
中，测量个数ｎ＝１１，自由度ｆ＝９时，ｒ＝０７３４８，说
明上述指标之间存在极显著线性正相关关系。
４ 结论和讨论
柴胡总皂苷的主要组分为 ＳＳａ，ＳＳｃ和 ＳＳｄ。三
者均属于Ｉ型齐墩果烷型三萜皂苷，区别仅在于１６
位羟基构型、２３位取代基及 ３位糖链的不同，而
Ｓｓａ，ＳＳｄ之间的区别仅在于１６位羟基构型中ＳＳａ为
βＯＨ，ＳＳｄ则为 αＯＨ［１７］。本研究发现北柴胡中
Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳｔ含量之间存在极显著正相关关系。通
过进一步分析前人的数据也可以得到相同的结
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论［５６，１８２０］。ＳＳａ和ＳＳｄ之间的比例随外界条件波动
很小，说明两者合成的比例主要是由遗传因素决定，
ＳＳａ或ＳＳｄ均可作为北柴胡中柴胡皂苷类成分的质
控指标成分。
由于气候、土壤等生态条件的差异，不同产地的
北柴胡的皂苷类成分绝对含量差异较大，但相对含
量较为一致，仅用相似度无法对其质量作出评价。
药理实验表明 ＳＳａ和 ＳＳｄ具有明显的药理活性，目
前ＳＳａ和ＳＳｄ成为检验药用柴胡质量的标准，而在
各柴胡皂苷单体的药理作用尚未弄清楚的前提下，
测定柴胡总皂苷含量很实用［１６］。所以 Ｓｓａ，ＳＳｄ结
合ＳＳｔ含量测定可以较好的定量评价北柴胡药材的
质量。在北柴胡药材的皂苷类成分指纹图谱中１８
个共有峰的总峰面积与Ｓｓａ，ＳＳｄ，ＳＳａ＋ＳＳｄ，ＳＳｔ含量
之间都呈极显著正相关，说明上述５个指标均能反
映北柴胡药材的内在质量。而在北柴胡皂苷类成分
指纹图谱中，１８个共有峰的相对位置是稳定的，其
他３种柴胡的指纹峰则各有其特点，因此根据该图
谱可以有效区分不同种柴胡。即以各共有峰的保留
时间为定性指标，用共有峰总峰面积结合 ＳＳａ或
ＳＳｄ含量测定作为定量指标，可以更全面、有效的反
映北柴胡药材的质量。
柴胡的主要药效成分为柴胡皂苷和挥发油，在
不同方剂中发挥不同的药效作用。本研究建立的柴
胡质量控制方法主要是针对柴胡皂苷类成分而提
出，关于柴胡挥发油成分的质量控制模式已进行了
一些研究，但要建立柴胡药材的综合质量评价体系
还需进一步探索。
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［责任编辑 王亚君］
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