全 文 :炙淫羊藿炮制过程中5种黄酮类成分变化规律研究
金晓勇1,2,贾晓斌1,2,孙娥1,王静静1,陈彦1,蔡宝昌3
(1.江苏省中医药研究院 中药新型给药系统重点实验室 国家中医药管理局名方适宜剂型重点研究室,
江苏 南京 210028;2.江苏大学 药学院,江苏 镇江 212013;
3.南京中医药大学 江苏省中药炮制重点实验室,江苏 南京 210046)
[摘要] 目的:研究炙淫羊藿炮制过程中5种黄酮类成分的变化规律。方法:测定炙淫羊藿炮制前后朝藿定A,朝藿定
B,朝藿定C,淫羊藿苷,宝藿苷I的含量。结果:炙淫羊藿炮制过程中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,宝藿苷 I的含
量发生了变化,不同品种、不同批次的炙淫羊藿呈现出不同的变化趋势。结论:炙淫羊藿的炮制工艺条件和黄酮类成分的比
例关系决定了炙淫羊藿炮制过程中黄酮类成分的变化趋势。
[关键词] 炙淫羊藿;炮制;黄酮类成分;变化规律
[收稿日期] 20090411
[基金项目] 国家自然基金项目(30572372);中国药典2010版一
部品种质量标准修订(YS240)
[通信作者] 贾晓斌,Tel:(025)85608672,Email:jxiaobin2005@
hotmail.com
[作者简介] 金晓勇,硕士研究生,研究方向为中药(饮片)质量与
质量标准化,Tel:13814038712,Email:jinzhulang@163.com
淫羊藿为我国传统的补益中药,始载于《神农
本草经》,并记载于历代本草。淫羊藿具有补肝肾、
强筋骨、祛风湿的作用,临床上用于治疗阳痿、腰膝
酸软、风湿痹痛等症具有较好的疗效[1]。临床用淫
羊藿历来均以炮制品为主,而炙淫羊藿饮片应用最
为广泛,且疗效极为显著。
淫羊藿炮制的文献[24]表明,炮制品中黄酮类成
分会发生改变,多以考察淫羊藿苷和总黄酮的含量
作为指标,但相关文献报道[57]结果各不相同,有的
实验结果表明炮制后淫羊藿苷的含量增加,有的则
反之。本实验室研究发现[8]朝鲜淫羊藿在 160~
210℃各温度下受热5,7min时淫羊霍苷的含量增
加了1倍以上,受热10min时宝藿苷 I的含量达到
最大,但是考虑到淫羊藿苷在药材中含量较高,而宝
藿苷I在受热7min时含量已增加1~2倍,因此应
该将药材受热温度控制在160~170℃,受热时间为
5~7min。本实验室进一步研究发现[910]温度和受
热时间是影响朝鲜淫羊藿黄酮类成分的重要因素。
为什么淫羊藿苷的含量在炮制过程中出现会不同的
变化趋势,文献报道的研究以单品种单批次淫羊藿
研究对象,本研究拟对20批(柔毛淫羊藿10批,朝
鲜淫羊藿7批,淫羊藿2批,粗毛淫羊藿1批)炙淫
羊藿饮片炮制过程中5种黄酮类成分进行测定,比
较5种黄酮类成分的变化,探讨淫羊藿炮制过程中
黄酮类成分变化规律,旨在为炙淫羊藿饮片的生产
加工、质量控制、资源利用和临床合理应用提供科学
依据。
1 材料
1.1 仪器与试药 美国 Waters公司高效液相色谱
仪(Waters600型泵,Waters2996自外检测器),Em
power数据处理系统;KQ5200型超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司);METTLERTOLEDO分析
电子天平(瑞士 METTLERTOLEDO公司,1/10
万)。乙腈(TEDIA公司,色谱纯),甲醇、乙醇(南京
化学试剂有限公司,分析纯),水为超纯水;淫羊藿
苷(中国药品生物制品检定所,批号 110737
200312),朝藿定 A,朝藿定 B,朝藿定 C,宝藿苷 I
对照品为实验室自制(纯度均高于98%)。
1.2 药材来源与炮制 20批淫羊藿饮片全部购于
正规的药材公司及饮片厂,全部经中国医学科学院
北京协和医学院药用植物研究所郭宝林教授鉴定,
结果见表1;1/3样品留样用于生品研究,1/3样品
由浙江中医药大学中药饮片厂加羊脂油(100kg淫
羊藿加入20kg羊脂油)炒制得 20批炙淫羊藿饮
片,温度170℃,时间7min;1/3样品由本实验室加
羊脂油(100kg淫羊藿加入20kg羊脂油)烘制得20
批炙淫羊藿饮片,温度170℃,时间7min。
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表1 药材来源
No. 来源 品种 批号
1 安徽亳州华申药业 柔毛淫羊藿 081217
2 安徽亳州华申药业 柔毛淫羊藿 081217
3 安徽亳州市万珍中药饮片厂 柔毛淫羊藿 0806364
4 陕西凯兴中药饮片有限公司 柔毛淫羊藿 081001
5 山东舜生堂中药饮片有限公司 柔毛淫羊藿 0811097
6 成都吉安康药业有限公司 柔毛淫羊藿 081101
7 安徽德昌药业饮片有限公司 柔毛淫羊藿 20081101
8 涡阳县源和堂中药饮片有限公司 柔毛淫羊藿 081126
9 商丘天龙药业有限公司 柔毛淫羊藿 080728
10 安徽亳州市万珍中药饮片厂 柔毛淫羊藿 0807120
11 浙江中医药大学中药饮片厂 朝鲜淫羊藿 080815
12 药都集团茗都中药饮片有限公司 朝鲜淫羊藿 080201
13 亳州市千草药业饮片厂 朝鲜淫羊藿 081001
14 安徽沪谯中药饮片有限公司 朝鲜淫羊藿 080829
15 安徽滕王药业 朝鲜淫羊藿 080603
16 亳州市京皖中药饮品厂 朝鲜淫羊藿 081101
17 安徽滕王药业 朝鲜淫羊藿 080816
18 浙江中医药大学中药饮片厂 淫羊藿 080814
19 亳州市永刚饮片有限公司 淫羊藿 081123
20 浙江中医药大学中药饮片厂 粗毛淫羊藿 080813
2 方法与结果
2.1 色谱条件 LunaC18柱(46mm×250mm,5
μm),流动相乙腈(A)水(B)梯度洗脱,0~29min,
25%(A);29~30min,25% ~41%(A);30~55
min,41%(A);55~56min,41% ~25%(A);56~
64min,25%(A);流速 10mL·min-1,检测波长
270nm,柱温30℃,进样量10μL,见图1。
1.朝藿定A;2.朝藿定B;3.朝藿定C;4.淫羊藿苷;5.宝藿苷I。
图1 混合对照品(A)、炙淫羊藿(B)的HPLC图
2.2 对照品溶液的制备 精密称定朝藿定 A33
mg,朝藿定 B67mg、朝藿定 C106mg、淫羊藿苷
85mg、宝藿苷I52mg对照品置于同一10mL量
瓶中,加甲醇定溶至刻度,得0325g·L-1朝藿定
A,0672g·L-1朝藿定 B,1058g·L-1朝藿定 C,
0852g·L-1淫羊藿苷,0516g·L-1宝藿苷I储备
液。取此储备液分别加甲醇稀释成不同浓度的对照
品溶液,所含朝藿定 A分别为 32500,13000,
5200,2080,832,333mg·L-1,所含朝藿定B分
别为67200,26880,10752,4301,1720,688mg
·L-1,所含朝藿定 C分别为 105800,42320,
16928,6771,2708,1083mg·L-1,所含淫羊藿
苷分别为 85200,34080,13632,5453,2181,
872mg·L-1,所含宝藿苷 I分别为 51600,
20640,8256,3302,1321,528mg·L-1。
2.3 供试品溶液的制备[11] 取淫羊藿饮片粉末
(过3号筛)约02g,精密称定,加入50%乙醇溶液
20mL,精密称定,超声提取60min,称重后用提取液
补足失重,用045μm微孔滤膜过滤。作为供试品
溶液。
2.4 线性关系考察 精密吸取各混合对照品溶液
10μL依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰
面积积分值为纵坐标(Y),对照品进样量(μg)为横
坐标(X),绘制回归曲线朝藿定A:Y=1805641X-
33234,r2=09999,线性范围 00333~32500
μg;朝藿定B:Y=1345532X-47525,r2=09999,
线性范围 00688~67200μg;朝藿定 C:Y=
1748186X-95951,r2=09999,线性范围01008~
105800μg;淫羊藿苷:Y=2476068X-140772,
r2=09999,线性范围00872~87200μg;宝藿苷
I:Y=911738X-32080,r2=1,线性范围00528~
51600μg。
2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品10μL,连
续进样6次,按21项下色谱条件测定各对照品峰
面积5次积分值的RSD分别为朝藿定A083%、朝
藿定B11%、朝藿定 C095%、淫羊藿苷 085%、
宝藿苷I11%,表明精密度良好。
2.6 重复性试验 取同一淫羊藿饮片,按23项下
操作制备供试品溶液6份,按21项下色谱条件测
定,计算朝藿定 A质量分数的 RSD19%,朝藿定 B
质量分数的 RSD18%,朝藿定 C质量分数的 RSD
12%,淫羊藿苷质量分数的RSD11%,宝藿苷I的质
量分数的RSD13%,表明本法重复性良好。
2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液,室温放
置,分别在0,1,2,4,8,12,24h进样,按21项下色
谱条件测定,以峰面积计算,朝藿定 ARSD18%、
朝藿定BRSD15%、朝藿定 CRSD20%、淫羊藿
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苷RSD12%,宝藿苷 IRSD14%,表明供试品在
24h内稳定。
2.8 加样回收率试验 称取同一已知含量的样品
9份,每份约01g,精密称定后,依次加入低、中、高
3种质量浓度朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿
苷和宝藿苷I储备液,按23项下操作制备供试品
溶液,准确吸取供试品10μL,进样,按21项下色
谱条件测定,计算得朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C、
淫羊藿苷和宝藿苷 I平均回收率分别为 9952%
(RSD18%,n=9),9893%(RSD23%,n=9),
997%(RSD12%,n=9),10094%(RSD18%,n
=9),10103%(RSD13%,n=9)。
2.9 样品测定 称取不同的供试品粉末(过三号
筛)约02g,精密称定按23项下操作制备供试品
溶液,准确吸取10μL,进样,按21项下色谱条件
测定,结果见表2(n=3)。
表2 淫羊藿饮片及炮制品中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷I的质量分数 mg·g-1
样品
淫羊藿饮片
朝藿
定A
朝藿
定B
朝藿
定C
淫羊
藿苷
宝藿
苷I
炙淫羊藿饮片(炒制法)
朝藿
定A
朝藿
定B
朝藿
定C
淫羊
藿苷
宝藿
苷I
炙淫羊藿饮片(烘制法)
朝藿
定A
朝藿
定B
朝藿
定C
淫羊
藿苷
宝藿
苷I
1 200 397 1600 319 266 148 301 1027 640 349 221 413 1668 386 306
2 207 408 1474 360 199 142 299 1103 504 224 243 456 1740 482 211
3 173 349 1508 398 393 178 361 1554 786 451 187 386 1573 891 624
4 211 462 1780 323 279 222 493 1849 534 392 266 514 2032 1147 637
5 166 329 1374 308 160 124 230 931 275 166 143 272 1189 350 178
6 119 198 614 348 1235 116 202 557 404 1211 169 322 727 598 2120
7 213 447 1507 300 103 170 358 1290 341 120 249 527 1616 514 263
8 169 327 1310 216 191 136 257 935 331 241 278 561 1793 605 398
9 222 398 2128 647 262 221 410 2129 588 220 289 462 2328 1099 298
10 142 285 1411 337 417 128 256 1253 319 320 213 436 1669 869 652
11 166 304 168 446 390 101 194 132 546 449 154 289 125 598 414
12 168 343 147 430 255 182 352 142 792 428 183 388 149 850 476
13 139 272 138 607 413 203 400 221 469 364 184 342 144 878 552
14 134 297 131 339 174 160 307 133 480 330 147 302 124 847 693
15 250 472 173 769 131 159 306 125 855 199 162 329 122 1022 221
16 147 295 152 352 238 132 264 158 383 216 173 321 123 659 404
17 197 373 130 505 456 150 278 162 391 248 182 363 138 516 302
18 118 225 510 461 2195 077 151 326 302 1466 123 239 564 615 2858
19 110 449 142 392 406 106 349 565 395 354 185 1186 302 595 794
20 218 430 1324 459 414 128 244 864 361 408 212 350 1341 402 403
注:炙淫羊藿饮片5种黄酮类成分含量已折算了羊脂油的含量。
3 讨论
炙淫羊藿饮片超声提取时,笔者考察了乙醇比
例(30%,50%,70%)和溶媒体积(10,20,30mL)对
炙淫羊藿饮片提取效率的影响,结果表明50%乙醇
和70%提取效率无明显差异,20mL的50%乙醇和
30mL的50%乙醇也无明显差异,故作者采取2005
年版《中国药典》淫羊藿提取的方法:取淫羊藿饮片
粉末(过三号筛)约02g,精密称定,加入50%乙醇
溶液20mL,精密称定,超声提取60min。
笔者先前的研究[8]发现:炙淫羊藿炮制后,炙
淫羊藿饮片中淫羊藿苷、宝藿苷 I的含量会增加。
本实验中,采用烘制法的结果:除了样品20较对应
的淫羊藿饮片中淫羊藿苷含量降低了1242%,其
余样品的淫羊藿苷含量较对应的淫羊藿饮片中淫羊
藿苷含量增加了 218% ~25511%;除了样品 17
和20较对应的淫羊藿饮片中宝藿苷 I的含量降低
了3377%,226%,其余样品的宝藿苷 I含量较对
应的淫羊藿饮片中宝藿苷 I含量增加了603% ~
29828%。采用炒制法的结果:除了样品5,9,10,
13,17,18,20的淫羊藿苷含量降低了 548% ~
3449%,其余样品的淫羊藿苷含量较对应的淫羊藿
饮片中淫羊藿苷含量增加了077% ~10063%;除
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了样品6,9,10,13,16,17,18,19,20较对应的淫羊
藿饮片中宝藿苷I的含量降低了145%~4561%。
这2种方法的结果有差异,其原因是烘制法温度控
制相对较准确,而炒制法炒制机器温度控制不稳定,
温度设定170℃,炮制过程中红外探测仪测定的实
际温度在120~210℃浮动。
研究[8]表明,炙淫羊藿炮制后,炙淫羊藿饮片
中淫羊藿苷和宝藿苷I的含量增加了1倍以上。本
实验中,采用烘制法的结果:除了样品3,4,8,10,14
的淫羊藿苷含量较对应的淫羊藿饮片分别增加了
12387%, 25511%, 18009%, 15786%,
14985%,其余样品(除样品 20中淫羊藿苷降低)
的淫羊藿苷含量增加了218% ~9767%;样品4,
7,8,14的宝藿苷 I含量较对应的淫羊藿饮片增加
了12832%,15534%,10838%,29828%,其余样
品(除样品17,20中宝藿苷I降低)的宝藿苷I含量
增加了603% ~9567%。不同品种、不同批次的
炙淫羊藿饮片在炮制过程中淫羊藿苷 I和宝藿苷 I
的含量增加的幅度存在着差异。
研究[8]表明,淫羊藿炮制后,炙淫羊藿饮片中
朝藿定A、朝藿定B和朝藿定 C有下降的趋势。本
实验中,采用烘制法的结果:除了样品5,11,15,17,
20的朝藿定A的含量较对应的淫羊藿饮片降低了
275%~3520%,其余样品的朝藿定 A的含量较
对应的淫羊藿饮片增加了424% ~6818%;除了
样品5,11,15,17,20的朝藿定B的含量较对应的淫
羊藿饮片降低了493% ~3030%,其余样品的朝
藿定B的含量较对应的淫羊藿饮片增加了168%
~16414%;除了样品5,11,14,15,16的朝藿定 C
的含量较对应的淫羊藿饮片降低了 1346% ~
2948%,其余样品的朝藿定 C较对应的淫羊藿饮
片增加了128%~11268%。
张鑫等研究发现[12]朝藿定 C在170℃时3位
去掉1个鼠李糖基成为淫羊藿苷,淫羊藿苷3位去
掉1个鼠李糖基成为淫羊藿次苷 I。研究发现[13],
朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在加热过程中降解为
箭藿苷 A、箭藿苷 B和 2″OrhamnosylicarisideⅡ。
目前从淫羊藿属分得的黄酮成分达100多种[1415],
笔者认为在受热炮制过程中,那些与朝藿定A、朝藿
定B、朝藿定 C、淫羊藿苷和宝藿苷 I母核相同而糖
基取代多于朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C、淫羊藿
苷、宝藿苷 I的黄酮苷,会脱去糖基转化为朝藿定
A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷 I;同时朝
藿定A、朝藿定B、朝藿定 C、淫羊藿苷、宝藿苷 I在
受热炮制过程中也会脱去糖基转化为其他产物;在
炮制过程中多糖苷黄酮类成分向次级糖苷黄酮类成
分转变,次级糖苷向更低级糖苷转变,不同品种不同
批次的淫羊藿饮片中的各级糖苷类黄酮类成分比例
不同,这样炙淫羊藿在炮制过程中朝藿定A、朝藿定
B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷I的含量呈现出不同
的变化趋势。
淫羊藿中黄酮类成分的变化取决于炮制工艺条
件和黄酮类成分的比例关系。系统研究淫羊藿炮制
前后淫羊藿黄酮类成分的变化规律,对于揭示中药
炮制的内涵和化学物质基础具有非常重要的意义。
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Researchonvarietyregularityofthefivemainflavonoidscontentin
EpimediumandprocessedEpimedium
JINXiaoyong1,2,JIAXiaobin1,2,SUNE1,WANGJingjing1,CHENYan1,CAIBaochang3
(1.KeyLaboratoryofNewDrugDeliverySystemofChineseMeteriaMedica,KeyLaboratoryofScientificPreparationfor
ClinicalEfectivePrescriptionofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine,JiangsuProvincialAcademyof
ChineseMedicine,Nanjing210028,China;
2.DepartmentofPharmaceutics,JiangsuUniversity,Zhenjiang212013,China;
3.JiangsuKeyLaboratoryofChineseMedicineProcesing,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210046,China)
[Abstract] Objectve:ToresearchthevarietyregularityofthefivemainflavonoidscontentinEpimediumandprocessedEpime
dium.Method:TodeterminethecontentofEpimedinA,EpimedinB,EpimedinC,IcarinandBaohuosideIinEpimediumandEpi
mediumprocessed.Result:ThecontentofEpimedinA,EpimedinB,EpimedinC,IcarinandBaohuosideinEpimediumandpro
cessedEpimediumhavevariety.Therearediferentvarietytendencyindiferentspeciesanddiferentbatches.Conclusion:Thevariety
tendencyofthefivemainflavonoidscontentdependontheprocessingtechnologyandtheflavonoidsproportioninEpimediumandpro
cessedEpimedium.
[Keywords] Epimediumprocessed;processing;flavonoids;varietyregularity
[责任编辑 周驰]
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第34卷第21期
2009年11月
Vol.34,Issue 21
November,2009