全 文 ：ＨＰＬＣ测定菝葜
!
类提取物在大鼠体内
组织中的分布
黄慧莲１，陈广通２，卢志强２，张金强２，果德安２
（１．江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 ３３０００４；
２．上海药物研究所 上海中药现代化研究中心，上海 ２０１２０３）
［摘要］　目的：研究菝葜
!
类提取物在大鼠体内的组织分布规律。方法：菝葜
!
类提取物大鼠灌胃给药１ｇ·ｋｇ－１后，应
用ＨＰＬＣ测定氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠心、肝、脾、肺、肾中的含量。色谱柱：ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；
流动相：（Ａ）乙腈－（Ｂ）水进行梯度洗脱；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３２０ｎｍ；进样量１０μＬ；柱温４０℃。结果：建立了氧
化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠心、肝、脾、肺、肾中的含量测定方法。结论：本方法简便、准确、专属性强，可以成功应用于大鼠
灌胃给药菝葜
!
类提取物后，氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠体内组织分布的研究。
［关键词］　菝葜；氧化白藜芦醇；白藜芦醇；ＨＰＬＣ；组织分布
［收稿日期］　２００９００００
［通信作者］　果德安，Ｔｅｌ：（），Ｅｍａｉｌ：
［作者简介］　黄慧莲，博士，主要研究方向：中药分析与体内代谢；
Ｔｅｌ：（０７９１）７１１８６５８，Ｅｍａｉｌ：ｈｕｉｌｉａｎｈ＠１６３．ｃｏｍ
　　菝葜为百合科植物菝葜ＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａＬ．的干燥
根茎，收载于２００５年版《中国药典》一部。性平，味
甘，微苦涩，归肝、肾经，有祛风利湿，解毒散瘀之功
效，临床用于各种炎症性疾病，如类风湿性关节炎、
妇科盆腔炎、附件炎及炎症性包块等，具有显著疗
效。近年来，关于菝葜的药理作用研究显示其抗炎、
抗肿瘤效果显著［１３］。前期，课题组对菝葜化学成分
及其在大鼠体内的药代动力学进行了研究［４６］。为
研究菝葜
!
类提取物在大鼠体内的组织分布规律，
本实验以氧化白藜芦醇和白藜芦醇为指标性化合
物，测定了菝葜
!
类提取物在３～２４０ｍｉｎ的８个时
间点，５个主要脏器中的分布经时变化。
１　材料
１．１　药品与试剂　对照品氧化白藜芦醇和白藜芦
醇（ｏｘ）由作者从菝葜中分离得到，经 ＨＰＬＣ分析其
纯度均大于９８％。卡马西平（Ｃａｒｂａｚｅｐｉｎｅ）内标对
照品购于中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯
（Ｂｕｒｄｉｃｋ＆Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｈｏｎｅｙｗｅｌ ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｎｃ．，
ＵＳＡ）；乙醇、甲醇为分析纯（国药集团化学试剂有限
公司）。
菝葜为百合科菝葜属植物菝葜 ＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａＬ．
的干燥根和根茎，采自江西省南昌市近郊，原植物经
江西中医学院赖学文副教授鉴定。
菝葜
!
类提取物的制备过程：干燥菝葜药材粉
碎后用７０％乙醇提取完全后，醋酸乙酯萃取３次，
萃取液减压浓缩后用水分散，再经３０～６０目聚酰胺
柱分离，分别用３０％，５０％，７０％乙醇洗脱。
!
类富
集于７０％乙醇部分，减压浓缩后真空干燥，经ＨＰＬＣ
检测其中含有１８０ｍｇ·ｋｇ－１氧化白藜芦醇和８０ｍｇ
·ｋｇ－１白藜芦醇。
菝葜
!
类提取物用２％西黄耆胶水溶液分散，
得到质量浓度为 ０１ｇ·ｍＬ－１的混悬液，以 １ｇ·
ｋｇ－１剂量灌胃大鼠。
１．２　仪器　高效液相色谱仪：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液
相色谱仪（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ），配有四
元泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱以及二极管
阵列检测器；Ｎ１０００型旋转蒸发仪：上海爱朗仪器
有限公司；ＢＴ２５Ｓ型 Ｓａｒｄｏｒｉｓ电子天平：德国 Ｓａｒｄｏ
ｒｉｓ公司。纯净水由 ＭｉｌｉｐｏｒｅＳｉｍｐｌｉｃｉｔｙ纯水制备系
统制备。
１．３　动物　ＳＤ大鼠，雌性，体重（２００±２０）ｇ，上海斯
莱克实验动物有限责任公司提供［动物合格证号
ＳＣＸＫ（沪）２００７０００５］。实验前禁食１６ｈ，自由饮水。
２　方法
２．１　组织样品的收集和预处理　取 ＳＤ大鼠 ４０
只，随机分成８组，每组５只。实验前禁食１６ｈ，自
由饮水。按１０ｇ·ｋｇ－１体重灌胃给予菝葜总
!
类，
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于给药后３，５，１０，３０，６０，９０，１２０和２４０ｍｉｎ乙醚麻
醉后处死，剖取心、肝、脾、肺和肾。生理盐水冲洗干
净，滤纸吸干水分。分别准确称取各脏器组织０５ｇ
，加入１ｍＬ生理盐水，在冰浴上制备组织匀浆，加入
内标溶液（Ｃａｒｂａｍａｚｅｐｉｎｅ，１００ｍｇ·Ｌ－１）１００μＬ，充
分混匀后加入６ｍＬ醋酸乙酯，涡旋混合３ｍｉｎ，离
心（４０００ｒ·ｍｉｎ－１）１０ｍｉｎ后，分取上清液，在４０℃
氮气流下吹干，残渣加入甲醇 ２００μＬ，涡旋溶解，
０２２μｍ微孔滤膜过滤，取滤液１０μＬ注入高效液
相色谱仪，记录色谱图。
２．２　对照品溶液的制备　分别精密称取氧化白藜
芦醇和白藜芦醇对照品适量，置１０ｍＬ量瓶中，用甲
醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得混合对照品储备
液，氧化白藜芦醇和白藜芦醇质量浓度分别为３１０，
１８０ｍｇ·Ｌ－１。再分别精密量取储备液适量，用甲醇
稀释成标准系列对照品溶液，氧化白藜芦醇和白藜
芦醇质量浓度分别为１５５～３１０ｍｇ·Ｌ－１和０９～
１８０ｍｇ·Ｌ－１。对照品溶液储存于４℃，备用。
２．３　内标溶液的制备　精密称取卡马西平（Ｃａｒｍ
ａｂａｚｅｐｉｎｅ）对照品１０ｍｇ，置１０ｍＬ量瓶中，甲醇溶
解并定容至刻度，摇匀。精密量取该溶液１ｍＬ，置
于１０ｍＬ量瓶中，即得质量浓度为１００ｍｇ·Ｌ－１的
内标溶液，储存于４℃，备用。
２．４　色谱条件　ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）（ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＺｏｒｂａｘＳＢ
Ｃ１８保护柱（２０ｍｍ×４ｍｍ，５μｍ）（ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ，
ＵＳＡ）；流动相（Ａ）乙腈（Ｂ）水；梯度洗脱 ０～３３
ｍｉｎ：Ａ１６％升至３３％，Ｂ８４％降至 ６７％；流速 １０
ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３２０ｎｍ；进样体积１０μＬ；柱
温４０℃。
３　结果
３．１　方法的专属性　将供试动物的空白组织色谱
图与空白组织中加入待测物和内标物后得到的色谱
图及给药后不同时间大鼠组织色谱图进行比较，结
果表明组织中所含内源性物质不干扰被测物和内标
物的测定，被测物峰形良好（图１）。
Ａ．空白心脏组织；Ｂ．空白心脏组织加对照品和内标；Ｃ．给药菝葜提取物后心脏组织。
图１　代表性色谱图
３．２　标准工作曲线的绘制　分别取空白组织，依次
加入标准系列对照品溶液１００μＬ、内标溶液１００μＬ
和０２ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸溶液１００μＬ，按“组织样品的
制备”项下方法操作，得系列浓度的标准曲线样品，
即质量浓度为０３１～６２μｇ·ｇ－１的氧化白藜芦醇和
０１８～３６μｇ·ｇ－１的白藜芦醇，进样１０μＬ，记录色
谱图。以被测物与内标物峰面积比值为纵坐标
（Ｙ），被测物浓度为横坐标（Ｘ），用加权最小二乘法
进行回归运算，权重系数为１／Ｙ２，求得直线回归方
程。２个被测化合物在标准曲线范围内呈良好线性
（ｒ２＞０９９），结果见表１。
表１　氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠组织中的标准曲线
组织 化合物
线性范围
／ｍｇ·Ｌ－１
标准曲线
相关系数
／ｒ２
心 ＯＸＹ ０３１６２ Ｙ＝０４４２３Ｘ－０２９７２ ０９９２５
　 ＲＥＳ ０１８３６ Ｙ＝１２７９Ｘ－０７３０５ ０９９１６
肝 ＯＸＹ ０３１６２ Ｙ＝０５４６１Ｘ－０４６１８ ０９９３６
　 ＲＥＳ ０１８３６ Ｙ＝１４２０９Ｘ－０４７３９ ０９９３０
脾 ＯＸＹ ０３１６２ Ｙ＝０５５５１Ｘ－０４６０４ ０９９６２
　 ＲＥＳ ０１８３６ Ｙ＝１３９８５Ｘ－０８６１９ ０９９１３
肺 ＯＸＹ ０３１６２ Ｙ＝０３８１５Ｘ－０１１４ ０９９７７
　 ＲＥＳ ０１８３６ Ｙ＝１１８３Ｘ－０４９０５ ０９９４７
肾 ＯＸＹ ０３１６２ Ｙ＝０３７８２Ｘ＋００００８ ０９９６６
　 ＲＥＳ ０１８３６ Ｙ＝１２２７７Ｘ－０３９９５ ０９９４９
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３．３　精密度和准确度　取对照品溶液高、中、低３
个浓度各６份，每一浓度进行６样本分析，测定该方
法的日内精密度和回收率。连续测定 ４ｄ，每天 １
次，并与标准工作曲线同时进行测定，以当日的标准
工作曲线计算对照品溶液的浓度，计算该方法的日
间精密度和准确度，结果见表２。均符合目前生物
样品分析方法指导原则的有关规定，表明该法可用
于准确测定大鼠组织中２个被测物的浓度。
３．４　绝对回收率　取对照品溶液高、中、低３个浓度
各３样本，按“标准工作曲线”项下方法操作，测得样
品中被测物的色谱峰面积，与相应浓度的标准溶液中
被测物的色谱峰面积比较，计算绝对回收率。被测物
及内标在高、中、低３个浓度组织样品中绝对回收率
均大于６５％，说明组织样品的萃取方法稳定可靠。
表２　方法的日间和日内精密度与准确度
化合物
加入量
／ｍｇ·Ｌ－１
日内（ｎ＝６）
检测量／ｍｇ·Ｌ－１ 准确度／％ ＲＳＤ／％
日间（ｎ＝４）
检测量／ｍｇ·Ｌ－１ 准确度／％ ＲＳＤ／％
ＯＸＹ １５５ １３５ ８７１０ ３７８ １３４ ８６４５ ５２９
　 ６２ ５８７ ９６６６ ４２２ ５５９ ９０１６ ４７７
　 １５５ １３６７ ８８１９ ５２２ １３８０ ８９０３ ７２０
ＲＥＳ ０９ ０７９ ８７８０ ７１０ ０８１ ９０００ ４５６
　 ３６ ３２５ ９０２８ ６２５ ３１８ ８８３３ ３６８
　 ９０ ８３４ ９２６６ ３９０ ８２８ ９２００ ６１２
３．５　组织样品稳定性　取对照品溶液高、低２个浓
度样品各３样本，置于室温保存（２０～３０℃）４ｈ后
测定，考察组织样品的短期稳定性；取对照品溶液
高、低２个浓度各３样本，制备后２４ｈ后测定，考察
组织样品的制备后稳定性；取对照品溶液样品高、低
２个浓度各３样本，冷冻保存于－８０℃，在室温中充
分解冻，然后再次冷冻，重复３个冻融周期后测定，
考察组织样品的 ３周期冻融稳定性。结果稳定性
ＲＳＤ小于１５％，表明组织中的被测物浓度可以被准
确测定。
３．６　组织分布研究结果　大鼠灌胃菝葜
!
类部分
后，分析了白藜芦醇和氧化白藜芦醇在心、肝、脾、肺
和肾组织中８个时间点的分布变化（见图２，３）。结
果表明，２个化合物在各脏器组织中均可被检出，给
药后１０ｍｉｎ各组织中即达峰。氧化白藜芦醇在肝和
肺组织中浓度较高，但在肺中６０ｍｉｎ后未能检测到，
肾中３０ｍｉｎ即未能检出。同一时间点，白藜芦醇在
各脏器中的浓度基本相同，２４０ｍｉｎ后也能检测到。
图２　大鼠灌胃菝葜提取物后心、肝、脾、肺和肾脏中目标化合物的平均药时曲线（ｎ＝５）
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图３　大鼠灌胃菝葜提取物后组织中的氧化白藜芦醇和白藜芦醇分布
４　讨论
!
类化合物是文献报道的活性成分，其抗炎、抗
氧化作用正逐渐受到药学研究者的重视。自从２０世
纪中期人们发现白藜芦醇在葡萄酒中的重要作用后，
出现了大量关于它的药理作用、临床应用和药动学研
究的报道。氧化白藜芦醇可以通过血脑屏障而日益受
到关注，被称为酪氨酸酶抑制剂，并有可能成为脑中
风的有效治疗药物。笔者的药材含量测定结果表明，
菝葜中的
!
类成分主要是白藜芦醇和氧化白藜芦醇，
因此，选择这２个成分作为指标性成分进行药动学研
究可以有助于阐明菝葜总
!
类成分的体内代谢过程。
在选取内标物时，本实验考察了与待测化合物
结构和紫外吸收相似的化合物。结果表明卡马西平
的紫外吸收性质、保留时间以及在血浆中的萃取效
率与被测物较为接近，符合内标的选取原则，故选择
卡马西平为含量测定的内标物。
大鼠灌胃菝葜
!
类提取物后，２个目标化合物
在各脏器组织中均可被检出，给药后１０ｍｉｎ各组织
中即达峰，１５ｍｉｎ依然保持较高浓度水平，这与本实
验前期测定大鼠血药浓度的结果基本一致（血药峰
浓度时间是１５ｍｉｎ）。
　　本课题还对大鼠灌胃菝葜提取物后的子宫和大
脑进行了分析研究，在现有的给药量和检测方法下
未发现有白藜芦醇和氧化白藜芦醇存在，然而文献
报道过氧化白藜芦醇可以穿越血脑屏障达到脑部，
这一点还需进一步探讨。
［参考文献］
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Ｄｉｓｔｄｂｕｔｉｏｎｓｔｕｄｙｏｆｔｗｏｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｒａｔａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆ
Ｓｍｉｌａｘｃｈｉｎａｅｘｔｒａｃｔ
ＨＵＡＮＧＨｕｉｌｉａｎ，ＣＨＥＮＧｕａｎｇｔｏｎｇ，ＬＵＺｈｉｑｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＪｉｎｑｉａｎｇ，ＧＵＯＤｅａｎ
（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｄｅｒｎＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｈａｎｇｈａｉＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＭｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１２０３，Ｃｈｉｎａ）
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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｒａｔａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａｅｘｔｒａｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｏｘｙｒｅｓ
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［责任编辑　古云侠］
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