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Dynamic change of paeoniflorin content in root of Paeonia lactiflora growing at Duolun County,Inner Mongolia

多伦野生芍药中芍药苷含量动态变化



全 文 :Evaluationongermplasmresourcesofmainproductionareaof
ArtemisiaannuainChina
WEIShugen2,MAXiaojun1,3,FENGShixin1,HUANGRongshao2,DONGQingsong1,YANZhigang1,HUANGQiuyin1
(1.GuangxiBotanicalGardenofMedicinalPlants,Nanning530023,China;
2.AgriculturecolegeofGuangxiuniversity,Nanning530005,China;
3.InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100094,China)
[Abstract] Objective:ToevaluateandselectexcelentgermplasmresourcesofArtemisiaannuaL.,providingbasicdatafor
databaseandbreedingofA.annua.Method:SeventytwogermplasmsofA.annua,whichwerecolectedfrommainproductionareas,
wereplantedingermplasmresourcesgardeninJingxiandNanningunderthesameconditions.Thesamplesweregatheredinthesqua
ringstage.Artemisininwasextractedbysupersonicwaveanddeterminedbyultravioletspectrophotometry.Result:Theleaf'syieldand
thecontentofartemisinininthesamplesofdiferentgermplasmswerevariedsignificantly.Efectofenvironmentonartemisinincontent
wasmorethanthatofhereditaryfactors.ThecontentofartemisininwasdiferentwhenthesamematerialofA.annuagrewindiferent
place.Thecontentofartemisinininnextyear'splantwasdecreasing.Conclusions:SevengermplasmsfromsouthofChinahavebeen
selected,theircontentofartemisininwasabove0.9% andcalculatedyieldwasmorethan2250kg·hm-2.Thecontentofartemisinin
hasbeenafectedbyhereditaryfactorsandvariationofthegrowthenvironment.
[Keywords] Artemisiaannua.;germplasmsresource;evaluation
[责任编辑 张宁宁]
多伦野生芍药中芍药苷含量动态变化
冯学锋,胡世林,张永欣,赫 炎,张启伟,格小光,杨京玉
(中国中医科学院 中药研究所,北京 100700)
[摘要] 目的:探讨多伦野生芍药芍药苷含量动态变化。方法:定株、定时原产地多样本采样,用 HPLC测定
芍药苷含量,数据经统计分析。结果:5月(苗期)采集的多伦野生芍药芍药苷质量分数平均值最低(305%),8,9
月(幼果期和果期)采集的含量较高(472%,458%);6~10月平均含量之间没有显著差别。野生芍药个体差异
很大,当根直径范围<1mm(051~060cm)时,芍药苷含量变异系数可达4717%。结论:野生芍药显蕾以后至枯
萎前均可采挖,农闲采挖的现实情况是可行的。首次报告和提出野生芍药株间芍药苷含量差异很大,取样不当,植
株个体差异可能影响芍药苷动态变化测定结果。
[关键词] 多伦赤芍;芍药;芍药苷;动态变化
[中图分类号]R2841 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)03024404
[收稿日期] 20061202
[基金项目]  国家“十五”科技攻关计划项目(2001BA701A52)
[通讯作者] 张启伟,Tel:(010)640144112848,Email:zhan
gqw19550805@163.com
  赤芍主要来源为毛茛科植物芍药 Paeonialacti
floraPal.的根,为清热凉血、散瘀止痛常用中药。
芍药自然分布原本广及洞庭湖畔,但现已缩小到我
国长城内外至大小兴安岭一带,内蒙古多伦所产赤
芍被认为是优异品质的道地药材,但已处于生产性
濒危状态,即不再能供应中医用药。迄今为止,芍药
苷含量动态研究多取材于观赏栽培芍药[1]或野生
移栽品[2],而野生与栽培芍药在药性和遗传特征上
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均有显著不同[36],可见原产地野生芍药(赤芍)中
芍药苷含量动态研究还是空白点,这对于确定赤芍
合理采收期是不利的,故有必要进行研究。从取样
方法来看,上述文献取样后混合测定或仅取3株测
定,计算其平均值,有背于生命活动研究的基本原
则:以个体对象,以足够多的个体来统计其规律性。
本实验定株、定时在原产地采样,用HPLC测定芍药
苷含量,数据经统计分析,力求最接近或符合芍药苷
动态积累的客观规律。
1 材料、仪器与试药
1.1 材料 从3个多伦赤芍药材个体(同一植株)
上,选择2~3条不同粗细的根或侧根;分别测定根
直径和芍药苷的含量,进行多伦赤芍根直径与含量
关系考察。
在内蒙古多伦县蔡木山定点(面积 <200m2)
选定的13株野生芍药挂牌,分别于2004年7月7
日,8月7日,9月11日,10月10日,2005年5月15
日和6月15日,采集其根的一部分,晾干,做为研究
材料,进行根直径和芍药苷含量测定,探讨芍药苷含
量动态变化。此13株芍药仍在原地良好生长。
芍药样品及多伦赤芍药材样品,均采自内蒙古
自治区多伦县,由本所胡世林研究员鉴定为毛茛科
植物芍药P.lactiflora的根。标本存中国中医科学
院中药研究所中药标本馆。
1.2 仪器与试药 Waters600型四元液相色谱泵,
996型光电二极管阵列检测器,Milennium2010色
谱管理系统;甲醇(色谱级),高纯水,其他试剂均为
分析纯。芍药苷购自中国药品生物制品检定所(批
号07369912,供含量测定用)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 DiamonsilC18色谱柱(46mm×
250mm,5μm),柱温25℃;流动相甲醇水冰醋酸
(33∶67∶02),流速1mL·min-1;检测波长230nm。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品
适量,加甲醇制成约60μg·mL-1溶液备用。
2.3 供试品溶液的制备 称取药材粉末(过60目
筛)约01g,精密称定,置50mL三角瓶中,准确加
入50mL甲醇,称重,超声提取30min,取出,放至室
温后再称重,补足失重,摇匀,用045μm微孔滤膜
滤过,作为供试品试液。
2.4 样品测定 精密吸取对照品溶液6μL和供试
品溶液5~10μL,分别进样测定。采用外标一点法
计算含量。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,重
复进样5次,测定各次峰面积,RSD12%。
2.6 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液
2,4,6,8,10μL,分别进样,在上述色谱条件下测定。
以进样量(μg)为横坐标(X),以测得峰面积为纵坐
标(Y),绘制标准曲线,其回归方程为 Y=1621×
106X+2503×104,结果表明,进样量在014~069
μg线性关系良好(r=09999)。
2.7 稳定性试验 取供试品溶液,分别在0,2,4,
8,12,24,48h进样测定,所测峰面积 RSD值为
20%,表明样品在48h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一样品粉末5份,分别制备
供试品溶液,在所选色谱条件下测定峰面积,计算所
得平均含量为247%,RSD21%,表明该方法重复
性较好。
2.9 加样回收试验 精密称取芍药苷1325mg,
用甲醇溶解并定容至50mL量瓶中。精密称取5份
已知含量的药材粉末,每份约50mg,置50mL三角
瓶中,分别准确加入上述芍药苷溶液5mL和甲醇
20mL,摇匀,按供试品溶液的制备项下方法制备。
高效液相色谱仪上测定,计算回收率,结果见表1。
表1 多伦野生芍药中芍药苷加样回收率(n=5)
称样量
/mg
样品中含量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
5352 1322 2622 981 989 24
5452 1347 2640 976    
5387 1331 2622 974
5293 1307 2673 1031    
5125 1266 2570 984    
  注:加入量1322mg
2.10 多伦芍药根直径与芍药苷含量关系考察 对
同一株赤芍不同粗细的根或侧根、同一根不同粗细
的部位中芍药苷的含量进行了测定,结果显示赤芍
株间和同株不同粗细根之间的芍药苷含量差异很
大,见表2。每株的根直径与芍药苷含量做相关性
分析,3株的相关系数分别为 r1=-09615,r2=
05925,r3=-09542,结果呈负相关;在做大样本
(多个不同植株)统计时,相关性降低,r=
-03372。
2.11 多伦野生芍药芍药苷含量的株间变化 在实
验过程中发现野生芍药的个体差异很大。用部分测
定数据进行离散趋势分析,不同个体按根直径分3
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表2 多伦野生芍药根的直径与芍药苷质量分数相关性
样品编号(株根部位) 直径/cm 质量分数/%
11 051 623
12 073 247
13 080 266
21 054 538
22 070 613
23 099 476
311 083 199
312 057 252
321 092 201
322 060 236
组,直径032~050cm组,有5份样品,芍药苷含
量RSD5976%;直径051~060cm组,8份样品,
RSD4717%;直径 064~083cm组,6份样品,
RSD4615%,每组测定数据都显示出较大的离散
性。结果提示测定芍药苷动态变化要尽可能排除生
物个体差异。
2.12 多伦野生芍药不同生长期芍药苷动态变化 
13株多伦芍药不同生长期根芍药苷含量测定结果见
表3,计算平均值,并与采集时间做折线图,见图1。
从6个采集时间点13份样品芍药苷含量的平均值
看,5月(苗期)采集的含量最低(305%),8,9月(幼
  
果期和果期)采集的含量较高(472%,458%)。
  测定结果进行方差分析,采用RepeatedMeasures
withinsubjectdesign(ANOVA)方法,由statistica30
软件完成。结果F=386,P<001,表明在不同采集
时间(5~10月)样品含量总体有非常显著的差别;但
在6~10月样品平均含量之间没有显著差别。
3 讨论
关于芍药苷动态变化规律,以往多取3~5株栽
培芍药进行,实际上并不能代表野生芍药中芍药苷
动态的真实情况。本实验在多伦偏僻的蔡木山丘陵
地区定点、定13株取样,5~10月每月1次的方法,
填补了野生芍药中芍药苷含量动态变化数据的空
白,首次报告和提出野生芍药株间芍药苷含量差异
很大,加之野外样品采集会有很大的偶然性,植株个
体差异可能影响芍药苷动态变化结论。在表述方式
上,以个体与总体的比值来表示其规律性或趋势,更
加客观,如5月(苗期)8/13表示13株中有8株含
量值在此时最低;花果期也有最低的,但属个体差
异;花蕾期和花期相加8/13表示13株中有8株含
量值在此时最高;幼果期和果期相加5/13表示13
株中有5株含量值在此时最高。
表3 多伦芍药不同生长期根芍药苷的质量分数 % 
编号
采样时间及物候
20050515苗期 20050615花蕾期 20040707花期 20040807幼果期 20040901果期 20041010枯萎期
1 260 452 323 498 461 480
2 425 500 291 670 358 321
3 210 392 732 603 597 447
4 260 370 526 393 391 463
5 413 580 820 509 441 671
6 423 460 548 480 356 473
7 190 222 332 472 461 478
8 150 454 224 201 364 242
9 449 398 326 283 462 415
10 431 591 219 502 548 471
11 180 419 264 381 339 338
12 260 673 602 593 623 474
13 320 338 332 547 556 339
M 305 450 426 472 458 432
图1 多伦芍药生长期平均含量折线图
  关于赤芍的采收期,单纯以芍药苷含量高低而
言,本测定结果表明在6~10月13株平均含量之间
没有显著差别,即花果期含量最高,到枯萎时,多数
个体芍药苷含量下降并不明显。因此显蕾以后至枯
萎前均可挖根,农民根据农活的忙闲,灵活安排;从
野外采集的实际出发,花蕾期和花期容易发现,采集
效率较高,枯萎期根的折干率较高,这些都是农民总
结的经验,看来都是可行的,故不必特别定显蕾就
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采。
一般认为芍药苷含量与根的直径有负相关,即
根直径粗含量低,直径细含量高[2,7]。本实验结果
显示,在做单株小样本时,芍药苷含量与根的直径的
确表现不同程度的负相关;但在做大样本 (多个不
同植株)统计时,相关性系数降低,芍药苷含量与根
的直径不表现相关性(表2),此结果与以往认识不
同。个体间差异大,掩盖直径与含量的相关性;样本
量小,都可能是原因之一。另外,在被引据的西泽信
文章中[7]虽然有皮部比木部芍药苷含量高、细根比
粗根含量高的结果,但也有主根上部(粗)比下部
(细)含量高的结果。因此,芍药根的直径与芍药苷
是否有负相关性问题有待进一步实验研究。
[致谢] 多伦县科技局郭本芳、苏志发、董占有、唐怀
东、叶鹏勇等协助采集实验样本。
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中の配糖体の定量[J].生


#
?,1979,33(2):65.
DynamicchangeofpaeoniflorincontentinrootofPaeonialactiflora
growingatDuolunCounty,InnerMongolia
FENGXuefeng,HUShilin,ZHANGYongxin,HEYan,ZHANGQiwei,GEXiaoguang,YANGJingyu
(InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)
[Abstract] ToexplorethedynamicchangeofpaeoniflorincontentinrootofPaeonialactiflora.Method:Thesampleswerecol
lectedandpaeoniflorincontentwasdeterminedbyHPLC.Result:Theresultsshowedthattheaveragecontentofpaeoniflorinwasthe
lowestat3.05% intherootscolectedinMay,andduringthefruittimeitwasratherhighinAugustat4.72%,andinSeptemberat
4.58%.TheaveragecontentshowednosignificantdiferencesduringJunetoOctober.Conclusion:WildplantofP.lactifloramight
becolectedformedicaluseduringbloomingstageuntilwiltingstage.
[Keywords] DuolunChishao;Paeonialactiflora;paeoniflorin;dynamicchange
[责任编辑 张宁宁]
《中国中药杂志》近况简介
《中国中药杂志》为中国中文核心期刊,中国科技核心期刊;为“中国科学引文数据库”、“中国学术期刊综合评价数据库”
和“中国科技论文统计源”核心期刊,并且被《中国学术期刊文摘》中、英文版收录。在国际上,被美国医学索引Medline及《化
学文摘》(CA)、《生物学文摘》(BA)、《国际药学文摘》(IPA)、《分析文摘》(AA),俄罗斯《文摘杂志》(AJ),荷兰《医学文摘》
(EM),波兰《哥白尼索引》(IC)等权威性专业文摘收录。
据2005年中国科技论文统计与分析年度研究报告结果:《中国中药杂志》在Medline收录中国论文的期刊中名列第4位,
为524篇。据中国科学技术信息研究所信息分析研究中心发布2006年版中国科技期刊引证报告:《中国中药杂志》总被引频
次为3260;影响因子为0.634;基金论文比例0.48。另据中国学术期刊综合引证年度报告(2006):《中国中药杂志》总被引频
次为4676,影响因子为0938,5年影响因子1224,基金论文比047。
《中国中药杂志》荣获第三届国家期刊奖百种重点期刊,国家中医药管理局“以岭杯”第三届全国中医药优秀期刊评选一
等奖,第五届中国百种杰出学术期刊,中国科协精品科技期刊工程项目资助。
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