全 文 :酸碱对药大黄与附子在大黄附子汤中配伍的
化学研究
段秀俊,裴妙荣,裴香萍
(山西中医学院 中药系,山西 太原 030024)
[摘要] 目的:考察酸碱对药大黄与附子在大黄附子汤中配伍后酸、碱性成分的变化情况。方法:采用高效液相色谱法
对大黄、附子单味药提取液、大黄附子对药提取液及全方提取液中蒽醌类成分和乌头生物碱类成分的提取量进行了测定。结
果:对大黄而言,蒽醌类成分的提取量随着单药、对药及全方的配伍变化,水煎滤过、水煎离心逐渐减低,乙醇回流蒽醌类成分
的提取总量逐渐升高。水煎煮单药与对药、对药与全方之间的变化趋势均明显。对附子而言,水煎煮只检测到单酯型乌头生
物碱,乙醇提取既可检测到单酯型乌头生物碱,又可检测到双酯型乌头生物碱;乌头生物碱的提取量随着单药、对药及全方的
配伍变化,水煎滤过、水煎离心逐渐减低,乙醇回流变化不明显;水煎煮单药与对药、对药与全方之间的变化趋势均明显。结
论:大黄、附子单煎和乙醇回流,大黄、附子对药煎煮和乙醇回流,大黄附子汤全方煎煮和乙醇回流,酸、碱性成分的提取量发
生有规律的变化。
[关键词] 大黄;附子;大黄附子汤;酸碱对药;配伍化学
[收稿日期] 20090312
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30472125)
[通信作者] 裴妙荣,教授。Tel:(0351)2272180,Fax:(0351)2272269,
Email:peimr602@163.com
附子伍大黄,源于张仲景的《金匮要略·腹满
·寒痛·宿食病脉证治第十》,二者在方剂中经常
配伍使用,如大黄附子汤,温脾汤、附子泻心汤、附子
鳖甲汤等方剂的组成均有大黄和附子。大黄主要含
有酸性的蒽醌类成分,附子主要含有乌头生物碱类
成分,它们是一对酸碱对药。徐氏等曾采用紫外分
光光度法研究了大黄对附子的解毒作用,结果为在
一定范围内,大黄对附子的解毒作用随着大黄剂量
的增加而增加[1];他们还曾采用紫外分光光度法研
究过大黄附子汤中诸药的不同组合及煎法对乌头碱
含量的影响,结果为大黄能佐制附子的毒性,细辛对
乌头碱的含量无影响[2];另有人也曾研究过大黄附
子或大黄附子汤配伍蒽醌类成分含量变化情况[34]。
为深入了解含酸碱对药方剂酸、碱性成分的配伍变
化规律性,本研究系统研究了大黄与附子在大黄附
子汤中蒽醌类成分及乌头生物碱类成分的配伍变化
情况。
1 材料
Waters515系列高效液相色谱仪;2996二极管
阵列检测器;M32色谱工作站。大黄为蓼科植物掌
叶大黄RheumpalmatumL.的干燥根及根茎、购自四
川省五块石药材市场;附子为毛茛科植物乌头 Aco
nitumcarmicaeliDebx.的子根,购自四川省江油县;
细辛为马兜铃科植物北细辛 Asarumheterotropoides
Fr.Schmidtvar.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的
根及根茎,由辽宁中医药大学贾天柱教授提供。以
上药材均由山西中医学院裴香萍副教授鉴定为正
品。芦荟大黄素(批号110795200605)、大黄酸(批
号0757200206)、大黄素(批号110756200110)、大
黄酚(批号 110796200310)、大黄素甲醚(批号
110758200408)、乌头碱(批号 110720200410)、新
乌头碱(批号 110799200404)、次乌头碱(批号
110798200404)、甘草酸单铵盐 (批号 110731
200510)以上化学对照品均购自中国药品生物制品
检定所。色谱测定用水为重蒸水,甲醇为色谱纯,其
他所用试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 大黄附子汤配伍研究提取液的制备
按大黄附子汤处方比例(大黄、附子、细辛质量
比为3∶3∶1)[5],精密称取大黄、附子单味药、大黄与
附子对药、大黄附子汤全方,分别加水煎煮2次,一
部分提取液双层纱布滤过,作为水煎煮液,一部分提
取液经离心处理,作为水煎离心液。精密称取单味
药、对药及全方,分别加95%乙醇回流提取2次,每
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次1h,作为乙醇提取液。
2.2 蒽醌类成分的含量测定方法
2.2.1 色谱条件[69]
HypersilBDSC18柱(46mm×200mm,5μm);
流动相甲醇01%磷酸(80∶20);流速 10mL·
min-1;检测波长254nm;柱温 室温。
2.2.2 对照品溶液的配制
精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、
大黄素甲醚对照品,分别加甲醇制成0056,0046,
0056,006g·L-1的溶液,摇匀,045μm滤膜过
滤后作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
分别取相当于大黄15g的上述水提取液,浓
盐酸调pH至2,水浴水解1h,放冷,二氯甲烷萃取
5次,第1次50mL,第2~5次40mL,二氯甲烷液
蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶内,加甲
醇稀释至刻度,摇匀,作为检测总蒽醌的水煎液与水
煎离心液的供试品溶液;浓盐酸调 pH至2后不水
解直接萃取制备检测游离蒽醌的供试品溶液。分别
取相当于大黄15g的上述乙醇提取液,蒸干,残渣
加水转移至分液漏斗中,同上制备检测总蒽醌与游
离蒽醌乙醇提取液的供试品溶液。
2.2.4 方法学考察
以检测总蒽醌类成分的大黄附子汤水煎液供试
品溶液作为方法学考察的供试品溶液。试验对线性
范围、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等方法
学指标进行了考察。其中芦荟大黄素在00070~
704μg、大黄酸在 00053~528μg、大黄素在
00052~516μg、大黄酚在00052~522μg、大
黄素甲醚在00029~294μg内均呈良好的线性,
相关系数分别为 09995,09993,09992,
09994,09993,回归方程的处理采用了加权最小
二乘法;5种蒽醌类成分精密度试验 RSD分别为
17%,16%,18%,15%,18%;12h稳定性试验
RSD分别为 11%,11%,14%,10%,13%;重
复性试验 RSD分别为18%,14%,11%,15%,
10%;芦荟大黄素平均回收率为 10106%,RSD
14%;大黄酸平均回收率为 9881%,RSD23%;
大黄素平均回收率为9870%,RSD21%;大黄酚
平均回收率为10033%,RSD19%;大黄素甲醚平
均回收率为9832%,RSD22%。
2.3 乌头生物碱类成分的含量测定方法
2.3.1 色谱条件[1012]
HypersilBDSC18柱(46mm×150mm,5μm);
检测波长230nm;流速10mL·min-1;柱温室温;其
中双酯型乌头生物碱的流动相甲醇水(65∶35),水中
含008%三乙胺;单酯型乌头生物碱的流动相甲醇
水(42∶58),水中含02%三乙胺、03%冰醋酸。
2.3.2 对照品溶液的配制
精密称取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对照品,
分别加甲醇制成028,040,022g·L-1的溶液,摇
匀,045μm滤膜过滤后作为对照品溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备
分别取相当于附子30g的上述水提液,加浓
盐酸调pH至2,用乙醚萃取2次,每次50mL,弃去
乙醚液,水层用浓氨水调 pH至 10,用乙醚萃取 4
次,第1次50mL,以后每次40mL,合并乙醚液,蒸
干,残渣加二氯甲烷甲醇(70∶30)溶解并转移至5
mL量瓶内,加二氯甲烷甲醇(70∶30)稀释至刻度,
摇匀,作为水煎液与水煎离心液的供试品溶液;分别
取相当于附子30g的上述乙醇提取液,蒸干,残渣
加水转移至分液漏斗中,同法萃取制备乙醇提取液
的供试品溶液。
2.3.4 方法学考察结果
2.3.4.1 双酯型乌头生物碱 实验对线性范围、精
密度、稳定性、重复性及加样回收率等方法学指标进
行了考察。其中乌头碱在00504~1008μg、新乌
头碱在03008~6016μg、次乌头碱在01024~
2048μg内呈良好线性,相关系数分别为09996,
09995,09996;3种乌头类生物碱精密度试验
RSD分别为19%,11%,10%;24h稳定性试验
RSD分别为13%,10%,15%;重复性试验 RSD
分别为11%,23%,19%;乌头碱平均回收率为
9718%,RSD21%;新乌头碱平均回收率为
10142%,RSD18%,次乌头碱平均回收率为
9946%,RSD21%。
2.3.4.2 单酯型乌头生物碱 由于未取得单酯型乌
头生物碱的化学对照品,故采用新乌头碱作为外标参
照物考察了稳定性与重复性。供试品溶液在24h内
稳定性良好,RSD分别为单酯型新乌头碱21%、单
酯型乌头碱12%、单酯型次乌头碱11%;重复性试
验RSD分别为单酯型新乌头碱11%、单酯型乌头碱
20%、单酯型次乌头碱22%。
3 配伍研究测定结果
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3.1 大黄、附子单味药,大黄附子对药及大黄附子
汤全方水煎液测定结果
游离蒽醌、总蒽醌及单酯型乌头生物碱类成分
的提取量随着单药、对药、全方的配伍变化,水煎液
及水煎离心液降低趋势均明显(表1,2)。
对药煎煮离心液和全方煎煮离心液较对药煎煮
液和全方煎煮液中蒽醌类成分及单酯型乌头生物碱
类成分的提取量明显减少(表1,2)。
表1 水煎煮蒽醌类成分提取量 mg
处理方法 配伍方式 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 总计
水煎液游离蒽醌 单药 1319 2189 1593 1553 1072 7726
对药 1118 1751 1509 1419 1016 6813
全方 0803 1634 1179 0830 0436 4882
水煎离心游离蒽醌 对药 0997 1478 0988 1373 0884 5720
全方 0570 1437 0742 0302 0261 3312
水煎液总蒽醌 单药 3558 2426 4105 3883 1982 15954
对药 2875 2096 3524 3491 1957 13943
全方 2285 1882 2577 1849 0952 9545
水煎离心总蒽醌 对药 2306 1811 2614 2106 1332 10169
全方 2089 1735 2370 1583 0857 8634
表2 水煎煮单酯型乌头生物碱提取量 mg
处理方法
配伍
方式
新乌头
碱型
乌头
碱型
次乌头
碱型
总计
水煎液 单药 1244 0412 0612 2268
对药 0973 0285 0266 1524
全方 0766 0198 0146 1110
水煎离心 对药 0755 0234 0204 1193
全方 0595 0150 0143 0888
3.2 大黄、附子单味药,大黄附子对药及大黄汤全
方乙醇回流提取测定结果
游离蒽醌及总蒽醌提取量随着单药、对药、全方
的配伍变化有所升高,但变化不明显。且乙醇回流蒽
醌类成分的提取量均不及相应的水煎煮(表3,4)。
单酯型乌头生物碱类成分提取量均随着单药、
对药、全方的配伍变化逐渐降低,双酯型乌头生物碱
类成分则逐渐升高(表3,4)。
表3 乙醇提取蒽醌类成分提取量 mg
测定类型 配伍方式 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 总计
游离蒽醌 单药 0125 0066 0146 0181 0035 0553
对药 0213 0145 0395 0393 0106 1252
全方 0229 0160 0410 0441 0115 1355
总蒽醌 单药 1369 0647 1632 2097 0828 6573
对药 1548 0718 2331 2307 1034 7938
全方 1789 0750 2583 2385 1215 8722
表4 乙醇提取乌头生物碱提取量 mg
测定类型
配伍
方式
新乌头
碱型
乌头
碱型
次乌头
碱型
总计
单酯型乌头生物碱 单药 0418 0275 0223 0916
对药 0220 0126 0116 0462
全方 0159 0119 0072 0350
双酯型乌头生物碱 单药 1357 0189 0531 2077
对药 1363 0280 0780 2423
全方 1502 0391 0844 2737
4 讨论
样品液中蒽醌类及乌头生物碱类成分的含量测
定方法参照有关文献报道的方法[612]建立。由于未
取得的单酯型乌头生物碱的化学对照品,参考文献
[12]的方法分别将乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的
化学对照品进行水解,用水解物的色谱峰与供试液
的色谱峰进行了比对,确定了单酯型乌头生物碱的
出峰位置。而单酯型乌头生物碱的定量分析以新乌
头碱作为外标参照物。经考察结果表明所建立的方
法精密度高、稳定性好,准确可靠,简便易行。
水提取液中总蒽醌类成分与乌头生物碱类成分
随着单药、对药、全方的配伍变化,提取量降低趋势
明显(蒽醌类成分对药与全方的提取量分别为单味
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药的874%,598%;乌头生物碱类成分对药与全
方的提取量分别为单味药的 672%,489%)。从
单药与对药的提取量变化情况看,酸碱对药大黄与
附子在合煎时形成了沉淀,导致酸、碱性成分提取量
减损;全方较对药提取量也降低,说明大黄附子汤中
细辛的加入对蒽醌类成分与乌头生物碱类成分形成
沉淀起到了促进作用。由于大黄中所含蒽醌类成分
的量(176%)远较附子中所含乌头生物碱的量
(013%)为多,而使蒽醌类成分对乌头生物碱提取
量的影响(乌头生物碱对药煎煮较单药煎煮提取量
下降3283%)比乌头生物碱对蒽醌类成分的提取
量影响(蒽醌类成分对药煎煮较单药煎煮提取量下
降1261%)更大,由此可加深对治疗寒积便秘的大
黄与附子相伍的合理性的理解,大黄既能佐制附子
刚燥之性,又不影响本身荡涤泻下作用的发挥。细
辛剂量虽小,但在方中的作用也不可少。
为考察大分子复合物稳定性,对煎液的处理设
计了两种方式,一种是纱布滤过,保留煎煮过程中形
成的沉淀;另一种是将煎液离心处理,除去提取液中
的全部沉淀物。酸、碱性成分形成大分子复合物结
构的稳定性可以通过比较煎煮液和煎煮离心液中
酸、碱性成分含量的方法来考察。若大分子复合物
结构不稳定,测定过程中的酸或碱处理可使其解离,
含有不溶性的大分子复合物沉淀的水煎液的检测量
就会比已除去不溶性沉淀的水煎离心液高。实验结
果表明:对药煎煮离心液和全方煎煮离心液比对药
煎煮液和全方煎煮液中蒽醌类成分及乌头生物碱类
成分的提取量均有所下降(对药煎煮液与水煎离心
液,蒽醌类成分的提取量分别为单味药的874%,
637%,乌头生物碱的提取量分别为单味药的
672%,526%;全方煎煮液与水煎离心液,蒽醌类
成分的提取量分别为单味药的 598%,541%,乌
头生物碱的提取量分别为单味药的 489%,
391%),说明保留在水煎液中的单酯型乌头生物
碱类成分与蒽醌类成分形成的大分子复合物,在采
用酸、碱处理时可部分解离。
乙醇回流提取全方和对药的总蒽醌量均略高于
单味大黄,说明乙醇作为提取溶媒,不宜于酸碱性成
分发生相互反应。单味大黄乙醇回流总蒽醌提取量
仅为水煎煮的412%,说明乙醇不利于蒽醌类成分
的提取。由此可见,大黄在复方中应用时,应与其他
药味分开选用水为溶媒煎煮提取。
全方乙醇回流乌头生物碱的提取量是水煎煮的
28倍,而单药乙醇回流为水煎煮的13倍,可见乌
头生物碱在乙醇中的溶解度高。对含酸碱对药的处
方,若单纯考虑生物碱类成分的转移率,应考虑用乙
醇回流提取,可保证生物碱类成分被充分提出。
附子中双酯型乌头生物碱在水煎煮时几乎全部
水解,在煎煮液中已检测不到。而乙醇回流可使药
材中近一半(494%)的双酯型乌头生物碱被保留,
且随着单药、对药、全方的配伍变化,双酯型乌头生
物碱的提取量还有所增加。此实验结果说明 双酯
型乌头生物碱在乙醇中较为稳定,不易水解成单酯
和原碱型乌头生物碱,即乙醇作为提取溶媒可抑制
乌头类生物碱酯键的水解;大黄、细辛中所含的成
分增加了双酯型乌头生物碱在乙醇中的溶解度;以
乙醇作为提取溶媒蒽醌类成分与乌头生物碱类成分
不易形成大分子复合物。
水煎液提 取 游 离 蒽 醌 对 药 比 单 药 下 降
1181%,总蒽醌对药比单药下降1261%。表明游
离蒽醌与结合蒽醌均可与乌头生物碱类成分发生化
学反应,且难易程度没有明显差异。
[参考文献]
[1] 徐建东,王洪泉,张文英,等.大黄附子汤中诸药的不同组合及
煎法对乌头碱含量的影响[J].中国药房,2003,14(10):634.
[2] 徐建东.大黄对附子解毒作用的相关性分析[J].上海中医药
杂志,1999(3):7.
[3] 吴振强,吴达荣,张鸿练.方药配伍对大黄附子汤的大黄酸提
取率变化的影响[J].实用医技杂志,2005,12(12A):3429.
[4] 张梅,苏莜琳,雨田,等.五种中药与附子配伍前后有效成分
含量的变化[J].世界科学技术———中医药现代化,2006,8
(3):27.
[5] 邓中甲.方剂学[M].北京:中国中医药出版社,2003:65.
[6] 张丹,蒋心惠.反相高效液相色谱法测定大黄药材中游离及
结合型蒽醌类衍生物的含量[J].分析化学研究简报,2003,
31(4):459.
[7] 中国药典.一部[S].2005:17.
[8] 白丽杰,王春梅,刘君富.肝胃气痛片中大黄素和大黄酚含量
的HPLC测定[J].药物分析杂志,2006,26(5):689.
[9] 盛云杰,尹华.HPLC法测定六味安消胶囊中大黄素、大黄酚
的含量[J].中医药学刊,2006,24(10):1940.
[10] 王丽娜,郭云峰,崔本连,等.薄层扫描法测定肾康胶囊中乌
头碱的含量[J].长春中医学院学报,2005,21(3):39.
[11] 王瑞,刘芳,孙毅坤,等.不同附子炮制品中乌头碱、新乌头
碱、次乌头碱含量的HPLC测定[J].药物分析杂志,2006,26
(10):1361.
[12] 孙婷婷,栾立标.HPLC分离测定四逆汤中3种双酯型生物碱
及其6种水解产物[J].中国中药杂志,2006,31(19):1634.
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Compatabilitychemistryofacidalkalinepairmedicineof
DahuangandFuziinDahuangFuzidecoction
DUANXiujun,PEIMiaorong,PEIXiangping
(DepartmentofChineseMateriaMedica,ShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Taiyuan030024)
[Abstract] Objective:TodeterminethechangepaternofalkalineandacidcomponentsofDahuangandFuziindiferentcom
binations.Method:ThecontentsofanthraquinonesandaconitealkaloidsweredeterminedbyHPLCinsamplesofDahuangextracts,
Fuziextracts,DahuangandFuzipairmedicinesextracts,andextractsofwholerecipe.Result:AsforDahuang,thecontentsofan
thraquinonesweredecreasedwithchangesofcombination:highercontentswereindecoctionsofDahuangalone,lowercontentswerein
decoctionsofpairmedicines,andthelowestcontentswereindecoctionsofwholerecipe.AsforFuzi,monoesteraconitealkaloids
couldbedetectedinwaterextracts,andbothbiesterandmonoesteraconitealkaloidscouldbedetectedinethanolextracts.Thecon
tentsofaconitealkaloidsweredecreasedwithchangesofcombinations:fromFuzialonetopairmedicines,andtowholerecipe.The
changepaternwasmoreapparentwhenextractedinwaterdecoction.Conclusion:Thecontentsofalkalineandacidcomponentsare
changedwithdiferentextractmethodsanddiferentcombinations.
[Keywords] Dahuang;Fuzi;acidalkalinepairmedicine;DahuangFuzidecoction;compatibilitychemistry
[责任编辑 周驰]
《中国中药杂志》被国内外数据库收录情况和引证数据
1 国外数据库收录
美国SciFinder数据库:进入医学索引MEDLINE;进入《化学文摘》(CA);荷兰 Elsevier公司 Scopus数据
库;《国际药学文摘》(IPA);《毒物学文摘》(ToxFile);俄罗斯《文摘杂志》(AJ);波兰《哥白尼索引》(IC);
WHO西太平洋地区医学索引(WPRIM)。
2 国内数据库收录
“中国科学引文数据库”来源期刊;“中国学术期刊综合评价数据库”来源期刊;中国自然科学核心期刊;
中国中文核心期刊;中国科技核心期刊;《中国学术期刊文摘》中、英文版。
3 主要引证数据或数据库统计结果
《中国中药杂志》在中国知网(CNKI)的2008年下载量为31万,国内外用户达到2000余家。
据中国科学技术信息研究所分析研究中心发布的中国科技期刊核心版引证报告(2007):影响因子为
0.693,总被引频次3937,基金论文比0.53,被引半衰期5.68;扩展版:影响因子1.052;引文频次6853。
据中国学术期刊综合引证报告(2008版):影响因子为1.056,总被引频次6828,5年影响因子1.304。
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