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Vol.34，Issue 3
February，2009
第 34 卷第 3 期
2009 年 2 月
RP-HPLC 测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-
香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的含量
宋丽丽，陆 娟，颜佩芳，谭丽娜，李绪文，金永日*
(吉林大学化学学院，吉林 长春 130021)
[摘要] 目的：对芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷（tiliroside）的含量进行测定。方法：采用反相高效液相
色谱，ZORBAX XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸水溶液(B)，梯度洗脱，0～18 min A ：
B 26∶74，18～33 mim A：B 80∶20；流速 1.0 mL·min-1，检测波长 310 nm，柱温 25 ℃。结果：山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡
喃葡萄糖苷在进样量 0.1~5.0 μg 与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9（n=6）。山柰酚-3-O-β-D-(6″-P-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的平
均回收率 101.50%，RSD 0.90%（n=6）。结论：该方法可准确地测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷，方法
精密度高、简便、快速。
[关键词] 芫花；山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷；反相高效液相色谱

芫花 Daphne genkwa Sieb.et Zucc.为瑞香科植
物芫花的干燥花蕾，主产于安徽、江苏、浙江、山
东、福建、四川、湖北等地[1]。芫花的化学成分主
要由芫花素、羟基芫花素、芫花酯甲、芫花酯乙等
组成[2]。芫花具有泻水逐饮、解毒杀虫的功效，用
于水肿胀满，胸腹积水，痰饮喘咳，二便不利，外
治疥癣秃疮，冻疮[3]。国内学者曾报道过用 HPLC
测定芫花中芫花素[4]和芫花酯甲[5]的含量，以及芫
花叶中芫花叶苷、木犀草苷、异槲皮苷的含量[6]。
作者从芫花中分离得到了 7 个黄酮类化合物，其中
山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷（tiliroside）
的含量较高。该研究采用 HPLC 测定了芫花中山柰
酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的含量，其研究
结果为芫花质量标准的建立提供了新的含量测定
指标。
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪，Agilent 1200 工
作站。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均
为分析纯。
本实验所用的芫花购自长春市吉林大药房，经
长春中医药大学邓明鲁教授鉴定为芫花D. genkwa。
山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照

[收稿日期] 2008-07-09
[通讯作者] ＊金永日，Tel：13504401277，E-mail：jinyr@jlu.edu.cn
品为自制，是从芫花提取物中分离得到，并经
1H-NMR，13C-NMR，MS，IR 和 UV 谱学鉴定，并
与文献对比确认其结构[7]，经 HPLC 测定，归一化
分析其纯度为 99.30%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 ZORBAX XDB C18 色谱柱(4.6
mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸
水溶液(B)，梯度洗脱，0～18 min，A-B 26：74 ；18～
33 mim，A-B 80：20），流速 1.0 mL·min-1，检测波
长 310 nm，柱温 25 ℃。在此条件下山柰酚-3-
O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷与其他组分均能达
到基线分离，见图 1。

A..对照品；B.样品；1. tiliroside。
图 1 对照品和样品色谱图

2.2 对照品溶液的制备 取山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香
豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照品 25.00 mg，置 50.0 mL 量
瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀即得。


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2.3 供试品溶液的制备 取干燥的芫花粉末样品，
混合均匀，精密称取 1.0002 g，用甲醇提取 3 次，
每次加甲醇 15 mL，水浴(72 ℃)回流，回流时间分
别为 2，1.5，1 h，合并提取液，蒸干溶剂后加甲醇
溶解并定容至 25.0 mL，过滤，取续滤液做为供试
品溶液。
2.4 线性关系考察 精密量取山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-
香豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照品溶液（0.50 g·L-1）适量，
分别以甲醇稀释为 0.01，0.05，0.10，0.20，0.40，
0.50 g·L-1 的对照品溶液，分别取上述对照品溶液 10
μL，注入液相色谱仪，结果表明在 0.1~5.0 µg 山柰
酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷进样量(X，µg)
与峰面积(Y)呈现良好的线性关系。回归方程为
Y=23 017.47X+23.55，r=0.999 9。
2.5 精密度试验 精密吸取浓度为 0.10 g·L-1 山柰
酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照品甲醇溶
液 10 μL，连续进样 6 次，其 6 次进样的峰面积的
RSD 1.32%。
2.6 稳定性试验 取同一份样品溶液，在 0～8 h
内每隔 2 h 进样 1 次，进样量均为 10 μL，测定峰面
积，计算其 RSD 值，样品溶液的 RSD 3.0%。
2.7 重复性试验 取干燥的芫花混合均匀粉末 6
份，按“供试品溶液制备”方法操作，制得 6 份供
试品溶液，取 10 μL 注入色谱仪测定含量，测定结
果显示，样品中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡
萄糖苷含量的 RSD 0.98%(n=6)。
2.8 加样回收率试验 取干燥的芫花混合均匀粉
末 6 份，每份约 1 g，精密称定。分别向其中加入山
柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照品 2.00
mg，按“供试品溶液制备”方法操作，以甲醇稀释并
定容至 25.0 mL 量瓶中，得 6 份加标溶液。再取干
燥的芫花混合均匀粉末 3 份，每份 1 g，按“供试品
溶液制备”方法操作，制得 3 份供试品溶液。将供
试品溶液和加标溶液分别注入色谱仪测定含量，计
算回收率，结果见表 1。
2.9 样品的测定 取各不同产地的芫花药材 9 份，
精密称定。以上述供试液的制备方法制备，按选定
的色谱条件测定，并按外标法以峰面积计算药材中
山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的含量。测
定结果见表 2。

表 1 芫花中 tiliroside 的加样回收率
称样量
/g
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1.000 3 3.450 102.0
1.000 2 3.466 102.8
1.000 4 3.418 100.2 101.5 0.92
1.000 2 3.426 100.8
1.000 4 3.447 101.9
1.000 1 3.432 101.1
注：样品中量 1.41 mg；加入量 2.00 mg。

表 2 样品中 tiliroside 的质量分数（n=3）
样 品 质量分数/%
吉林大药房 0.141
安徽亳州 1 0.177
安徽亳州 2 0.161
安徽亳州 3 0.158
安徽亳州 4 0.173
安徽亳州 5 0.169
河北安国 1 0.149
河北安国 2 0.154
河北安国 3 0.138

3 结果与讨论
3.1 检测波长的选择 称取山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香
豆酰)-吡喃葡萄糖苷对照品适量，以适量甲醇溶解并
配制成 0.5 g·L-1 的溶液，以甲醇为空白，在波长
200～400 nm 扫描得到吸收光谱，在 310 nm 处有最
大吸收，故选择 310 nm 为山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆
酰)-吡喃葡萄糖苷含量测定的检测波长。
3.2 流动相的选择 分别选用乙腈-水，甲醇-水作
为流动相，发现乙睛-水分离效果较好，但是色谱峰
有托尾现象，在水中加入 0.1％醋酸，峰形有明显
改善。此外，为将样品中的其他成分在 1 个分析周
期内从色谱柱中洗脱出来，采用了梯度洗脱的方
式，在此条件下样品中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-
吡喃葡萄糖苷具有很好的分离度。
3.3 提取条件的选择 本研究考察了提取溶剂，比
较了乙醇、甲醇和丙酮 3 种溶剂的提取率，结果以
甲醇的提取率最佳，丙酮的提取率最低。通过比较
甲醇室温冷浸 24 h、回流提取 2 h（72 ℃）、超声提
取 0.5 h 的提取率，发现回流提取提取率最高，且
回流提取 3 次与 4 次的提取率基本一致，因此最终


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选择回流提取 3 次，每次加入甲醇量为 15 mL，回
流时间分别为 2，1.5，1 h。
[参考文献]
[1] 徐珞珊. 中国药材学，下册[M]. 北京：中国医药科技出版社，
1996：964.
[2] 宋小妹. 中药化学成分提取分离与制备[M].北京：人民卫生出版
社，2004：255.
[3] 中国药典. 一部[S]. 2005：109.
[4] 张保献，原思通，夏 坤. HPLC 法测定芫花中芫花素的含量[J].
中国中药杂志，1996，21(4)：237.
[5] 张保献，原思通，夏 坤. HPLC 法测定芫花中芫花酯甲的含量[J].
中国中药杂志，1994，19(9)：551.
[6] 李晓晓，刘延泽. RP-HPLC 法测定芫花叶中 3 中黄酮苷的含量[J].
中草药，2004，35(7)：822.
[7] Tamotsu Nikaido，Taichi Ohmoto，Ushio Sankawa. Inhibitors of
adenosine 3′，5′-cyclic monophosphate phosphodiesterase in Daphne
genkwa Sieb.et Zucc[J]. Chem Pharm Bull，1987，35(2)：675.


RP-HPLC determination of tiliroside in Daphne genkwa

SONG Lili，LU Juan，YAN Peifang，TAN Lina，LI Xuwen，JIN Yongri*
(College of Chemistry of JiLin university，Changchun 130012，China)

[Abstract] Objective: To determine the contents of tiliroside [kaempferol 3-O-β-D-(6＂-p-coumaroyl) glucopyranoside] in
the Daphne genkwa. Method：The separation was performed on ZORBAX XDB C18 column (4.6 mm×250 mm，5 μm)，using
acetonitrile and water/acetic acid mixture (1 000/1) (gradient elution：0-18 min，26∶74; 18-33 min，80∶20) as mobile phase with
the rate of 1.0 mL·min-1 at 25 ℃， the wavelength for measurement was 310 nm. Result：The linearity was in the range of 0.1-5.0
μg(n=6)，and the correlation coefficient was 0.999 9. The average recovery for compound tiliroside was 101.50％(RSD 0.90%)
(n=6) . Conclusion：This method is accurate，reliable and reproducible to determine tiliroside in the D. genkwa.
[Key words] Daphne genkwa；tiliroside；RP-HPLC
[责任编辑 王亚君]



《中国中药杂志》被国内外数据库收录情况和引证数据

1 国外数据库收录
美国 SciFinder 数据库：进入医学索引 MEDLINE；进入《化学文摘》（CA）；荷兰 Elsevier 公司 Scopus
数据库；《国际药学文摘》(IPA)；《毒物学文摘》（ToxFile）；俄罗斯《文摘杂志》（AJ）；波兰《哥白尼索引》
（IC）；WHO 西太平洋地区医学索引(WPRIM)。
2 国内数据库收录
“中国科学引文数据库”来源期刊；“中国学术期刊综合评价数据库”来源期刊；中国自然科学核心
期刊；中国中文核心期刊；中国科技核心期刊；《中国学术期刊文摘》中、英文版。
3 主要引证数据或数据库统计结果
《中国中药杂志》在中国知网（CNKI）的 2007 年浏览量为 37 万，下载量为 21 万，国内外用户达到
2000 余家。　
据中国科学技术信息研究所分析研究中心发布的中国科技期刊核心版引证报告(2007)：影响因子为
0.693，总被引频次 3 937，基金论文比 0.53，被引半衰期 5.68；扩展版：影响因子 1.052；引文频次 6 853。