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图１ 栀子苷对照品和样品ＨＰＬＣ图
Ａ对照品；Ｂ样品；Ｃ阴性样品；１栀子苷
２０，３０，４０，５０，６０，７０，８０μＬ，分别注入液
相色谱仪，测定其峰面积，以峰面积对进样量（μｇ）
进行直线回归，回归方程为 Ｙ＝１３２３８２Ｘ＋８２２，
ｒ＝０９９９４，表明栀子苷在００６６～０５２８μｇ与峰面
积呈良好的线性关系。
２．４ 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 ５
μＬ，重复进样６次，测得其峰面积ＲＳＤ０３２％。
２．５ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于０，
２，４，６，８ｈ进样１次，每次 ５μＬ，记录色谱峰峰面
积，ＲＳＤ０５１％（ｎ＝５）。结果表明在８ｈ内栀子苷
峰面积无明显变化。
２．６ 重复性试验 取同一批号的样品，精密称取５
份，按样品测定方法分别测定栀子苷含量，
ＲＳＤ２２％（ｎ＝６），表明本法重复性好。
２．７ 加样回收率试验 取已知含量的样品（８１
ｍｇ·ｇ－１）２丸６份，精密称定，分别精密加入栀子苷
对照品溶液（０２４４ｍｇ·ｍＬ－１）各３ｍＬ，按２．２项下
方法，制备回收率测定溶液，按２．８项下方法测定含
量，计算回收率，结果见表１。
表１ 栀子苷回收率试验
样品中含量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０８１５ １５４９ １００３０
０７９８ １５２６ ９９４５
０８０３ １５２９ ９９１８
９９２４ ０７１
０８１１ １５３０ ９８２２
０８０５ １５３１ ９９１８
０８０７ １５２５ ９８０９
注：加入量均为０７３２ｍｇ
２．８ 样品含量测定 精密吸取供试品溶液和对照
品溶液各５μＬ，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，
按外标法计算栀子苷含量，结果见表２。
表２ 样品中栀子苷含量（ｎ＝３）
批号 ｍｇ／丸 ＲＳＤ／％
１ ０４１ １５６
２ ０４５ ２０４
３ ０３８ １１２
３ 讨论
供试品溶液制备时曾对样品取样量及超声提取
时间进行了考察，当取样量为０２ｇ，超声处理分别
考察了２０，３０，４０ｍｉｎ，结果超声处理３０ｍｉｎ量含量
不再增加，故最后确定超声处理３０ｍｉｎ。供试品在
超声提取后，置冰箱中放置２ｈ，主要是为了使滴丸
中的赋形剂聚乙二醇析出，以免污染色谱柱。
［责任编辑 张宁宁］
双黄连片对细菌感染小鼠的保护作用
马 朝，刘 静，史瑞娜，曹永孝
（西安交通大学 医学院 药理学系，陕西 西安 ７１００６１）
［收稿日期］ ２００７０４１６
［通讯作者］ 曹永孝，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０２９）８２６５５１４０，Ｅｍａｉｌ：ｙｘｙ＠
ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
双黄连是由双花（金银花）、黄芩和连翘所组成
的中成药，具有辛凉解表、清热解毒的作用［１］，常用
的双黄连制剂有双黄连注射液、注射用双黄连冻干
粉、双黄连胶囊、双黄连口服液和双黄连含片，广泛
用于风热感冒发热、咳嗽、咽痛等症。双黄连口服液
适用于病毒及细菌引起的上呼吸道感染、咽炎、扁桃
体炎、肺炎等，有体外抗菌作用［２］，本研究报道双黄
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中 国 中 药 杂 志
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连片的体内抗菌作用。
１ 材料
１．１ 药物与试剂 双黄连片，批号０６０４３７，由陕西
白鹿制药股份有限公司提供，用生理盐水配成不同
剂量；注射用头孢唑林钠，哈药集团制药总厂产品，
批号 Ｂ０６０５４０５１３；胃膜素，陕西方兴制药有限公司
生产，批号０６０９０１。
１．２ 菌株 标准菌株：大肠埃希菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ
ＡＴＣＣ２５９２２株，金黄色葡萄球菌 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕ
ｒｅｕｓＡＴＣＣ２５９２３株，铜绿假单孢菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＡＴＣＣ２７８５３株，购自中国预防医学科学
院北京药品生物制品鉴定所中国医学细菌保藏中
心。临床分离菌株：中间葡萄球菌Ｒ１７４３，金黄色葡
萄球菌Ｂ７５４，铜绿假单孢菌 Ｒ１６２０株，铜绿假单孢
菌 Ｒ１５９８株，大肠埃希菌 Ｒ１５９８株，大肠埃希菌
Ｗ１８６７株，由西安交通大学第二附属医院细菌室提
供，试验前传代备用。
１．３ 动物 ＩＣＲ品系小白鼠，体重１８～２２ｇ，雌雄
兼用。由西安交通大学医学实验动物中心提供，合
格证号 陕医动证字第 ０８００４号。实验室温度为
２２～２６℃，相对湿度３５％ ～７０％，自然光源，换气
扇通风，饮自来水，食全价固体饲料，由西安交通大
学医学实验动物中心提供，动物按性别分笼饲养。
２ 方法
参照《卫生部药政局新药临床前研究指导》中
体内抗菌试验原则［３］，测定双黄连片对感染小鼠生
存率的影响。
２．１ 试验菌最小致死量（ＭＬＤ）测定 将 ＩＣＲ小鼠
随机分组，每组５只，将测定了菌落形成单位ＣＦＵ·
ｍＬ－１的试验菌２４～４８ｈ培养物用５％胃膜素悬液
进行１０倍连续梯度稀释，稀释４至５个剂量组，每
一稀释度菌液腹腔注射感染１组小鼠，感染量０５
ｍＬ／只。观察、记录各组小鼠死亡情况。组内小鼠
全部死亡的最小细菌量为 ＭＬＤ［４，５］。测得金葡菌
ＡＴＣＣ２５９２３的ＭＬＤ为１０３ＣＦＵ·ｍＬ－１，中间葡萄球
菌 Ｒ１７４３、金黄色葡萄球菌 Ｂ７５４、大肠埃希菌
ＡＴＣＣ２５９２２、铜绿假单胞菌 ＡＴＣＣ２５９８３和铜绿假单
胞菌Ｒ１５９８的ＭＬＤ为１０４ＣＦＵ·ｍＬ－１，大肠埃希菌
Ｒ１５９８、大肠埃希菌 Ｗ１８６７和铜绿假单胞菌 Ｒ１６２０
的ＭＬＤ为１０５ＣＦＵ·ｍＬ－１。
２．２ 药物对感染小鼠的保护作用测定 小鼠随机
分组：对照组（生理盐水），双黄连片１２，０６，０３ｇ
·ｋｇ－１组，头孢唑啉０５ｇ·ｋｇ－１。每组１０只，对照
组１５只。各药用生理盐水配成不同浓度，灌胃给
药，每日１次，连续７ｄ，第４天给药后１ｈ，用 ＭＬＤ
量菌液腹腔注射感染小鼠，０５ｍＬ／只。感染后每
日观察、记录小鼠死亡情况，连续６ｄ［６９］。
２．３ 统计方法 用 ＳＰＳＳ３０统计软件，计数资料
比较采用秩和检验，质反应指标用χ２检验。
３ 结果
３．１ 对金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２３感染小鼠的保
护作用 对照组小鼠在２ｄ内死亡１２只，双黄连片
高剂量组仅在感染后第１天死亡１只，死亡率明显
低于对照组，中、低剂量组分别死亡２，３只，头孢唑
啉钠组死亡２只。表明双黄连片对金黄色葡萄球菌
ＡＴＣＣ２５９２３感染小鼠有显著的保护作用，能明显延
长小鼠生存时间，比头孢唑啉钠组有更高的生存率。
３．２ 对中间葡萄球菌 Ｒ１７４３感染小鼠的保护作用
对照组２ｄ内死亡１４只，双黄连片高剂量组第１，
２天共死亡３只，明显低于对照组，中、低剂量组分
别死亡７，９只。表明双黄连片高剂量组对中间葡萄
球菌Ｒ１７４３感染小鼠有显著的保护作用，能明显延
长小鼠生存时间，与头孢唑啉钠组有相同的生存率。
３．３ 对金黄色葡萄球菌 Ｂ７５４感染小鼠的保护作
用 ６ｄ内对照组小鼠死亡１３只，双黄连片高、中、
低剂量组分别死亡３，５，６只，均低于对照组，头孢唑
啉钠组仅死亡２只。表明双黄连片高剂量组对金黄
色葡萄球菌 Ｂ７５４感染小鼠有显著的保护作用，能
延长小鼠生存时间。
３．４ 对铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３感染小鼠的保护
作用 对照组小鼠前３天内全部死亡，双黄连片高
剂量组第１天死亡２只，第２，３天分别死亡１只，头
孢唑啉钠组前２ｄ死亡５只。双黄连片中剂量组与
低剂量组各死亡５，８只。表明双黄连片高剂量组对
铜绿假单胞菌 ＡＴＣＣ２７８５３感染小鼠有明显的保护
作用，能显著提高感染小鼠的生存率，比头孢唑啉钠
组有更高的生存率。
３．５ 对铜绿假单胞菌 Ｒ１６２０感染小鼠的保护作用
对照组小鼠前２天死亡１３只，双黄连片高、中、低
剂量组分别死亡４，６，９只小鼠，均低于对照组，而头
孢唑啉钠组只死亡１只。表明双黄连片高剂量组对
铜绿假单胞菌Ｒ１６２０感染小鼠有一定的保护作用，
能延长小鼠生存时间。
３．６ 对铜绿假单胞菌 Ｒ１５９８感染小鼠的保护作用
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对照组小鼠死亡１２只，双黄连片高、中、低剂量组
分别死亡４，５，６只小鼠，均低于对照组，而头孢唑啉
钠组只死亡３只。表明双黄连片高剂量组对铜绿假
单胞菌Ｒ１５９８感染小鼠有一定的保护作用，能延长
小鼠生存时间。
３．７ 对大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２感染小鼠的保护作
用 对照组死亡１２只，双黄连片高、中、低剂量组分
别死亡小鼠４，６，８只，均低于对照组，且高剂量组与
对照组比有显著性差异，头孢唑啉钠组死亡 ２只。
表明双黄连片高剂量组对大肠埃希菌 ＡＴＣＣ２５９２２
感染小鼠有显著的保护作用，显著提高感染小鼠的
生存率。
３．８ 对大肠埃希菌 Ｒ１５９８感染小鼠的保护作用
对照组小鼠３ｄ内全部死亡，双黄连片高、中剂量组
死亡情况相同，各死亡６只，低剂量组死亡７只，也
低于对照组，各组与对照组比均有显著性差异，头孢
唑啉钠组只死亡２只。表明双黄连片高剂量组对大
肠埃希菌Ｒ１５９８感染小鼠有微弱保护作用。
３．９ 对大肠埃希菌Ｗ１８６７感染小鼠的保护作用
对照组小鼠前４天死亡１１只，双黄连片高、中、低剂
量组分别死亡４，５，７只，均低于对照组，头孢唑啉钠
组死亡３只。表明双黄连片高剂量组对大肠埃希菌
Ｗ１８６７感染小鼠有保护作用，显著提高感染小鼠的
生存情况，与头孢唑啉钠组有相同的生存率。
４ 讨论
双黄连是传统方剂，目前已广泛用于细菌、病
毒所引起的各种感染。据文献报道，临床金黄色
葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２３对双黄连粉针剂最敏感，加
入双黄连６ｍｇ·ｍＬ－１后体外最低抑菌浓度（ＭＩＣ）
下降最大，标准金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２３加入
双 黄 连 后 ＭＩＣ 低 于 标 准 铜 绿 假 单 胞 菌
ＡＴＣＣ２７８５３，而标准铜绿假单胞菌 ＡＴＣＣ２７８５３加
入双黄连前后无变化［１０］。双黄连与青霉素、头孢
唑啉、头孢噻肟、苯唑青霉素 ４种抗生素伍，可使
对细菌的 ＭＩＣ下降８５％ ～９０％［１１］，注射用双黄连
与抗生素伍用时，抗生素对上述细菌的 ＭＩＣ下降
５０％ ～９９％［１１］。双黄连与头孢噻肟合用，比单用
头孢噻肟对铜绿假单胞菌的敏感度提高２～８倍；
与头孢唑啉、苯唑青霉素合用比单用头孢唑啉、苯
唑青霉素对金黄色葡萄球菌的敏感度提高 １～４
倍。提示：双黄连与以上抗生素合用，有显著协同
抗菌作用，其机制可能是 β内酰胺类抗生素破坏
了细菌的细胞壁，使双黄连易进入细菌细胞内，所
以其体外抗菌活性有显著提高［１１］。本试验从体内
抗菌方面证实，双黄连片对金黄色葡萄球菌
ＡＴＣＣ２５９２３感染小鼠的保护作用明显优于铜绿假
单 胞 菌 ＡＴＣＣ２７８５３，但 对 铜 绿 假 单 胞 菌
ＡＴＣＣ２７８５３感染小鼠的保护作用也有效，表明双
黄连片对细菌感染小鼠有明显的保护作用，对治
疗临床耐药菌感染具有重要意义，有很好的推广
应用价值。
［参考文献］
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［责任编辑 古云侠］
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