全 文 ：ＨＰＬＣ测定藏药手掌参旺拉中４种有效成分的含量
杨蓓蓓，李帅，张瑞萍，王琰，石建功
（中国医学科学院 北京协和医学院 药物研究所，北京 １０００５０）
［摘要］ 目的：建立ＨＰＬＣ同时测定旺拉中４种促智类有效成分的含量测定方法，并对不同产地的旺拉进行含量测定，以
建立旺拉的质量控制标准。方法：采用 Ｃ１８反相色谱柱，甲醇水梯度洗脱，０ｍｉｎ１５％ ～１０ｍｉｎ２０％ ～２０ｍｉｎ４５％ ～３５ｍｉｎ
７０％，流速０７ｍＬ·ｍｉｎ－１，在２２２ｎｍ波长处检测ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ的含量。正交实验优化药材
提取方法并测定２４个不同产地样品的含量。结果：建立了藏药旺拉 ＨＰＬＣ分析方法，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ在测定的范围内均表现出良好的线性（ｒ＝０９９９９）；方法的回收率在９９００％ ～９９５２％，ＲＳＤ＜１０％。结论：高效
液相色谱法，能简便快速的测定旺拉中有效成分的含量，鉴别不同产地药材质量优劣，为全面控制藏药旺拉提供了依据。
［关键词］ 藏药；ＨＰＬＣ；旺拉；含量测定
［收稿日期］ ２００８１１１３
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（２０４０２０２５）；中央级公益性科
研院所基本科研业务费专项资金项目（２００６ＱＮ２０）
［通信作者］ 石建功，Ｔｅｌ：（０１０）８３１５４７８９，Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｊｇ＠ｉｍｍ．ａｃ．
ｃｎ
兰科手参属植物手参 ＧｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａＲ
Ｂｒｏｗｎ的块根别名旺拉、手掌参、佛手参、手儿参［１］。
手参始载于藏医最早医药书《四部医典》，有填精补
髓、增强体质、生津止渴、安神增智的功效［２］，以后
历代的蒙、藏本草如《晶珠本草》、《本草图鉴》等均
有记载［３］。分布于西藏、内蒙古、青海、四川、辽宁、
黑龙江等地［４］。旺拉中含有二氢芪类、菲类、苷类、
苯丙素类、异戊二烯类、脂肪酸衍生物等多种类型化
合物，但对旺拉这味传统藏药的分析方法却较少有
报道。本研究首次建立了旺拉的 ＨＰＬＣ方法，同时
测定旺拉中 ４种促智有效成分［５］（ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，
ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ）的含量。该方法
快速、灵敏，分离度好，专属性强，为评价藏药旺拉的
质量提供了依据。
１ 仪器和试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱系统，包括四元泵，
真空脱气机，自动进样器，ＤＡＤ检测器，Ｃｈｒｏｍｏｇｒａｐｈ
色谱工作站；甲醇（色谱纯），娃哈哈纯净水（过０４５
μｍ滤膜）。ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ对照品由本课题组分离鉴定，纯度＞９９％。
２ 方法
２．１ 色谱条件 ＰｒａｖｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇水，梯度洗脱：０～１０ｍｉｎ，
１５％～２０％；１０～２０ｍｉｎ，２０％ ～４５％；２０～３５ｍｉｎ，
４５％ ～７０％ 流速 ０７ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长 ２２２
ｎｍ。在此色谱条件下，４个有效成分分离良好，
见图１。
１．ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ；２．ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ；３．ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ；４．ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ。
图１ 对照品混合溶液（Ａ）旺拉药材提取溶液（Ｂ）
ＨＰＬＣ图
２．２ 对照品溶液的制备 分别精密称取 ｄａｃｔｙｌｏ
ｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ对照品各
１０ｍｇ，分别置于１０ｍＬ量瓶中，用甲醇溶解并定容
至刻度，配成１ｇ·Ｌ－１的标准储备液。
２．３ 供试液的制备 精密称取旺拉药材粉末１ｇ
（过４０目筛），７５％乙醇２０ｍＬ超声提取３ｈ。过滤
后浓缩，用甲醇定容到１０ｍＬ，即得。
２．４ 线性关系考察 分别取适量的对照品储备液
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混合，并用甲醇定容至５ｍＬ，再依次稀释至标准曲
线所需要的浓度。分别进样１０μＬ，以进样量为横
坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到的回归
方程为 ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，Ｙ＝３２６１＋１３１５４Ｘ，ｒ＝
０９９９９，线性范围 ０２０～４０５μｇ；ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，Ｙ＝
６０７＋１３６６２５Ｘ，ｒ＝０９９９９，线性范围０１０～５１１
μｇ；ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，Ｙ＝１０３９＋１２２４８Ｘ，ｒ＝
０９９９９，线性范围 ００９～１７９μｇ；ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ，Ｙ＝
１８３６９＋１３０９１６Ｘ，ｒ＝０９９９９，线性范围 ００９～
４３２μｇ。
２．５ 精密度试验 取０５ｇ·Ｌ－１混合对照品溶液，
进样１０μＬ，连续进样５次，以色谱峰面积计算，ＲＳＤ
分别为 ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ０３％，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ０４％，ｄａｃ
ｔｙｌｏｒｈｉｎＡ０４％，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ０５％。
２．６ 重复性试验 取同一批次供试品５份，按２．３
项下方法分别提取，各取１０μＬ进样，测定４个成分
的含量，含量 ＲＳＤ分别为０６１％，０６７％，０２９％，
０６５％。
２．７ 稳定性试验 将同一供试品按２．３项下方法
制备溶液，于制备后的１，２，５，１２，２４ｈ进行测定，测
得４个成分的含量ＲＳＤ为０９４％，０９３％，０５８％，
０５９％。
２．８ 回收率试验 精密称取１ｇ样品（１９号）９份。
分别加入一定量的对照品储备溶液，按２．３项下方
法提取测定。结果 ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ回收率 ９９１９％，
ＲＳＤ ０６６％，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ回 收 率 ９９１６％，ＲＳＤ
０２２％，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ回收率９９５２％，ＲＳＤ０４２％，
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ回收率９９００％，ＲＳＤ０４４％，结果见表１。
３ 含量测定
精密称取不同来源的２４份旺拉样品粉末各１
ｇ，按２．３项下方法制备待测液。精密量取１０μＬ进
样，测定色谱峰峰面积，根据标准曲线计算其含量，
结果见表２。
４ 讨论
ＤａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａ
ｒｉｎｅ４个成分均为有机酸苄酯糖苷类化合物，研究
发现，这４个成分可改善ＤＧａｌ＋ＮａＮＯ２致衰老小鼠
的学习记忆能力，具有促智和延缓衰老的作用，其作
用可能部分由于其具有抗氧化的能力［６］。为了有
效的利用和开发该类成分，也对以这４个活性成分
为主的旺拉提取物有效部位进行了研究。该方法也
可用于测定有效部位中有效成分的含量，辅助研究
表１ ４个成分加样回收率（ｎ＝３）
化合物
样品中量
／ｍｇ·ｇ－１
加入量
／ｍｇ·ｇ－１
测得量
／ｍｇ·ｇ－１
平均回
收率／％
ＲＳＤ
／％
ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ ０６３４ ０３１７ ０９５０ ９９８９ ０６６
０６３４ ０６３４ １２５０ ９８５８
０６３４ ０９５０ １５７０ ９９１１
ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ ０４２９ ０２１５ ０６４５ ９９３８ ０２２
０４２９ ０４２０ ０８４０ ９８９４
０４２９ ０６３０ １０５０ ９９１５
ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ １００４ ０５００ １５００ ９９７３ ０４２
１００４ ０９００ １９００ ９９７９
１００４ １５００ ２４８０ ９９０４
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ ０２１０ ０１０５ ０３１２ ９９０５ ０４４
０２１０ ０２００ ０４０４ ９８５４
０２１０ ０３００ ０５０７ ９９４１
旺拉有效部位的制备工艺，使工艺合理、稳定、有效、
可行。
正交试验优化提取条件 以提取溶剂，提取次
数，提取时间，提取方法和提取溶剂体积为五因素，
下设四水平。用 Ｌ１６（４５）正交表安排提取实验，精
密量取１０μＬ进样。分别计算４个成分含量，以总
含量为考察指标。根据正交实验结果，综合考虑实
验室提取方便和经济性，决定采取７５％乙醇２０倍
体积超声提取１次３ｈ为提取条件。
色谱柱的选择 在实验中考察了Ｃ８和 Ｃ１８色谱
柱，Ｃ１８色谱柱分离效果明显优于Ｃ８柱。同时也比较
了不同厂家不同填料和长度的 Ｃ１８色谱柱对旺拉提
取物进行分离，结果发现，采用亲水性端基封尾硅胶
填充的色谱柱，对这４个极性较大的化合物保留较
好，与普通的Ｃ１８色谱柱相比，分离度和峰型都有很
大改善。
流动相考察 比较了甲醇水，乙腈水，甲醇冰
醋酸水，乙腈冰醋酸水的不同比例和梯度洗脱程
序，最终确定甲醇水梯度洗脱，０ｍｉｎ１５％ ～１０ｍｉｎ
２０％ ～２０ｍｉｎ４５％ ～３５ｍｉｎ７０％流速 ０７ｍＬ·
ｍｉｎ－１。此流动相比例，样品的分离度良好，峰型对
称。
波长的考察 ４个对照品，都为有机酸苄酯糖
苷类化合物，结构类似，紫外吸收也相近，所以选取
２２２ｎｍ最大吸收处为测定波长。
根据旺拉药材的含量测定结果可知，收集到的
２４批旺拉药材，均含有 ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，
ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ这４个成分。但内蒙古和东
北产的样品４个成分含量都较低，质量较差。四川、
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青 表２ ２４批旺拉药材中４种有效成分的含量 ｍｇ·ｇ－１
产地或购买地 ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ
内蒙古 ０２７１ ０２１０ ０５２０ ０１８０
四川 ０７４８ ０５２４ ０９２７ ０１６３
四川 １３２２ ０７１８ １０５９ ０２４２
青海 ０６８５ ０２６６ ０２４４ ００７０
黑龙江大兴安岭 ０２２７ ０２８９ ０２６０ ０２３０
青海 １２１８ ０６８９ １４７６ ０２５５
吉林 １６１４ １１４８ ０６６９ ０５２１
黑龙江大兴安岭 ００６１ ０３１３ ０１７２ ０２６８
青海 １０５６ ０５７８ ０９８３ ０１８５
西藏鲁朗 ０８３７ ０４５４ １４２８ ０２４３
青海玉树 ０５７１ ０２７９ ０６６６ ０１４８
青海金诃药业 ０７５７ ０２８０ ０５２６ ００９５
青海 １０１３ ０３９３ ０６３８ ０１４３
西藏 ０２１７ ００７１ ０１７１ ００４６
四川甘孜 １１４７ ０３９４ ０８６３ ０１０１
西藏鲁朗 １６３２ ０５８１ １１９９ ０２１４
青海 ０７２７ ０３５４ ０４７１ ０１２６
四川 ０６４４ ０４３１ １０２１ ０２１３
川西药材采购站 ０６５６ ０４４８ １０３４ ０２２１
四川 ０２７０ ０２０１ ０３９４ ００９４
青海西宁 ０８７８ ０３５８ １８５０ ０３５２
川西药材采购站 ０４２１ ０２４８ ０４２１ ０１０７
川西药材采购站 １１０４ ０４８９ ２１９３ ０３５１
四川甘孜 ０７４８ ０２６６ ０７８７ ００９０
海、西藏产的样品不同批次含量差别较大。４个成
分中，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ含量相对较大，
ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ相对含量较小。该方法可快速
高效的检测出样品中４个有效成分的含量，可为判
断旺拉药材的优劣提供科学的依据。
［参考文献］
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ｍｅｍｏｒｙｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６（１０４）：
２５０．
ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｏｕｒａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎＴｉｂｅｔａｎｈｅｒｂ
Ｇｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＹＡＮＧＢｅｉｂｅｉ，ＬＩＳｈｕａｉ，ＺＨＡＮＧＲｕｉｐｉｎｇ，ＷＡＮＧＹａｎ，ＳＨＩＪｉａｎｇｏｎｇ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｕｒａｃ
ｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡ，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎａＴｉｂｅｔａｎｈｅｒｂＧｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ａｎａｌｙｓｉｓｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｏｎａＰｒａｖｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）ｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ（Ａ）ｗａｔｅｒ（Ｂ）ｉｎ
ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓ１５％ Ａ，ｃｈｓｎｈｒｆｔｏ２０％ Ａｉｎ１０ｍｉｎ，ｔｏ４５％ Ａｉｎ１０ｍｉｎ，ｔｏ７０％ Ａｉｎ１５ｍｉｎ．Ｔｈｅｄｅ
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ｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２２２ｎｍ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０７ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆ
ｆｏｕｒａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｆｒｏｍＧｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅａｓｓａｙｄｉｓｐｌａｙｅｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｏｖｅｒｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅｓｏｆ０２０
４０５μｇ（ｒ＝０９９９９），０１０５１１μｇ（ｒ＝０９９９９），０１０５１１μｇ（ｒ＝０９９９９）ａｎｄ００９１７９μｇ（ｒ＝０９９９９），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ
ｌｙ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝９）ｗｅｒｅ９９１９％，９９１６％，９９５２％ ａｎｄ９９００％ ｆｏｒｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＢ，ｌｏｒｏｇｌｏｓｓｉｎ，ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｎＡａｎｄ
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔｕｄｙ
ｏｆＧｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｔｉｂｅｔａｎｈｅｒｂ；Ｇｙｍｎａｄｅｎｉａｃｏｎｏｐｓｅａ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
［责任编辑 王亚君］
第三次全国道地药材学术研讨会暨中药资源生态专业委员会换届选举大会征文通知（第二轮）
第三届全国道地药材学术研讨会暨中药资源生态专业委员会换届选举大会定于２００９年９月１８－２０日在山东济南召开。
本次会议由中国生态学学会中药资源生态专业委员会主办，中国中医科学院中药研究所、山东省科学院协办。会议主要内容
为中药资源生态学，特别是中药道地药材学术研讨，经验交流。本次会议将邀请中药学和生态学及相关领域的科技工作者
参加。
一、会议议题
１．中药道地药材的研究；２．中药资源生态学及其相关研究；３．中药资源生物多样性及保护利用，４中药资源可持续发展；
５．中药栽培中的环境问题及对策；６．濒危中药资源及保护现状；７．新技术在中药资源研究中的应用；８．当今世界生态学发展的
前沿及研究的热点问题及其对中药资源生态学研究的影响等。
二、征文要求
１．参会者与论文作者请填写报名回执，并于２００９年７月３０日前寄回大会秘书处；２．征文截止日期：２００９年７月３０日；３．
论文长度不超过８０００字，摘要３００字左右。文章题目请用四号黑体居中，题目下方的作者姓名用小四楷体居中，正文小五号
宋体。文章可分段落，但不设各级标题；４．作者简介限１００字，请用小五号宋体，（包括：姓名、性别、出生年月、工作单位、职务、
职称、专业领域、主要成就、联系地址、邮政编码、电话、传真与电子信箱）附于摘要下方；５．文稿请于２００９年８月２０日前，以
ｗｏｒｄ文档发送ｚｈｏｎｇｙａｏｓｈｅｎｇｔａｉ＠１２６．ｃｏｍ。
三、会议日期 会议报到日期：２００９年９月１８日。
会期：２００９年９月１９－２０日上午，２０日下午离会。
四、会议地点及住宿费用
山东翰林大酒店地址：济南市经十路１６７８７号（山东省千佛山医院对面）。
豪华标准间：会议价：３２０元／间／夜（含双早）。
标间：会议价：２９０元／间／夜（含双早）。
前台联系电话：０５３１８６１８１８８８。
乘车路线：①火车站乘Ｋ５１路到山东省千佛山医院站（山东师范大学南门）下车，打的士从火车站到翰林大酒店约１８元。
②汽车总站乘Ｋ６８路到山东省千佛山医院站（山东师范大学南门）下车，打的士从汽车总站到翰林大酒店约２０元左右。③飞
机场乘坐机场大巴到燕山立交桥下车，沿经十路西行８００米即到（山师东路口）。
四、会务费
人民币８００元（含会务费、资料费及２天餐费），报到时缴纳。差旅费、住宿费自理。
五、会议秘书处联系地址
地址：北京东直门内南小街 １６号 中国中医科学院中药研究所；邮编：１００７００；联系人：林淑芳、张霁、郭兰萍；电话：
６４０１４４１１２９５５或２９５６；传真：０１０８４０２７１７５８；Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｙａｏｓｈｅｎｇｔａｉ＠１２６．ｃｏｍ；济南联系人及联系电话：王岱杰 ０５３１
８２６０５３１９（Ｏ）；１５９６５３１７５８１；王晓０５３１８２６０５３１９（Ｏ）１３０３１７４８０１９。
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