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Content comparison of main constituents in Yinyanghuo Granules from different manufactories

不同厂家淫羊藿配方颗粒主成分含量对比研究



全 文 :(10):1339.
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StudiesonchemicalconstituentsoffruitsofBrideliatomentosa
DENGAnjun,QINHailin
(KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesofChineseHerbalMedicine,
MinistryofEducation,InstituteofMateriaMedica,Chinese
AcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege,Beijing100050,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsfromthefriutsofBrideliatomentosa.Method:Theconstituents
wereisolatedandpurifiedbysilicagel,theirstructureswereelucidatedbyphysicochemicalpropertiesandspectroscopicdata.Result:
TencompoundswereisolatedfromB.tomentosa.Theywereidentifiedastamarixetin(1),quercetin(2),ethylgalate(3),galic
acid(4),3,3′,4triOmethylelagicacid(5),ethylbrevifolincarboxylate(6),βamyrin(7),friedelin(8),βsitosterol(9),
stigmasterol(10).Conclusion:Compounds1and37wereisolatedfromthegenusBrideliaforthefirsttime,Compound2wasob
tainedfromthisplantforthefirsttime.
[Keywords] Euphorbiaceae;Brideliatomentosa;chemicalconstituents
[责任编辑 牛泽宇]
[收稿日期] 20070725
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30572372)
[通讯作者] 丁安伟,Tel:(025)85811523,Email:awding105@163.com
不同厂家淫羊藿配方颗粒主成分含量对比研究
陈 彦1,2,蔡 垠2,贾晓斌2,丁安伟1
(1.南京中医药大学,南京 210046;
2.江苏省中医药研究院 江苏省现代中药制剂工程技术研究中心,江苏 南京 210028)
[摘要] 目的:对2厂家生产的淫羊藿配方颗粒中的主要黄酮类成分进行比较。方法:建立反相高效液相色
谱法同时测定淫羊藿配方颗粒中5种主要黄酮类成分:淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ的含量。
结果:2厂家生产的淫羊藿配方颗粒中朝藿定A的含量较一致,生产厂家A产品中朝藿定B的含量较高;生产厂家
B产品中淫羊藿苷、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ的含量较高。但按药典规定的药材中淫羊藿苷含量折算,2厂家产品淫羊
藿苷的提取转移率均较低,只有25%~38%。结论:建议淫羊藿配方颗粒应进一步完善制备工艺,建立多种成分的
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含量测定方法,以全面控制淫羊藿配方颗粒的质量。
[关键词] 淫羊藿配方颗粒;黄酮成分;含量对比
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)02016004
  中药配方颗粒是利用现代生产技术,以中药饮
片为原料,按照一定的生产工艺制成的提取物,与适
宜的辅料或药材细粉,制成的仅供临床调剂用的颗
粒状制剂。由于其具有携带贮存方便、质量稳定等
优点,目前,国家食品药品监督管理局已批准了6家
企业试点生产中药配方颗粒。但由于各生产厂家受
所处地域不同、用药习惯不同等因素的影响,饮片品
种、原料来源及炮制方法均有一些差异,在制备工艺
上也受到各企业原有条件的限制,因而造成目前各
家企业的产品质量标准、工艺标准不一,质量参差不
齐。
淫羊藿配方颗粒(不同生产厂家名称不同,有
的叫仙灵脾配方颗粒)是中药淫羊藿经提取、浓缩、
干燥、制粒所得的颗粒饮片。淫羊藿含有多种黄酮
类成分[1],具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的作用,临
床上用于治疗阳痿、腰膝酸软、风湿痹痛等症具有较
好的疗效。淫羊藿的品种来源繁多,中国药典就收
载了 5个品种,即小檗科植物淫羊藿 Epimedium
brevicornum Maxim.,箭 叶 淫 羊 霍 E.sagitatum
(Sieb.etZuc.c)、柔毛淫羊藿 E.pubescensMaxim,
巫山淫羊藿 E.wushanenseT.S.Ying和朝鲜淫羊藿
E.koreanumNakai的干燥地上部分[2]。文献报
道[2],不同产地不同品种的淫羊藿所含的黄酮类成
分的含量差异较大。目前,测定淫羊藿黄酮类成分
的主要方法有高效液相色谱法[3]、紫外分光光度
法[4]等,这些测定方法大多局限于测定主要成分淫
羊藿苷或总黄酮的含量,也有学者报道了同时测定
淫羊藿药材中4种黄酮成分的方法[5],但同时测定
淫羊藿配方颗粒中5种主要黄酮类成分淫羊藿苷、
朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定 C和宝藿苷Ⅰ的含量,
未见报道。本研究建立反相高效液相色谱法,同时
测定淫羊藿配方颗粒中5种主要黄酮类成分淫羊藿
苷、朝藿定 A、朝藿定 B、朝藿定 C、宝藿苷Ⅰ的含
量,并对药房出售的2个厂家生产的配方颗粒进行
比较和分析,为进一步完善配方颗粒的制备工艺,制
订统一科学的质量控制方法提供理论依据。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(四元泵,DAD检
测器,美国Agilent公司)。
淫羊 藿 配 方 颗 粒 批 号 0609215,0611096,
0701098,0704036由 生 产 厂 家 A 生 产;批 号
0504072,0606041,0611008由生产厂家 B生产。淫
羊藿苷(批号110737200312,供含量测定用)购自
中国药品生物制品检定所,朝藿定 A、朝藿定 B、朝
藿定C、宝藿苷Ⅰ由江苏省中医药研究院中药制剂
研究室提供,纯度经归一化法测定均大于98%。乙
腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 ZORBAXSBC18色谱柱(4.6mm
×250mm,5μm);流动相为乙腈水,梯度洗脱程序
为0~15min乙腈 10% ~25%,15~38min乙腈
25%,38~61min乙腈 25% ~71%;流速 1mL·
min-1;检测波长270nm;柱温30℃。在此条件下,
淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定 C、宝藿苷Ⅰ
能达到基线分离。HPLC谱图见图1。
图1 2生产厂家淫羊藿配方颗粒HPLC图
AA样品;BB样品;1.朝藿定A;2.朝藿定B;3.朝藿定C;4.淫
羊藿苷;5.宝藿苷Ⅰ
2.2 对照品和供试品溶液的配制 对照品溶液的
制备:精密称取淫羊藿苷5.330mg,朝藿定A8.260
mg,朝藿定 B8.280mg,朝藿定 C8.020mg,
宝藿苷Ⅰ5.686mg,分别加甲醇稀释至10mL,作为
储备液,取各储备液适量置同一量瓶中加甲醇稀释、
摇匀配制成系列不同质量浓度的对照品混合溶液。
对照品混合溶液所含淫羊藿苷依次为5.33,10.66,
26.65,53.30,106.60,213.20μg·mL-1;所含朝藿
定A的质量浓度依次为0.83,1.65,4.13,8.26,16.
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52,33.04μg·mL-1;所含朝藿定 B的质量浓度依
次为4.41,8.82,22.05,44.10,88.20,176.40μg·
mL-1;所含朝藿定C的质量浓度依次为1.60,3.20,
8.02,16.04,32.08,64.16μg·mL-1;所含宝藿苷Ⅰ
的质量浓度依次为 0.284,0.567,1.422,2.843,
5686,11.372μg·mL-1。
供试品溶液的制备:取不同厂家不同批号的淫
羊藿配方颗粒各约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶
中,精密加入稀乙醇25mL,称定质量,超声处理30
min,再称定质量,用稀乙醇补足减失的质量,摇匀,
滤过,取续滤液,即得。
2.3 线性试验 精密吸取各对照品混合溶液 10
μL,按上述色谱条件测定,以质量浓度(μg·mL-1)
为横坐标,以峰面积为纵坐标进行线性回归,得5种
成分的回归方程、相关系数及线性范围,见表1。
表1 5种成分的回归方程、相关系数及线性范围
成分 线性方程 r 线性范围/ng
淫羊藿苷 Y=21.11X-4.32 0.9999 53.3~2132
朝藿定A Y=27.70X+3.82 0.9998 8.26~330.4
朝藿定B Y=17.40X+8.97 0.9998 44.1~1764
朝藿定C Y=15.89X+1.02 0.9998 16.0~641.6
宝藿苷Ⅰ Y=23.38X-1.55 0.9997 2.84~113.7
2.4 精密度试验 精密吸取上述对照品混合溶液,
进样10μL,重复6次,计算峰面积的 RSD值,结果
淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定 C、宝藿苷Ⅰ
的日内精密度分别为 0.41%,0.25%,0.25%,
086%,1.1%;日间精密度分别为0.67%,0.74%,
089%,1.0%,1.9%。
2.5 重复性试验 精密称定同一批样品,按供试品
溶液制备方法分别制备5份供试品溶液,进行重复
性试验,测定5种成分的含量,计算各成分含量的
RSD值,结果淫羊藿苷为0.5%、朝藿定 A0.82%、
朝藿定B为2.5%、朝藿定C为 2.3%、宝藿苷Ⅰ为
2.7%。
2.6 稳定性试验 取上述供试品溶液,分别于0,
1,2,4,8,12,24h进样测定,每次10μL,计算峰面
积的RSD值,结果淫羊藿苷为0.60%、朝藿定 A为
2.0%、朝藿定B为2.2%,朝藿定 C为2.1%、宝藿
苷Ⅰ为2.0%,表明样品溶液在24h内稳定。
2.7 回收率试验 精密称取 A厂家配方颗粒(批
号 0611096)6份,每份0.05g,加入一定量的对照
品混合溶液,按供试品溶液制备方法制备,进样10
μL,计算各对照品的平均加样回收率,结果见表2。
表2 5种成分加样回收率(n=6)
成分
已知量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
平均回收率
/%
淫羊藿苷 1.2516 1.3090 2.5111 96.22
朝藿定A 0.3649 0.3612 0.7382 103.40
朝藿定B 0.9067 0.9492 1.8169 95.89
朝藿定C 0.3849 0.3898 0.7753 100.20
宝藿苷Ⅰ 0.0860 0.0892 0.1708 95.07
2.8 样品测定 按供试品溶液的制备方法,对生产
厂家A的4批淫羊藿配方颗粒(0.5g,相当于饮片
10g)和生产厂家B的3批淫羊藿配方颗粒(0.5g,
相当于饮片10g)中5种有效成分进行测定,结果见
表3。
表3 2生产厂家样品中5种成分含量(n=3) mg·g-1
来源 批号 淫羊藿苷 朝藿定A 朝藿定B 朝藿定C 宝藿苷Ⅰ
生产厂家A 0609215 2544 704 1808 772 188
  0611096 2504 730 1814 770 192
  0701098 2520 698 1818 772 206
  0704036 3216 694 680 1268 236
生产厂家B 0504072 3578 674 1298 1626 526
  0606041 3006 674 582 1536 566
  0611008 3854 682 656 1924 468
3 讨论
中药配方颗粒改变了传统中药饮片体积大,不
宜贮存的缺点,是中药饮片的一种现代应用形式,具
有携带保存方便、质量稳定等优点。但中药配方颗
粒由于对原药材进行了提取、浓缩、干燥等加工处
理,因此对其质量控制的要求应比普通饮片要高。
淫羊藿含有多种黄酮类成分,且多品种入药,而中国
药典只规定了淫羊藿中主要成分淫羊藿苷的含量,
因此有必要建立多种成分的含量测定方法,以全面
控制淫羊藿配方颗粒的质量。在对国家食品药品监
督管理局批准的2家企业生产的淫羊藿配方颗粒的
含量进行测定后,结果表明,生产厂家A4批样品中
淫羊藿苷(25.04~32.16mg·g-1)、朝藿定 A
(6.94~7.30mg·g-1)、宝藿苷Ⅰ(1.86~2.36mg
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·g-1)的含量较一致,其中有1批样品(0704036)
的朝藿定B含量为6.80mg·g-1,比其他3批含量
低约2倍,而朝藿定 C的质量浓度为12.68mg·
g-1,比其他3批含量高近1倍。生产厂家B3批样
品淫羊藿苷(30.06~38.54mg·g-1)、朝藿定
A(6.74~6.82mg·g-1)、朝藿定 C(15.36~19.24
mg·g-1)、宝藿苷Ⅰ(4.68~5.66mg·g-1)的含量
较一致,其中1批样品(0504072)朝藿定 B的质量
浓度为12.98mg·g-1,比另2批含量高约1倍。2
厂家产品相比,朝藿定 A的含量较一致,厂家 A产
品中朝藿定 B的含量较高;厂家 B产品中淫羊藿
苷、朝藿定C、宝藿苷的含量较高。比较2厂家产品
的高效液相图谱,发现图谱不尽相同,成分峰之间的
比例也有较大的差别。《中国药典》一部2005年版
“淫羊藿”项下只规定了淫羊藿药材中淫羊藿苷质
量分数,其质量分数不得低于0.5%,但即使按含量
0.5%计算,2厂家生产的配方颗粒淫羊藿苷的转移
率也只有25% ~38%。因此建议进一步完善制备
工艺,建立多成分质量控制的标准,全面控制淫羊藿
配方颗粒的质量,以确保其临床疗效的可靠性与一
致性。
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ContentcomparisonofmainconstituentsinYinyanghuoGranules
fromdiferentmanufactories
CHENYan1,2,CAIYin2,JIAXiaobin2,DINGAnwei1
(1.NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210046,China;
2.JiangsuProvincialAcademyofChineseMedicine,JiangsuEngineering
andTechnologyResearchCenterforModernChinesePharmaceuticalPreparation,Nanjing210028,China)
[Abstract] Objective:TocomparethecontentofthemainflavonoidsinYinyanghuogranulesfromtwodiferentmanufactories.
Method:AnHPLCmethodwasdevelopedtodeterminethecontentoficarin,epimedinA,epimedinB,epimedinC,andbaohuoside
Ⅰ.Result:ThecontentofepimedinAwasalmostthesameinbothproductsfromdiferentmanufactories.ThecontentofepimedinB
inthegranulesfrommanufactoryAwashigherthanthatoftheproductfrommanufactoryB,whereasthecontentoficarin,epimedin
C,baohuosideⅠ waslower.Theextractrateoficarininbothtwoproductswasverylow,only25%38%.Conclusion:Theprepara
tionoftheYinyanghuogranulesshouldbefurtherimproved,andthedeterminationmethodofmultipleconstituentsshouldbedevelopto
controltheoveralqualityoftheYinyanghuogranules.
[Keywords] Yinyanghuogranules;flavonoids;contentcomparison
[责任编辑 王亚君
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