全 文 ：!资源与鉴定!
EFG<测定不同生长年限及采收期何首乌中
二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量
蔡丽芬!)! 钟国跃!+!! 张倩!)! 瞿显友!+
-重庆市中药研究院 濒危药材繁育国家工程实验室! 重庆 &$$$#%
+-重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心! 重庆 &$$$#
)-北京中医药大学 中药学院! 北京 $$$+#
摘要#!目的$建立EFG<同时测定何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的方法$比较不同生长年限及采收期何首乌
的成分动态变化) 方法$采用EFG<同时测定一至四年生及 %&+ 月采收的何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量) 色谱
柱为<
(
$流动相为甲醇5$de磷酸水梯度洗脱$检测波长 )+$$+& 20$流速 d$ 0G*0N2f) 结果$在一定范围内二苯乙烯
苷%大黄素%大黄素甲醚进样量与峰面积积分值线性关系良好$具有良好的精密度%重复性%稳定性和良好的加样回收率) 结
论$样品测定结果表明该方法灵敏$准确$重复性好) 何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分在一至二年生长期间迅速积累$至
三年生时达到峰值+同年生何首乌中成分含量在 月时相对高于其他月份)
关键词#!何首乌+成分动态+EFG<+二苯乙烯苷+蒽醌+含量测定
稿件编号#!+$$*$&$$*
基金项目 # !国家 ,重大新药创制 - 科技重大专项 !<8P<$
+$$(
准及民族药$PMS#!$+)(*$+*$$$I50BNS#YD6$$36B?//d.2
!!何首乌为常用中药$来源于蓼科植物何首乌
$%&(%)*++*&,-.&%/*+P?L2\d的干燥块根./ ) 何首
乌在全国各地分布广泛$药材主产于河南%湖北%广
西%广东%贵州%四川等地.+5)/ ) 何首乌在临床应用上
有,生首乌-和,制首乌-之别$前者功能解毒%消痈%
润肠通便$后者补肝肾%益精血%乌须发%强筋骨./ $
两者的功效有着明显的不同)
何首乌主要含有二苯乙烯苷类%蒽醌类及卵
磷脂三大类成分 .)/ ) 但关于何首乌的质量控制$
+$$ 年版中国药典(对,何首乌- %,制何首乌-
仅规定了 +$)$$&a5四羟基二苯乙烯5+5!
#
!0葡
萄糖苷的含量!何首乌不得少于 d$e$制何首
乌不得少于 $d%$e $但由于该成分并非何首乌
所特有!虎杖等中也含有 $同时何首乌所含有的
三大类成分均具有生理活性$而,生首乌-与,制
首乌-在临床疗效上也有明显的差异$显然$仅以
该成分控制何首乌的质量其客观性和专属性尚
不足) 另一方面$目前何首乌商品药材主要来自
野生采集$在广西%广东%贵州%重庆等地有部分
栽培生产) 据调查$不同产区何首乌的采收期略
有不同$文献报道 .)/不同采收期何首乌!野生品$
#&$ 月采收中二苯乙烯苷%总蒽醌及磷脂的
含量存在一定差异$且变化趋势不尽一致+而关
于不同生长年限何首乌中上述成分的动态积累
尚未见有关报道) 为探讨建立何首乌更为客观
合理的质量标准$并为栽培生产中何首乌的合理
采收提供依据$本文在参考文献 .&5(/的二苯乙烯
苷%蒽醌类成分测定方法的基础上$建立了 EFG<
同一色谱条件下同时测定二苯乙烯苷和大黄素%
大黄素甲醚含量的方法$并对一至四年生及相同
生长年限何首乌的 #&+ 月采收样品进行了含
量测定)
!材料
_!仪器
安捷伦 +$$ 高效液相色谱仪$RP++&8 电子天
平!8BC@/CNLU$c^ 5+$R超声波清洗机!昆山超声仪
器厂$超纯水机!美国9NSNA/CM公司)
_(!试药
二苯乙烯苷!批号 $(&&5+$$##%大黄素!批号
$%#5+$$$ % 大 黄 素 甲 醚 ! 批 号 $%(5
*++*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$ :UULM!$
9B6$ +$$
+$$#$%大黄酚!批号 $%*#5+$$#%大黄酸!批
号 $%%5+$$+$#对照品均购于中国药品生物制品
检定所$甲醇为色谱纯$水为去离子水$其余试剂为
分析纯)
_&!药材
何首乌药材样品均采自重庆市石柱县悦崃镇何
首乌生产基地!海拔 *($ 0$沙壤土$同一块地$块
根大小相近$采挖后洗净$除去根茎%须根$横切成
+ g) 00厚的薄片$置烘箱中 #$ h烘干) 一至四年
生样品为 +$$&+$$( 年 & 月种植!扦插苗%+$$(
年 月采挖+不同采收期样品为 +$$% 年 & 月种植
的二年生植株$从 +$$( 年 % 月 号到 + 月 号$
每间隔 个月采收 次$共计 # 批样品) 样品经重
庆市中药研究院生药室秦松云副研究员鉴定为蓼科
植物何首乌$d+*&,-.&%/*+)
(!方法与结果
(_!色谱条件
色谱柱为F?M2/0M2M7862MCDN<
(
!&d# 00i+$
00$&
0$柱温 )$ h$进样量 $
G$流速 0G*
0N2
f
$检测波长 $ g+$ 0N2为 )+$ 20!检测二苯乙烯
苷的波长$+$ g& 0N2 为 +& 20!检测蒽醌类成分
的波长) 流动相4为甲醇$R为 $de磷酸水$梯度
洗脱$ $ g+$ 0N2$4)$e g$e+ +$ g+ 0N2$4
$eg($e++ g) 0N2$4($eg$$e+) g& 0N2$
4$$e) 对照品及供试品色谱图见图 $+)
-二苯乙烯苷++d大黄酸+)d大黄素+&d大黄酚+
d大黄素甲醚!图 + 同)
图 !二苯乙烯苷和蒽醌类成分对照品EFG<图
(_(!对照品溶液的制备
精密称取二苯乙烯苷%大黄素%大黄素甲醚对照
品适量$分别加 %$e甲醇溶解并稀释制成每 0G
含二苯乙烯苷 $d&+ 0D%大黄素 $d+* 0D%大黄素甲
醚 $d+$ 0D的溶液$超声溶解$即得)
图 +!供试品二苯乙烯苷和蒽醌类成分的EFG<图
(_&!供试品溶液的制备
(_&_!二苯乙烯苷和游离蒽醌供试品溶液的制备
!取样品粉末!过 & 号筛约 $d D$精密称取$置
+$ 0G具塞锥形瓶中$精密加入 %$e甲醇 $ 0G$
密塞$称定质量$水浴回流提取 #$ 0N2$放冷$再称
重$用 %$e甲醇补重$摇匀$滤过$滤液过 $d&
0
微孔滤膜$即得供试品溶液)
(_&_(!总蒽醌供试品溶液的制备!吸取 (_&_ 项
下的滤液 $ 0G于 +$ 0G具塞锥形瓶中$加入 d
0G盐酸$用 %$e甲醇定容在 + 0G量瓶中$摇匀$
水浴回流 #$ 0N2$滤过$滤液过 $d&
0微孔滤膜$
即得供试品溶液) 结合蒽醌j总蒽醌的含量f游离
蒽醌的含量)
(_Q!线性关系考察
(_Q_!二苯乙烯苷线性关系考察!精密吸取 (_(
项下的过 $d&
D微孔滤膜的二苯乙烯苷对照品溶
液 $)$#$$$+$$+$
G$注入色谱仪$按上述色
谱条件测定峰面积$以二苯乙烯苷进样量!1为横
坐标$二苯乙烯苷峰面积!2积分值为纵坐标$绘制
标 准 曲 线$ 计 算 回 归 方 程$ 回 归 方 程 为
3j) &d)4k()d#*!5
+
j$d*** *$结果表明二苯
乙烯苷进样量在 $d&+ g(d&$
D线性关系良好)
(_Q_(!蒽醌类线性关系考察!精密吸取 (_( 项下
的大黄素$大黄素甲醚对照品溶液各 0G$用 %$e
的甲醇定容在 $ 0G量瓶中$过 $d&
D的微孔滤
膜$精密吸取精密吸取 $)$$%$+$$+$
G注入
色谱仪$按测定结合蒽醌的色谱条件测定其峰面积$
以进样量!1为横坐标$峰面积!2积分值为纵坐
标$绘制标准曲线$计算回归方程$大黄素#3j
) &(d4f%d))%!5
+
j$d*** *$大黄素甲醚#3j
*)d4f+d$(!5
+
j$d*** *)结果表明$大黄
素在 $d$+* g$d(
D$大黄素甲醚在 $d$+$ g$d&$
*+++*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$ :UULM!$
9B6$ +$$
D线性关系良好)
(_$!精密度试验
分别精密吸取二苯乙烯苷$大黄素$大黄素甲醚
对照品溶液 $
G$各重复进样 # 次$测定峰面积$
计算峰面积$>8X分别为 $de$$d%e$$d)#e$
表明仪器精密度良好)
(_Y!重复性试验
取同一批样品粉末!过 & 号筛约 $d D$精密
称取$重复 份$按上述 (_&_ 项下制备二苯乙烯苷
和游离蒽醌的供试品制备方法制备$按上述色谱条
件测定峰面积$计算二苯乙烯苷和游离蒽醌的质量
分数$计算相对标准偏差$二苯乙烯苷 >8X$d+%e$
游离大黄素 >8X$d++e$游离大黄素甲醚 >8X
$d%(e)
按上述 (_&_( 项下制备总蒽醌供试品溶液$按
上述色谱条件测定峰面积$计算结合大黄素和结合
大黄素甲醚的质量分数!结合蒽醌 j总蒽醌 f游离
蒽醌$计算相对标准偏差$结合大黄素>8Xd+e$
结合大黄素甲醚>8Xd)e$表明试验重复性良好)
(_%!稳定性试验
取同一何首乌供试品溶液$分别于 $$+$&$#$+&
?每次进样 $
G测定其峰面积$计算质量分数和
相对标准偏差$结果二苯乙烯苷 >8X$d&(e$游离
大黄素 >8X$d%e$游离大黄素甲醚 >8Xd#e$
结合大黄素 >8X d&e$结合大黄素甲醚 >8X
d+e$+& ?内各成分峰面积的 >8X均小于 +e$表
明供试品提取液在室温下放置 +& ? 基本稳定$不影
响含量测定结果)
(_`!回收率试验
(_`_!二苯乙烯苷的加样回收实验!取已知含量
的何首乌粉末约 $d$ D$平行 份$精密称定+另精
密称定二苯乙烯苷对照品 $d 0D置 + 0G量瓶
中$用 %$e甲醇定容$加入此对照品溶液 ) 0G!相当
于二苯乙烯苷 d+# 0D$混匀$按制备二苯乙烯苷
供试品溶液的方法制备$测定二苯乙烯苷的供试品
溶液方法进行测定$计算回收率$ 个样品的加样回
收 率 分 别 为 $d$e$ **d&(e$ $)d&)e$
$+d*+e$$$d($e$平均回收率为 $d#+#e$>8X
d#e!)j)
(_`_(!蒽醌的加样回收实验!取已知含量的何
首乌粉末约 $d D$平行 份$精密称定$加入质
量浓度为 +d* D*Gf的大黄素对照品溶液 0G
!相当于大黄素 $d+* 0D $质量浓度为 $d% D*
G
f的大黄素甲醚对照品溶液 0G!相当于大黄
素甲醚 $d% 0D混匀$计算回收率) 个样品大
黄素的加样回收率分别为 $$d+e$$d+e$
$$d$e$$d(#e$ *(d)e$平均回收率为
$$d&#e$>8Xd&e! ) j + 个样品大黄素甲
醚的加样回收率分别为 $$d)e$ $d&$e$
$$d+e$$d%*e$$d%e$平均回收率为
$d$&e$>8X$d#e! ) j )
(_#!样品测定
取 _& 项下的药材样品$照 (_& 项下方法制备
供试液$每个样平行 ) 次$进样测定$以均值作为结
果$计算样品中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量)
结果见表 $+)
表 !不同生长年限何首乌含量测定 e
样品 二苯乙烯苷 大黄素 大黄素葡萄糖苷 大黄素甲醚 大黄素甲醚葡萄糖苷
四年生 d(+ * $d$(% # $d( & $d$*& ) $d+
三年生 d+)& # $d$* ( $d+$) # $d$*( & $d+) &
二年生 &d&)% & $d$*( * $d)( * $d$(* $d$(& $
一年生 +d*($ * $d$+* ) $d$+ + $d$% $d$%
表 +!不同采收期样品含量测定 e
采收时间 二苯乙烯苷 大黄素 大黄素葡萄糖苷 大黄素甲醚 大黄素甲醚葡萄糖苷
+$$(5$%5 )d#( * $d$) $d#)) + $d$&# $ $d$## %
+$$(5$(5 )d*$ + $d$&# $d$ $ $d$% $ $d$)& #
+$$(5$*5 &d++& $ $d$&( ) $d$*# + $d$&) $d$*
+$$(5$5 &d)%$ $ $d$) $d$* $d$& & $d$&% &
+$$(55 &d&)% & $d$*( * $d)( * $d$(* $d$(& $
+$$(5+5 &d) $d$% % $d# * $d$# & $d$)# (
*)++*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
&!讨论
在流动相的选择中$考察了不同比例的甲醇5
水%乙腈5水%甲醇5乙腈5水$结果峰不对称或者成分
达不到基线分离) 又以甲醇5e醋酸%甲醇5$d$e
磷酸水%甲醇5$de磷酸水梯度洗脱$结果表明以甲
醇5$de磷酸水梯度洗脱分离完全$峰形对称%尖
锐$故选用甲醇5$de磷酸水为流动相梯度洗脱)
在优选二苯乙烯苷和游离蒽醌的提取方法时$考察
了甲醇%)$e甲醇%%$e甲醇%乙醇%$e乙醇 $
0G$超声提取 )$$#$$*$$+$ 0N2 和回流提取 )$$
#$$*$$+$ 0N2$结果表明用 %$e的甲醇回流提取
#$ 0N2时$各成分提取率达到最高$故选择 %$e甲
醇回流提取 #$ 0N2 的提取方法) 对于水解后总蒽
醌的供试液制备方法$比较了盐酸水解法和硫酸水
解氯仿萃取方法$结果表明前者水解较完全$重复性
较好$且操作简单) 考察了 $ 0G(_&_ 项下的滤
液分别加 d$$d$+d$$+d 0G盐酸$分别水浴回流
)$$#$$*$$+$ 0N2$结果表明在加 d 0G盐酸水浴
回流 #$ 0N2时$可将待测成分提取完全)
部分文献.*5$/记载何首乌含有大黄素%大黄素
甲醚%大黄酸和大黄酚等成分$但有研究表明表明何
首乌中的游离蒽醌类成分主要为大黄素和大黄素甲
醚.&$5+/ ) 本研究中也同时测定了大黄酸和大黄
酚$但仅少数样品中检出痕量大黄酸$而大黄酚未检
出$与文献报道一致) 相应地结合蒽醌类成分主要
为大黄素葡萄糖苷和大黄素甲醚葡萄糖苷$且大黄
素葡萄糖苷的含量明显高于大黄素甲醚葡萄糖苷)
对一至四年生何首乌含量测定结果表明$所测
定成分的含量随生长年限而增加$在第 年到第 +
年间积累最快$+ 年以后则增长缓慢$三年生何首乌
中所测各成分含量均达到最高值$且高于四年生$分
析其原因可能是随着生长年限的增加$何首乌块茎
中木质部所占比例增大$而木质部中成分含量较低
所致) 但一年生何首乌中二苯乙烯苷含量即已达到
+$$ 年版中国药典(规定!d$e以上) 对二年
生不同采收期何首乌中二苯乙烯苷及蒽醌类成分的
含量测定结果表明$何首乌中二苯乙烯苷含量在 #
月后随着植株的生长发育呈上升趋势$ 月时达到
最高$+ 月后略有下降$该结果与文献.)/报道!# f%
月和 $ 月质量分数高$分别为 d&%e$+d#*e不
一致$推测与样品的产地和植株生长年限有关+蒽醌
类成分的含量随采收期的不同有所波动$分别在
%&( 月和 &+ 月出现 + 个峰值$总体以 月最
高$该结果与文献.)/报道较为一致) 以上结果表
明$何首乌生产中一般采挖三年生块根$传统在秋季
采挖以及 +$$ 年版中国药典(规定,秋%冬二季叶
枯萎时采挖-是合理的) 由于本研究的材料仅取自
于重庆石柱$其结论是否适合于其他产地$还有待进
一步研究)
参考文献#
. /!中国药典d一部.8/d+$$#++d
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#
d高效液相
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$
-何首乌二
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./!大岛俊幸$平山总良$齐藤文孝$等d高效液相色谱法测定何
首乌和夜交藤中蒽醌类成分的含量 .W/-药物分析杂志$
**#$#!&#+*-
.+/!傅军$严寒静$梁从庆$等-不同采集地何首乌的质量评价
.W/-广东药学院学报$+$$#$++!)#%(-
*&++*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
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@?CBbLN2/2+ ./2@M2@JM@MC0N2B@N/2
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责任编辑!吕冬梅#
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