全 文 ：淫羊藿质量控制的取样数量研究
王川易１，曹金一２，梁　云３，黄文华１，郭宝林１
（１．中国医学科学院 中国协和医学院 药用植物研究所，北京 １００１９３；
２．北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２；
３．大连市药品检验所，辽宁 大连 １１６０２１）
［摘要］　目的：探讨取样数量对药材含量检测结果的影响。方法：以柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿为样本，确定单株，以及５，
１０，２０，３０，５０株个体混合６个取样数量级别，采用ＨＰＬＣ的方法，测定朝藿定Ｃ和淫羊藿苷的含量以及朝藿定Ａ、朝藿定Ｂ、鼠
李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ等４个成分的峰面积。结果：同一取样数量级别各成分的３个重复测定值的 ＲＳＤ值以及其
中一次的测量值偏离假定真实值（５０株个体混合的平均值）的最大偏差（最大变异率）随着取样个体数的增加而呈现出下降
的趋势，但是不同药材、不同成分因取样数量不同产生的变化是有差异的。结论：进行淫羊藿药材含量测定时，研究样本的取
样个体数不应少于１０株，而取样个体数在５０株以上时则更能代表研究样本的真实含量。
［关键词］　取样数量；质量控制；药材；淫羊藿
［收稿日期］　２００８１１１３
［通信作者］　郭宝林，研究员，主要从事药用植物资源的分类、鉴
定和药材质量控制研究。Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０１０）６２８９５０４９，Ｅｍａｉｌ：ｇｕｏｂａ
ｏｌｉｎ０１０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　药材的质量成为中药研究和生产日益关注的问
题。对于药材的目标成分含量，如何实现正确的测
定，使得测定结果具有代表性和重要参考价值，不同
的测定值之间具有可比性，以往更注重于测定方法
的科学性，然而由于取样因素带来的差异甚至可能
大于方法学因素，但这一问题常被忽视。产地、环境
不同将带来含量的差异，而生态地理环境大体一致
的样本，样本间含量差异主要来自于居群内的个体
间差异，表现为个体间遗传的差别以及个体在生长
发育过程中对于外界因素影响反映的差别。本研究
组对淫羊藿药材含量进行了较多的研究，发现取样
策略带来较大的含量测定结果偏差，因此设计了本
实验，选择了柔毛淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍｐｕｂｅｓｃｅｎｓ和（心
叶）淫羊藿Ｅ．ｂｒｅｖｉｃｏｒｎｕ２个药典收载物种，测定了
淫羊藿苷（ｉｃａｒｉｎ）和朝藿定Ｃ（ｅｐｉｍｅｄｉｎＣ）２个主要
成分的含量，同时检测了朝藿定 Ａ（ｅｐｉｍｅｄｉｎＡ）、朝
藿定Ｂ（ｅｐｉｍｅｄｉｎＢ）、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ（ｒｈａｍ
ｎｏｓｙｌｉｃａｒｉｓｉｄⅡ）和宝藿苷Ⅰ（ｂａｏｈｕｏｓｉｄｅⅠ，ｉｃａｒｉｓｉｄ
Ⅱ）等４个成分的峰面积，以反映不同的取样个体
数量对于测定结果的影响，考察不同的药材和不同
的成分，其含量随取样数量不同的变异情况，并提出
淫羊藿成分含量测定研究中适合的取样量，本研究
对于其他中药材的质量控制研究可以提供有意义的
提示。
１　仪器、试剂与药材
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（２６９５型泵，９９６紫外检
测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站）；ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ－
ＸＳ１０５型电子分析天平。乙腈为色谱纯（美国
Ｂｕｒｄｉｃｋ＆Ｊａｃｋｓｏｎ公司），水为娃哈哈纯净水。乙醇
等其他试剂为分析纯（北京化工厂）。对照品淫羊
藿苷、朝藿定 Ｃ，均为本研究组分离得到并鉴定，
ＨＰＬＣ检测纯度大于９８％。
柔毛淫羊藿为２００７年７月采集于四川省巴中
县一面山坡，心叶淫羊藿为２００７年６月采集于甘肃
省西和县洛峪镇，经中国医学科学院药用植物研究
所郭宝林研究员鉴定为柔毛淫羊藿 Ｅ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ和
心叶淫羊藿 Ｅ．ｂｒｅｖｉｃｏｒｎｕ药材。取样方法为单株，
以及每５，１０，２０，３０，５０株混合６个取样数量级别，
除了单株为５个重复外，其他均为３个重复，共４０
个研究样品。
２　试验方法
２．１　色谱条件　ＶｅｎｕｓｉｌＡＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱，ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ保护柱（美国
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ公司）；流动相 乙腈水溶剂系统梯度洗
脱［１］；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温 ２０℃，进样量 １０
μＬ，检测波长为２７２ｎｍ。
２．２　对照品溶液的制备　分别精密称取淫羊藿苷
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对照品１０３ｍｇ，朝藿定Ｃ１０５ｍｇ。置于１０ｍＬ量
瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。其质量浓度分
别为０１０３，０１０５ｇ·Ｌ－１。
２．３　供试品溶液的制备　每个样品取干燥叶片，粉
碎，过４０目筛，取约０２ｇ，精密称定，置于５０ｍＬ圆
底烧瓶中，精密加入５０％乙醇２０ｍＬ，称重，水浴回
流提取２ｈ，放至室温，用５０％乙醇补足失重，摇匀，
用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取续滤液作为供试品
溶液。
２．４　线性关系考察　朝藿定 Ｃ回归方程为 Ｙ＝
５５２×１０６Ｘ－３７６×１０４，ｒ＝０９９９９，线性范围０３０９～
３０９μｇ。淫羊藿苷回归方程为 Ｙ＝６９８×１０６Ｘ＋
２８４×１０３，ｒ＝０９９９５，线性范围０２１１～２１１μｇ。
２．５　精密度试验　取同一对照品溶液，重复进行５
次，测定朝藿定 Ｃ和淫羊藿苷的峰面积，ＲＳＤ分别
为０８５％，０３０％。
２．６　稳定性试验　取同一供试品溶液，在２，３５，
６，１１，２０ｈ分别测定朝藿定 Ｃ和淫羊藿苷的含量，
ＲＳＤ分别为１１％，０９３％。
２．７　加样回收率实验　精密称取已知含量的同一
批次样品５份，分别精密加入淫羊藿苷和朝藿定 Ｃ
对照品适量。按 ２．３项下方法制备供试品溶液 ５
份，按上述方法测定，回收率分别为 １０４７％和
９８５％，其ＲＳＤ值分别为１５％，１８％。
２．８　重复性试验　精密称取同一份样品０２ｇ共５
份，按２．３项下方法制备供试品溶液５份，测定并计
算淫羊藿苷和朝藿定Ｃ的含量，ＲＳＤ＜２０％。
３　结果
心叶淫羊藿和柔毛淫羊藿的ＨＰＬＣ色谱图见图
１。测定了各样品中淫羊藿苷和朝藿定 Ｃ的含量以
及朝藿定Ａ、朝藿定Ｂ、鼠李糖基淫羊藿次苷Ｉ和宝
藿苷Ⅰ ４个色谱峰的峰面积，含量值以及色谱峰值
范围见表１。计算每种取样方法的３个重复（单株
取样为５个重复）的 ＲＳＤ值。将取样个体数为５０
株混合的３个样本求平均值（珋ｘ），用来代表淫羊藿
群体含量接近真实的含量数值，按以下公式计算各
样品含量（Ｘ）偏离群体含量（珋ｘ）的变异率：
　　变异率＝｜Ｘ－珋ｘ｜
珋ｘ
×１００％
　　朝藿定Ａ、朝藿定Ｂ、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和
宝藿苷Ⅰ等４个成分用峰面积值计算，计算方法类
似。所有计算值见表２。
Ａ．柔毛淫羊藿；Ｂ．心叶淫羊藿；１．朝藿定Ａ；２．朝藿定Ｂ；
３．朝藿定Ｃ；４．淫羊藿苷；５．鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ；６．宝藿苷Ⅰ。
图１　柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿ＨＰＬＣ图
４　讨论和结论
随着采样个体数量的增加，同一取样个体数量
级别的３（５）个重复之间的ＲＳＤ值和这一取样方式
随机一次检测获得的结果和假定真实值（５０株取样
３个重复的平均值）之间的最大偏差（即本研究给出
的最大变异率）都呈现下降的趋势，也就是说，取样
量越大越能获得代表测定对象含量的整体真实数
值。当然例外的情况也有，如柔毛淫羊藿２０株混合
样品中鼠李糖基淫羊藿次苷Ｉ和宝藿苷Ｉ的变异反
而远远大于１０株混合的情况。
不同药材、不同成分的变异程度是不同的。心
叶淫羊藿的变异比较平稳和规律，而柔毛淫羊藿的
变异规律性稍差，说明心叶淫羊藿的质量较柔毛淫
羊藿更容易控制一些。两种药材的淫羊藿苷和朝藿
定Ｃ的成分变异比较规律，和其他成分相比，变异
率也比较低，朝藿定 Ｃ又略好于淫羊藿苷。而鼠李
糖基淫羊藿次苷Ｉ和宝藿苷Ｉ是两种淫羊藿中变异
比较大的成分，是不容易控制的含量的成分。因此
对于淫羊藿质量的控制，控制淫羊藿苷和朝藿定 Ｃ
含量较好，如果某些淫羊藿的品种中朝藿定 Ａ或者
朝藿定Ｂ含量比较高，也可以同时控制。本研究结
果和前期的指纹图谱特征研究结果一致［２］。
从最大变异率曲线图看出，取样１０株是变异的
一个拐点，明显好于５株取样，取样２０株却不好于
１０株，３０株略好于１０株，５０株最好，５０株取样时的
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　　 表１　柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿中朝藿定Ｃ等６个化学成分的含量或峰面积
化学成分 药材品种 单位
１株～３０株个体混合含量
或峰面积范围
５０株个体混合样品的含量
或峰面积平均值
ｅｐｉｍｅｄｉｎＣ 柔毛 ％ 　０９００～２０６０ １７９７
　 心叶 ％ 　１３１２～２５０５ １７６１
ｉｃａｒｉｎ 柔毛 ％ 　０２９６～０６１４ ０４５３
　 心叶 ％ 　１０７６～１９７７ １３６３
ｅｐｉｍｅｄｉｎＡ 柔毛 峰面积１） ２５２７９７～６３８０７ ４４６８４８
　 心叶 峰面积１） ７３９７５～２７７５５５ １７１７６２
ｅｐｉｍｅｄｉｎＢ 柔毛 峰面积１） ３１０７８６～８７７１３７ ５６１１３８
　 心叶 峰面积１） １１７１８７～９５５５８５ ３１８４９７
ｒｈａｒｎｎｏｓｙｌｉｃａｒｉｓｉｄⅡ 柔毛 峰面积１） １１６１２７～５４２２６１ ３２２９１２
　 心叶 峰面积１） ８４２９６～３０１９４８ １３２８８４
ｉｃａｒｉｓｉｄⅡ 柔毛 峰面积１） ３９２０２～１６０６２３ ８２２７５
　 心叶 峰面积１） ８０１７０～２６４７５２ １３５４００
　　注：１）峰面积值按照０２００ｇ进行了折算。
表２　柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿不同取样数量测定的含量结果的ＲＳＤ值及变异率范围 ％
化学成分 药材品种 １株 ５株 １０株 ２０株 ３０株 ５０株
ｉｃａｒｉｎ 柔毛 ２２１） １６ ７６ １５ ４１ ４６
　 　 ４６３６～３４６５８２） １１０４～３５５４１ ４４１５～８８３０ ５５１９～１８３２２ ５２９８～１２５８３ 　
　 心叶 ２９ ７２ ２２ １３ １１ ５８
　 　 ２２０１～４５０４８ １８３４～１８０４８ １９８１～３０８８８ ００５１～２３３３１ ００８０～２４２８５ 　
ｅｐｉｍｅｄｉｎＣ 柔毛 ２８ １２ １２ ７５ ５２ １２
　 　 ３７８４～４９９１７ ７６２４～１２２４３ ６１２１～１４６３６ １４３５７～２４５９７ １３８０１～２１９２５ 　
　 心叶 ３１ ７１ １３ ２０ ７６ １３
　 　 ９６５４～４２２４９ ２２１５～７０９８ ８７４５～１８５１２ ５１１１～２０２１６ ２４４２～７９５０ 　
ｅｐｉｍｅｄｉｎＡ 柔毛 ２７ １１ ７６ ６２ ３６ ４８
　 　 ６３０８～４３４２７ １５４７７～４１３９２ ０３２０～９６５１ ３７４８～１４２８４ ５８７３～１２３５３ 　
　 心叶 ４７ １５ １７ １３３２２ １３ ９８
　 　 １５７５～６１５９３ ５５４０～１６６６５ １０７０７～１７４６４ ３８１３～１９６０５ ３４１６～１８８４６ 　
ｅｐｉｍｅｄｉｎＢ 柔毛 ３０ ２０ ７９ ５８ ２７ ４１
　 　 ０７０８～４４６１５ ５６７２～５６４１４ １１４１～１３３７８ ０９６５～１１７７７ ５３４３～１０２０６ 　
　 心叶 ９１ １２ ２１ １８ ２５ ８
　 　 ０６２５～２０００３０ １１１３～２０７２１ ５９０１～２３００４ ３３６４～２８５６４ ７０２６～３０８２７ 　
ｒｈａｒｎｎｏｓｙｌｉｃａｒｉｓｉｄⅡ 柔毛 ５１ １７ ９３ ３０ ２３ １６
　 　 ３９４７～６４０３８ ５７８０～３２２５４ ４７５１～１０３７１ ５６３～６７９２８ ７０４２～１６０３２ 　
　 心叶 ６０ ４６ ３１ ２７ １８ ４６
　 　 １７９７～１２７２２７ ３３４０１～９０５５６ １９９３１～３３６９３ ０８８２～３３７２９ ５１７０～２２９７７ 　
ｉｃａｒｉｓｉｄⅡ 柔毛 ５６ ２１ ８９ ３１ １０ ７６
　 　 ３３１０～５２３５２ ５３１３～５７９３５ ４１４５～１２８６２ ５９１１～９５２２７ ６５２３～１０３３４ 　
　 心叶 ５１ ４９ ３８ ２６ １５ ６３
　 　 ０７５３～９５５３３ ４０７９０～７３７９６ ２１３５３～４１０３０ ７１７４～２９３９１ １５７９～２６７４６ 　
　　注：１）ＲＳＤ值；２）变异率范围。
大多数成分的不同重复之间的含量 ＲＳＤ值小于
１０％，因此如果研究要求比较严格，尽可能取到５０
株个体的混合样，如果条件限制，１０株个体混合可
以基本反映研究群体的状况（最大变异率一般不大
于２０％）。其他药材的情况是否类同，可能随药用
部位和成分在药材中的含量等因素而有所不同。
不同药材体现的个体差异是不一样的，造成差
异的因素有遗传的、环境的以及药用部位的不同，其
中野生药材遗传差异和环境差异都大于种植药材
（虽然绝大多数的种植药材基本没有经过遗传上的
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优选，遗传背景仍比较复杂）。而个体间的遗传差
异又受其遗传多样性水平和繁育方式等多种因素影
响，因此目前尚不能给出１个适用于所有或者大多
数药材的取样方法，但根据研究结果建议取样的个
体数不应少于１０株，可以是１０～２０株。尽管如此，
如果用该结果表示所代表的群体还是会存在着一定
的差异，因此不同研究样本含量检测结果绝对数值
之间的微小差异有可能是没有统计意义的。
［致歉］　本课题组的系列研究过程中存在失误。文献
［１１１］中提到的箭藿苷 Ｂ（ｓａｇｉｔａｔｏｓｉｄｅＢ）应该是鼠李糖基
淫羊藿次苷Ⅱ。本研究组一直使用的色谱柱和色谱条件不
能将二者很好分离，而箭藿苷Ｂ是极大多数淫羊藿样品的微
量成分（除心叶淫羊藿的个别样品含量稍高，另文报道），因
此前文报道的箭藿苷Ｂ的色谱峰指认和含量存在问题，本课
题组正在方法上予以纠正，并对以往研究带来的误导致以歉
意。
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ＳａｍｐｌｉｎｇｉｎｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｍａｔｅｒｉａｌｓＡｃａｓｅｏｆＥｐｉｍｅｄｉｕｍ
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２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ；
３．ＤａｌｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｄａｌｉａｎ１１６０２１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｓａｍｐｌｉｎｇｏｎｔｈｅａｓｓａｙｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｍｅｄｉｃ
ｉｎａｌｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＥｐｉｍｅｄｉｕｍｐｕｂｅｓｃｅｎｓａｎｄＥ．ｂｒｅｖｉｃｏｒｎｕｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ６ｓａｍｐｌｉｎｇｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｅｄａｓ１ｉｎ
ｄｉｖｉｄｕａｌ，５，１０，２０，３０，５０ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｍｉｘ，ｅａｃｈｌｅｖｅｌｗｉｔｈ３ｐａｒａｌｅｌｓａｎｄ１ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｅｖｅｌ５ｐａｒａｌｅｌｓ．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｐｉｍｅｄｉｎＣ
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ｍａｔｅｒｉａｌｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｓａｍｐｌｉｎｇｎｕｍｂｅｒ；ｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ；ｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｓ；Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ
［责任编辑　王亚君］
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