全 文 ：鸡骨草总黄酮含量测定及其含量动态变化研究
黄荣韶 t o玉永雄 u3 o胡 艳 u o盛孝邦 v
kt1广西大学 农学院 o广西 南宁 xvsssx~ u1西南大学 动物科技学院 o重庆 wsszty~
v1湖南农业大学 农学院 o湖南 长沙 wtstu{l
≈摘要   目的 }探讨鸡骨草总黄酮的超声提取条件 !含量测定方法以及含量动态变化 ∀方法 }采用正交试验优
化鸡骨草总黄酮超声提取工艺 o用比色法测定不同生长期鸡骨草不同部位的总黄酮含量 ∀结果 }乙醇用量和超声
提取次数是影响鸡骨草总黄酮超声提取效果的主要因素 ~鸡骨草茎蔓的总黄酮含量最高 o其次是根系 o叶片含量最
低 ~鸡骨草根系 !茎蔓总黄酮含量有相似的累积变化规律 o即随着植株生长 o鸡骨草根系和茎蔓的总黄酮含量逐渐
增加 o到 ts月份达高峰值 o随后缓慢降低 o但 ts ∗ tu月份的含量差别不显著 ~受低温影响 o到第 u年 u月份含量显
著降低 ~叶片在脱落前总黄酮含量达最大值 ∀结论 }以药材 us倍量的 {sh乙醇作为溶剂 o用超声波提取 v次每次
持续 vs °¬±即可获得最佳的鸡骨草总黄酮提取效果 ~在植株自然落叶前采收鸡骨草 o容易获得最大的生物产量和
质量 ∀
≈关键词   鸡骨草 ~总黄酮 ~超声提取 ~含量 ~动态变化
≈中图分类号   • u{w1t ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussyltz2twu{2sw
≈收稿日期   ussx2sv2ux
≈基金项目   国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 规 划 项 目
kusst≤…ts{|sxl
≈通讯作者   3 玉永雄 oר¯}ksuvly{uxts{so∞2°¤¬¯}¼∏¼²±ª¬¬ƒ
¶º¤∏q¦´ q¦±
鸡骨草 Αβρυσ χαντονιενσισ ‹¤±¦¨为豆科相思子
属藤本植物的带根全草 o具有清热解毒 !舒肝散瘀 !
止痛的功效 o是治疗急 !慢性肝炎和肝硬化腹水 !毒
蛇咬伤的理想药物 o亦是我国出口中药材品种之
一 ≈t  ∀因野生资源日渐枯竭 o现以人工栽培为
主 ≈u  o广西是鸡骨草的主要产区 ∀
鸡骨草化学成分复杂 o有黄酮类 !相思子碱 !胆
碱 !甾醇 !糖类等 ∀曾有用芦丁为对照品对栽培鸡骨
草的总黄酮和总提取物的含量与野生鸡骨草进行比
较研究 o结果一年生鸡骨草总黄酮成分含量较高 ≈v  o
对栽培鸡骨草黄酮类物质的季节变化和产地变化尚
无报道 ~提取鸡骨草有效成分常用回流法 ≈v  o超声波
法提取也未见报道 ∀本研究采用正交试验研究超声
提取鸡骨草总黄酮的条件 o并测定了不同生育期鸡骨
草不同部位总黄酮含量的动态变化 o为确定鸡骨草药
材最佳采收期及规范化种植提供依据 ∀
1 材料与仪器
试验所用的鸡骨草种子购自广西药用植物园 o
于 ussv年 w月在广西南宁市用自制的鸡骨草根瘤
菌菌肥与萌动种子拌匀后播种 o田间管理等措施与
一般生产栽培同 ∀分别于 ussv年 |月 ts日 k开花
结荚初期 l!ts月 tu日 k开花结荚中期 l!tt月 ts
日 k开花结荚后期 l!tu月 us日 k产地收获期 l和
ussw年 u月 us日 k萌芽前期 l取样 o将根 !茎蔓和叶
片分开 o置于 ys ε 烘箱烘至恒重 o粉碎后过 ws目筛
备用 ∀
≤± py超声波清洗器 k上海沪超超声波仪器有
限公司 lo日立 ˜ pt{ss紫外可见分光光度计 ~芦丁
对照品 k中国药品生物制品检定所 o批号 ss{s2
|zsxlo其余亚硝酸钠 !硝酸铝等试剂均为分析纯 ∀
2 方法与结果
211 对照溶液的配制及测定 参照文献 ≈v 方法 o
精密称取在 tus ε 烘至恒重的芦丁对照品 ts1s
°ªo用 {xh乙醇溶解并定容 xs °配成 s1u °ª#
°pt芦丁母液 o再用 {xh 乙醇配制成含 sos1uo
s1wos1yos1{ot1s °ª芦丁对照品系列溶液各 x °o
分别加入 xh ‘¤‘’u溶液 s1v °o摇匀 oy °¬±后再
加入 tsh „ k¯‘’v lv溶液 s1v °o摇匀 otx °¬±后加
入 t °²¯# pt ‘¤’‹溶液 w1s °和蒸馏水 s1w °o
摇匀 o放置 ts °¬±o测定 Αxts值 ∀
212 总黄酮提取工艺设计 根据前期试验结果 o选
择乙醇含量 kΑ) !溶剂用量 (Β) !提取时间 (Χ) !提取
#{uwt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
次数 (∆l为试验因素 o每因素又分 v水平 o以芦丁含
量为指标 o选用 | kvw l正交表对这 w个因素进行试
验 k见表 tlo以探讨超声波法提取总黄酮的最佳工
艺条件 ∀称取 ussv年 tu月在广西平南县取样的鸡
骨草根茎粉碎样品 u1sss ªk过 ws目筛 lo加入石油
醚 kys ε ∗ |s ε lus °浸泡过夜 o|s ε 水浴蒸除
石油醚 o按表 t的因素和水平超声提取 o收集滤液 o
置 {s ε 水浴蒸去部分乙醇至 ts ∗ vs °o用醋酸乙
酯萃取 x次 o收集醋酸乙酯液 o{s ε 水浴蒸干 o用
ysh乙醇溶解 !定容至 xs °o吸取 s1x °按照标
准曲线的方法测定总黄酮含量 ∀为了消除色素等背
景颜色对测定结果的影响 o设 t个空白对照 o即吸取
相同体积的样品液 o除了用 s1v °ysh乙醇代替
tsh硝酸铝溶液外 o其余测定方法与正常测定同 ∀
表 t 因素水平
水平
Α
乙醇含量
rh
Β
溶剂用量
r倍
Χ
提取时间
r°¬±
∆
提取次数
r次
t zs ts us t
u {s tx vs u
v |s us ws v
总黄酮含量 kh l € kΧ p Χs ) ≅ ςt / (ςu ≅ Ω) ≅ tss
式中 Χ为根据标准曲线的回归方程算出样品
液芦丁量 k°ªloΧs为根据回归方程算出空白对照的
芦丁量 k°ªl~ςt为定容体积 k°loςu为测定时所用
的样品液体积 k°loΩ为称样量 k°ªl∀
213 回流提取法提取效果比较试验 参考文献
≈v 进行 ∀称取 212项相同的鸡骨草样品 x1sss ªo
加入石油醚 xs °浸泡过夜并用超声脱脂后 o按照
212项下的方法水浴蒸去石油醚 o加 {sh乙醇 tss
°o于沸水浴提取 u «o共 v次 o过滤 o用少量乙醇洗
药渣 o合并滤液按照 212项下的方法进行处理 !测
定 o计算总黄酮含量 ∀重复测定 v次 o并与上述超声
提取法比较提取效果 ∀
214 样品供试液的制备与测定 称取粉碎鸡骨草
样品 u1sss ªo加入石油醚 us °浸泡过夜 o超声 vs
°¬±以脱脂和除去色素 !树脂等杂质 o水浴蒸除石油
醚 o加 {sh乙醇 ws °o超声提取 vs °¬±o过滤 o重复
v次 o合并滤液 o{s ε 水浴蒸去部分乙醇至 vs °o
用醋酸乙酯萃取 x次 o收集醋酸乙酯液 o{s ε 水浴
蒸干 o用 ysh乙醇溶解 !定容 xs °o即得样品溶液 ∀
取 s1u ∗ t °样品溶液于试管中 o加 ysh乙醇
至 x1s °o按照标准曲线法显色 o测 Αxts值 ∀为了消
除材料中色素等物质的影响 o每 t个样品液均设 t
个空白对照 ∀总黄酮含量计算方法同 212∀
215 标准曲线绘制 芦丁对照品系列溶液在 xts
±°下所得的吸光度进行回归 o得回归方程 Α €
t1uvz { Χ p s1ss| uoρ € s1||| |∀表明芦丁在
s1t ∗ t1s °ª# pt有良好的线性关系 ∀
216 精密度试验 吸取同一供试液 s1u °o重复
测定 y次 o总黄酮含量的 • ≥⁄为 s1z|h o表明仪器
精密度好 ∀
217 稳定性试验 吸取同一供试液 s1u °o显色
后在 sotsousovsowsoxsoys °¬±测定其吸光度 o结
果表明供试液在 ys °¬±内基本稳定 o • ≥⁄为
t1xyh ∀
218 重复性试验 取同一粉碎样品 y份 o按 214项
下方法制备供试液 o测定总黄酮含量 • ≥⁄ tqzh o说
明本法的重复性良好 ∀
219 加样回收率试验 精密称取已知总黄酮含量
的粉碎样品 y份各 t1sss ªo按照 214项下方法用石
油醚去杂质后 o加入含芦丁 x °ª的对照品溶液 o制
备供试液并测定总黄酮含量 o结果平均回收率为
|z1xh o• ≥⁄为 t1vh ∀
2110 总黄酮提取最佳工艺确定 鸡骨草总黄酮提
取正交设计试验结果见表 uo方差分析见表 v∀
表 u 鸡骨草总黄酮提取工艺正交试验结果
‘²q 总黄酮含量 rh ‘²q 总黄酮含量 rh
t sq{tw y sq|x{
u sq||u z tquz{
v tqts{ { tqssu
w tqssy | tqtyy
x tqt{s
表 v 方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 Φ Π
Α (误差 ) s. ss{ x u s. ssw t
Β s. wt{ u u s. us| xu. v  s. sx
Χ s. stu u s. ssy t. x  s. sx
∆ s. t{| { u s. s|x uv. {  s. sx
结果表明 o鸡骨草总黄酮提取效果的影响因素
大小顺序为 Β  ∆  Χ  Α∀方差分析表明 o超声提
取的次数和溶剂加入量对鸡骨草总黄酮提取量的影
响有显著影响 kΠ  s1sxlo而超声提取时间和乙醇
含量的影响不显著 ∀可见 o溶剂用量和超声提取次
数是影响鸡骨草总黄酮提取效果的主要因素 ∀在试
验设计范围内 o超声提取时间和溶剂含量对鸡骨草
总黄酮提取效果影响较小 ∀因此 o在参考文献 ≈w2y 
#|uwt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ tz
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
的基础上 o确定鸡骨草总黄酮超声波提取工艺的最
终优化方案为超声波提取 v次 o每次超声用鸡骨草
药材粉末 us倍量的 {sh乙醇 o超声波提取时间 vs
°¬±∀本试验及其后续研究即采取该方案制备鸡骨
草供试液 ∀
用回流提取法的总黄酮平均含量为 t1txth o
与上述超声提取法正交试验的最大值相比低
s1tuzh k绝对值 l∀可见 o超声法提取鸡骨草总黄
酮的效果较回流法优 ∀
2111 鸡骨草各部位总黄酮含量动态变化 不同生
长期鸡骨草植株各部位的总黄酮含量 o根据表中数
据绘成鸡骨草总黄酮含量动态变化图 o见图 t∀
图 t 鸡骨草总黄酮含量动态变化
鸡骨草根系总黄酮含量在 ts月份最高 o平均达
t1zvyh o其次是 tu月份为 t1w{zh ou月份最低 ∀ Φ
检验表明 o尽管 ts月份鸡骨草根总黄酮含量达到峰
值后呈缓慢下降的趋势 k见图 tlots ∗ tu月差异不
显著 o在 tu月份的收获季节仍保持较高的水平 ~经
过 t月低温以后 o鸡骨草根总黄酮含量显著降低 ∀
不同生长期茎蔓总黄酮含量变化趋势与根系相似 o
在 ts月份最高 o平均达 v1uvxh o其次是 tu月份为
u1|{th o|月份最低但比根系高 s1xw{h ∀鸡骨草
在每年 tu月以后都会自然落叶 ∀鸡骨草叶片总黄
酮含量在脱落前的 tu月份最高 o平均为 s1wyuh o

其余月份含量较低 o且变化不大 ~与相同时期茎蔓和
根系相比 o鸡骨草叶片总黄酮含量较低 ∀
试验表明 o鸡骨草不同部位的总黄酮含量差异
较大 ∀在收获期 ktu月份 lo茎蔓的总黄酮含量为
u1|{th o根为 t1w{zh o而叶片为 s1wyuh ~但经过
元月低温霜冻以后 o茎蔓和根系总黄酮含量显著降
低 ∀因此 o从鸡骨草总黄酮累积的动态变化分析 o为
保证鸡骨草药材的质量和获得最大的生物产量 o在
tu月份叶片自然落叶前收获鸡骨草药材较为合适 ∀
3 讨论
在 |月份前 o鸡骨草植株以营养生长为主 o形成
的初生代谢产物主要满足植株生长需要 o此时植株
总黄酮含量低 ~开花结实后 o部分初生代谢产物转化
为总黄酮等次生代谢产物 o从而形成 ts ∗ tu月的鸡
骨草总黄酮累积高峰期 ∀可见 o鸡骨草总黄酮的形
成与累积与植株生殖生长的过程密切相关 ∀
≈致谢   西南农业大学动物科学院 ussw届张敏 !徐丽
娟 !张鹏同学在分析实验方面 o广西大学农学院韦树根 !莫
亚 !蒙中吉 !王盛华 !陶敬祥同学在研究材料种植方面给予帮
助 ∀
≈参考文献  
≈t  徐祥浩 o黎敏萍 q鸡骨草的原植物鉴定和生态习性的调查研
究 ≈ q药学通报 o t|yso kwl}t|uq
≈u  陆善旦 q广西鸡骨草近年市场走势及预测 ≈ q中国中医药信
息杂志 ousssozkul}wuq
≈v  王 建 o陆善旦 o杨福顺 o等 q栽培鸡骨草与野生鸡骨草化学
成分比较 ≈ q基层中医药杂志 ot||zottkvl}u{q
≈w  郭孝武 q超声波提取和回流提取对益母草总碱提出率的影响
≈ q声学技术 o t||yo w}t|xq
≈x  王昌利 o杨景亮 q超声技术在中草药提取方面的应用 ≈ q陕
西中医学院学报 o t||vo tykvl}vvq
∆ ετερµ ινατιον οφ τοταλφλαϖονοιδσ ιν Αβρυσ χαντονιενσισανδ ιτσ δψναµ ιχ χηανγεσ
‹˜„‘Š • ²±ª2¶«¤²t o ≠ ˜ ≠ ²±ª2¬¬²±ªu o ‹ ˜ ≠¤±u o ≥‹∞‘Š ÷¬¤²2¥¤±ªv
(t. ΑγριχυλτυραλΧολλεγε οφ Γυανγξι Υνιϖερσιτψ, Ναννινγ xvsssx, Χηινα;
u. Ανιµ αλΤεχηνολογιχαλΧολλεγε οφ Σουτηωεστ Υνιϖερσιτψ, Χηονγθινγ wsszty, Χηινα;
v. ΑγριχυλτυραλΧολλεγε οφ Ηυναν ΑγριχυλτυραλΥνιϖερσιτψ, Χηανγσηα wtstu{, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤° ·¨«²§©²µ∏¯·µ¤¶²±¬¦ ¬¨·µ¤¦·¬²± ¤±§§¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶¬± Αβρυσχαντονιενσισo
¤±§·²¤±¤¯¼½¨ ¬·¶§¼±¤°¬¦¦«¤±ª¨ ¶q Μετηοδ : ׫¨ ²³·¬°¬½¨ §¦²±§¬·¬²± ²© ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶º¤¶¶·∏§¬¨§º¬·«²µ·«²ª²±¤¯ §¨ 2
¶¬ª±q ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶¬± §¬©©¨µ¨±·²µª¤±¶¤±§²©§¬©©¨µ¨±·ªµ²º·«¶·¤ª¨ ¶º µ¨¨ §¨ ·¨µ°¬± §¨¥¼ ˜∂ 2√¬¶¬¥¯¨¶³¨ ¦·µ²³«²·²° 2¨
·¨µq Ρ εσυλτ: ׫¨ ·¨«¤±²¯ √²¯∏°¨¤±§ ¬¨·µ¤¦·¬²± ·¬° ¶¨º µ¨¨ ·«¨ °¤¬± ©¤¦·²µ¶¬°³¤¦·¬±ª·«¨ ©¨©¨¦·¶²©∏¯·µ¤¶²±¬¦ ¬¨·µ¤¦·¬²±q ׫¨ ¦²±·¨±·²©
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第 vt卷第 tz期
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·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶¬± ¶·¨°¶º µ¨¨ «¬ª«¨ µ·«¤± ¬± µ²²·¶¤±§·«¨ ²¯º ¶¨·¬± ¯¨ ¤√ ¶¨q ׫¨ §¼±¤°¬¦¦«¤±ª¨ ¶²©·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶¦²±·¨±·¶¬± µ²²·¶
¤±§¶·¨°¶²©Α1 χαντονιενσισº µ¨¨ ¬± ¶¬°¬¯¤µ·µ¨±§¶q Œ·¶·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§¶¦²±·¨±·¬± ·«¨ ·º² ³¤µ·¶²©³¯¤±·¬±¦µ¨¤¶¨§ªµ¤§∏¤¯ ¼¯ º¬·«·«¨
ªµ²º·«¤±§µ¨¤¦«¨ §·«¨ °¤¬¬°∏° ¬± ’¦·²¥¨ µo ¤±§·«¨ ¦²±·¨±·§¨ ¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬± ƒ ¥¨∏µ¤¼ ²©± ¬¨·¼¨ ¤µq ׫¨ ¦²±·¨±·²©·²·¤¯ ©¯¤2
√²±²¬§¶¬± ¯¨ ¤√ ¶¨µ¨¤¦«¨ § ¤¯¶² ·² ·«¨ «¬ª«¨ ¶·√¤¯∏¨ ¥¨ ©²µ¨ ¯¨ ¤√ ¶¨©¨ ¯¯ ²©©q Χονχλυσιον: ׫¨ ²³·¬°¬½¨ § ¬¨·µ¤¦·¬²± ° ·¨«²§ ²©·²·¤¯ ©¯¤2
√²±²¬§¶¬± „¥µ∏¶¦²±·²±¬¨±¶¬¶º¤¶²¥·¤¬± §¨º¬·«·«µ¨¨·¬° ¶¨º¬·«{sh ·¨«¤±²¯ ¤·us ·¬° ¶¨²©√²¯∏°¨©²µvs °¬±q ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¬°³¯¬¨§
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[ Κεψ ωορδσ] Αβρυσ χαντονιενσισ~ ·²·¤¯ ©¯¤√²±²¬§~ ∏¯·µ¤¶²±¬¦ ¬¨·µ¤¦·¬²±~ ¦²±·¨±·~ §¼±¤°¬¦¦«¤±ª¨
≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussx2st2su
≈通讯作者   3 傅欣彤 oר¯}kstslyytuwwuuo∞2°¤¬¯}©∏¬¬±·²±ªy{
ƒ ¶²«∏1¦²°
千山活血膏质量标准研究
傅欣彤 t3 o李 琰 t o杜小伟 t o张小茜 t o石任兵 u
kt1北京市药品检验所 o北京 tsssvx~
u1北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsul
≈摘要   目的 }建立千山活血膏的鉴别及含量测定方法 ∀方法 }采用薄层色谱法鉴别三七 !血竭 o‹ °≤测定三
七中人参皂苷 • ªt的含量 ∀结果 }人参皂苷 • ªt在 s1txv | ∗ t1suy s Λª线性关系良好 o平均回收率为 |z1xh o• ≥⁄
为 u1th ∀结论 }该方法简便易行 o重复性好 ∀
≈关键词   千山活血膏 ~薄层色谱 ~血竭 ~三七 ~人参皂苷 • ªt ~‹ °≤
≈中图分类号   • u{w1t ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussyltz2twvt2sv
千山活血膏收载于 5国家中成药标准汇编 #骨
伤科分册 6o是由土鳖虫 !大黄 !三七 !血竭 !乳香 !没
药等 t|味中药制成的黑膏药 ∀为了确保制剂的质
量和疗效 o作者根据处方中所含药味的化学成分及
剂型特点 o研究制订了三七 !血竭的薄层色谱鉴别及
三七中人参皂苷 • ªt的含量测定方法 o用以控制药
品质量 ∀文献中虽已有 ‹°≤测定三七及其制剂中
人参皂苷 • ªt的含量 ≈t2w  o但在传统剂型黑膏药中测
定该成分尚未见报道 ∀
1 仪器与试药
‹° ttss高效液相色谱仪 ~硅胶 Š预制薄层板
k烟台市化工研究所 l~乙腈 !磷酸为优级纯 o其他试
剂均为分析纯 ~人参皂苷 • ¥t o• ªt及三七皂苷 • t对
照品 o血竭 !三七对照药材 k中国药品生物制品检定
所提供 o批号 ‚l∀千山活血膏 k北京全科医药研究
所 o批号 ussts{usousstsvtxoussssvuxl∀
2 方法与结果
211 薄层色谱鉴别
21111 三七 取本品 ts ªo加水 zs °o加热煮沸
tx °¬±o再充分搅拌提取 ts °¬±o放冷 o除去黑色黏
稠状物 o离心 ts °¬±o倾取上清液 o加乙醚 vs °o振
摇提取 o弃去乙醚液 o水层用水饱和的正丁醇提取 u
次 o每次 ws °o合并正丁醇液 o加氨试液 vs °洗
涤 o弃去碱液 o再用正丁醇饱和的水 vs °洗涤 o弃
去水液 o分取正丁醇层 o蒸干 o残渣加乙醇 t °使溶
解 o作为供试品溶液 ∀按处方比例称取除三七外各
药材 o按工艺提取 o同法制成缺三七的空白对照溶
液 ∀另取三七对照药材 tªo加甲醇 us °o回流提取
t «o放冷 o滤过 o滤液蒸干 o残渣加水 us °使溶解 o
用水饱和的正丁醇提取 u次 o每次 ux °o合并正丁
醇液 o加氨试液 vs °o同法制成对照药材溶液 ∀再
取人参皂苷 • ¥t o• ªt及三七皂苷 • t对照品 o加乙醇
制成每 t °各含 t °ª的混合溶液 o作为对照品溶
液 ∀吸取上述 w种溶液各 x ˏo分别点于同一硅胶
Š薄层板上 o以氯仿 2甲醇 2水 kyxΒvxΒtslts ε 以下
放置的下层溶液为展开剂 o展开 o取出 o晾干 o喷以
tsh硫酸乙醇溶液 o热风吹至斑点显色清晰 ∀供试
#tvwt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
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Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ tz
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy