全 文 ：≈v 中国药典 q一部 1usss qtxs1
≈w 上海中医学院方药教研组 q中药临床手册 q上海 }上海卫生出
版社 ot|zz1u|{1
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussx2tu2ts
≈通讯作者 王萌声 oר¯ }kstslywssxwtx
正交试验优选大黄中蒽醌类成分酶解工艺
王萌声t 3 o蒋 昊u
kt1 北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu ~
u1 中国海洋大学 生命科学院 o山东 青岛 uyyssvl
纤维素酶在国外已经广泛被用于食品 !化工等
领域 o而在中药领域的应用尚不多见 ∀鉴于此 o作者
选用大黄药材 o以其中的活性成分结合蒽醌为考察
指标考察其酶解的最佳工艺 o从而为纤维素酶在中
药提取中的应用提供实验依据 ∀
1 仪器与试剂
岛津 ∂ p uwst°≤ 紫外分光光度仪 o纤维素酶
ks1x #°ªpt o¶¬ª°¤公司 o北京化学试剂公司l o蒽醌
对照品kt o{2二羟基游离蒽醌 o含量测定用 o中国药
品生物制品检定所l o其他试剂均为分析纯 ∀萃取混
合碱配制 }xs ª¤加 |{s °蒸馏水 ous °氨水 ~
萃取混合酸配制 }tys °冰醋酸加 { °浓 ≤¯ ouw
°蒸馏水 o大黄药材购于北京市药材公司 o经本校
陈玉婷教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄 Ρηευµ παλµα2
τυµ 1的干燥根及根茎 ∀
2 方法与结果
211 大黄的常规提取工艺
取生大黄药材粉碎成 ys目细粉 o取粉末 u ª酸
化 o以 |x h的乙醇 us °超声提取 o提取液过滤后得
vs °续滤液 o取 t °加入混酸回流后乙醚 o混碱
萃取得总蒽醌 o取 t °乙醚 o混碱萃取得游离蒽醌 ∀
212 大黄酶解试验
在 ux ε 水浴恒温下以 s1x #ªpt生药的量加入
纤维素酶 o充分搅拌后保温 t «o以下同常规操作工
艺 o经薄层鉴别与含量测定初步表明加入纤维素酶
后对大黄的化学成分无影响 o总蒽醌含量增加了
vs1v{ h o游离蒽醌含量增加了 vu1wv h ∀
213 正交试验设计 由初步酶解试验可知 o加入纤
维素酶可提高大黄中活性成分蒽醌的含量 o因此拟
订考察因素酶解温度k Αl o酶解 ³( Βl o酶解时间
kΧl o以上 v个因素每个因素上 v个水平 o用 |kvvl
正交表安排试验 o见表 t ∀
表 t 因素与水平
水平
Α
酶解温度
r ε
Β
³
Χ
时间
r«
t vs v t
u ws x v
v xs z x
214 定量方法≈t 紫外可见分光光度法 o将供试液
在 xus ±° 处比色 o利用对照品比较法计算含量 ∀
k供试品与对照品溶液均在置备好 s1x ∗ u «内进行
测定l ∀
定量依据 }Αk供试品lΑk对照品l
Χk供试品l
Χk对照品l
总蒽醌k h l Χ总 ≅ vs ≅ ts
p y
药材量 ≅ tss h
游离蒽醌k h l Χ游 ≅ vs ≅ ts
p y
药材量 ≅ tss h
结合蒽醌k h l 总蒽醌 p游离蒽醌
对照品溶液配置 }取对照品 ux °ªo冰醋酸定容
至 xs °o取上述溶液 t1x °o用混合碱定容至 tss
°oΧk对照品l为 z1x Λª#°pt ∀
215 样品含量测定
21511 样品供试液制备 精密称取药材粉末 u ªo
按正交表条件酶解 o酶解结束后 o取得酶解液 o称重 o
用 us °|x h 乙醇超声提取 vs °¬±o补重 o摇匀过
滤 o得续滤液 vs °∀
总蒽醌供试液制备 }取续滤液 t °o加入 x °
混酸 o回流 tx °¬±o得到水解液 o将水解液分别用乙
#|w{#
第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤¼oussy
醚萃取 v次kvs ox ox °l o乙醚层用混和碱萃取至无
色kus ous ots °l o碱水层合并并用混合碱定容至
tss °o摇匀精密称取 ts °o称重 o挥去乙醚 o氨试
液补重 o摇匀 ∀得到总蒽醌供试液 ∀
游离蒽醌供试液制备 }取续滤液 t °o加入 x
°蒸馏水 o分别用乙醚萃取 w次kts ots ots ox °l o
乙醚层用水萃取至无色kus ots ox °l o合并乙醚层 o
用混合碱萃取 v次kus ots ox °l o合并碱水层定容
至 xs °o精密称取 ts °o称重 o挥去乙醚 o氨试液
补重 o摇匀 ∀得到游离蒽醌供试液 ∀
21512 含量测定 按拟订方法进行测定 o结果见表 u∀
表 u 正交试验结果 h
²q 总蒽醌 游离蒽醌 结合蒽醌
t u quvw x s qyxu x t qx{u s
u u qsut s s qyuu s t qv|| s
v u qstx { s qys| x t qwsy u
w u qt{v x s qyus x t qxyv s
x u qvzt s s qytt x t qzx| x
y u qwut { s qwzz u t q|ww x
z u qtws x s qyvx s t qxsx x
{ u quwt s s qyxt z t qx{| v
| u qtv{ u s qyus x t qxtz {
214 结果分析
对实验结果进行直观分析 o比较 v个因素的极
差 o结果影响因素的大小顺序 Χ Α Β ,方差分析
见表 v ∀比较 v个因素 Α, Β , Χ,因素 Α, Χ对结果均
有显著性影响 o考虑生产成本 o故选大黄酶解最佳工
艺条件为 Αu Βv Χt o即 ws ε o³ z o酶解 t «∀
表 v 大黄中结合蒽醌酶解因素方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 Φ Π
s qxxz u s quz| t{ qvuu s1sx
s qsvu u s qsty t qsxv
≤ s quw{ u s qtwu | qvwu s1st
误差 s qws| x uz s qusw {
注 }Φs qsxku ouzl v qvx oΦs qstku ouzl x qw|
3 讨论
大黄药材的有效成分包括游离蒽醌与结合蒽醌
u类 o故以可测定的总蒽醌含量减去可测定的游离
蒽醌含量得到的结合蒽醌含量为指标优选大黄提取
工艺 ∀
酶法应用于中药材提取 o还要考虑其提取作用
的本质和决定因素以及多酶和酶活性对提取率的影
响 ∀本研究仅为此提供初步实验依据 o更多的影响
因素尚须进一步讨论 ∀
≈参考文献
≈t 李发美 q分析化学 q北京 }人民卫生出版社 oussv quts q
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussx2tt2us
≈通讯作者 3余菁 oר¯ }ksxztl{xwyv{|t o∞2°¤¬¯}·¥¥¼ ¼¤«²²q
¦²° q¦±
°≤测定橘络中橙皮苷的含量
余 菁 3 o宋旭峰
k杭州市药品检验所 o浙江 杭州 vtsstwl
橘络为芸香科植物橘 Χιτρυσ ρετιχυλατα
¯¤±¦²及
其栽培变种干燥成熟果实中果皮与内果皮之间的维
管束群 o具有理气化痰 !活血通络的功效≈t ∀据调查
目前中药材市场上的橘络主要是在橘瓣罐头的罐装
工艺中经热烫剥皮分瓣去络收集而来的≈u o并且存
在着杂质多 !色泽差的问题 ∀文献报道 o橘络含黄酮
类化合物最多 o主要为橙皮苷≈v ∀为此 o本研究采用
反相高效液相色谱法对橘络的主要成分之一橙皮苷
进行含量测定 o为药材的质量评价提供依据 ∀
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 }°ttss四元液相色谱仪 o∂
检测器 o≤«¨ °¶·¤·¬²±色谱工作站 o超声波处理器k上
海威龙电子设备有限公司l ∀乙腈为色谱纯 o水为蒸
馏水 o其余试剂均为分析纯 ∀橙皮苷对照品k中国药
品生物制品检定所提供 o批号为 ttszut2sstsl ∀橘
络 {批 o其中 v批自备样品为直接剥皮撕取收集 o其
余为中药市场上的抽检留样品 o均由本所郭怡飚主
任中药师鉴定 ∀
2 方法与结果
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第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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