全 文 ：复方大青叶注射液 ‹°≤指纹图谱研究
刘 瑞 o刘志刚 o李 磊 o任 冲 o袁 波 o李发美 3
k沈阳药科大学 药学院 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈摘要  目的 }采用 ‹°≤建立复方大青叶注射液的指纹图谱测定方法 ∀方法 }采用 ⁄¬¤°²±¶¬¯ ≤t{色谱柱 o甲醇2
水2磷酸为流动相进行梯度洗脱 o流速 t1s °#°¬±p t o检测波长 uxw ±° ∀结果 }建立了复方大青叶注射液的 ‹°≤ 对
照指纹图谱 o标示了注射液中的 us个共有峰 o并初步确定注射液的相似度阈值为 s1{x ∀结论 }该方法准确 !重复性
好 o为复方大青叶注射液的质量控制提供了依据 ∀
≈关键词  复方大青叶注射液 ~质量控制 ~指纹图谱 ~相似度
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltv2tsx|2sw
≈收稿日期  ussx2sy2u{
≈基金项目  国家科技攻关计划项目kusst…„zst„xyl子项目
≈通讯作者  3 李发美 oר¯ }ksuwluv|{yu{| o∞2°¤¬¯}©¤° ¬¨¯¬ƒ
tyv1¦²°
色谱指纹图谱是在寻求综合评价中药质量的过
程中鉴别中药真实性 !评价质量一致性和稳定性实
际可行的模式 ∀复方大青叶注射液由大青叶 !金银
花 !大黄 !羌活和拳参 x味药材经提取加工制成 o是
中华人民共和国卫生部药品标准收载的品种≈t  ∀本
研究建立了复方大青叶注射液 ‹°≤ 指纹图谱检测
标准 o实验方法的精密度 !稳定性和重复性良好 o操
作简便可行 o并采用国家药典委员会的/中药色谱指
纹图谱相似度评价系统0kussw „版l对 ty批大生产
的注射液进行相似度评价 o同时对药材 !中间体和注
射液的相关性进行了研究 ∀
1 仪器与试剂
„ª¬¯¨ ±·ttss型高效液相色谱仪 o⁄„⁄检测器 o
≤«¨ °¶·¤·¬²±色谱工作站 ~∞×׏∞• ג∞⁄’ 电子天
平 ~甲醇k色谱纯l o磷酸k分析纯l o均购自山东禹王
实业有限公司禹城化工厂 ~尿苷k批号 {{z2usssstl o
腺苷k批号 {z|2usssstl o没食子酸k批号 s{vt2|xstl o
绿原酸k批号 szxv2usstttl o均购自中国药品生物制
品检定所 ~复方大青叶注射液由国内几家生产企业
提供 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件和系统适用性试验
⁄¬¤°²±¶¬¯ ≤t{色谱柱kw1y °° ≅ uss °° ox Λ°l ~
流动相 „甲醇2… s1u h的磷酸水溶液k用 ts h的氢
氧化钠溶液调 ³‹ 为 v1sl o梯度洗脱 }s ∗ ty °¬±o
v h ∗ us h „ ~ty ∗ ys °¬±ous h ∗ zx h „ ~ys ∗ zs °¬±o
流动相比例保持不变 ~流速 t1s °#°¬±pt ~检测波长
uxw ±° ~供试品溶液和对照品溶液各 us ˏ∀所有组
分在 zs °¬±内洗脱出柱 o理论板数按尿苷峰计算不
低于 u万 o尿苷峰与相邻峰的分离度大于 t1x ∀
212 供试品溶液的制备
精密吸取注射液 t °o置 ts °量瓶中 o用重蒸
水稀释并定容至刻度 ∀
213 参照物溶液的制备
取尿苷对照品适量 o精密称定 o重蒸水溶解 o并
稀释成每 t °中含 vs Λª的尿苷对照品溶液 ∀
214 方法学考察
21411 精密度试验 取供试品溶液 o在上述色谱条
件下重复进样 x次 ∀结果表明 o各色谱峰的相对保
留时间和相对峰面积的 • ≥⁄均小于 v1s h o直观观
察指纹图谱的全貌无明显变化 o测得的色谱指纹图
谱相似度不小于 s1|{ o符合指纹图谱技术要求 ∀
21412 重复性试验 分别精密量取同一批复方大
青叶注射液 x份 o每份 t1s °o按/供试品溶液的制
备0项下操作 o在上述色谱条件下进行 ‹°≤ 分析 ∀
结果表明 o各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积
的 • ≥⁄均小于 v1s h o直观观察指纹图谱的全貌无
明显变化 o测得的色谱指纹图谱相似度不小于
s1|{ o符合指纹图谱技术要求 ∀
21413 稳定性试验 取供试品溶液 o室温下放置 o
分别在 s ou ow o{ oty ouw «测定 ∀结果表明 o各色谱峰
的相对保留时间和相对峰面积的 • ≥⁄ 均小于
#|xst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tv
∏¯¼ oussy
v1s h o直观观察指纹图谱的全貌无明显变化 o测得
的色谱指纹图谱相似度不小于 s1|{ o表明供试品溶
液在 uw «内稳定 ∀
215 样品测定
取统一工艺后 o各企业提供的 ty批复方大青叶
注射液 o按/供试品溶液的制备0项下操作 o在上述色
谱条件下进行指纹图谱分析 ∀以尿苷峰为参比峰 o将
其保留时间定为 t1s o标示了复方大青叶注射液指纹
图谱中 us个共有指纹峰 o各峰相对保留时间见表 t∀
表 t 复方大青叶注射液指纹图谱共有峰的
相对保留时间kτχ• l
峰号 τχ• 峰号 τχ• 峰号 τχ•
t s qyw { t quz tx v quu
u s qzu | t qws ty v qvt
v s q{u ts t qzv tz v q{y
w s q{y tt u qss t{ w qtz
≥ t qss tu u qxs t| w qwv
y t qs{ tv u qyz us x qvw
z t qt| tw u q||
216 指纹图谱相似度的测定
采用国家药典委员会/中药色谱指纹图谱相似
度评价系统0kussw„版l评价 ty批复方大青叶注射
液的指纹图谱 o设定时间窗宽度为 s1x °¬±o以均值
法生成对照指纹图谱 o建立共有模式 o见图 t o苯甲
醇不加入相似度计算 o测得样品与共有模式之间的
相似度 o结果见表 u ∀
图 t 尿苷色谱图k„l和复方大青叶注射液
‹°≤指纹图谱k…l
≥1 尿苷 ~{1 没食子酸 ~ts1腺苷 ~
tu1 绿原酸 ~tx1 苯甲醇
217 相关性研究
21711 药材和注射液的相关性 按复方大青叶注
射液生产工艺≈u 和/供试品溶液的制备0项下操作 o
自制大青叶 !金银花 !羌活 !拳参和大黄药材的 ‹°≤
供试液 o按已建立的复方大青叶注射液 ‹°≤ 指纹
图谱色谱条件检测 o得到各药材 ‹°≤ 指纹图谱 o与
表 u ty批复方大青叶注射液样品指纹图谱相似度
‘²q 批号 相似度 ‘²q 批号 相似度
t swtuut s q|vu | swtuuv s q|tw
u swtuuu s q|vs ts swtuu| s q|ww
v swttsu s q{yy tt swtust s q|zz
w swtuuy s q|vw tu sxstst s q|tz
x swtt{y s q|{u tv swtuut s q|{t
y swtuuv s q|yw tw swtuuy s q|yv
z swtuuw s q|zu tx sxstst s q|s|
{ sxstsv s q|uz ty sxstsw s q{||
复方大青叶注射液指纹图谱相比较 o结果表明 o在注
射液指纹图谱中 o除 tx号色谱峰为辅料苯甲醇外 o
us个指纹峰有 ts个来自大青叶kt ou ov ow ox ots ott o
ty ot{ ot|l otv个来自金银花kw ox o{ o| ots ott otu otv o
tw oty otz ot{ ot|l oz个来自羌活kw ox o| otu otv oty o
t|l ow个来自拳参k{ o| otu otvl oz个来自大黄ky oz o
{ otv ot{ ot| ousl o所有指纹峰均从药材指纹图谱中
找到归属 ∀
21712 中间体和注射液的相关性 按照注射液的
生产工艺 u次水沉后为中间体 ∀复方大青叶注射液
及其对应中间体的 ‹°≤ 指纹图谱见图 u ∀由图 u
可见 o中间体的的主要色谱峰均保留在注射液中 o但
注射液色谱峰的峰面积相对较小 ∀此外 o多增加了
苯甲醇的色谱峰 ∀按生产工艺自制的注射液与中间
体的峰面积总积分值的比较见表 v ∀从表中可以看
出 o中间体和注射液相关性良好 o但从中间体到注射
液的过程中 o指纹图谱的总积分值下降大约 ws h左
右 o推测可能由于活性炭的加入对成分的吸附所致 ∀
3 讨论
311 色谱柱的考察
按照指纹图谱研究技术指南的要求 o作者考察
了注射液在不同填料的色谱柱k≤{ o≤t{和氨基柱l上
的分离情况 o结果在 ≤t{柱上注射液中各成分能达到
较好分离 ∀同时对不同品牌色谱柱进行了考察 o分
别用 ‹¼³¨µ¶¬¯ ’⁄≥2t ≤t{柱kw1y °° ≅ uss °° ox Λ° o
大连依利特公司 o含碳量为 tu h o封尾l o⁄¬®°¤ ⁄¬¤2
°²±¶¬¯×≤t{柱kw1y °° ≅ uss °° ox Λ° o迪马公司 o含
碳量为 tz h o封尾l oŽµ²°¤¶¬¯ ’⁄≥2t柱 ≤t{kw1y °° ≅
uss °° ox Λ° o天美公司 o含碳量 tz1x h o封尾l进行
洗脱 o结果表明 ⁄¬®°¤ ⁄¬¤°²±¶¬¯× ≤t{柱洗脱出的色
谱峰基线平稳 o峰数多且分离度好 o其他 u种色谱柱
上的分离尚可 o但色谱图略差 o最终选用 ⁄¬®°¤ ⁄¬¤2
°²±¶¬¯× ≤t{柱 ∀
#syst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tv
∏¯¼ oussy
图 u 复方大青叶注射液和中间体的指纹图谱
„1注射液 ~…1中间体 ~t1 苯甲醇
表 v 注射液和中间体指纹图谱的总积分值比较
批号 注射液 中间体 注射液Β中间体
sws|sut vz z{x yu |tv s qyst
sws|suu u| tzy wt yyt s qzss
sws|suv vx uvs ys ty| s qx{y
sws|suw vy |yx x| t{{ s qyux
sws|sux vy x{{ w| ytu s qzvz
sws|suy v{ ywy xu sy{ s qzwu
sws|suz vz {{u xw |y| s qy{|
sws|su{ vy uvw xv tty s qy{u
均值 vy syv xw utu s qyyx
312 流动相的考察
考察了多种流动相系统k甲醇2冰醋酸水溶液 o
甲醇2醋酸铵缓冲液 o甲醇2磷酸水溶液 o甲醇2磷酸盐
溶液 o乙腈2磷酸盐溶液等l和 ³‹ 对分离的影响 o发
现以甲醇2磷酸盐溶液为流动相较好 ∀在此色谱条
件下 o图谱的各峰分离度良好 o基线平整 o特征性指
纹峰表达明显 o且图谱的稳定性 !重复性 !精密度均
好 o整个谱图运行时间为 zs °¬±o而且样品在色谱柱
上没有残留 o对下一样品分析无干扰 ∀txs °¬±色谱
图见图 vkys °¬±后流动相比例保持不变l ∀
313 检测波长的考察
考察了 uvs ouxw ou{s ovss ±°等波长下的检测情
况 o结果在 u{s ovss ±°下只能检测到少数色谱峰 o
不能表现出注射液成分的整体特征 ~uxw ±°和 uvs
±°下指纹图谱色谱峰数较多 o各指纹特征峰均有较
大吸收 o能全面反映注射液成分的信息特征 o而且在
uxw ±°下 o各色谱峰强度较均匀 o基线平整 o而在
uvs ±°下测定时 o基线的稳定性较差 o各峰强度差
异较大 o尤其溶剂前沿的峰强大 o同时运用二极管阵
列检测器对检测波长进行选择 o确定 uxw ±°为最佳
检测波长 ∀
314 参照物的选择
根据参照物的选择原则 o首选君药中的有效成
分为参照物 o但是复方大青叶注射液水提醇沉的生
产工艺使得君药大青叶的脂溶性有效成分靛蓝和靛
玉红在注射液中含量极低 o在指纹图谱中检测不到
这 u种成分k见图 v …l ∀因此作者又选取主要来自
注射液中君药大青叶的指标成分尿苷作为参照物 ∀
有关尿苷成分的鉴定已另撰文 ∀在确定的色谱条件
下 o尿苷色谱峰峰面积稳定 o与相邻色谱峰分离良
好 o有助于辨认和评价色谱指纹图谱的特征 ∀
图 v 复方大青叶注射液 ‹°≤图
„1txs °¬±的色谱图 ~…1 大青叶中脂溶性成分
t1 靛蓝 ~u1靛玉红
315 共有峰的识别和匹配
实验中发现在注射液的色谱指纹图谱中 o指纹
峰相对保留时间的偏差都在 v h以内 o但由于指纹
图谱中色谱峰较密集 o因此辅以各色谱峰的紫外光
谱图对色谱峰进行识别 o通过比较在线紫外光谱和
加入对照品溶液的方法 o确认了 x个已知成分峰 o它
们分别是尿苷 !没食子酸 !腺苷 !绿原酸和苯甲醇 ∀
316 不同企业注射液样品的指纹图谱分析
研究初期对不同企业提供的注射液进行分析 o
发现不同企业的产品指纹图谱之间差异较大 o难于
统一 ∀作者对可能引起不同企业产品差异的生产工
艺和投料药材两种主要因素分别进行了分析 o发现
不同企业的产品质量差异的部分原因是工艺不完全
统一 o而更主要的原因是药材来源的不同 ∀因此作
者对方中的 x味药材分别固定了产地和品种 o并统
一了生产工艺 ∀
317 统一工艺后大生产样品的相似度结果分析
由表 u相似度评价结果可见 ty批不同企业提
供的按统一工艺大生产的注射液 ‹°≤ 指纹图谱相
#tyst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tv
∏¯¼ oussy
似度除一批为 s1{z外 o其余均在 s1|s以上 o因此建
议在对复方大青叶注射液质量进行评价时 o ‹°≤
指纹图谱相似度应达到 |1s以上 o并且随着生产企
业生产水平的不断改进和提高 o复方大青叶注射液
的相似度阈值也将不断提高 ∀
≈参考文献 
≈t  国家药典委员会 1 卫生部药品标准 1 中药成方制剂k第 us
册l qt||{ }ust1
Φινγερπριντ αναλψσισ οφ χοµ ποσιτε Φολιι Ισατιδισινϕεχτιον βψ ΗΠΛΧ
Œ˜ •∏¬oŒ˜ «¬2ª¤±ªoŒ ¨¬o • ∞‘≤«²±ªo ≠˜„‘…²oŒ ƒ¤2° ¬¨
(Σχηοολ οφ Πηαρµαχψ, Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨ √¨¯²³·«¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²©¦²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²± ¥¼ ‹°≤1 Μετηοδ : ׫¨ ¶¨³¤2
µ¤·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤⁄¬¤°²±¶¬¯ ≤t{ ¦²¯∏°± º¬·«¤ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¦²±¶¬¶·¬±ª²© ° ·¨«¤±²¯2º¤·¨µ2³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§¤¶ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯¨ ±·¤··«¨ ©¯²º
µ¤·¨ ²©t1s °#°¬±p t1 ׫¨ ˜∂ §¨·¨¦·¬²± º¤¶¶¨·¤·uxw ±°1 Ρεσυλτ : „ ¶·¤±§¤µ§ ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·³µ²¦¨§∏µ¨ º¤¶§¨√¨¯²³¨ §©²µ¦²°³²¶¬·¨
ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±oº¬·«us ¦²°°²± ³¨ ¤®¶¤±§¤¶¬°¬¯¤µ¬·¼·«µ¨¶«²¯§²©|1s ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §1 Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§º¤¶¤¦¦∏µ¤·¨oµ¨³¨ ¤·¤¥¯¨
¤±§∏¶¨©∏¯ ©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©¦²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] ≤²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±~ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ~ ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·~¶¬°¬¯¤µ¬·¼
≈责任编辑 鲍 雷 
≈收稿日期  ussx2sy2us
≈基金项目  国家自然科学基金项目k|sus|ssxl
≈通讯作者  3 程翼宇 oר¯ }ksxztl{z|xttv{ o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼ ƒ
½­∏q¨§∏q¦±
‹°≤测定双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量
葛志伟 o贺 庆 o水文波 o程翼宇 3
k浙江大学 药学院 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要  目的 }建立双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量测定方法 ∀方法 }采用高效液相色谱法 o²µ¥¤¬ ≥…2
≤t{色谱柱 o流动相 „s1sx h的磷酸水溶液 o…含 s1sx h磷酸的 w h乙腈甲醇溶液 o梯度洗脱 o流速 t °#°¬±p t o柱温
ux ε o检测波长 uvs ±° ∀结果 }丹酚酸 …在 s1zts ∗ uu1z Λªkρ€ s1||| |l o芍药苷在 s1tsv ∗ v1vs Λªkρ€ s1||| |l有
良好的线性关系 o测定了 v个批次双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量 o其中丹酚酸 …的含量范围为 y1wy ∗ tt1y
°ª#ªp t o芍药苷的含量范围为 t1ww ∗ t1z{ °ª#ªp t ∀结论 }该方法准确度好 !重复性好 !稳定可靠 o可以作为双丹颗粒
质量控制的方法 ∀
≈关键词  高效液相色谱法 ~双丹颗粒 ~丹酚酸 …~芍药苷
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltv2tsyu2sv
双丹颗粒由丹参和丹皮 u味药组成 o具有改善
心肌微循环 o增加冠状动脉的血流量 o降低心肌的耗
氧量 o维持缺氧心肌的氧代谢供求平衡 o保护心脏的
功能 o还可抗血栓形成和抗动脉粥样硬化 ∀国家药
品标准选用 ׏≤2˜∂ 法≈≥v2uwvk÷2uvvl2ussskl 测
定原儿茶醛的含量 o该法处理繁琐 o误差较大 ~亦有
报道用 ‹°≤测定丹参素和原儿茶醛的含量来进行
质量控制≈t  o但这 u种成分均来自于丹参 o不能代表
全方药效物质基础 ∀为了更好地控制该制剂的质
量 o有必要建立一种更合理的含量分析方法 ∀本研
究以丹酚酸 …和芍药苷作为质量控制指标 o使用高
#uyst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tv
∏¯¼ oussy