全 文 ：Σπεχιεσ οφ Λιγυλαρια ιν τηε νορτηωεστερν Χηινα ανδ τηειρ µεδιχιναλ υσεσ
≥«²∏2¬±tou o± ∏¤±2¼¤±ªt o± ∏¬t o ¬¤±t o • «¨ ±ª2·¤²t
(t1 Χηινα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utssv{ , Χηινα ;
u . Σχηοολ οφ Πηαρµαχψ, Ανηυι Χολλεγε οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Ηεφει uvssv{ , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¶³¨¦¬¨¶²© Λιγυλαρια §¬¶·µ¬¥∏·¨§¬±·«¨ ±²µ·«º ¶¨·¨µ± ≤«¬±¤¤±§·«¨¬µ° §¨¬¦¬±¤¯ ∏¶¨¶¬±·«¨ ²¯2
¦¤¯ ¤µ¨¤q Μετηοδ : ƒ¬¨ §¯¬±√ ¶¨·¬ª¤·¬²±o¶³¨¦¬° ±¨ ¦²¯¯¨ ¦·¬²±o·¤¬²±²°¬¦¶·∏§¼ ¤±§§¤·∏° ¦«¨¦® º µ¨¨ ¤§²³·¨§q Ρεσυλτ : ׫¨ µ¨ ¤µ¨ u| ¶³¨¦¬¨¶
¤±§t √¤µ¬¨·¬¨¶²© Λιγυλαρια §¬¶·µ¬¥∏·¨§¬±·«¨ ±²µ·«º ¶¨·¨µ± ≤«¬±¤o¤±§t{ ¶³¨¦¬¨¶²©·«¨ ° «¤§¥¨ ±¨ ∏¶¨§¤¶©²¯® ° §¨¬¦¬±¨ ¶º¬·«·«¨ ©∏±¦·¬²± ²©
µ¨¶²¯√¬±ª³«¯ ª¨° oµ¨ ¬¯¨√¬±ª¦²∏ª«o¦¯ ¤¨µ¬±ª«¨ ¤·¤±§·²¬¬±¶qΧονχλυσιον : ׫¨ ±²µ·«º ¶¨·¨µ± ≤«¬±¤¬¶¤¥∏±§¤±·¬± ° §¨¬¦¬±¤¯ µ¨¶²∏µ¦¨ ²© Λιγυ2
λαριαq
[ Κεψ ωορδσ] Λιγυλαρια~¶³¨¦¬¨¶¤±§§¬¶·µ¬¥∏·¬²±~ ° §¨¬¦¬±¤¯ µ¨¶²∏µ¦¨ ~·«¨ ±²µ·«º ¶¨·≤«¬±¤ ≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussw2su2st
≈基金项目 甘肃省环保局项目kusst2tsl
≈通讯作者 3刘丽莎 oר¯ }ks|vtl{zyxwtw
麻花秦艽组织培养及植株再生的研究
刘丽莎 3 o张西玲 o王 岚 o张延红
k甘肃中医学院 o甘肃 兰州 zvssssl
≈摘要 目的 }研究药用植物麻花秦艽组织培养技术 o为工厂化育苗提供科学依据 ∀方法 }以麻花秦艽根 !茎
育出的无菌苗为外植体 o采用 ≥培养基 o附加不同的植物激素进行实验 ∀结果 }以 ≥培养基为基本培养基 o附加
s1x ∗ t1s °ª#pt n s1x °ª#pt o适于丛生芽的诱导与增殖 ~附加 t1s °ª#pt n
v °ª#pt o适于愈伤
组织的诱导 ~附加 t1s °ª#pt n
u1s ∗ v1s °ª#pt适于愈伤组织继代培养 o附加
u1s °ª#pt n s1x °ª
#pt适于愈伤组织的分化 ∀结论 }通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的 ∀
≈关键词 麻花秦艽 ~组织培养 ~植株再生
≈中图分类号 ≥ xyz ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylts2sz|z2sw
麻花秦艽 Γεντιανα στραµινεσ ¤¬¬°是龙胆科植
物 o国家重点保护的野生药材之一≈t ou ∀麻花秦艽
主产于甘肃 !青海 !四川 !陕西等地 ∀甘肃为道地产
区 o目前都为野生≈u ∀近年来 o由于用药需求量猛
增 o过度采挖 o致使麻花秦艽野生资源严重枯竭 o产
量锐减 o市场价格逐年上升 o因此 o应用组织培养方
法繁殖和保存野生药用植物种质已成为必需 ∀作者
采用生物技术手段复壮麻花秦艽优良品种 o具有诱
导周期短 o再生苗频率高 o苗具健壮的根等优点 ∀为
麻花秦艽的工厂化快速繁殖提供了科学依据 ∀
1 材料和方法
111 材料
供试植物材料采自甘肃榆中野生麻花秦艽 Γ1
στραµινεαo由本院中药鉴定教研室张西玲副教授鉴
定 ∀外植体为其根基上的芽长成的无菌苗 ∀
112 方法
11211 无菌外植体的获得 野生麻花秦艽采下
后 o用洗衣粉溶液仔细刷洗 o并用自来水冲洗干净 o
从根茎上切下大约 s1x ¦°的芽 o置于 zx h乙醇中浸
泡 vx ¶o再于 s1t h升汞中消毒 { °¬±o无菌水冲洗
x ∗ y次 o然后接种于 ≥培养基中培养获得无菌苗 o
培养条件为 ≥培养基附加 s1{ h琼脂 o³ x1{ ~培
养温度kux ? ul ε ~光照 ts ∗ tu «#§pt o光强 {ss ∗
t sss ¬¯o蔗糖为 vs ª#pt ∀
11212 丛生芽的诱导与增殖 剪取麻花秦艽试管
#z|z#
第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ ts
¤¼oussy
苗基部约 t ¦°长接种于附加不同激素配比的 ≥培
养基中 o筛选出适于丛生芽诱导的培养基 ∀
11213 愈伤组织的诱导 !继代与分化 选取较幼
嫩的麻花秦艽试管苗的不同部位接入附加不同激素
配比的愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱
导 o将诱导出的愈伤组织于愈伤组织继代培养基上
每 vs ∗ vx §继代 t次 ∀选取继代了 u ∗ v次生长旺
盛 o质地致密 o表面有细颗粒状结构 o颜色鲜黄的愈
伤组织转入愈伤组织分化培养基中进行愈伤组织分
化培养 ∀
11214 芽的伸长与生根培养 将在愈伤组织分化
培养基中生长键壮的再生芽及在芽增殖培养基中生
长了约 t个月的丛生芽分成 v ∗ w个为一小簇转入
芽伸长培养基中进行芽的伸长培养 ∀将在芽伸长培
养基中生长了约 t个月的芽再转入到芽生根培养基
中进行生根培养 ∀
11215 试管苗的移栽 将在生根培养基中生长了
约 t个月的生长键壮的试管苗在移栽前 v ∗ x §将
瓶口打开 o注入少量清水淹没培养基表面 o于室内自
然光下散射 ∀移栽时将试管苗从瓶中取出 o用清水
将根表面的培养基冲净 o然后移入蛭石和花园土混
合的基质中 o于温室内培养 ∀
2 结果与分折
211 激素对丛生芽诱导与增殖的影响
细胞分裂素和生长素是芽诱导与增殖过程中最
关键的因子 ∀本实验研究了多种细胞分裂素和生长
素的不同含量的配比组合 o其中以
和 的组
合最佳 ∀
与 对芽的诱导与增殖的影响见表
t ∀由表 t可见
s1x ∗ t1s °ª#pt n s1x °ª#
pt最适于芽的诱导 o见图 t o
含量超过 u1s °ª#
pt时对芽的分化产生了抑制作用 ∀
图 t 茎尖诱导出的丛生芽
212 激素对愈伤组织诱导 o继代和分化的影响
21211 生长素对愈伤组织诱导 o继代和分化的影
响 以 ≥培养基为基本培养基 o分别附加不同含
表 t
与 对麻花秦艽试管苗丛生芽诱导的影响
r°ª#pt r°ª#pt 产生芽的时间r§ 芽生长状况
s qx s qx tw ∗ ty 芽健壮 o饱满
t qs s qx tu ∗ tw 生长迅速
t qs t qs tv ∗ tx
u qs s qx ty ∗ tz 芽弱小
u qs t qs tz ∗ t{ 缓慢
v qs t qs tz ∗ t{
量的 ou ow2⁄o 对麻花秦艽的根 !茎 !叶进行
愈伤组织诱导 o培养 t个月后观察 o见表 u ∀
表 u 生长素对愈伤组织诱导的影响
r°ª#pt
r°ª#pt
u ow2⁄
r°ª#pt
产生愈伤组织
时间r§
出愈率
r h
s qx s qs s qs us ∗ ut {u ∗ {w
t qs s qs s qs t{ ∗ t| |x ∗ |y
s qs s qx s qs ux ∗ uy ts ∗ tu
s qs t qs s qs p p
s qs s qs s qx tz ∗ t{ {w ∗ {x
s qs s qs t qs us ∗ ut yz ∗ y{
注 }/ p 0表示无愈伤组织产生
由表 u可见 o ou ow2⁄和 对麻花秦艽均
可诱导愈伤组织 o但其诱导作用有明显区别 o其中
诱导作用最强 ou ow2⁄次之 o较弱 ∀不加激
素的培养基上未诱导出愈伤组织 ∀
21212
对愈伤组织诱导 o继代和分化的影响
实验中发现单独使用 ou ow2⁄即可诱导出愈伤组
织 o但诱导出的愈伤组织生长缓慢且不能分化 ∀因
此本实验在诱导愈伤组织过程中除了使用 ou o
w2⁄外 o还附加了不同含量的
∀结果发现
有
利于状态良好的愈伤组织的产生 ∀在 ≥ n
v °ª
#pt n t °ª#pt的培养基中诱导产生的愈伤组
织k图 ul在继代培养中生长旺盛 ∀以 ≥ n
u1s ∗
v1s °ª#pt n t1s °ª#pt进行愈伤组织的继代
培养较为适宜 o见图 v ∀
对愈伤组织的分化也有
很大的影响 o见表 v ∀
由表 v可见 o
t1s ∗ v1s °ª#pt愈伤组织都
能分化出芽 o见图 w ∀但
u °ª#pt即有利于愈伤
组织的分化 o又有利于再生芽的成苗k成苗率 zs h
左右l ∀当采用 ≥ n
u1s °ª#pt n s1x °ª#
pt培养基进行愈伤组织分化培养时 o再生芽成苗
率可较 ≥ n
u1s °ª#pt培养基提高 ts h以上
k成苗率 {v h ∗ {z h l ∀
21213 外植体部位对愈伤组织诱导 o继代和分化
的影响 实验中发现外植体部位对愈伤组织诱导具
#{|z#
第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ ts
¤¼oussy
图 u 从外植体诱导出愈伤组织
1 根 ~
1茎 ~≤1 叶
图 v 愈伤组织继代培养
表 v
对愈伤组织分化的影响
r°ª#pt
产生率
时间r§
诱导率
r h
再生芽数目
r个r块 再生芽生长状态
s qx p p p p
t qs ut ∗ vv {s u ∗ v 芽生长状态良好
u qs t{ ∗ us |x { ∗ | 芽生长状态良好 o易成苗
v qs t{ ∗ us |x ts ∗ tv 芽生长状态一般 o不易成苗
w qs t{ ∗ us |w ts ∗ tt 芽生长较弱 o不易成苗
图 w 愈伤组织开始分化出芽
有极其重要的影响 o在含 ≥ n
v1s °ª#pt n
t °ª#pt的培养基上 o茎经大约 tx §培养后在其切
口处形成黄色松软愈伤组织 o继代培养生长旺盛 o而
且易于分化 ∀相比较 o根 !叶切块形成愈伤组织较迟
缓 o根形成的愈伤组织为白色小颗粒状 o生长缓慢 o
叶形成的愈伤组织为淡绿色 o继代培养生长缓慢 ∀
213 影响麻花秦艽试管苗成活率的主要因素
21311 对再生芽伸长的影响 在麻花秦艽再
生芽的伸长培养中 o附加一定含量的 对再生芽
的伸长有明显的促进作用 ∀在 ≥ n
v °ª#pt n
t °ª#pt的培养基中附加 v °ª#pt时 ovs §
后即可较未加 的对照组芽高 t倍左右 o既能保
证再生芽的快速生长 o又能保证其健壮而不弱小 ∀
21312 对试管苗生根的影响 实验中发现
既能使试管苗正常生长 o又能诱导出良好的根
系 ∀本实验采用 ≥ n
s1x °ª#pt n t1s °ª#
pt n蔗糖 vs ª#pt的培养基作为麻花秦艽试管苗
的生根培养基 o取得良好的效果 ∀生根率可达
{s h o并获得了生长健壮的试管苗 ∀
21313 温度 !光照和水分对试管苗移栽的影响
麻花秦艽试管苗在生根培养基中生长 t个月后便可
以进行移栽 o试管苗移栽时温度不能低于 ty ε o也
不宜过高 o否则易引起试管苗徒长 ∀移栽初期试管
苗不能接受阳光的直射 o最好是散射光或遮阴 ∀试
管苗移栽后 o每 u ∗ v §应浇水 t次 o相对湿度应保
持在 {s h左右 ∀试管苗移栽 u周后 o便长出新叶 o
当户外温度稳定在 us ε 时便可移栽入大田 ∀
3 讨论
311 细胞分裂素和生长素之间的比例关系对麻花
秦艽组织培养的影响 在麻花秦艽芽的诱导 o增殖
和愈伤组织的分化过程中 o高含量的细胞分裂素是
必需的 o而且同时应配合一定低浓度的生长素 ∀细
胞分裂素类物质腺嘌呤与生长素之间的比例关
系非常主要 o可以有效地控制植物组织培养中芽和
根的发生 o这一比例高时有利于芽的分化 o这时细胞
分裂素起主导作用 ∀比例低时有利于根的分化 o这
时生长素起主导作用 o本实验结果与上述观点相符 ∀
在麻花秦艽的愈伤组织的诱导过程中也使用了
高含量的细胞分裂素
v °ª#pt并配合 t1s
°ª#pt进行愈伤组织的诱导 ∀虽然细胞分裂素对
麻花秦艽的愈伤组织的诱导不是必需的 o但是配合
高浓度的细胞分裂素都有利于麻花秦艽产生高质量
的易于继代和分化的愈伤组织 ∀
312 细胞分化程度与麻花秦艽脱分化的关系 在
麻花秦艽组织培养的快速繁殖和愈伤组织诱导过程
中 o正确的选择外植体的部位极其重要 o麻花秦艽芽
的诱导 o增殖和愈伤组织的诱导都是在茎尖生长点
处比较成功 ∀这是因为该处分生细胞较多 o分化程
#||z#
第 vt卷第 ts期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ ts
¤¼oussy
度低的原因 ∀麻花秦艽叶片 !根也可诱导产生愈伤
组织 o但诱导出的愈伤组织分化较慢 ∀在愈伤组织
诱导过程中 o将根 !茎段外植体竖放 !横放和倒放的
方式接入愈伤组织诱导培养基中培养 o结果根竖放
的外植体周围距培养基 t1v ¦°范围内都能产生大
量的愈伤组织 ~而横放的外植体只是在靠近基部约
s1w ¦°的范围内产生一些愈伤组织 o倒放的外植体
只是在上端k原形态学下端 o苗基部l产生少量的愈
伤组织 o而接触培养基的部位却未能产生出愈伤组
织 o这证明了细胞的分化程度对麻花秦艽脱分化有
极其重要的影响 ∀应该选择细胞分化程度低的部位
进行麻花秦艽的脱分化研究 ∀
≈参考文献
≈t 张恩迪 o郑汉臣 q中国濒危野生药用动植物资源的保护 q上
海 }第二军医大学出版社 ousss qu{ q
≈u 中国药典 q一部 qusss quuu q
≈v 朱俊儒 o宋平顺 o马 潇 o等 q甘肃产秦艽植物资源及商品研
究 q中药材 ousss ouvk|l }xut q
Στυδιεσ ον πλαντλετ ρεγενερατιον ανδ προπαγατιον οφ Γεντιανα στραµινεσ
¬2¶«¤o ÷¬2¯¬±ªo • ¤±o ≠¤±2«²±ª
( Γανσυ Χολλεγε οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Λανζηου zvssss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ³µ²√¬§¨ ¶¦¬¨±·¬©¬¦¥¤¶¬¶©²µ ¤¯µª¨ ¶¦¤¯¨ ³µ²§∏¦·¬²± ¥¼ ¶·∏§¼¬±ª·«¨ ·¨¦«±¬´∏¨ ²©·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ²© Γεντιανα
στραµινεσq Μετηοδ : ≤¤¯ ∏¯¶º¤¶¬±§∏¦¨§©µ²° ª¨µ°2©µ¨¨¶·¨° ¶¨ª° ±¨·²© Γ . στραµινε󲱤 ≥ ° §¨¬∏°¶∏³³¯ °¨ ±¨·¨§º¬·«§¬©©¨µ¨±·«²µ°²±¨ ¶q
Ρεσυλτ : ׫¨ ≥ ° §¨¬∏° º¬·«s qx2t qs °ª#pt
¤±§s qx °ª#pt º¤¶¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ ¬±§∏¦·¬²± ¤±§³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©¦¯∏¶·¨µ¥¤§¶q ≥
° §¨¬∏° º¬·«t qs °ª#pt ¤±§v °ª#pt
º¤¶¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ ¬±§∏¦·¬²± ²©¦¤¯ ¬¯q ≥ ° §¨¬∏° º¬·«t qs °ª#pt ¤±§u qs2v qs °ª
#pt
º¤¶¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ ¶∏¥¦∏¯·∏µ¨ ²©¦¤¯ ¬¯q ≥ ° §¨¬∏° º¬·«u qs °ª#pt
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²©¦¤¯ ¬¯q Χονχλυτιον : ¶¨³·¬¦¶¨ §¨¬±ª²© Γ . στραµινε󦤱 ¥¨ ∏´¬¦®¯¼ ³µ²³¤ª¤·¨§¥¼ ¶«²²·¦∏¯·∏µ¨ q
[ Κεψ ωορδσ] Γεντιανα στραµινεσ~·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ~³¯¤±·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussw2s|2sz
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kvswzst{{l ~国家教育部高等学校骨干教师资助计划项目kusssl
≈通讯作者 3杨得坡 oר¯ }ksusl{zvvvtx| o∞2°¤¬¯ }¯¶¶º§° °¤¬¯q¶¼¶∏q¨§∏q¦±
指纹图谱技术对贯叶连翘提取物制备工艺过程的评价
王冬梅 o刘朝 o杨得坡 3
k中山大学 药学院 生药学与天然药物化学实验室 o广东 广州 xtss{sl
≈摘要 目的 }建立贯叶连翘提取物k含金丝桃素类和黄酮类化合物l的指纹图谱分析方法 o并对提取物制备
工艺的有效性 !稳定性以及抗氧化剂 !药材采收部位对提取物质量的影响进行综合评价 ∀方法 }采用 °≤2∂2≥
法测定了药材与提取物的指纹图谱 o并对主要色谱峰进行定性定量分析 ∀结果 }在提取物指纹图谱中标示了 ts个
特征峰 o鉴定了其中 {个色谱峰所代表的化学成分 ∀采用的提取物制备工艺稳定性良好 o可有效地富集金丝桃素
类和黄酮类化合物 ~抗氧化剂的使用对提取物的质量影响不大 o但药材采收部位则对其有显著影响 ∀结论 }该指纹
图谱分析方法可为提取物的质量控制以及制备工艺的评价提供依据 ∀
≈关键词 贯叶连翘提取物 ~提取制备工艺 ~°≤指纹图谱
≈中图分类号 u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylts2s{ss2sx
贯叶连翘 Ηψπεριχυµ περφορατυµ 1是藤黄科金丝 桃属植物 o其抗抑郁 !镇静 !抗 ∂ 病毒 !抗甲型 !乙型
#ss{#
第 vt卷第 ts期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ ts
¤¼oussy