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Comparative study on quality of Tongrentang Red Ginseng and Korean Red Ginseng——determination of ginsenosides and polysaccharides

同仁堂红参与高丽红参品质的初步比较研究——人参皂苷和人参多糖的含量测定



全 文 :同仁堂红参与高丽红参品质的初步比较研究
) ) ) 人参皂苷和人参多糖的含量测定
吴建梅 t3 o林宏英 t o赵李宏 t o贾海涛 u o贾海坤 u o王 钰 u o陈大为 v
ktq北京师范大学 资源学院 资源药物与中药资源研究所 o北京 tss{zx~
uq北京百利康医药有限责任公司 o北京 tsssuu~
vq沈阳药科大学 药学院 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈摘要   目的 }测定人参总皂苷 o人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t和人参多糖含量 o比较同仁堂红参与高丽红参的质量 ∀
方法 }建立大孔吸附树脂比色法测定人参总皂苷含量 ~采用二元梯度洗脱程序的高效液相色谱法测定人参皂苷
• ªt o• o¨• ¥t的含量 ~优化试验条件 o采用苯酚 2硫酸显色方法测定人参多糖含量 ∀结果 }同仁堂红参中人参总皂苷
含量不低于高丽红参中总皂苷的含量 ~人参皂苷 • ªt o• ¥t的含量与高丽红参中的含量相近 o人参皂苷 • 含¨量略低
于高丽红参中的含量 o而人参多糖含量则高于高丽红参中的含量 ∀结论 }同仁堂红参中人参皂苷含量不低于高丽
红参中的含量且人参多糖含量高于高丽红参 ∀建立的测定人参总皂苷 !人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t以及人参多糖含量
的方法准确 !快速 !重复性好 o可以作为人参质量定量评价的方法 o初步比较不同来源的人参品质 ∀
≈关键词   人参总皂苷 ~人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t ~人参多糖 ~大孔吸附树脂比色法 ~‹ °≤~苯酚 2硫酸显色法
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsz2sxzv2sx
≈收稿日期   ussx2tu2tx
≈通讯作者   3 吴建梅 oר¯}kstslyuusxu{uoƒ¤¬}kstslyuus2
syy|o∞2°¤¬¯}º∏­°½«¤²®´ ƒ ¼¤«²²q¦²°q¦±
人参 Παναξ γινσενγ ≤q „q  ¼¨1系五加科人参
属植物的根和根茎 o红参是由人参经蒸制加工而成 ∀
红参除了保持人参的滋补强壮等功效外 o还有抗癌 !
抗衰老和降低血糖等作用 ≈t2w  ∀
红参因产地不同 o主要可以分为中国红参和高
丽红参 ∀高丽红参开发较早 o在国际市场上已享有
盛誉 o价格也远高于中国红参 y ∗ ts倍不等 o国内外
学者对中国红参与高丽红参的质量进行了许多研
究 o其中主要是对人参皂苷的含量进行比较 ≈xoy  ∀
但近年研究表明 ≈z  o人参多糖作为人参的另一类主
要成分 o可明显增强免疫系统的功能并有免疫抗肿
瘤和辅助抗肿瘤活性 o另外 o人参多糖还有降低血糖
及调控血细胞生成的作用 o具有很好的治疗保健作
用 ∀所以建议将人参皂苷和人参多糖的含量共同作
为初步评价人参品质的指标 ∀
在整项研究中 o拟建立科学 !系统的比较同仁堂
红参与高丽红参品质的评价体系 o包括主要活性成
分人参皂苷及人参多糖的含量测定 ~人参中氨基酸
的含量比较 ~人参中微量元素的比较以及主要药理
活性的比较 ∀此体系能准确 !简便 !系统地比较同仁
堂红参与高丽红参的品质差异 o为制订企业标准提
供参考 ∀
作者在文献基础上 ≈{o|  o建立用大孔吸附树脂
测定人参总皂苷的准确 !便捷的方法 ~新建立一种采
用二元梯度洗脱程序的高效液相色谱法分析人参皂
苷 • ªt o• o¨• ¥t含量的方法 ∀关于人参多糖的测定 o
对一些影响因素进行了考察 o建立了准确 !简便 !快
速的苯酚 2硫酸法测定人参多糖含量 ∀
1 仪器与药品
txuxruw{z型高效液相色谱仪 k美国 • ¤·¨µ¶公
司 lo ¨¯¯¨ ±±¬∏°vu色谱工作站 ~˜∂ p uxws紫外分光
光度计 k日本岛津公司 l~大孔吸附树脂 k„… p {o天
津南开大学 l∀
人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t对照品 k购自中国药品生
物制品检定所 o• ªt批号为 ttszsv2ussvuuo• ¨批号
为 ttszxw2ussvus~• ¥t批号为 zsw2ussttwl~同仁堂
红参样品 k北京百利康医药有限责任公司提供 o批
号为 ו swszuvosws{syosws{vsl~高丽红参 k正官庄
牌 o大韩民国人参公社 Šussvstoussvsuoussvsvo
Šusswstousswsuousswsvl~其余试剂均为分析纯 ∀
#vzx#
第 vu卷第 z期
ussz年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ z
„³µ¬¯o ussz
2 方法与结果
2q1 大孔吸附树脂比色法测定人参总皂苷含量
2q1q1 对照品溶液和供试品溶液的制备 精密称
定人参皂苷 • 适¨量 o制备 s1xvw °ª# °pt的对照
品溶液 ∀按文献 ≈ts 操作 o制备供试品溶液 ∀
2q1q2 树脂柱的预处理 大孔吸附树脂 „… p{o用
丙酮浸泡数天后 o用乙醇洗至无残渣 o蒸馏水冲洗数
遍 o湿法装柱 kt1u ¦° ≅ ts ¦°lo备用 ∀
2q1q3 样品上柱的洗脱条件 取供试品 u °上
样 o用蒸馏水 vs °洗脱后 o用 ysh乙醇 ys °洗
脱 o收集洗脱液备用 ∀
2q1q4 线性关系考察 精密移取人参皂苷 • 对¨
照品溶液 s1tos1vos1xos1zos1| °o分别置于 x °
量瓶中 o用甲醇定容 o分别从中取 t1x °置于 ts
°具塞试管中 o蒸干 o加 xh 香草醛 2冰醋酸溶液
s1u °o高氯酸 s1{ °o于 ys ε 恒温水浴加热 tx
°¬±o冷却 o加入 x °冰醋酸 o显色 o摇匀 o随行空白 o
于 xxs ±°下测定吸收度值 ∀以吸收度值为纵坐标
kΨlo以质量浓度为横坐标 kΞlo得回归方程 Ψ €
s1ssw zΞ p s1svt toρ € s1||| zo表明在 ty1su ∗
tww1t{ Λª线性关系良好 ∀
2q1q5 精密度试验 精密吸取人参皂苷 • 对¨照
品溶液 s1z °oy份 o按 2q1q4项下依法显色后在
xxs ±°测定吸收度 o结果 • ≥⁄为 s1vh ∀
2q1q6 重复性试验 取供试样品 ו swszuv t ªo共
y份 o精密称重 o按 2q1q1和 2q1q3项下操作 o再按
2q1q4项下依法显色 o随行对照品 o于 xxs ±°下测
定吸收度值并计算含量 o结果 • ≥⁄为 u1vh ∀
2q1q7 稳定性试验 取供试品溶液 v份 o放置 o分
别在 sotouovow «后 o分别显色再测定吸收度 o计算
样品含量 o结果 w «内 • ≥⁄为 s1{h o表明溶液非常
稳定 ∀取供试品溶液 v份 o依法显色后再放置 o分别
在 sos1uxos1xsot1sot1xou1s «后测定吸收度并计
算样品含量 o结果 • ≥⁄为 v1yh o表明样品在显色后
u «内稳定 ∀
2q1q8 加样回收率试验 取已知含量的人参供试
样品溶液 o加入适量的人参皂苷 • 对¨照品溶液各 y
份 o按 2q1q3项下收集乙醇洗脱液 o再按 2q1q4依法
显色后测定吸收度 o计算回收率 o结果见表 t∀
2q1q9 样品含量测定 按 2q1q1项下供试品溶液
的制备项下操作 o再按 2q1q3和 2q1q4项下依法显
色后测定吸收度 o计算含量 o结果见表 u∀从表 u可
表 t 人参皂苷 • 加¨样回收率
测得量
r˪
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
tsv1u tsx1x
tst1s tst1t
tst1v tst1y tsu1w u1v
tst1{ tsu1z
tsu1y tsw1w
tss1u ||1w
注 }样品中含量均为 xu1wy Λªo对照品加入量均为 w{1sy Λª
见 ov个批号的同仁堂红参中人参总皂苷的含量与 v
个批号为 Šussv的高丽红参的人参总皂苷含量相
近 o但高于 v个批号为 Šussw高丽红参中人参总
皂苷的含量 ∀
表 u 人参样品中人参总皂苷的质量分数 kν € vl
批号 人参总皂苷 r°ª# ªpt
ו swszuv ux1w
ו sws{sy ux1t
ו sws{vs ux1x
Šussvst uw1x
Šussvsu uy1t
Šussvsv uu1y
Šusswst t|1t
Šusswsu t{1z
Šusswsv t{1|
2q2 高效液相色谱法测定人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t含

2q2q1 对照品溶液与供试样品溶液的制备 取各
对照品精密称定 o用甲醇配制成人参皂苷 • ªt s1vxz
°ª# °pt o• ¨ s1txu °ª# °pt o• ¥t s1v{u °ª#
°pt的混合对照品溶液 ∀供试品溶液的制备按文
献 ≈ts 方法操作 ∀
2q2q2 色谱条件及系统适用性试验 安捷仑科技
公司 ’• …„÷ ≥…2≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox
Λ°l~流动相乙腈 2s1sxh磷酸水溶液 ~流速 t1s °
# °¬±pt ~柱温 vx ε ~检测波长 usv ±°~二元梯度洗
脱程序为 }s ∗ vx °¬±ot|h乙腈 ~vx ∗ xy °¬±ot|h ∗
u|h 乙腈 ~xy ∗ zt °¬±ou|h 乙腈 ~zt ∗ tss °¬±o
u|h ∗ wsh乙腈 ∀理论板数按人参皂苷 • ªt峰计算
不低于 y ssso人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t的分离度均大
于 t1xo符合药典规定 o见图 t∀
2q2q3 标准曲线的制备 分别精密吸取混合对照
品溶液 zotsotvot|oux ˏo按上述色谱条件测定峰
面积 o以峰面积为纵坐标 kΨlo质量浓度为横坐标
kΞlo绘制标准曲线 ∀结果见表 v∀
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图 t 同仁堂红参与高丽红参的 ‹ °≤图
„q对照品 ~…q同仁堂红参 ~≤q高丽红参 ~
tq人参皂苷 • ªt ~uq人参皂苷 • ~¨vq人参皂苷 • ¥t
表 v 人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t的标准曲线
对照品 回归方程 ρ 线性范围 rΛª
• ªt Ψ € v1ss ≅ tsx Ξ p t1vz ≅ tsw s1||| y u1xs ∗ {1|u
• ¨ Ψ € u1xx ≅ tsx Ξ p t1zy ≅ tsv s1||| { t1sy ∗ v1{s
• ¥t Ψ € u1s| ≅ tsx Ξ n y1|{ ≅ tsv s1||| x u1yz ∗ |1xx
2q2q4 精密度试验 取混合对照品溶液重复进样
y次 o每次 tv ˏo按上述方法和色谱条件进行测
试 o计算各对照品峰面积积峰值的 • ≥⁄o人参皂苷
• ªt为 v1sh o人参皂苷 • 为¨ v1th o人参皂苷 • ¥t
为 v1sh o表明该方法精密度较好 ∀
2q2q5 重复性试验 取批号为 ו swszuv的供试
样品 t ªo按 2q2q1项下供试样品溶液制备方法操
作 o制备 y份供试品溶液 o按色谱条件测定 o同时
测定人参皂苷混合对照品溶液 o读取峰面积值后 o
用外标法计算供试品中人参皂苷 • ªt o • o¨ • ¥t的
含量 o计算的 • ≥⁄人参皂苷 • ªt为 v1uh o人参皂
苷 • 为¨ v1th o人参皂苷 • ¥t为 v1th ∀表明该测
试方法 o即用同一系统同时测定 v个组分重复性较
好 ∀
2q2q6 加样回收率试验 取批号为 ו swszuv样
品约 s1x ªo精密称定 x份 o按 2q2q1项下供试样品
溶液制备 o并测定其含量 o每份中分别加入人参皂苷
• ªt o• o¨• ¥t对照品 o按测试条件测定 o计算含量并
计算加样回收率 o结果如表 w所示 ∀
表 w 人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t加样回收率
成分
称样量
r°ª
样品中
含量 r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
• ªt wsv1v t1uvx t1zzx u1|y| |z1z ||1w u1|
xss1{ t1xvw t1zzx v1uv| |y1s
xsz1w t1xxw t1zzx v1v|u tsv1y
xyy1x t1zvx t1zzx v1xtv tss1u
xzz1| t1zzs t1zzx v1xwt ||1{
• ¨ wsv1v s1xsy | t1txs t1ztt tsw1z tss1u v1|
xss1{ s1yu| x t1txs t1zww |y1|
xsz1w s1yvz { t1txs t1{vv tsv1|
xyy1x s1ztu t t1txs t1{xs |{1|
xzz1| s1zuy w t1txs t1{vz |y1y
• ¥t wsv1v u1s{| t1wts v1xxy tsw1s ||1| v1{
xss1{ u1x|w t1wts v1|zz |{1t
xsz1w u1yu{ t1wts w1s{v tsv1u
xyy1x u1|vw t1wts w1uy{ |w1y
xzz1| u1||v t1wts w1v|w ||1w
2q2q7 样品含量测定 取各批号样品 o按 2q2q1项
下供试样品制备方法制备溶液 o按色谱条件项下进
行测定 o以外标法求出含量 ∀结果见表 x∀ v个批号
的同仁堂红参所含有的 • ªt和 • ¥t含量与批号为
Šussv的 v个批号的高丽红参的含量相当 o并高于
v个批号为 Šussw的含量 ~而 • 含¨量则低于高丽
红参的含量 o但 v批同仁堂红参的人参皂苷 • ªt o
• o¨• ¥t总含量与批号为 Šussv的高丽红参中的总
含量相近 o并高于批号为 Šussw高丽红参的含量 ∀
表 x 人参样品中人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t含量 kν € vl h
批号 • ªt • ¨ • ¥t 总量
ו swszuv s1vt s1tv s1xu s1|y
ו sws{sy s1vt s1tv s1xu s1|y
ו sws{vs s1vs s1tu s1xs s1|u
Šussvst s1vx s1uu s1xt t1s{
Šussvsu s1vy s1ut s1xt t1s{
Šussvsv s1v{ s1uu s1xs t1ts
Šusswst s1us s1t| s1wv s1{u
Šusswsu s1t| s1tz s1vu s1y{
Šusswsv s1t| s1tz s1v{ s1zw
2q3 苯酚 2硫酸显色法测定人参多糖
2q3q1 对照品溶液 !供试样品溶液及显色剂的配制
精密称定已恒重的葡萄糖适量 o于 tss °量瓶
中 o加入蒸馏水定容 o配成 s1s|| °ª# °pt的葡萄
糖对照品溶液 ∀
将 t ª按文献 ≈ts 提取过人参皂苷的残渣 o加
入 xs倍量的蒸馏水 o浸泡过夜 o水煎 v次 o第 t次 u
«o第 uov次均 t «o合并滤液 o减压浓缩至黏稠挂壁 o
再加入 us °|sh乙醇 o静置过夜 o离心 o在上清液
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中再加入 |sh乙醇 us °o静置 t «o离心 o合并沉淀
物 o干燥 ∀取粉碎的干燥沉淀物适量 o于 tss °量
瓶中 o加入蒸馏水 o摇匀 o备用 ∀
显色剂 }称取 x ª苯酚 o置 tss °量瓶中 o加入
适量蒸馏水溶解 o继续加入蒸馏水至刻度 o得到 xh
的苯酚溶液 ∀
2q3q2 标准曲线的绘制 从葡萄糖对照品溶液中
分别精确量取 touovowox °至 ts °量瓶中 o加入
蒸馏水至刻度 ∀分别从中取出 u °溶液加入 ts
°具塞试管中 o加入 xh苯酚溶液 t °o摇匀 o再迅
速加入 x °浓硫酸 o摇匀 o室温放置 ts °¬±o再于
ws ε 水浴下保温 tx °¬±o取出后迅速冷却至室温 o
以蒸馏水做空白对照 o于 w|s ±°下测定吸收度值 o
以质量浓度为横坐标 kΞlo以吸收度值为纵坐标
kΨlo进行线性回归 o得线性方程 Ψ € s1ssx {Ξ p
s1swx |oρ€s1||| {o表明在 t|1{ ∗ || Λª线性关系
良好 ∀
2q3q3 精密度试验 精密吸取葡萄糖对照品溶液
kx|1w Λªly份 o按 2q3q2项下依法显色后测定吸收
度 o结果 • ≥⁄为 v1th ∀
2q3q4 重复性试验 按 2q3q1项下供试品溶液的
制备方法制备批号为 ו swszuv的样品溶液 y份 o
按 2q3q2项下显色后测定吸收度值 o结果 • ≥⁄为
w1sh o表明重复性较好 ∀
2q3q5 溶液稳定性试验 分别将葡萄糖对照品溶
液 k为 x|1w Λªl和批号为 ו swszuv的样品溶液显
色后 xotxousovsowxo|s °¬±测定吸收度值 o计算
• ≥⁄o葡萄糖对照品为 s1zh o样品溶液为 s1vh o表
明在显色后 |s °¬±内测定数值稳定 ∀
2q3q6 加样回收率试验 取已知含量批号为
ו swszuv样品溶液 o分别精密加入一定量的葡萄糖
对照品溶液适量 o按 2q3q2项下显色后测定吸收度
值 o计算加样回收率 o结果见表 y∀
表 y 人参多糖加样回收率
测得量 rΛª 回收率 rh 平均值 rh • ≥⁄rh
zz1yz |w1s
{s1tt tss1u
z|1sw |z1x |z1w v1w
{s1vt tss1z
z|1z| ||1w
zz1tu |u1y
注 }样品中含量均为 ws1ww Λªo加入量均为 v|1ys Λª
2q3q7 样品含量测定 按 2q3q1项下供试品溶液
的制备方法制备各批号样品 o按 2q3q2项下显色后
测定吸收度值 o计算人参多糖得率和人参多糖含量 o
结果见表 z∀从表中可看到 ov个批号国产的同仁堂
红参中人参多糖的含量高于 y个批号的高丽红参的
人参多糖含量 ∀
表 z 人参样品中人身多糖的含量 kν € vl
样品批号 样品量 rª 得率 rh 含量 rh
ו swszuv t1stz vv1t us1|
ו sws{sy t1sw| u|1u t|1w
ו sws{vs t1svw vw1s us1{
Šussvst t1st| uu1y tt1t
Šussvsu t1sux ut1w tu1u
Šussvsv t1svu t{1t tu1u
Šusswst t1svz u{1x tz1x
Šusswsu t1su| ut1v tv1{
Šusswsv t1suu uw1s tw1u
3 讨论
3q1 „… p {型大孔吸附树脂是 ⁄ p tst大孔吸附
树脂的换代产品 o用它富集纯化人参总皂苷 o具有准
确 !工艺简便 !成本低的优点 ∀文献多报道 ≈{o| 采用
xsh乙醇洗脱人参总皂苷 o其洗脱能力强 o但经作者
的试验证实 o体积分数为 ysh的乙醇洗脱能力强于
xsh乙醇 ∀用于定量分析人参总皂苷 o最终确定洗
脱溶剂用量为 ys °o洗脱人参总皂苷占 |xh以上 o
洗脱人参皂苷量大且纯度高 ∀
3q2 用高效液相色谱仪紫外检测测定人参皂苷
• ªt o• o¨• ¥t o检测波长在 usv ±°o由于红参中成分
复杂 o分离困难 o最终选用安捷仑科技公司 ’• …„÷
≥…2≤t{柱 o选择流动相为乙腈 2s1sxh磷酸水溶液系
统并采用二元梯度洗脱程序使各成分完全分离 ∀此
方法具有精密度高 o重复性良好 o准确度高的优点 o
适合作为测定红参中人参皂苷 • ªt o• o¨• ¥t含量的
方法 o值得推广 ∀
3q3 采用苯酚 2硫酸显色法测定人参多糖 o具有操
作简便 !准确度高等优点 ∀虽然已有文献报道 o人参
多糖中的有效成分是人参果胶 ≈tt  o但笔者认为 o人
参果胶的分离提取过程复杂 o纯化程度鉴定不易 o不
适合将人参果胶的含量作为企业加工生产的一项监
控指标 o而人参多糖的分离提取操作容易 o采用苯
酚 2浓硫酸显色法又能准确 !快捷地定量人参多糖 o
特别在本试验中 o对浓硫酸用量 o苯酚浓度和用量分
别做了单因素考察 o最终确定采用 x °硫酸 oxh的
苯酚 t °测定人参多糖 ∀
3q4 通过对不同批次同仁堂红参和高丽红参中人
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„³µ¬¯o ussz
参皂苷和人参多糖含量的测定比较 o结果表明 o不同
批次的高丽红参的人参总皂苷 !人参皂苷 • ªt o• o¨
• ¥t的含量不高于同仁堂红参样品中的含量 o说明
高丽红参的品质并不一定高于中国产同仁堂红参 ∀
≈参考文献  
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学苑出版社 ot||z}t|q
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k‹°≤2ƒ°≥l比较研究 ≈ q中成药 ousstouvkvl}tysq
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用高速薄层扫描法测定人参皂苷含量 ≈ q中药通报 ot|{yott
ktsl}wsq
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≈ q国外医学 #中医中药分册 ousswouykul}z|q
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脂比色法测定人参皂苷 ≈ q沈阳药学院学报 ot|{xouxkwl}
u{{q
≈|  张崇禧 o郑友兰 o张春红 o等 q大孔树脂吸附人参总皂苷工艺及
再生使用的研究 ≈ q中国药学杂志 oussvov{k|l}yywq
≈ts  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}tsxq
≈tt  李向高 o郑友兰 o贾继红 o等 q吉林红参与高丽红参中多糖的含
量测定 ≈ q中药通报 ot|{zotukyl}wsq
Χοµ παρατιϖε στυδψ ον θυαλιτψ οφ Τονγρεντανγ Ρ εδ Γ ινσενγ ανδ Κορεαν Ρ εδ
Γ ινσενγ ) ) ) δετερµ ινατιον οφ γινσενοσιδεσανδ πολψσαχχηαριδεσ
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(t. Ινστιτυτε οφ ΝατυραλΜεδιχινε ανδ Χηινεσε Μεδιχινε Ρεσουρχεσ, Χολλεγε οφ Ρεσουρχεσ Σχιενχε
&Τεχηνολογψ, Βειϕινγ Νορµ αλΥνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tss{zx, Χηινα;
u. Βαιλικανγ ΜεδιχαλΧο. , Λτδ1 , Βειϕινγ tsssuu, Χηινα;
v. Χολλεγε οφ Πηαρµ αχψ, Σηενψανγ Πηαρµ αχευτιχαλΥνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«° ·¨«²§¶©²µ´ ∏¤±·¬·¤·¬√¨§¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©ª¬±¶¨±ª¶¤³²±¬±¶o ª¬±¶¨±²¶¬§¨ • ªt o • o¨ • ¥t ¤±§
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≈责任编辑 张宁宁  
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第 vu卷第 z期
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中 国 中 药 杂 志
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